Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Geautomatiseerde bereiding van [68Ga]Ga-3BP-3940 op een synthesemodule voor PET-beeldvorming van de tumormicro-omgeving

1.7K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/68356

⸱

25 april 2025

 ,  ,  , 
1Nuclear medicine department, Institut régional du Cancer de Montpellier (ICM), University of Montpellier, 2IBMM, University of Montpellier, CNRS, ENSCM

In dit artikel

Samenvatting

Dit onderzoek beschrijft het geautomatiseerde proces voor de productie van [68Ga]Ga-3BP-3940 met de GAIA V2-synthesizer, voor PET-beeldvorming van fibroblastactiveringseiwit. Ook worden de resultaten gepresenteerd van kwaliteitscontroletests die zijn uitgevoerd op drie testbatches.

Samenvatting

Er is een snelle, efficiënte methode ontwikkeld op de GAIA-synthesemodule voor geautomatiseerde gallium-68 radiolabeling van 3BP-3940, een moleculaire beeldvormingssonde die zich richt op het fibroblastactiveringseiwit voor positronemissietomografiebeeldvorming van de micro-omgeving van de tumor. De reactiecondities betroffen acetaatbuffer (eindconcentratie: 0,1 M), methionine als antiradiolysemiddel (eindconcentratie: 5,4 mg/ml) en 30 μg 3BP-3940, met verhitting gedurende 8 minuten bij 98 °C. Een laatste zuiveringsstap op een C18-patroon was nodig om een radioactief gelabeld product met een hoge zuiverheid te verkrijgen. Daarentegen werd de door de generator geproduceerde 68Ga direct gebruikt zonder een concentratiestap op een kationenwisselpatroon. De productie van drie validatiebatches bevestigde de betrouwbaarheid van de methode, waardoor de synthese van [68Ga]Ga-3BP-3940 in 22,3 ± 0,6 minuten mogelijk was met een hoge radiochemische zuiverheid (RCP), zoals bepaald door zowel radio-HPLC (99,1% ± 0,1%) als radio-TLC (99,2% ± 0,1%). De gemiddelde radiochemische opbrengst, gebaseerd op RCP-waarden gemeten door radio-HPLC, was 74,4% ± 3,3%. De stabiliteit van het radioactief gelabelde product werd aangetoond tot 4 uur na bereiding. Dit protocol biedt een betrouwbare, snelle en efficiënte methodologie voor de bereiding van [68Ga]Ga-3BP-3940, die gemakkelijk kan worden omgezet naar een klinische setting.

Inleiding

In de afgelopen jaren heeft het richten op de tumormicro-omgeving (TME) veel belangstelling gewekt voor diagnostische en therapeutische toepassingen1. De overvloed aan celtypen, signaalmoleculen en extracellulaire matrix (ECM) macromoleculen binnen de TME biedt een breed scala aan potentiële moleculaire doelen2. Onder de residente en infiltrerende gastheercellen vormen kanker-geassocieerde fibroblasten (CAF's) een aparte subset van fibroblasten binnen de TME, fenotypisch verschillend van normale fibroblasten. CAF's spelen een cruciale rol bij tumorprogressie, metastase, immuunontwijking en therapieresistentie door middel van unieke cellulaire en moleculaire kenmerken3. Deze mesenchymale cellen vertonen een geactiveerd fenotype dat wordt gekenmerkt door de expressie van fibroblastactiveringseiwit (FAP). Moleculair scheiden CAF's een complexe reeks cytokines, chemokinen, groeifactoren (bijv. TGF-β, IL-6 en CXCL12) en ECM-eiwitten (bijv. collageen, fibronectine) af, die de ECM hermodelleren en een pro-tumorigene omgeving bevorderen4.

Als een zeer specifiek eiwit dat tot overexpressie wordt gebracht en gelokaliseerd op het extracellulaire oppervlak van het CAF-membraan, vertoont FAP alle kenmerken van een betrouwbaar moleculair doelwit, vooral voor nucleaire geneeskunde en radiofarmaceutische toepassingen5. In deze context werden op chinoline gebaseerde kleine molecuulremmers van FAP (FAPI), gefunctionaliseerd met een DOTA-groep, ontwikkeld en snel geïntroduceerd in klinisch gebruik 6,7,8. In het bijzonder hebben FAPI-04 en FAPI-46 radioactief gelabeld met gallium-68 (β+ zender, t1/2 = 68 min) voor beeldvorming met positronemissietomografie (PET) een significante waarde aangetoond bij fibrotische ziekten, cardiologie en oncologie 8,9, met name voor kankers waarbij [18F]fluorodeoxyglucose ([18F]FDG) beperkt nut heeft10. Hoewel hun bijdragen aan de beeldvorming van oncologie en niet-kwaadaardige ziekten onmiskenbaar zijn, vertonen FAPI's met kleine moleculen bepaalde beperkingen voor gerichte radionuclidetherapie (TRT)-toepassingen, met name vanwege hun suboptimale intratumorale verblijftijd, die kan leiden tot onbedoelde bestraling van gezond weefsel11. Om dit probleem aan te pakken, zijn verschillende strategieën onderzocht, zoals het ontwerp van multivalente liganden11,12 of het gebruik van therapeutische radionucliden met korte halfwaardetijden 13,14,15. Er zijn ook nieuwe moleculaire scaffolds ontwikkeld met een hoge affiniteit voor FAP en die een groot deel van de celinternalisatie teweegbrengen.

Een daarvan is het pseudopeptidederivaat FAP-2286. Het bevat een sequentie van 7 aminozuren, gecycliseerd en gekoppeld aan een DOTA-chelator door een 1,3,5-benzeentrimethaanthiolgroep16. Een eerste studie bij mensen toonde aan dat [68Ga]Ga-FAP-2286 een biodistributieprofiel vertoont dat vergelijkbaar is met [68Ga]Ga-FAPI-46, met een iets hogere fysiologische opname in de lever, de nieren en het hart17. In deze studie ondergingen 64 patiënten, voornamelijk met kanker van de nek, lever, maag, alvleesklier, eierstokken en slokdarm, PET-beeldvorming met [68Ga]Ga-FAP-2286 voor kankerstadiëring of detectie van recidief: de opname van [68Ga]Ga-FAP-2286 was opmerkelijk hoger dan [18F]FDG bij primaire tumoren, lymfekliermetastasen en metastasen op afstand, waardoor het beeldcontrast en de detecteerbaarheid van laesies werden verbeterd. Alle primaire tumoren waren zichtbaar met [68Ga]Ga-FAP-2286 PET/CT, terwijl [18F]FDG PET/CT bijna 20% van de laesies miste. Voor betrokken lymfeklieren waren de detectiepercentages hoger met [68Ga]Ga-FAP-2286, evenals voor bot- en viscerale metastasen. Een andere studie in een kleinere groep van 21 patiënten met een verscheidenheid aan kankerziekten toonde ook de uitstekende gevoeligheid van dit beeldvormende middel aan, wat de diagnostische efficiëntie van [68Ga]Ga-FAP-228618 weerspiegelt. Meer specifieke studies hebben zich gericht op een enkel type kanker, zoals urotheel- of longkanker, waarbij nogmaals het hoge potentieel van [68Ga]Ga-FAP-2286 voor klinische moleculaire beeldvorming 4,5 wordt benadrukt. Wat de therapie betreft, onderzocht een voorlopige studie het gebruik van FAP-2286 radioactief gelabeld met lutetium-177 (β-zender, t1/2 = 6,7 d) bij 11 patiënten met diverse progressieve, gemetastaseerde kankers19. De meeste patiënten kregen twee behandelingscycli met een tussenpoos van 8 weken, en de gemiddelde toegediende dosis per cyclus was 5,8 ± 2,0 GBq van [177Lu]Lu-FAP-2286. Het geneesmiddel vertoonde langdurige intratumorale retentie, met een effectieve halfwaardetijd van ongeveer 44 uur bij botmetastasen. Gezien de aanvaardbare bijwerkingen maakten deze bevindingen de weg vrij voor grootschalige klinische studies: de veiligheid en werkzaamheid van [177Lu]Lu-FAP-2286 worden momenteel beoordeeld in de fase 1/2 LuMIERE klinische studie, gesponsord door Novartis (NCT04939610)7,8. Verdere kleinschaligere onderzoeksprotocollen zijn gedocumenteerd in de literatuur 9,20, en er zijn meerdere casusrapporten gepubliceerd 21,22,23,24,25,26, die de werkzaamheid en uitstekende verdraagbaarheid van deze TRT aantonen.

