Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Productie van een SARS-CoV-2-virusachtig deeltjessysteem om virale levenscycli in vitro te onderzoeken

1.4K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/68389

⸱

6 juni 2025

 ,  ,  , 
1School of Life Sciences, Beijing University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

We presenteren een geoptimaliseerd in vitro protocol voor het produceren van SARS-CoV-2-virusachtige deeltjes die het authentieke virus nauwkeurig nabootsen. Deze aanpak maakt het mogelijk om virale infectie-, assemblage- en uitgangsmechanismen te onderzoeken zonder de beperkingen van het vereisen van een laboratorium van bioveiligheidsniveau 3.

Samenvatting

De methode voor ernstige acute respiratoire syndrome-coronavirus 2 (SARS-CoV-2) virusachtige deeltjes (SC2-VLP) biedt een krachtig en toegankelijk hulpmiddel voor het bestuderen van de levenscyclus van SARS-CoV-2 zonder dat er laboratoria van bioveiligheidsniveau 3 (BSL-3) nodig zijn. Dit systeem bootst effectief kritieke stadia van de virale levenscyclus na, inclusief assemblage, genoomverpakking en uitgang, met behulp van een luciferase-reporter die is gefuseerd met het T20-signaal voor gevoelige en nauwkeurige detectie van de productie van virale deeltjes. SC2-VLP's worden gegenereerd door structurele SARS-CoV-2-eiwitten tot co-expressie te brengen, waaronder membraan (M), nucleocapside (N), envelop (E) en spike (S), samen met het RNA-verpakkingssignaal in HEK-293T-cellen. In tegenstelling tot traditionele virusachtige deeltjessystemen, zorgt de SC2-VLP-methode voor een nauwkeurige kwantificering en een grotere getrouwheid aan de natuurlijke virale levenscyclus. Bovendien biedt het SC2-VLP-systeem, in vergelijking met lentivirale pseudotyperingsmethoden, die beperkt zijn tot het bestuderen van virale binnenkomst door de opname van S-eiwit in op HIV gebaseerde lentivirale deeltjes, een uitgebreider platform voor het verkennen van meerdere stadia van SARS-CoV-2-biologie. Terwijl deze methode de risico's van het omgaan met levend virus omzeilt en de toegankelijkheid vergroot. De SC2-VLP-methode vertegenwoordigt een aanzienlijke vooruitgang in het antiviraal onderzoek en de ontwikkeling van therapeutische strategieën tegen SARS-CoV-2.

Inleiding

De COVID-19-pandemie is naar voren gekomen als een van de meest verwoestende wereldwijde gezondheidscrises in de moderne geschiedenis, met wereldwijd miljoenen doden tot gevolg1. Het verantwoordelijke virus, SARS-CoV-2, volgt een complexe levenscyclus die belangrijke fasen omvat zoals infectie, genoomreplicatie, assemblage en uitgang. Het infectieproces begint wanneer het virale spike-eiwit (S) zich bindt aan de gastheercelreceptor, angiotensine-converterend enzym 2 (ACE2), waardoor de afgifte van het virale genoom in de gastheercel 2,3 wordt vergemakkelijkt. Het virale RNA-afhankelijke RNA-polymerase (RdRp) katalyseert vervolgens de replicatie van het genomische RNA. Dit RNA, in complex met het nucleocapside-eiwit (N), vormt een stabiele structuur die wordt herkend door het membraaneiwit (M). Het M-eiwit speelt een centrale rol bij virale assemblage door het RNA-N-complex, S, en het envelop-eiwit (E)4,5 te rekruteren. Na assemblage voltooit het virion zijn uitgang via een niet-canonieke lysosoom-gemedieerde handelsroute6.

Als reactie op de pandemie zijn aanzienlijke wereldwijde middelen gemobiliseerd om vaccins, neutraliserende antilichamen en antivirale geneesmiddelen te ontwikkelen. De evaluatie van deze interventies is van essentieel belang geweest bij het bevorderen van SARS-CoV-2-onderzoek7. Het bestuderen van het levende virus brengt echter aanzienlijke logistieke uitdagingen met zich mee, aangezien experimenten met het virus moeten worden uitgevoerd in laboratoria van bioveiligheidsniveau 3 (BSL-3). De beperkte beschikbaarheid van BSL-3-faciliteiten heeft het tempo van het onderzoek naar het begrijpen en bestrijden van SARS-CoV-2 beperkt.

