Methodenartikel

Preparaat van intact weefsel voor microscopische analyse van de endospermcellaag in zich ontwikkelende en rijpe Arabidopsis-zaden

DOI:

10.3791/68217

⸱

16 mei 2025

 ,  , 
1Department of Life Sciences, School of Agriculture, Meiji University, 2Organization for the Strategic Coordination of Research and Intellectual Properties, Meiji University, 3Plant Functional Biotechnology, Agro-Biotechnology Research Center, Graduate School of Agricultural and Life Sciences, The University of Tokyo

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit protocol beschrijft de bereiding van intacte monsters van de endospermcellaag in Arabidopsis thaliana zaden. De methode vereist alleen gewone laboratoriumapparatuur, zoals een injectienaald en een precisietang, en maakt fluorescerende levende celbeeldvorming met hoge resolutie mogelijk van endospermcellen in zowel ontwikkelende als rijpe zaden.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

In Arabidopsis-zaden speelt het endosperm, een enkele laag levende cellen tussen het embryo en de testa, een cruciale rol bij het reguleren van de rijping, kiemrust en kieming van zaden. Microscopische analyse van intacte endospermcellen is essentieel voor het begrijpen van de fysiologische functies van het endosperm op cellulair en moleculair niveau. De voorbereiding van het monster was echter een uitdaging vanwege de kleine omvang van de Arabidopsis-zaden en de locatie van de endospermcellaag onder de testa. Dit artikel beschrijft de voorbereiding van intacte endospermcellaagmonsters die geschikt zijn voor microscopische observatie en analyse in zowel ontwikkelende als rijpe zaden. Deze methode maakt het mogelijk om grote gebieden en talrijke intacte endospermcellen te observeren zonder dat fixatie of doorsnede nodig is. Bovendien maakt het protocol alleen gebruik van standaard laboratoriumapparatuur, zoals injectienaalden, precisietangen en stereomicroscopen. Deze aanpak maakt met succes beeldvorming van levende cellen met hoge resolutie van fluorescerende signalen, zoals groen fluorescerend eiwit (GFP), in intacte endospermcellen mogelijk. Deze methode maakt de observatie mogelijk van intracellulaire lokalisatie en beweging van verschillende eiwitten, evenals de morfologie van organellen, in de endospermcellen van verschillende Arabidopsis-mutanten . Dit protocol draagt bij aan de opheldering van nieuwe endospermfuncties en vergroot het potentieel voor cellulaire en moleculaire studies van dit essentiële weefsel.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Omdat planten sessiele organismen zijn, is het ontkiemen van zaden een cruciale gebeurtenis die hun lot bepaalt. De beslissing om te ontkiemen wordt strikt gereguleerd door zowel interne als omgevingsfactoren, zoals de kiemrust van primaire zaden, temperatuur, lichtintensiteit en golflengte, en stikstofconcentratie 1,2,3,4,5,6. Zaden hebben complexe structuren die bestaan uit meerdere weefseltypes7. Bij droge zaden van Arabidopsis is het embryo, dat zich ontwikkelt tot een zaailing, omgeven door een enkele laag endosperm en de buitenste lagen, de testa. De testa is samengesteld uit meerdere lagen dode cellen, terwijl het embryo en het endosperm zelfs in droge zaden in leven blijven. Het endosperm wordt algemeen beschouwd als een opslagweefsel dat voedingsstoffen levert voor de groei van het embryo en, samen met de testa, mechanische weerstand biedt tegen het uitsteeksel van het kiemwortel 8,9,10,11,12,13.

Verschillende recente studies hebben aangetoond dat het endosperm een essentiële rol speelt bij het reguleren van een optimale zaadontkieming 14,15,16,17. De fotoreceptor fytochroom B (PHYB) in endospermcellen detecteert bijvoorbeeld rood (R) of verrood (FR) licht, waardoor de kiemreacties worden gereguleerd15. Het endosperm functioneert ook als een temperatuurgevoelig weefsel en onderdrukt kiemreacties bij hoge temperaturen16. Kwaliteitscontrole van het endosperm is van cruciaal belang voor een optimale zaadontkieming, vooral bij langdurig bewaarde zaden17.