Minimale structuurwijzigingen aan FAP-2286 leidden tot de geoptimaliseerde analoge 3BP-3940 (Figuur 1)27. Hoewel de wetenschappelijke literatuur over dit vectormolecuul beperkt blijft, zijn er vroege studies uitgevoerd voor zowel beeldvorming als therapeutische toepassingen. Een voorlopig rapport beschrijft het gebruik van [68Ga]Ga-3BP-3940 bij 18 patiënten met verschillende gemetastaseerde carcinomen in het eindstadium en concludeert dat dit radiofarmacon een geschikt PET-beeldvormingsmiddel is, met de nadruk op de uitstekende tumor-achtergrondverhouding en de zeer lage nieropname28. In een ander werk ontving een enkele patiënt met alvleesklierkanker met levermetastasen 150 MBq van [68Ga]Ga-3BP-3940 voor PET-beeldvorming, die intense opname in de primaire tumor en gemetastaseerde laesies aantoonde29. Dezelfde patiënt kreeg vervolgens een enkele dosis van 9,7 GBq van [177Lu]Lu-3BP-3940 voor TRT. De behandeling werd goed verdragen, zonder significante veranderingen in vitale functies of biologische parameters. Een andere studie presenteerde de eerste menselijke resultaten van een theranostische benadering met behulp van 3BP-3940: patiënten werden geselecteerd met [68Ga]Ga]3BP-3940 PET-beeldvorming en kregen vervolgens 3BP-3940 gelabeld met verschillende isotopen (177Lu, 90Y of 225Ac), alleen of in tandemcombinaties toegediend (bijv. 177Lu + 225Ac) in 1-5 behandelingscycli30. De resultaten omvatten één volledige remissie, vier gedeeltelijke remissies, drie stabiele ziekten en 12 ziekteprogressies. De mediane totale overleving van het cohort (n = 28) was 9 maanden vanaf de start van TRT.

figure-introduction-1
Figuur 1: Chemische structuur van [68Ga]Ga-3BP-3940. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Het 68Ga radioactieve labelingproces voor experimentele radiofarmaceutica zoals FAP-2286 en 3BP-3940 omvat over het algemeen een synthesemodule om de bereidingsstap te automatiseren. Met name methodeautomatisering zorgt voor procesrobuustheid en GMP-conformiteit en minimaliseert de blootstelling van de operator aan straling in vergelijking met handmatige bereidingsmethoden 31,32,33. In veel gevallen verwachten regelgevende instanties een dergelijk protocol als onderdeel van een dossier betreffende geneesmiddelen voor onderzoek (IMPD) voordat een centrum toestemming krijgt om het overeenkomstige experimentele radiofarmaconte vervaardigen 34. Tot op heden is er zeer weinig gedetailleerde informatie beschikbaar over de geautomatiseerde 68Ga-radiolabeling van anti-FAP-pseudopeptiden in de literatuur 29,35,36,37,38. Bovendien zijn de gerapporteerde gegevens over het algemeen alleen van toepassing op een bepaald model synthesizer. Het type 68Ga-generator dat wordt gebruikt, kan ook bepaalde specifieke kenmerken met zich meebrengen, aangezien de verschillende in de handel verkrijgbare oplossingen worden gekenmerkt door specifieke volumes van 68Ga3+ eluate in HCl (meestal 0,1 M), wat een directe impact kan hebben op de geautomatiseerde radiolabeling.

In deze context presenteren we een gedetailleerd protocol voor de snelle en efficiënte geautomatiseerde radiolabeling van het pseudopeptide 3BP-3940 met 68Ga, met behulp van de GAIA V2-synthesemodule. Deze synthesizer is gebaseerd op het gebruik van een buizenset bestaande uit drie hellingen van elk vijf spruitstukken, verbonden met een peristaltische pomp om de vloeistofstroom te regelen. Het beschikt ook over een injectieflacon voor het verwarmen van reactiemediums, verschillende radioactiviteitssondes en een druksensor om deze parameters binnen het systeem te bewaken. Hoewel niet zo wijdverbreid als sommige andere modellen, wordt deze automaat routinematig gebruikt in ons centrum en is hij geïnstalleerd in een groeiend aantal faciliteiten 31,39,40,41,42,43,44. Bij dit werk werd een GALLIAD 68Ge/68Ga-generator gebruikt zonder voorzuivering van het 68Ga-eluaat. Deze methode is ontworpen om een robuuste, snelle en handige oplossing te bieden voor de productie van [68Ga]Ga-3BP-3940, waarbij ook de stralingsbescherming voor operators tijdens radiolabeling wordt geoptimaliseerd. Dit is ook het eerste bereidingsprotocol voor dit radiofarmacon dat zo gedetailleerd wordt gerapporteerd op dit specifieke synthesizermodel.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

OPMERKING: Dit protocol omvat het werken met radio-isotopen. Iedereen die deze procedure uitvoert, moet goed zijn opgeleid in het omgaan met niet-ingekapselde radioactieve materialen en moet goedkeuring hebben van de stralingsveiligheidsfunctionaris van zijn instelling. De geautomatiseerde synthesizer moet in een aangewezen afgeschermde hete cel worden geplaatst. Handmatige procedures met radioactieve materialen moeten ook worden uitgevoerd in een afgeschermde hete cel of achter een geschikte stralingsafscherming.

1. Bereiding van reagentia

OPMERKING: De reagentia die nodig zijn voor de geautomatiseerde productie van [68Ga]Ga-3BP-3940 (zie materiaaltabel) werden bereid in een preparaatheidseenheid voor radiofarmaceutica (GMP-klasse C cleanroom). Reagentia kunnen in willekeurige volgorde en tot 2 uur voorafgaand aan de synthese worden bereid.

  1. Bereiding van de bufferoplossing (natriumacetaat 0,8 M)
    1. Verkrijg de volgende grondstof: natriumacetaattrihydraat EMPROVE API Ph Eur, BP, JP, USP, FCC, E262.
    2. Weeg in een steriele container (bijv. microcentrifugebuisje, 5 ml) die correct is geïdentificeerd, een exacte massa natriumacetaattrihydraat af van bijna 544,32 mg met behulp van een precisiebalans.
    3. Los natriumacetaat met behulp van een gekalibreerde micropipet en steriele kegels op in een hoeveelheid water voor injectie (WFI) van bijna 5 ml, zodat WFI is zoals hieronder beschreven.
      WFI-volume = (gewogen buffermassa x 5)/544,32
    4. Vortex de oplossing en laat deze door een ultrasoon bad (40 kHz, ~1 min) lopen om de oplosbaarheid te vergemakkelijken.
    5. Gebruik een spuit van 10 ml die is uitgerust met een naald van 21 G om de bufferoplossing op te zuigen. Installeer een filter van 0,22 μm tussen de spuit en een nieuwe naald en filtreer de bufferoplossing vervolgens rechtstreeks in een correct geïdentificeerde steriele verzegelde injectieflacon (bijv. TC-ELU 5) na desinfectie van het septum.
  2. Bereiding van een oplossing tegen radiolyse (methionine 10 mg/ml)
    1. Verkrijg de volgende grondstof: L-Methionine (Ph. Eur., USP) puur, farmaceutische kwaliteit.
    2. Weeg in een steriele container (bijv. microcentrifugebuisje 5 ml) die correct is geïdentificeerd, een exacte massa L-methionine van bijna 50 mg af met behulp van een precisieweegschaal.
    3. Gebruik een gekalibreerde micropipet en steriele kegels om L-methionine op te lossen in een volume WFI van bijna 5 ml, zodat WFI is zoals hieronder beschreven.
      WFI-volume = (gewogen buffermassa x 5)/50
    4. Vortex de oplossing en laat deze door een ultrasoon bad (40 kHz, ~1 min) lopen om de oplosbaarheid te vergemakkelijken.
    5. Gebruik een spuit van 10 ml die is uitgerust met een naald van 21 G om de methionineoplossing op te zuigen. Installeer een filter van 0,22 μm tussen de spuit en de nieuwe naald en filtreer de oplossing vervolgens rechtstreeks in een correct geïdentificeerde steriele verzegelde injectieflacon (bijv. TC-ELU 5, Curium) na desinfectie van het septum.