Om deze uitdagingen aan te gaan, zijn twee belangrijke systemen - virusachtig deeltje (VLP) en lentivirale pseudotypering - op grote schaal toegepast in SARS-CoV-2-onderzoek, die beide geen BSL-3-inperking vereisen8. Het VLP-systeem omvat de co-transfectie van cellen met genen die coderen voor virale structurele eiwitten, waaronder M, S, E en N, die samen virusachtige deeltjes genereren. Deze deeltjes bootsen de structurele en functionele eigenschappen van het virus na, waardoor ze een waardevol hulpmiddel zijn voor het bestuderen van belangrijke processen in de levenscyclus van SARS-CoV-2, en zelfs een effectief antigeen voor de ontwikkeling van vaccins 9,10,11.

Omgekeerd omvat het lentivirale pseudotyperingssysteem het vervangen van het vesiculaire stomatitisvirus (VSV) G-eiwit in lentivirus door SARS-CoV-2 S-eiwit, waardoor de productie van lentivirale deeltjes mogelijk wordt die reportergenen zoals luciferase of GFP kunnen bevatten. Dit systeem is vooral nuttig voor het onderzoeken van neutraliserende antilichamen die de S-ACE2-interactie blokkeren12. Lentivirale pseudotypering weerspiegelt echter niet de assemblage of uitgang van SARS-CoV-2-virussen vanwege het gebruik van structurele HIV-eiwitten, die de afgifte van deeltjes aan het plasmamembraan mediëren.

Om deze beperkingen te overwinnen, Syed et al. identificeerde onlangs het SARS-CoV-2-verpakkingssignaal in zijn RNA-genoom, wat de specificiteit van het N-eiwit voor virale genoomherkenning aantoont13. Door dit verpakkingssignaal te fuseren met reportergenen, is het mogelijk om deze genen efficiënt op te nemen in SARS-CoV-2-virusachtige deeltjes (SC2-VLP's)13. Deze strategie repliceert niet alleen de SARS-CoV-2-assemblage- en uitgangsprocessen, maar maakt ook de gevoelige meting van infectiestappen mogelijk. In deze studie introduceren we de experimentele methodologie voor het gebruik van het SC2-VLP-systeem en belichten we de belangrijkste overwegingen voor het uitvoeren van deze aanpak.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. Genereren van SC2-VLP's

  1. Zaad ~3.0 × 106 HEK-293T-cellen in een weefselkweekplaat met een diameter van 10 cm met DMEM compleet medium, aangevuld met 10% v/v FBS en 1% penicilline-streptomycine.
    OPMERKING: Om hoge transfectieefficiency en optimale SC2-VLP-productie te verzekeren, zouden de cellen HEK-293T bij lage passageaantallen ~10 moeten worden gehandhaafd.
  2. Kweek de HEK-293T-cel ongeveer 24 uur bij 37 °C, 5% CO2 en controleer de celconfluentie onder de microscoop. Ga verder als ~70% samenvloeit.
  3. Verdun 60 μL PEI van 1 mg/ml bouillon tot 200 μL met serum-freemedium.
  4. Voeg 6,7 μg N-plasmide, 10 μg Luc-T20-plasmide, 0,016 μg S-plasmide en 3,3 μg M-IRES-E-plasmide toe aan 200 μl serumvrij medium (zie aanvullend bestand 1).
  5. Voeg de verdunde PEI uit stap 1.3 voorzichtig toe aan de oplossing die plasmiden bevat die coderen voor virale structuureiwitten uit stap 1.4 en incubeer gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Dit is de transfectieoplossing.
  6. Laat de transfectieoplossing van stap 1.5 voorzichtig op HEK-293T-cellen vallen en draai voorzichtig de weefselkweekplaat voor grondig mengen.
  7. Wissel het celkweekmedium 6 uur na infectie uit door het volledige DMEM-medium en incubeer de getransfecteerde HEK-293T-cellen bij 37 °C, 5% CO2 gedurende 48 uur.
  8. Verzamel het supernatans van de geïnfecteerde HEK-293T-cellen, dat de SC2-VLP's bevat, en filtreer vervolgens het supernatans door een spuitfilter van 0.45 μm om celresten te verwijderen. Dit is het SC2-VLP medium.
    OPMERKING: We hebben geprobeerd SC2-VLP's te produceren in HeLa-, Vero E6- en Caco2-cellijnen, maar er werd geen meetbare virale titer verkregen, wat de specificiteit van het protocol voor HEK-293T-cellen aangeeft.