Beeldvorming van levende cellen is nu nodig om de fysiologische functies van het endosperm verder op te helderen. Microscopische analyse van intacte endospermcellen die fluorescerend gelabelde eiwitten tot expressie brengen, maakt het mogelijk om de moleculaire mechanismen te onderzoeken waarmee het endosperm de kieming van zaden reguleert. Het is echter een uitdaging om intacte endospermcellen voor microscopische observatie voor te bereiden, vooral bij Arabidopsis-zaden . De zaden hebben een diameter van ongeveer 0,4 mm en het endosperm is een eencellige laag tussen het embryo en de testa, waardoor nauwkeurige manipulatie moeilijk is. Bijgevolg is het endosperm, ondanks zijn belangrijke fysiologische rol, zelden waargenomen met behulp van beeldvorming van levende cellen.

Dit artikel presenteert een protocol voor de snelle bereiding van intacte endospermcellaagmonsters die geschikt zijn voor beeldvorming van levende cellen in zowel ontwikkelende als rijpe zaden.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

In deze studie werden twee verschillende procedures vastgesteld voor de bereiding van monsters van levende endospermcellagen: één voor het ontwikkelen van zaden en één voor rijpe zaden. Er zijn iets andere benaderingen nodig, afhankelijk van de stevigheid van de testa. De details van de gebruikte reagentia en apparatuur staan vermeld in de materiaaltabel.

1. Bereiding van intacte endospermmonsters van zich ontwikkelende zaden

  1. Inzameling van siliques
    1. Kweek Arabidopsis-planten op aarde of steenwol tot ze bloeien.
    2. Markeer volledig geopende bloemen met gekleurde draden (0 dagen na de bloei, 0 DAF).
      OPMERKING: Vermijd het gebruik van groene, gele of bruine draden om bloemen te markeren, omdat deze kleuren moeilijk te onderscheiden zijn van groeiende of volwassen planten en siliques.
    3. Snijd de gemarkeerde zich ontwikkelende siliques bij de steel af (aangegeven in figuur 1(1)) en vang ze op in buisjes van 1,5 ml.
      LET OP: Het ontwikkelen van siliques van 12-16 DAF is geschikt voor bereiding met behulp van dit protocol.
  2. Dissectie van zich ontwikkelende zaden
    OPMERKING: De volgende stappen moeten worden uitgevoerd op nat filtreerpapier om de monsters te beschermen tegen uitdroging. Manipulaties moeten onder een stereomicroscoop worden uitgevoerd.
    1. Splits een klep (aangegeven in figuur 1, punt 2) van de put (aangegeven in figuur 1, punt 1) met behulp van twee tangen: een met dikke punten om vast te houden en de andere met scherpe punten om te scheuren).
    2. Pak de zich ontwikkelende zaden voorzichtig op van de siliques met behulp van een tang met gesloten punten om beschadiging van de zaden te voorkomen (Figuur 1(2)).
    3. Houd het zaad met een tang vast zonder het zaad te laten crashen en maak met behulp van een injectienaald (27 G, 0,40 mm × 19 mm) een litteken van ongeveer 0,2 mm groot op de testa en het endosperm rond het embryo (figuur 1(3)).
      OPMERKING: De optimale locatie voor het maken van het litteken is op de kruising van de zaadlobben en de kiemwortel.
    4. Duw het embryo naar buiten door met een tang in het zaad te knijpen (figuur 1(4)). Plet de lege zaadenvelop, die bestaat uit de testa en het endosperm, niet en probeer de ronde vorm te behouden.
    5. Steek de injectienaald in de lege zaadenvelop bij het litteken en prik deze van binnenuit door (Figuur 1(5)).
    6. Houd de naald op zijn plaats, kras met een tang op het oppervlak van de testa met de uiteinden gesloten en knip een kant van de lege zaadenvelop af zodat deze kan openen (Figuur 1(6)).
    7. Open de lege zaadenvelop in een vel met behulp van een tang met scherpe punten (Figuur 1(7)). Het monster moet nu worden geïsoleerd als een dubbellaagse plaat bestaande uit de endosperm- en testalagen (figuur 1(8)).
      NOTITIE: Als het monster de neiging heeft om op te krullen wanneer water als montagemedium wordt gebruikt in stap 3 hieronder, verdeel het plaatmonster dan in twee stukken. Zaden die rond 18 DAF's uit siliques zijn geoogst (in dit stadium is de testa bruin maar nog niet helemaal droog) kunnen ook volgens dit protocol worden verwerkt, hoewel de zaden enkele minuten moeten worden gedronken voordat ze worden bereid.