2. Voorbereiding van apparatuur voor kwaliteitscontroles

  1. pH-regeling van het eindproduct
    1. Plaats achter een geschikt beschermend schild een strook pH-papier voor latere controle van het eindproduct.
  2. Radiochemische zuiverheidscontrole door radio-TLC
    1. Bereid twee TLC-migratietanks voor met de juiste mobiele fasen. Mobiele fase A: citraatbuffer 0,1 M pH 4 in water, met verwachte Rf = 0-0,2 voor [68Ga]Ga-3BP-3940 en Rf = 0,8-1 gratis 68Ga3+. Mobiele fase B: ammoniumacetaatbuffer 1 M in een 1:1 mengsel van water en methanol (v/v), met verwachte Rf = 0-0,2 voor [68Ga]galliumcolloïden en Rf = 0,8-1 voor [68Ga]Ga-3BP-3940.
    2. Plaats achter een geschikt beschermend schild de twee TLC-migratietanks naast twee iVRC-SG-platen voor latere controle van de RCP van het eindproduct.
    3. Schakel de radiochromatograaf in en open de bijbehorende acquisitiesoftware op de besturingscomputer. Voer vooraf de identificatiegegevens in voor de eerste analyse die moet worden uitgevoerd.
  3. Radiochemische zuiverheidscontrole door radio-HPLC
    1. Controleer of het kolommodel dat nodig is voor de analyse (C18 ACE-equivalentie) op het systeem is geïnstalleerd.
    2. Bereid verse mobiele fase voor HPLC, d.w.z. water voor HPLC + 0,1% TFA (oplosmiddel A) en acetonitril + 0,1% TFA (oplosmiddel B). Sluit de flessen oplosmiddel A en oplosmiddel B aan op de overeenkomstige leidingen op de radio-HPLC.
    3. Zet de besturingscomputer aan en maak verbinding met de besturingssoftware.
    4. Open indien nodig de ontluchtingsklep op de pompmodule en ontlucht de leidingen die voor analyse worden gebruikt (d.w.z. lijn A en lijn B). Sluit de ontluchtingsklep na deze handeling.
    5. Laat het systeem in evenwicht brengen met een hoeveelheid oplosmiddel die gelijk is aan het begin van de gradiënt (d.w.z. 95% A/5% B) met een stroom van 0,6 ml/min gedurende ten minste 20 minuten. Gebruik voor de [68Ga]Ga-3BP-3940 HPLC-analysesequentie het debiet dat op 0,6 ml/min wordt gehouden en programmeer de mobiele fasegradiënt van 0,1% TFA in water (A) tot 0,1% TFA in acetonitril (B) als volgt: 0 - 1 min 95/5 A/B; 1 - 8 min lineaire gradiënt van 95/5 A/B tot 60/40 A/B; 8 - 9 min 60/40 A/B; 9 - 10 min lineaire gradiënt van 60/40 A/B tot 95/5 A/B; 10 - 12 min 95/5 A/B.
    6. Selecteer de analysemethode met de mobiele fasegradiënt beschreven in stap 2.3.5 en voer vervolgens de identificatie-informatie voor de eerste uit te voeren analyse in.
    7. Bereid in een afgeschermde container een HPLC-injectieflacon met een glazen inzetstuk voor om het te analyseren monster te ontvangen en plaats het achter een geschikt beschermend schild.

3. Voorbereiding van de synthesemodule

  1. Schakel de stroom en het licht van de afgeschermde cel in. Zet de laptop aan die de synthesizer bestuurt en log in op de modulesoftware.
  2. Verwijder indien nodig de oude kit uit de synthesizer en gooi het afval weg in de daarvoor bestemde containers.
  3. Reinig de binnenkant van de afgeschermde kast waarin de synthesemodule is ondergebracht en van de synthesizer zelf in overeenstemming met de geldende hygiënenormen.
  4. Druk op de synthesizersoftware op Gebruiker, selecteer vervolgens een gebruikersnaam en voer het bijbehorende wachtwoord in het pop-upvenster in. Druk op Methode en selecteer het geautomatiseerde protocol dat eerder is geconfigureerd voor de [68Ga]Ga-3BP-3940-synthese.
  5. Druk op Voorbereiding en voer de synthesetitel, het vectorbatchnummer, het batchnummer van de reagenskit en eventuele opmerkingen in het juiste tekstvak in. In dit stadium kan ook een checklist met de verschillende stappen voor het voorbereiden van de kit worden opgesteld en gevolgd (aanvullende figuur 1).

4. Voorbereiding van de synthesecassette en cassette-installatie

  1. Reinig de werkbank van het radiofarmaceutisch laboratorium met een doekje en het juiste reinigingsmiddel en plaats een steriel laken over de werkbank.
  2. Zorg voor een steriele [68Ga]Ga-etiketteercassette (referentie RT-01-H) en een reagentiakit (aanvullende afbeelding 2). De 3 hellingen van de slangenset worden van links naar rechts op de module aangeduid als A, B en C; de spruitstukken van elke oprijplaat zijn genummerd van 1 tot 5 van boven naar beneden (oprijplaten A en C) of van links naar rechts (oprijplaat B).
  3. Zet de cassette in elkaar volgens de onderstaande stappen.
    1. Wikkel de [68Ga]Ga-cassette-envelop uit, controleer op eventuele beschadigingen en draai elke Luer-verbinding op de cassette vast. Verwijder alle spikedoppen.
    2. Gebruik een Luer Lock-spuit van 5 ml en een naald van 21 G om 5 ml ethanol absolue uit de reagenskit op te zuigen en heel langzaam over de C18-cartridge te halen, vervolgens 5 ml WFI op te zuigen (niet meegeleverd in de set) en heel langzaam over dezelfde C18-cartridge te halen om het voor te conditioneren.
    3. Plaats helling A van de slangenset op de synthesemodule en draai aan de twee vergrendelingen om de helling op zijn plaats te houden. Sluit het vrije uiteinde van de verticale A1-slang aan op een 19G-naald en steek deze in de afvalflacon.
    4. Voeg een ontluchtingsnaald toe aan de afvalflacon en plaats deze naar achteren, optimaal achter de afgeschermde container die de evacuatieflacon zal ontvangen. Plaats een filter van 0,22 μm op positie A4.
    5. Sluit de horizontale A1-slang aan op de druksensor linksonder op het voorpaneel van de module.
    6. Sluit met behulp van een mannelijke/mannelijke adapter in horizontale A5-positie een verlengstuk van 30 cm aan dat wordt afgesloten met een aansluitfilter van 0,22 μ en een 20G-naald van 80 mm.
    7. Steek de bovengenoemde naald van 20 G in een afgesloten, steriele evacuatieflacon (bijv. TC-ELU 5), voeg een beluchtingsnaald toe en plaats de evacuatieflacon in de afgeschermde container.
    8. Plaats de buisleiding die verticaal A1 met verticaal C1 verbindt achter de bevestigingshaken boven oprit B.
    9. Sluit de horizontale verdelers A2 en B1 aan met een korte verlenglijn (niet meegeleverd in de set, of de oorspronkelijke aansluiting in positie C5 horizontaal), met behulp van de adapter die al in positie A2 is gemonteerd.
    10. Plaats helling B op de synthesemodule en draai aan de twee vergrendelingen om de helling op zijn plaats te houden.
    11. Sluit de voorgeconditioneerde C18-cartridge aan op de horizontale C2-positie, waarbij de adapter de horizontale B5-klep met C2 aan de linkerkant verbindt.
    12. Plaats helling C op de synthesemodule en draai aan de twee vergrendelingen om de helling op zijn plaats te houden.
    13. Sluit met behulp van een mannelijke/mannelijke adapter een verlenglijn van 50 cm van horizontale C5 aan op de GALLIAD 68Ga-generator.
    14. Plaats de glas-in-lood reactieflacon van de slangenset in de oven van de module. Plaats de slang voorzichtig van verticaal A5 naar verticaal C5 in de slangenpomp, sluit de pomp, controleer of de slang correct is geplaatst en leid de slang door de activiteitssensor aan de linkerkant van de pomp.
  4. Voer een tussentijdse controle uit om er zeker van te zijn dat de cassette en de slang op de radiosynthesizer zijn gemonteerd zoals weergegeven in figuur 2, nog zonder reagentia.

