Keuze en No-keuze Assays voor het testen van de weerstand van A. thaliana te kauwen Insecten

Samenvatting

Plant de weerstand tegen kauwen insect herbivoren kunnen worden getest op verschillende manieren. Hier hebben we laten zien hoe je set-up een keuze en een no-keuze-experiment met de modelplant Arabidopsis thaliana te identificeren weerstand tegen de plaagsoorten Pieris rapae.

Samenvatting

Larven van de kleine witte kool vlinder zijn een plaag in de landbouw-instellingen. Deze rups soort feeds van planten in de kool familie, die veel gewassen zoals kool omvatten, broccoli, spruitjes etc. grootbrengen van de insecten vindt plaats op kool planten in de kas. Minstens twee kooien zijn nodig voor de opfok van Pieris rapae. Een voor de larven en de andere aan de volwassenen, de vlinders bevatten. Met het oog op de rol van de plantenhormonen en giftige plant chemicaliën in verzet tegen dit insect plaag te onderzoeken, tonen we aan twee experimenten. De eerste, de bepaling van de rol van jasmonzuur (JA - een plantenhormoon vaak aangegeven in resistentie tegen insecten) in het verzet tegen de kauwen insect Pieris rapae. Rups groei kan worden vergeleken op wild-type en mutant planten verminderde in de productie van JA. Dit experiment wordt beschouwd als "No Choice", omdat de larven worden gedwongen om van te leven op een enkele plant die synthetiseert of een tekort in JA. Ten tweede tonen we aan een experiment dat de rol van de glucosinolaten, die worden gebruikt als ovipositie (leg) signalen onderzoekt. Hier gebruiken we WT en mutant Arabidopsis verminderde in glucosinolaten de productie in een 'Choice "experiment waarin de vrouwelijke vlinders mogen kiezen om hun eieren te leggen op planten van een van beide genotype. Deze video toont de experimentele opstelling voor beide testen alsmede representatieve resultaten.

Protocol

No Choice Experiment:

1. Voorzichtig omsluiten de Arabidopsis plant van belang in een plastic beker. In dit geval: Col-0 (WT) en een mutant verminderde in de productie van JA. Zorg ervoor dat je beperking van schade aan de bladeren. Voor dat gebruik ik de achterkant van dit penseel.
   
2. Gebruik een fijn penseel met een vers uitgekomen larven te nemen van de kolonie op kool.
   
3. Plaats voorzichtig de larve op de Arabidopsis-planten.
   
4. Gewicht larve op dag 4, 7, 10. TIP: Kweek je planten onder korte dag omstandigheden (acht uur licht) tot vegetatieve groei (een larve kan zijn volledige levenscyclus te voldoen op een plant) te verhogen.

Keuze Experiment:

1. Twee planten zijn geselecteerd, een van elk genotype. Het beste is om planten groeien in dezelfde pot, met andere factoren, zoals de lade effecten, enz. te beperken
   
2. Zet de planten in een vlinder kooi.
   
3. Selecteer een vruchtbaar vrouwtje. Ik meestal vangen een vrouw die actief is eieren leggen in de opvoeding kolonie.
   
4. Laat de vrouw in de kooi met de keuze uit twee planten voor 24 uur.
   

TIP 1: Om een invloed van het leren te sluiten, mag niet aan vrouwen hergebruiken voor de volgende keuze tests.

TIP 2: Men kan alleen maar vergelijken met planten die een vergelijkbare groei fenotype hebben. Als alternatief kun je een blad monteren van elk genotype op de top van een erlenmeyer en vergelijken hun aantrekkelijkheid voor een vrouwtje.

Ga naar Annual Reviews van Plant Biology voor meer informatie over dit protocol en de plant immuun voor insecten herbivorie.