2. Bereiding van intacte endospermmonsters van rijpe zaden

  1. Imbibitie van rijpe zaden
    1. Voeg 1 ml dubbel gedestilleerd water toe aan een tube van 1,5 ml met droge Arabidopsis-zaden .
    2. Bewaar de zaden minimaal 40 minuten bij kamertemperatuur (figuur 2(1)).
      OPMERKING: Droge zaden en zaden binnen 40 minuten na imbibitie zijn moeilijk te beschadigen bij de testa en het endosperm en om het embryo uit het zaad te verwijderen zonder de lege zaadenvelop te beschadigen in de stappen 2.2.1 en 2.2.2, terwijl een langere imbibitietijd manipulatie vergemakkelijkt.
    3. Gebruik een micropipet van 1000 μl om de opgenomen zaden over te brengen op nat filtreerpapier.
  2. Ontleding van rijpe zaden
    OPMERKING: De volgende stappen moeten worden uitgevoerd op nat filtreerpapier om de monsters te beschermen tegen uitdroging. Manipulaties moeten onder een stereomicroscoop worden uitgevoerd.
    1. Houd het zaad met een tang vast zonder het zaad te laten crashen en maak met een injectienaald een litteken van ongeveer 0,2 mm groot op de testa en het endosperm rond het embryo (figuur 2(2)).
    2. Duw het embryo naar buiten door met een tang in het zaad te knijpen (figuur 2(3)). Plet de lege zaadenvelop, die de testa en het endosperm bevat, niet. Probeer de ronde vorm te behouden.
    3. Snijd de boven- en onderkant van het lege zaadomhulsel met een injectienaald af tot een cilinder (figuur 2(4)).
    4. Snijd de cilindrisch gevormde lege zaadenvelop langs de centrale as om deze in twee stukken te scheiden (Figuur 2(5)). De monsters moeten worden geïsoleerd in de vorm van dubbellaagse vellen, bestaande uit de endospermlaag en de testalaag (figuur 2, punt 6).

3. Microscopische waarneming

  1. Plaats de endospermmonsters in plaatvorm op een glasplaatje en monteer ze in water of perfluordecaline (PFD).
    OPMERKING: Als er luchtbellen tussen het monster en het dekglaasje achterblijven, zou perfluordecaline (PFD), waarvan is gemeld dat het bijzonder nuttig is voor het afbeelden van monsters die luchtbellen bevatten, zoals bladeren18,19, nuttig zijn. Van PFD is bekend dat het de laagste oppervlaktespanning heeft, waardoor het gemakkelijk de luchtruimten op het monsteroppervlak kan vullen. Voor time-lapse-beeldvorming wordt echter het gebruik van water als montagemedium aanbevolen, omdat het watergehalte in rijpe zaden overvloedig moet zijn om de cellulaire vloeibaarheid te behouden.
  2. Leg een dekglaasje voorzichtig over het monster. Zorg ervoor dat de endospermlaag naar het dekglaasje wijst.
    OPMERKING: Nagellak of vet kan worden gebruikt om de randen van het dekglaasje af te dichten om uitdroging van het monster en het montagemedium te voorkomen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Met behulp van het protocol in figuur 1 werden endospermmonsters bereid uit zich ontwikkelende zaden die waren geoogst uit siliques bij 14 DAF (in dit stadium is de testa nog groen). Talrijke endospermcellen over een groot gebied en hun intracellulaire structuren werden geobserveerd (Figuur 3A). In dit experiment werden zaden gebruikt die PHYB tot expressie brengen, gefuseerd met GFP aan de C-terminus (PHYB-GFP). Het is algemeen...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De rol van het endosperm bij het ontkiemen van zaden is onthuld door middel van genetische en biochemische analyses met behulp van gescheiden zaadweefsels, zoals genexpressieanalyse en de kwantificering van lipiden en fytohormonen 9,14,25,26,27. Een in vitro zaadschilbeddingstest, waarbij het lege zaadomhulsel (endosp...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