figure-protocol-1
Figuur 2: Configuratie van de synthesemodule. (A) Opstelling voor geautomatiseerde synthese van [68Ga]Ga-3BP-3940 op de synthesemodule. (B) Gegevens over de reagensposities voor de geautomatiseerde productie van [68Ga]Ga-3BP-3940 met behulp van een GAIA-synthesemodule. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

5. Installatie van reagentia

  1. Nadat de oprijplaten op de module zijn geïnstalleerd, installeert u de reagentia zoals hieronder beschreven.
    1. Sluit de WFI-zak van 250 ml uit de reagenskit aan op de C4-slang met behulp van de Spike-adapter en hang de zak aan de speciale haak aan de rechterkant van de module.
    2. Gebruik een driedelige Luer Lock-spuit van 3 ml uitgerust met een naald van 20 G, om 1,5 ml van de eerder bereide L-methionine 10 mg/ml-oplossing op te zuigen, de spuit aan te sluiten op de horizontale C1-slang en de spuit in de daarvoor bestemde gleuf aan de rechterkant van de module te hangen. Laat ongeveer 2 ml lucht tussen het vloeistofoppervlak en de afdichting van de zuiger van de spuit om een volledige vloeistofoverdracht te garanderen.
    3. Zuig met behulp van een spuit van 1 ml met een naald van 20 g 750 μl van de eerder bereide 10 mg/ml L-methionineoplossing op en injecteer in de injectieflacon met 0,9% NaCl (blauwe krimp) uit de reagensset, na desinfectie van het septum.
    4. Gebruik een driedelige Luer Lock-spuit van 10 ml met een naald van 20 G om de inhoud van de injectieflacon met 0,9% NaCl + L-methionine op te zuigen (blauwe krimp), in te stellen op 8,6 ml, de Spike in positie B4 te verwijderen en vervolgens de spuit in plaats daarvan op B4 aan te sluiten. Laat ongeveer 2 ml lucht tussen het vloeistofoppervlak en de afdichting van de zuiger van de spuit om een volledige vloeistofoverdracht te garanderen.
    5. Gebruik een driedelige Luer Lock-spuit van 3 ml met een naald van 20 G om de inhoud van de injectieflacon met 60% ethanol (oranje krimp) op te zuigen na desinfectie van het septum. Controleer of het volume ten minste gelijk is aan 1,5 ml, verwijder de Spike in stand B5 en sluit vervolgens de spuit aan op B5. Laat ongeveer 2 ml lucht tussen het vloeistofoppervlak en de afdichting van de zuiger van de spuit om een volledige vloeistofoverdracht te garanderen.
    6. Gebruik een spuit van 1 ml met een laag dode volume en een naald van 20 G, zuig 0,25 ml van de eerder bereide 0,8 M natriumacetaatbufferoplossing op en injecteer deze in de injectieflacon met 30 μg 3BP-3940 om deze op te lossen door opeenvolgende injecties/heraspiratiecycli. Zuig de 0.25 ml-oplossing op in dezelfde spuit, koppel de naald los en plaats de buffer + vectorspuit in B3. Laat ongeveer 0,25 ml lucht tussen het vloeistofoppervlak en de zuiger van de spuit om een volledige vloeistofoverdracht te garanderen.
  2. Voer een laatste controle uit voor het begin van de synthese, zoals hieronder beschreven.
    1. Controleer of alle reagentia zijn aangesloten op de cassette of slang, zoals weergegeven in afbeelding 3.
    2. Zorg ervoor dat elk van de aansluitingen van de kit voldoende goed vastzit. Zorg ervoor dat er geen slang bekneld of schuin staat.
  3. Het systeem is klaar. Sluit het voorpaneel en schakel de ventilatie van de afgeschermde cel in.

figure-protocol-2
Figuur 3: Opstelling van de kit. Definitieve installatie van de buizenset en reagentia op de synthesizer voor de radiolabeling van 3BP-3940 met 68Ga. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

6. Geautomatiseerde radioactieve labelingssequentie voor de productie van [68Ga]Ga-3BP-3940

  1. Klik op Synthese uitvoeren wanneer alle reagentia op de hellingen zijn geplaatst en alle informatie correct is geregistreerd in de software.
  2. Een typisch profiel van de verdeling van de radioactiviteit in de slangenset gedurende de synthesesequentie wordt weergegeven in Figuur 4. Volg de opeenvolgende stappen in de geautomatiseerde methode voor het bereiden van [68Ga]Ga-3BP-3940 zoals hieronder beschreven.
    1. Integriteitstests van de kit: na een korte ontluchting van de slang in de richting van de afvalflacon (in wezen om de resterende vloeistof in de C18-patroon te verwijderen), verhoogt het systeem de interne druk door A4 te openen en gefilterde lucht via de peristaltische pomp te pompen. Zodra de op A1 aangesloten druksensor een slangdruk > 1500 mbar detecteert, sluit het systeem en stopt de slangenpomp. Als de drukval niet hoger is dan 400 mbar gedurende 15 s, beoordeel dan de integriteitstest van de kit als succesvol en begin met de synthese. Als de test mislukt, vermoed dan een systeemlek en breek de synthesesequentie af.
    2. Toevoeging van vector aan reactieflesje: Zorg ervoor dat de 3BP-3940 die in de bufferoplossing is opgelost, in ongeveer 30 s via spruitstuk B2 in de reactieflacon wordt gezogen.
    3. Toevoeging van L-methionine aan de reactieflacon: Zorg ervoor dat de methionineoplossing in de spuit bij C1 wordt overgebracht naar de reactieflacon via spruitstuk B2, helling C omlaag en vervolgens helling A opwaarts om bij helling B af te takken via spruitstuk A2.
    4. Activering van de C18-cartridge met WFI: Zorg ervoor dat de WFI in de zak bij C4 over de C18-cartridge wordt geleid, waarbij ook de hellingen A, B en C worden gespoeld op de paden die worden gevolgd door de vector- en methionineoplossingen. Dezelfde routes worden vervolgens gespoeld met gefilterde lucht om ervoor te zorgen dat er geen water in de slang blijft voor de volgende stappen.
    5. Generatorelutie in reactieflacon (handmatige interventie): Om de GALLIAD-generator te elueren, draait u de groene knop bovenop de generator 90° naar de laadstand voordat u 10-20 s wacht: deze tijd stelt de generator in staat om een vast eluaatvolume van 1,1 ml voor te bereiden. Zet de groene knop terug in de beginstand en klik op de prompter op de besturingssoftware. De peristaltische pomp zuigt vervolgens de 68Ga-eluaat in de reactieflacon gedurende een periode van 3 minuten. Gedurende dit tijdsinterval wordt de temperatuur van de reactieflacon geleidelijk verhoogd tot 60 °C gedurende 1 minuut en vervolgens tot 90 °C gedurende 2 minuten, om de ingestelde temperatuur voor de radioactieve labelstap sneller te bereiken.
    6. Radioactieve labeling: Controleer of aan het begin van de radioactieve labeling gedurende 30 s een insteltemperatuur van 120 °C wordt toegepast om een snelle, efficiënte verwarming mogelijk te maken. Controleer of de ingestelde temperatuur vervolgens gedurende 2 minuten op 98 °C is ingesteld. Door de verhitting en drukstijging in de reactieflacon heeft een deel van het reactiemedium de neiging om terug te stromen in de slang die is aangesloten op B2. Om dit te beperken, wordt een lijnontluchting van 10 seconden ingesteld na 2 minuten verwarmen; Daarna gaat het radiolabelen ongeveer 5,5 minuten door.
    7. Opvang op patroon C18 : Zorg ervoor dat gefilterde lucht door C3 in het reactievat wordt gepompt. Door de druk die op het oppervlak van de vloeistof wordt uitgeoefend, kan het reactiemedium naar boven stromen door de slang die is aangesloten op B2 en vervolgens naar de SPE-patroon. De reactieflacon wordt vervolgens met WFI uit de zak bij C4 gespoeld en deze spoelvloeistof wordt op dezelfde manier overgebracht naar de SPE-patroon. De cartridge wordt uiteindelijk gespoeld met verse WFI en gespoeld met gefilterde lucht.
    8. Elutie van patroon C18 en formulering (toevoeging van NaCl 0,9% + L-methionine): De SPE-patroon houdt in eerste instantie het radioactief gelabelde product en eventuele galliumcolloïden vast en laat vrij 68Ga3+ door. Om de patroon te elueren en [68Ga]Ga-3BP-3940 in de terminale injectieflacon terug te winnen, moet u ervoor zorgen dat opeenvolgende fracties ethanol 60% en methionine ~0,9 mg/ml in NaCl 0,9% (elk 3x 0,5 ml) over de patroon worden getrokken voor elutie. De volledige inhoud van de spuit bij B4 wordt vervolgens in een formuleringsstap door de C18-patroon geleid om een uiteindelijke ethanolconcentratie van <10% in de eindinjectieflacon te bereiken.
    9. Filterintegriteitstest (handmatige interventie): Volg na synthese en verwijdering van de aansluitflacon de prompt waarin wordt gevraagd om het terminalfilter aan te sluiten op de afvalflacon en verwijder het ontluchtingsfilter uit de afvalflacon om de integriteit van het terminalfilter te controleren met behulp van een bellenpunttest. Tijdens de bubble point-test wordt het filter in eerste instantie gedurende 30 s bevochtigd door WFI. Na het doorspoelen van de leidingen wordt de druk in het systeem langzaam verhoogd tot >2500 mbar gedurende <2 minuten, waarbij de synthesizer controleert of er geen drukverhoging is op de uitlaat van het filter. Vervolgens verhoogt het systeem langzaam de druk om het bubbelpunt te controleren. De synthesizer zal uiteindelijk de druk registreren wanneer de druk op de filteruitlaat toeneemt om de druk van het bellenpunt te bepalen.
  3. Aan het einde van de synthese genereert de automatonsoftware een syntheserapport waarin het verloop van de radioactieve labeling wordt beschreven en de temperaturen in de reactiefles, de drukken in het systeem en de betrokken hoeveelheden radioactiviteit worden gevolgd (Figuur 4). Bereken als aanvulling handmatig de voor verval gecorrigeerde radiochemische opbrengst (RCY) volgens de formule:
    RCY = figure-protocol-3
    met restactiviteiten die de resterende activiteiten beschrijven in de reactieflacon, op de C18-patroon en in de afvalflacon aan het einde van de synthese.

figure-protocol-4
Figuur 4: Typisch verdelingsprofiel van radioactiviteit binnen de module. (A) reactieflesje; (B) C18 patroon tijdens synthese van [68Ga]Ga-3BP-3940. De stroom van 68Ga eluate in de reactieflacon vindt plaats na 6 minuten. De activiteit blijft gedurende de hele radioactieve labelingsreactie in de reactieflacon. Na 16 minuten wordt de activiteit overgebracht naar de SPE-cartridge. De cartridge wordt na 19,5 min geëlueerd, waarna er een restactiviteit van ongeveer 150 MBq overblijft op de stationaire fase. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

7. Dosering en kwaliteitscontroles van [68Ga]Ga-3BP-3940

  1. Breng de eindinjectieflacon over naar een geschikte afgeschermde cel voor het meten van de radioactiviteit en het bereiden van de dosis voor de patiënt.
  2. Meet de activiteit van de eindinjectieflacon met een goed gekalibreerde dosiskalibrator en noteer het preparaat op de computer.
  3. Identificeer de injectieflacon op de juiste manier en plaats deze in een geschikte afgeschermde container. Zuig met behulp van geschikte aseptische technieken en stralingsbeschermingstechnieken een monster van ~0,5 ml uit de eindinjectieflacon voor kwaliteitscontrole.
    1. Beoordeel het uiterlijk van het preparaat door visuele inspectie. Beoordeel de pH van het preparaat door een druppel productoplossing op de pH-papierstrip te deponeren.
    2. Meet de radiochemische zuiverheid door middel van radio-TLC door een druppel productoplossing op elk van de twee eerder voorbereide iTLC-SG-platen te deponeren. Laat de platen vervolgens migreren naar de overeenkomstige mobiele fasen en lees ze door de radiochromatograaf. Integreer het resulterende radiochromatogram door het gebied onder de curve van het productsignaal en het onzuiverheidssignaal te meten, en bereken vervolgens de radiochemische zuiverheid volgens de formule:
      RCP (%) = 100 - %AUConzuiverheid 1 - %AUConzuiverheid 2
    3. Meet de radiochemische zuiverheid door middel van radio-HPLC door ~50 μl van het preparaat in de vooraf voorbereide HPLC-injectieflacon te injecteren (zie stap 2.3.7). Plaats de injectieflacon in de HPLC autosampler op de gewenste positie en start de analysereeks. Zodra het monster in het systeem is geïnjecteerd, verwijdert u de injectieflacon uit de autosampler en plaatst u deze terug in de afgeschermde container om bestraling tot een minimum te beperken. Aan het einde van de analyse integreert u het resulterende radiochromatogram door het gebied onder de curve van het productsignaal en de onzuiverheidssignalen te meten, en berekent u vervolgens de radiochemische zuiverheid volgens de formule:
      RCP (%) = 100 - Σ(%AUC-onzuiverheden)
    4. Controleer de halfwaardetijd (gammateller) van de radio-isotoop in het preparaat door ~5 μL preparaat toe te voegen aan een gammatellerbuis die 1 ml WFI bevat. Tel het buisje met de gammateller 10x achter elkaar (tellingen van elk 1 min). Bereken de halfwaardetijd op basis van het radioactieve verval dat tijdens de 10 metingen is waargenomen.
    5. Voer de radionuclidische identiteitstest uit op hetzelfde monster als de halfwaardetijdtest door gammaspectrometrieanalyse uit te voeren met behulp van de gammateller, op zoek naar de pieken van 511 keV en 1077 keV van annihilatiefotonen.
    6. Beoordeel de radionuclidische zuiverheid na een vervalperiode van 48 uur van het vorige monster. Voer een meting van 120 minuten uit in de gammateller, waardoor eventuele resterende 68Ga-activiteit die in situ wordt gevormd door een doorbraak van 68Ge en andere radionuclide-onzuiverheden met een lange halfwaardetijd kunnen worden gedetecteerd.