We danken Drs. Matsushita en Oka van de Universiteit van Kyoto voor het leveren van de phyB-mutant die PHYB-GFP tot expressie brengt, aangestuurd door de 35S-promotor. Deze studie werd mede mogelijk gemaakt door een Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas, Research in a Proposed Research Area (19H05713 tot K.Y.).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
1.5 mL Microcentrifuge TubesWatoson Bio Lab131-815C
Coverslip (18 x 18 mm)Matsunami Glass Ind.,Ltd.C218181
DDWWater voor montage
Filter Paper No.526 (400 x 400 mm)ADVANTEC VIETNAM CO., LTD.02453400 
Genki-kun Seru Senyo yodo kopu N-150 (55 L)Katakura & Co-op Agri CorporationGrond voor plantengroei
Glass slide (26mm x 76 mm)Matsunami Glass Ind.,Ltd.S1215
Grodan AO 36 x 36 x 40 mm CubesGrodanSteenkoeling voor plantengroei
Iris SchaarPremium Plus Japan Co.,Ltd.FC-0212
Juwelierstangen, Dumont No. 5 (4 1/4 in.)DumontF6521Tang voor scheuren
Leica Application Suite X (LAS X) LeicaSoftware voor Sterallis 8
Leica Microsystems Immersiollie voor microscopenZeer lage autofluorescentie-immersiollieTHMOIL-10LF
LIOR precisietang 110mm  SL-14KENIS Ltd.KN33450438Tang voor vasthouden 
NAIL HOLICKOSENagellak
Naald 27G 3/4 (19 mm) RB Misawa Medical Industry Co., Ltd.Een injectienaald voor snijden
Nichipet Air 1000 uLNichiryo00-NAR-1000Een 1000 µL micropipet
PerfluorodecalinAPOLLO SCIENTIFICPC5960Reagentia voor montage
Rood licht/verrood licht LED-paneelTOKYO RIKAKIKAI CO., LTD.10147599
Schappe Spun #60Fujix Co., Ltd.Garen
SPINKOTE Smeermiddel 2 ozBECKMAN COULTER306812Vet
Sterallis 8LeicaConfocale laserscanmicroscopie
Stereomicroscoop Stemi 305 cam WCarl Zeiss NTS Ltd.491903-0017-000
Witte LED-lichtPANASONICFL40SSW/37