8. Stabiliteit van het [68Ga]Ga]3BP-3940 preparaat

  1. Beoordeel drie testbatches op stabiliteit in de loop van de tijd. Hiertoe moet elk uur onmiddellijk na de EoS en tot 4 uur na de synthese ongeveer 200 μl preparaat uit de eindinjectieflacon worden opgezogen.
  2. Voer op elk tijdstip een radio-HPLC-analyse uit om RCP door HPLC te meten volgens de hierboven beschreven procedure. Voer op elk tijdstip radio-TLC-analyses uit om RCP door TLC te meten volgens de eerder beschreven procedure.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Het syntheseproces dat op de GAIA-module is ontwikkeld, maakt een snelle 68Ga radioactieve labeling van 3BP-3940 mogelijk in 21-22 minuten. Dit protocol is ontworpen om te werken met de 68Ge/68Ga-generator GALLIAD van farmaceutische kwaliteit, die 1,1 ml 68Ga-eluaat produceert in 0,1 M HCl. Het volume en de molariteit van de reactiebuffer werden nauwkeurig afgesteld op basis van deze hoeveelheid zuur om een reactie-pH tussen 3,5 en 4 te verkrij...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Dit werk presenteert een GMP-conform geautomatiseerd voorbereidingsprotocol voor de synthese van [68Ga]Ga-3BP-3940 met behulp van een GAIA-module en een GALLIAD-generator. Deze methode is aangepast op basis van protocollen die in ons centrum worden gebruikt voor gallium-68 radioactieve labeling van vectoren zoals PSMA-liganden44 en andere FAP-remmers 43,46 voor klinische PET-beeldvorming, met kl...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen commerciële partnerschappen of financieringsbronnen die zouden leiden tot een reëel of vermeend belangenconflict met betrekking tot dit werk om bekend te maken.

Dankbetuigingen

De auteurs danken Yasmine Soualy, Stéphane Renaud en Élodie Gaven voor hun hulp bij het voorbereiden van de radioactieve labelingsreacties die in dit manuscript worden gepresenteerd.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
0.2 µ filtersVWR514-0515Voor de filtratie van buffer- en antioxidantoplossingen en eindradiolabelingproduct
Acetonitrile voor HPLCSigma Aldrich34851-2.5LVoor HPLC-controle van radiochemische zuiverheid
AmmoniumacetaatSigma Aldrich238074Voor de bereiding van een van de mobiele fasen voor TLC-controle
C18-kolom voor HPLCVWREQV-3C18-1503Voor HPLC-controle van radiochemische zuiverheid
Gekalibreerd dosiskalibratie (CRC25)Capintec-Voor het meten van de radioactiviteit van het eindproduct en de verschillende componenten van het module post-synthese
Citraatbufferoplossing, pH 4Thermofisher258585000Mobiele fase voor TLC-controles
Eppendorfbuis 5 mL BiopurSigma AldrichEP0030119479Voor de bereiding van buffer- en antioxidantoplossingen
Verlenglijn (30 cm)Vygon1159.03Voor de aansluiting van de generator op de slangset
Gallium-68 generatorIRE Elit-Voor in situ-generatie van [68Ga]galliumchloride
Gammateller (Hidex AMG)Hidex-Voor halfwaardetijd en radiochemische zuiverheidsbeoordeling
HPLC-stationShimadzu-Voor HPLC-controle van radiochemische zuiverheid
iTLC-SG platenAgilentSGI0001Voor TLC-controle van radiochemische zuiverheid
L-methionineAppliChemA1340Voor de bereiding van antioxidantoplossingen
Male/male adapterVygon893.00Voor de aansluiting van de generator op de slangset
MethanolSigma Aldrich320390-1LVoor de bereiding van een van de mobiele fasen voor TLC-controle
Naalden (21G, Sterican)B Braun4657543BVoor oplossingsoverdrachten vóór radiolabeling
pH-papierVWR85409.600Om de pH van het radiolabelingsproduct te testen
Pipet 1000 µL (Gilson PIPETMAN)Fisher Scientific12346132-1000Voor nauwkeurig vloeistofmeten en overbrengen
Pipet 200 µL (Gilson PIPETMAN)Fisher Scientific12326132-200Voor nauwkeurig vloeistofmeten en overbrengen
Pipetpunten, 100-1000 μLCharles RiverD1000IWVoor nauwkeurig vloeistofmeten en overbrengen
Pipetpunten, 2-200 μLCharles RiverD200IWVoor nauwkeurig vloeistofmeten en overbrengen
RadiochromatograafElysia-Raytest-Voor TLC-controle van radiochemische zuiverheid
Radiosensor voor HPLCElysia-Raytest-Voor HPLC-controle van radiochemische zuiverheid
ReagenskitABXRT-101Bevat ethanol 60%, NaCl 0,9%, WFI-zak, C18-cartridge, 0,2 µ eindfilter, beluchtingsnaalden, eindnaald en afvalflesje
Afgeschermde containerLemerPaxVoor stralingsdemping van het radiolabelingsproduct
Plastiek spatel voor eenmalig gebruikCorning3005Voor de bereiding van reagentia
Natriumacetaattrihydraat EMPROVESigma Aldrich1.28204Voor de bereiding van reactiebuffer
Sterile verzegelde flacons (glas type 1)CuriumTC-ELU-5Voor de uiteindelijke conditionering van buffer-, antioxidant- en radiolabelingsoplossingen
Steriele slangsetABXRT-01-HVoor geautomatiseerde synthese van [68Ga]Ga-3BP-3940
Steriele water voor irrigatieB Braun0082479EVoor de bereiding van een van de mobiele fasen voor TLC-controle
Synthesemodule (GAIA)Elysia-Raytest-Voor geautomatiseerde synthese van [68Ga]Ga-3BP-3940
Spuit (1 mL, lage doodvolume)B Braun9166017VVoor peptide in bufferconditionering en toevoeging van methionine in NaCl 0,9%
Spuiten (10 mL)Becton Dickinson309649Voor methionine in NaCl 0,9% en conditionering
Spuiten (3 mL)Becton Dickinson309658Voor methionine en ethanol 60% conditionering
TLC-migratietanksFisher Scientific50-212-281Voor TLC-controle van radiochemische zuiverheid
Trifluorazijnzuur (geschikt voor HPLC)Sigma Aldrich302031-100MLVoor HPLC-controle van radiochemische zuiverheid
Buizen voor gammateller--Voor voorbereiding van halfwaardetijd en radiochemische zuiverheidsmetingen
UltrasoonbadSelecta3000683Voor sonicatie van bereide oplossingen
Vectormolecuul (3BP-3940)MedChemExpressHY-P10131 Vectormolecuul dat geradiolabeld moet worden
Vial voor HPLC met glazen inzetSigma Aldrich29385-U en SU860066Voor HPLC-controle van radiochemische zuiverheid
VortexmixerVWR444-5900PVoor het roeren van de bereide oplossingen
Water voor HPLCSigma Aldrich34877-2.5L-MVoor HPLC-controle van radiochemische zuiverheid
Water voor injectie, 10 mL kolvenAguettan34009 370 641 0 1Voor de bereiding van oplossingen

Referenties

  1. Xiao, Y., Yu, D. Tumor microenvironment as a therapeutic target in cancer. Pharmacol Ther. 221, 107753(2021).
  2. Zhang, L., et al. Targets of tumor microenvironment for potential drug development. MedComm Oncol. 3 (1), e68(2024).
  3. Fouillet, J., Torchio, J., Rubira, L., Fersing, C. Unveiling the Tumor Microenvironment Through Fibroblast Activation Protein Targeting in Diagnostic Nuclear Medicine: A Didactic Review on Biological Rationales and Key Imaging Agents. Biology. 13 (12), 967(2024).
  4. Chen, Y., McAndrews, K. M., Kalluri, R. Clinical and therapeutic relevance of cancer-associated fibroblasts. Nat Rev Clin Oncol. 18 (12), 792-804 (2021).
  5. Lindner, T., et al. Targeting of activated fibroblasts for imaging and therapy. EJNMMI Radiopharm Chem. 4 (1), 16(2019).
  6. Jansen, K., et al. Extended structure-activity relationship and pharmacokinetic investigation of (4-quinolinoyl)glycyl-2-cyanopyrrolidine inhibitors of fibroblast activation protein (FAP). J Med Chem. 57 (7), 3053-3074 (2014).
  7. De Decker, A., et al. Novel Small Molecule-Derived, Highly Selective Substrates for Fibroblast Activation Protein (FAP). ACS Med Chem Lett. 10 (8), 1173-1179 (2019).
  8. Van Rymenant, Y., et al. In Vitro and In Situ Activity-Based Labeling of Fibroblast Activation Protein with UAMC1110-Derived Probes. Front Chem. 9, 640566(2021).
  9. Lindner, T., et al. Development of Quinoline-Based Theranostic Ligands for the Targeting of Fibroblast Activation Protein. J Nucl Med. 59 (9), 1415-1422 (2018).
  10. Guglielmo, P., et al. Head-to-Head Comparison of FDG and Radiolabeled FAPI PET: A Systematic Review of the Literature. Life. 13 (9), 1821(2023).
  11. Ora, M., et al. Fibroblast Activation Protein Inhibitor-Based Radionuclide Therapies: Current Status and Future Directions. J Nucl Med. 64 (7), 1001-1008 (2023).
  12. Zhao, L., et al. Synthesis, Preclinical Evaluation, and a Pilot Clinical PET Imaging Study of FAPI Dimer. J Nucl Med. 63 (6), 862-868 (2022).
  13. Ferdinandus, J., et al. Initial clinical experience with radioligand therapy for advanced stage solid tumors: a case series of nine patients. J Nucl Med. 63 (5), 727-734 (2021).
  14. Rathke, H., et al. Two Tumors, One Target: Preliminary Experience With 90Y-FAPI Therapy in a Patient With Metastasized Breast and Colorectal Cancer. Clin Nucl Med. 46 (10), 842-844 (2021).
  15. Fendler, W. P., et al. Safety and Efficacy of 90Y-FAPI-46 Radioligand Therapy in Patients with Advanced Sarcoma and Other Cancer Entities. Clin Cancer Res. 28 (19), 4346-4353 (2022).
  16. Zboralski, D., et al. Preclinical evaluation of FAP-2286 for fibroblast activation protein targeted radionuclide imaging and therapy. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 49 (11), 3651-3667 (2022).
  17. Pang, Y., et al. PET Imaging of Fibroblast Activation Protein in Various Types of Cancer Using 68Ga-FAP-2286: Comparison with 18F-FDG and 68Ga-FAPI-46 in a Single-Center, Prospective Study. J Nucl Med. 64 (3), 386-394 (2023).
  18. Banihashemian, S. S., et al. [68Ga]Ga-FAP-2286, a novel promising theragnostic approach for PET/CT imaging in patients with various type of metastatic cancers. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 51 (7), 1981-1988 (2024).
  19. Baum, R. P., et al. Feasibility, Biodistribution, and Preliminary Dosimetry in Peptide-Targeted Radionuclide Therapy of Diverse Adenocarcinomas Using 177Lu-FAP-2286: First-in-Humans Results. J Nucl Med. 63 (3), 415-423 (2022).
  20. Loktev, A., et al. Development of Fibroblast Activation Protein-Targeted Radiotracers with Improved Tumor Retention. J Nucl Med. 60 (10), 1421-1429 (2019).
  21. Banihashemian, S. S., et al. The complete metabolic/molecular response to chemotherapy combined with [177Lu]Lu-FAP-2286 in metastatic breast cancer. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 51 (13), 4185-4187 (2024).
  22. Rao, Z., Zhang, Y., Liu, L., Wang, M., Zhang, C. [177Lu]Lu-FAP-2286 therapy in a case of right lung squamous cell carcinoma with systemic metastases. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 50 (4), 1266-1267 (2023).
  23. Yang, H., Liu, H., Zhang, Y., Zhang, Y., Chen, Y. Metastatic Lung Adenocarcinoma Received Combined 177Lu-FAP-2286 Radiation Therapy and Targeted Therapy. Clin Nucl Med. 49 (6), 569-571 (2024).
  24. Wan, Z., Wang, W., Chen, Y., Zheng, W., Huang, Z. 177Lu-FAP-2286 Therapy in a Patient With Metastatic Rhabdoid Meningioma. Clin Nucl Med. 49 (9), 879-881 (2024).
  25. Yang, H., Liu, H., Li, H., Zhang, Y., Chen, Y. 177Lu-FAP-2286 Therapy in a Metastatic Bone Malignant Solitary Fibrous Tumor. Clin Nucl Med. 49 (5), 472-474 (2024).
  26. Li, L., Yang, J., Peng, D., Zhang, Y., Chen, Y. 177 Lu-FAP-2286 Therapy in a Case of Recurrent Bladder Cancer With Multiple Metastatic Lesions. Clin Nucl Med. 48 (11), 1012-1014 (2023).
  27. Compounds comprising a fibroblast activation protein ligand and use thereof. US Patent. , US20230212549A1 https://patents.google.com/patent/US20230212549A1/en (2023).
  28. Jakobsson, V., et al. First-in-human study of a novel radiolabeled fibroblast activating protein (FAP)-targeted peptide 68Ga-FAP-3BP-3940 for PET/CT imaging in patients with solid tumors. J Nucl Med. 64 (supplement 1), P1615-P1615 (2023).
  29. Greifenstein, L., et al. 3BP-3940, a highly potent FAP-targeting peptide for theranostics - production, validation and first in human experience with Ga-68 and Lu-177. iScience. 26 (12), 108541(2023).
  30. Baum, R. P., et al. FAP-Targeted Radiopeptide Therapy using 177Lu-, 225Ac- and 90Y-labeled 3BP-3940 in Diverse Advanced Solid Tumors: First-in-Humans Results (Abstract P1612). J Nucl Med. 64 (supplement 1), P1612-P1612 (2023).
  31. Meisenheimer, M., Kürpig, S., Essler, M., Eppard, E. Manual vs automated 68Ga-radiolabelling-A comparison of optimized processes. J Labelled Comp Radiopharma. 63 (4), 162-173 (2020).
  32. Kleynhans, J., et al. Production of [68Ga]Ga-PSMA: Comparing a manual kit-based method with a module-based automated synthesis approach. J Labelled Comp Radiopharma. 63 (13), 553-563 (2020).
  33. le Roux, J., Rubow, S., Ebenhan, T. A comparison of labelling characteristics of manual and automated synthesis methods for gallium-68 labelled ubiquicidin. Appl Radiation Isotopes. 168, 109452(2021).
  34. Todde, S., et al. EANM guideline for the preparation of an Investigational Medicinal Product Dossier (IMPD). Eur J Nucl Med Mol Imaging. 41 (11), 2175-2185 (2014).
  35. Mueller, D., et al. Radiolabeling and Stability of FAP- Seeking Radiopharmaceuticals for Radio-Molecular Imaging and Therapy. J Nucl Med. 61 (supplement 1), 1129-1129 (2020).