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bentsink, L., Jowett, J., Hanhart, J. C., Koornneef, M. Cloning of DOG1, a quantitative trait locus controlling seed dormancy in Arabidopsis. Proc Natl Acad Sci USA. 103 (45), 17042-17047 (2006).
  2. Toh, S., et al. High temperature-induced abscisic acid biosynthesis and its role in the inhibition of gibberellin action in Arabidopsis seeds. Plant Physiol. 146 (3), 1368-1385 (2008).
  3. Seo, M., Nambara, E., Choi, G., Yamaguchi, S. Interaction of light and hormone signals in germinating seeds. Plant Mol Biol. 69 (4), 463-472 (2009).
  4. Shinomura, T., et al. Action spectra for phytochrome A- and B-specific photoinduction of seed germination in Arabidopsis thaliana. Proc Natl Acad Sci USA. 93 (15), 8129-8133 (1996).
  5. Liu, Y., et al. Nitric oxide-induced rapid decrease of abscisic acid concentration is required in breaking seed dormancy in Arabidopsis. New Physiol. 183 (4), 1030-1042 (2009).
  6. Yan, D., et al. NIN-like protein 8 is a master regulator of nitrate-promoted seed germination in Arabidopsis. Nat Commun. 7, 13179(2016).
  7. Yan, D., Duermeyer, L., Leoveanu, C., Nambara, E. The functions of the endosperm during seed germination. Plant Cell Physiol. 55 (9), 1521-1533 (2014).
  8. Lopes, A. M., Larkins, A. B. Endosperm origin, development, and function. Plant Cell. 5 (10), 1383-1399 (1993).
  9. Penfield, S., et al. Reserve mobilization in the Arabidopsis endosperm fuels hypocotyl elongation in the dark, is independent of abscisic acid,and requires PHOSPHOENOLPYRUVATE CARBOXYKINASE1. Plant Cell. 16 (10), 2705-2718 (2004).
  10. Leubner-Metzger, G., Fründt, C., Meins, F. Jr Effects of gibberellins, darkness and osmotica on endosperm rupture and class I β-1,3-glucanase induction in tobacco seed germination. Planta. 199, 282-288 (1996).
  11. Sargant, E. Recent work on the results of fertilization in angiosperms. Ann Bot. 14 (4), 689-712 (1900).
  12. Groot, P. S., Karssen, M. C. Gibberellins regulate seed germination in tomato by endosperm weakening: A study with gibberellin-deficient mutants. Planta. 171 (4), 525-531 (1987).
  13. Groot, P. S., Kieliszewa-Rokicka, B., Vermeer, E., Karssen, M. C. Gibberellin-induced hydrolysis of endosperm cell walls in gibberellin-deficient tomato seeds prior to radicle protrusion. Planta. 174, 500-504 (1988).
  14. Lee, P. K., Piskurewicz, U., Turečková, V., Strnad, M., Lopez-Molina, L. A seed coat bedding assay shows that RGL2-dependent release of abscisic acid by the endosperm controls embryo growth in Arabidopsis dormant seeds. Proc Natl Acad Sci USA. 107 (44), 19108-19113 (2010).
  15. Lee, P. K., et al. Spatially and genetically distinct control of seed germination by phytochromes A and B. Genes Dev. 26 (17), 1984-1996 (2012).
  16. Piskurewicz, U., Sentandreu, M., Iwasaki, M., Glauser, G., Lopez-Molina, L. The Arabidopsis endosperm is a temperature-sensing tissue that implements seed thermoinhibition through phyB. Nat Commun. 14, 1202(2023).
  17. Shinozaki, D., Takayama, E., Kawakami, N., Yoshimoto, K. Autophagy maintains endosperm quality during seed storage to preserve germination ability in Arabidopsis. Proc Natl Acad Sci USA. 121 (14), e2321612121(2024).
  18. Littlejohn, R. G., Gouveia, D. J., Edner, C., Smirnoff, N., Love, J. Perfluorodecalin enhances in vivo confocal microscopy resolution of Arabidopsis thaliana mesophyll. New Phytol. 186 (4), 1018-1025 (2010).
  19. Littlejohn, R. G., Love, J. A simple method for imaging Arabidopsis leaves using perfluorodecalin as an infiltrative imaging medium. J Vis Exp. (59), e3394(2012).
  20. Chen, M., Schwab, R., Chory, J. Characterization of the requirements for localization of phytochrome B to nuclear bodies. Proc Natl Acad Sci USA. 100 (24), 14493-14498 (2003).
  21. Matsushita, T., Mochizuki, N., Nagatani, A. Dimers of the N-terminal domain of phytochrome B are functional in the nucleus. Nature. 424 (6948), 571-574 (2003).
  22. Buskirk, V. K. E., Decker, V. P., Chen, M. Photobodies in light signaling. Plant Physiol. 158 (1), 52-60 (2012).
  23. Logan, C. D., Leaver, J. C. Mitochondria-targeted GFP highlights the heterogeneity of mitochondrial shape, size and movement within living plant cells. J Exp Bot. 51 (346), 865-871 (2000).