  36. Greifenstein, L., et al. Radiolabeling of 3BP-3940 with 68Ga, 90Y, 177Lu and 225Ac for imaging and Peptide Targeted Radiotherapy (PTRT) (Abstract 2532). J Nucl Med. 63 (supplement 2), 2532-2532 (2022).
  37. Greifenstein, L., et al. Radiolabeling of 3BP-3940 with 68Ga, 90Y, 177Lu and 225Ac for imaging and Peptide Targeted Radiotherapy (PTRT) (Abstract P61). Nuklearmedizin. 62, P61(2023).
  38. Hörmann, A. A., et al. 68Ga]Ga-FAP-2286-Synthesis, Quality Control and Comparison with [18F]FDG PET/CT in a Patient with Suspected Cholangiocellular Carcinoma. Pharmaceuticals. 17 (9), 1141(2024).
  39. Lütje, S., et al. Optimization of Acquisition time of 68Ga-PSMA-Ligand PET/MRI in Patients with Local and Metastatic Prostate Cancer. PLoS One. 11 (10), e0164392(2016).
  40. Haendeler, M., et al. Biodistribution and Radiation Dosimetric Analysis of [68Ga]Ga-RM2: A Potent GRPR Antagonist in Prostate Carcinoma Patients. Radiation. 1 (1), 33-44 (2020).
  41. Daniel, T., Balouzet Ravinet, C., Clerc, J., Batista, R., Mouraeff, Y. Automated synthesis and quality control of [68Ga]Ga-PentixaFor using the Gaia/Luna Elysia-Raytest module for CXCR4 PET imaging. EJNMMI Radiopharm Chem. 8 (1), 4(2023).
  42. Rusu, T., et al. Fully automated radiolabeling of [68Ga]Ga-EMP100 targeting c-MET for PET-CT clinical imaging. EJNMMI Radiopharm Chem. 8 (1), 30(2023).
  43. Rubira, L., et al. 68Ga]Ga-FAPI-46 synthesis on a GAIA® module system: Thorough study of the automated radiolabeling reaction conditions. Appl Radiation Isotopes. 206, 111211(2024).
  44. Fouillet, J., et al. "One Method to Label Them All": A Single Fully Automated Protocolfor GMP-Compliant 68Ga Radiolabeling of PSMA-11, Transposable toPSMA-I&T and PSMA-617. Curr Radiopharm. 17 (3), 285-301 (2024).
  45. Nelson, B. J. B., Andersson, J. D., Wuest, F., Spreckelmeyer, S. Good practices for 68Ga radiopharmaceutical production. EJNMMI Radiopharm Chem. 7 (1), 27(2022).
  46. Rubira, L., Torchio, J., Fouillet, J., Vanney, J., Fersing, C. GMP-Compliant Automated Radiolabeling and Quality Controls of [68Ga]Ga-FAPI-46 for Fibroblast Activation Protein-Targeted PET Imaging in Clinical Settings. Chem Pharma Bullet. 72 (11), 1014-1023 (2024).
  47. Mueller, D., et al. Radiolabeling of DOTA-like conjugated peptides with generator-produced 68Ga and using NaCl-based cationic elution method. Nat Protoc. 11 (6), 1057-1066 (2016).
  48. Bauwens, M., Chekol, R., Vanbilloen, H., Bormans, G., Verbruggen, A. Optimal buffer choice of the radiosynthesis of 68Ga-Dotatoc for clinical application. Nucl Med Comm. 31 (8), 753-758 (2010).
  49. Kulprathipanja, S., Hnatowich, D. J. A method for determining the pH stability range of gallium radiopharmaceuticals. Int J Appl Radiation Isotopes. 28 (1-2), 229-233 (1977).
  50. Martins, A. F., et al. Spectroscopic, radiochemical, and theoretical studies of the Ga3+-N-2-hydroxyethyl piperazine-N'-2-ethanesulfonic acid (HEPES buffer) system: evidence for the formation of Ga3+ - HEPES complexes in (68) Ga labeling reactions. Contrast Media Mol Imaging. 8 (3), 265-273 (2013).
  51. European Directorate for the Quality of Medicines & Healthcare (EDQM). Gallium (68Ga) PSMA-11 injection. Eur Pharma 11.0. 3044, 1276-1277 (2021).
  52. European Directorate for the Quality of Medicines & Healthcare (EDQM). Gallium (68Ga) edotreotide injection. Eur Pharma 11.0. 2482, 1274-1276 (2022).
  53. Li, D., et al. Development of a fibroblast activation protein-targeted PET/NIR dual-modality probe and its application in head and neck cancer. Front Bioeng Biotechnol. 11, 1291824(2023).
  54. Koshkin, V. S., et al. Initial Experience with 68Ga-FAP-2286 PET Imaging in Patients with Urothelial Cancer. J Nucl Med. 65 (2), 199-205 (2024).
  55. De Blois, E., Sze Chan, H., Konijnenberg, M., De Zanger, R. A. P., Breeman, W. Effectiveness of Quenchers to Reduce Radiolysis of 111In- or 177Lu-Labelled Methionine-Containing Regulatory Peptides. Maintaining Radiochemical Purity as Measured by HPLC. Curr Topics Med Chem. 12 (23), 2677-2685 (2013).
  56. Larenkov, A., Mitrofanov, I., Pavlenko, E., Rakhimov, M. Radiolysis-Associated Decrease in Radiochemical Purity of 177Lu-Radiopharmaceuticals and Comparison of the Effectiveness of Selected Quenchers against This Process. Molecules. 28 (4), 1884(2023).
  57. Baudhuin, H., et al. 68Ga-Labeling: Laying the Foundation for an Anti-Radiolytic Formulation for NOTA-sdAb PET Tracers. Pharmaceuticals. 14 (5), 448(2021).
  58. Kaczorowska, K., Kolarska, Z., Mitka, K., Kowalski, P. Oxidation of sulfides to sulfoxides. Part 2: Oxidation by hydrogen peroxide. Tetrahedron. 61 (35), 8315-8327 (2005).
  59. Breeman, W. A. P., et al. Optimised labeling, preclinical and initial clinical aspects of CCK-2 receptor-targeting with 3 radiolabeled peptides. Nucl Med Biol. 35 (8), 839-849 (2008).
  60. Haskali, M. B. Automated preparation of clinical grade [68Ga]Ga-DOTA-CP04, a cholecystokinin-2 receptor agonist, using iPHASE MultiSyn synthesis platform. EJNMMI Radiopharm Chem. 4, 23(2019).
  61. Chen, J., et al. Synthesis, stabilization and formulation of [177Lu]Lu-AMBA, a systemic radiotherapeutic agent for Gastrin Releasing Peptide receptor positive tumors. Appl Radiation Isotopes. 66 (4), 497-505 (2008).
  62. Chatalic, K. L. S., et al. In Vivo Stabilization of a Gastrin-Releasing Peptide Receptor Antagonist Enhances PET Imaging and Radionuclide Therapy of Prostate Cancer in Preclinical Studies. Theranostics. 6 (1), 104-117 (2016).
  63. De Zanger, R. M. S., Chan, H. S., Breeman, W. A. P., De Blois, E. Maintaining radiochemical purity of [177Lu]Lu-DOTA-PSMA-617 for PRRT by reducing radiolysis. J Radioanal Nucl Chem. 321 (1), 285-291 (2019).
  64. Hörmann, A. A., et al. Automated Synthesis of 68Ga-Labeled DOTA-MGS8 and Preclinical Characterization of Cholecystokinin-2 Receptor Targeting. Molecules. 27 (6), 2034(2022).
  65. Breeman, W. A. P., Jong, M., Visser, T. J., Erion, J. L., Krenning, E. P. Optimising conditions for radiolabelling of DOTA-peptides with 90Y, 111In and 177Lu at high specific activities. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 30 (6), 917-920 (2003).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Gallium 68 radiolabellinggeautomatiseerde synthesemodulebeeldvorming van de tumormicro omgevingfibroblast activatieprote nePET beeldvormingsproberadiochemische zuiverheidC18 cartridgezuiveringradio HPLCradio TLCmethionine stabilisatie
Geautomatiseerde bereiding van [68Ga]Ga-3BP-3940 op een synthesemodule voor PET-beeldvorming van de tumormicro-omgeving
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.