  24. Paszkiewicz, G., Gualberto, M. J., Benamar, A., Macherel, D., Logan, C. D. Arabidopsis seed mitochondria are bioenergetically active immediately upon imbibition and specialize via biogenesis in preparation for autotrophic growth. Plant Cell. 29 (1), 109-128 (2017).
  25. Lefebvre, V., et al. Functional analysis of Arabidopsis NCED6 and NCED9 genes indicates that ABA synthesized in the endosperm is involved in the induction of seed dormancy. Plant J. 45 (3), 309-319 (2006).
  26. Okamoto, M., et al. CYP707A1 and CYP707A2, which encode abscisic acid 8' hydroxylases, are indispensable for proper control of seed dormancy and germination in Arabidopsis. Plant Physiol. 141 (1), 97-107 (2006).
  27. Endo, A., et al. Tissue-specific transcriptome analysis reveals cell wall metabolism, flavonol biosynthesis and defense responses are activated in the endosperm of germinating Arabidopsis thaliana seeds. Plant Cell Physiol. 53 (1), 16-27 (2012).
  28. Lee, P. K., Lopez-Molina, L. A seed coat bedding assay to genetically explore in vitro how the endosperm controls seed germination in Arabidopsis thaliana. J Vis Exp. (81), e50732(2013).
  29. Uno, K., Sugimoto, N., Sato, Y. N-aryl pyrido cyanine derivatives are nuclear and organelle DNA markers for two-photon and super-resolution imaging. Nat Commun. 12, 2650(2021).
  30. Shinozaki, D., et al. Autophagy increases zinc bioavailability to avoid light-mediated reactive oxygen species production under zinc deficiency. Plant Physiol. 182 (3), 1284-1296 (2020).
  31. Laxmi, A., Pan, J., Morsy, M., Chen, R. Light plays an essential role in intracellular distribution of auxin efflux carrier PIN2 in Arabidopsis thaliana. PLOS One. 3 (1), e1510(2008).
  32. Rigal, A., Doyle, M. S., Robert, S. Live cell imaging of FM4-64, a tool for tracing the endocytic pathways in Arabidopsis root cells. Methods Mol Biol. 1242, 93-103 (2015).
  33. Shimomura, O., Johnson, H. F., Saiga, Y. Extraction, purification and properties of Aequorin, a bioluminescent protein from the luminous hydromedusan, Aequorea. J Cell Comp Physiol. 59 (3), 223-239 (1962).
  34. Holzinger, A., Buchner, O., Lütz, C., Hanson, R. M. Temperature-sensitive formation of chloroplast protrusions and stromules in mesophyll cells of Arabidopsis thaliana. Protoplasma. 230, 23-30 (2007).
  35. Mano, S., et al. Distribution and characterization of peroxisomes in Arabidopsis by visualization with GFP: dynamic morphology and actin-dependent movement. Plant Cell Physiol. 43 (3), 331-341 (2002).
  36. Nelson, K. B., Cai, X., Nebenführ, A. A multicolored set of in vivo organelle markers for co-localization studies in Arabidopsis and other plants. Plant J. 51 (6), 1126-1136 (2007).
  37. Goto, C., Tamura, K., Fukao, Y., Shimada, T., Hara-Nishimura, I. The novel nuclear envelope protein KAKU4 modulates nuclear morphology in Arabidopsis. Plant Cell. 26 (5), 2143-2155 (2014).
  38. Geldner, N., et al. combinatorial analysis of membrane compartments in intact plants with a multicolor marker set. Plant J. 59 (1), 169-178 (2009).
  39. Jang, I. -C., Henriques, R., Seo, S. H., Nagatani, A., Chua, N. -H. Arabidopsis phytochrome interacting factor proteins promote phytochrome B polyubiquitination by COP1 E3 ligase in the nucleus. Plant Cell. 22 (7), 2370-2383 (2010).
  40. AI-Sady, B., Ni, W., Kircher, S., Schäfer, E., Quail, H. P. Photoactivated phytochrome induces rapid PIF3 phosphorylation prior to proteasome-mediated degradation. Mol Cell. 23 (4), 439-446 (2006).
  41. Lam, K. S., et al. BFA-induced compartments from the Golgi apparatus and trans-Golgi network/early endosome are distinct in plant cells. Plant J. 60 (5), 865-881 (2009).
  42. Yoshimoto, K., et al. Processing of ATG8s, ubiquitin-like proteins, and their deconjugation by ATG4s are essential for plant autophagy. Plant Cell. 16 (11), 2967-2983 (2004).
  43. Xu, G., Zhang, X. Mechanisms controlling seed size by early endosperm development. Seed Biol. 2, 1(2023).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Preparatie van intact weefsellive cell imagingzaadkiemingstereomicroscoopfluorescent eiwit imagingmitochondri le motiliteitzaaddissectie

Gerelateerde artikelen