2. Onderzoek van de effectiviteit van SC2-VLP

OPMERKING: De HEK-293T-cellijn die ACE2 en TMPRSS2 stabiel tot expressie brengt, werd tot stand gebracht met behulp van een lentivirale transductiebenadering14,15. Eiwitexpressie van zowel ACE2 als TMPRSS2 werd bevestigd door western blot-analyse, volgens een protocol dat vergelijkbaar is met dat beschreven in stap 3 (SC2-VLP-samenstellingsanalyse).

  1. Zaai 4.0 × 104 HEK-293T-cellen met stabiele expressie van ACE2 en TMPRSS2 in een plaat met 96 putjes en voeg 50 μL SC2-VLP-medium toe vanaf stap 1.8.
  2. Incubeer de weefselkweekplaat met 96 putjes bij 37 °C met 5% CO2 gedurende 24 uur.
  3. Verwijder het medium van de plaat met 96 putjes en was eenmaal met 100 μL PBS-buffer bij 37 °C, met 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4 en 1,8 mM KH2PO4.
  4. Lyseer de HEK-293T ACE2/TMPRSS2-cellen met 20 μL passieve lysisbuffer en schud het monster voorzichtig gedurende 15 minuten op een orbitale shaker bij kamertemperatuur.
    OPMERKING: De lysisbuffer bevat 25 mM Tris-fosfaat (pH 7,8), 2 mM DTT, 2 mM 1,2-diaminocyclohexaan-N,N,N',N'-tetraazijnzuur, 1,25 mg/ml lysozym, 2,5 mg/ml BSA, 10% glycerol en 1% Triton X-100).
  5. Draai de plaat met 96 putjes op 4.00×0 g gedurende 15 minuten bij 4 °C in een gekoelde microplaatcentrifuge en breng de plaat vervolgens onmiddellijk over naar een ijsbad.
  6. Neem 100 μl gereconstitueerde luciferase-assaybuffer op een ondoorzichtige witte plaat met 96 putjes en voeg 20 μl lysaat toe uit stap 2.5. Meng ze kort door 2-3x op en neer te pipetteren.
  7. Meet de luminescentie met behulp van een plaatlezer met de volgende parameters: Detectiemodus: Luminescentie; Golflengtebereik: Volledig spectrum; Plaatformaat: standaard ondoorzichtige plaat met 96 putjes; Integratietijd: 200 ms.

3. Onderzoek van de samenstelling van SC2-VLP

  1. Voeg 1,36 ml PEG 8000-oplossing, die 50% PEG 8000 en 2,2% NaCl bevat, toe aan 10 ml SC2-VLP-medium uit stap 1.8.
  2. Bewaar het mengsel op een orbitale schudder en meng de oplossing langzaam bij 4 °C gedurende een nacht.
  3. Centrifugeer de oplossing gedurende 30 minuten bij 4 °C, 2.000 × g en verzamel de SC2-VLP-pellet voor de analyse van western blotting16.
    OPMERKING: Voor de western blotting-analyse wordt alle informatie met betrekking tot de antilichamen verstrekt in de Materiaaltabel.

4. Subcellulaire lokalisatieanalyse van S en zijn mutanten in SC2-VLP-producerende cellen

  1. Zaad ~3.0 × 106 HEK-293T-cellen gelijkmatig in de kweekschaal met glasbodem met een diameter van 15 mm, en laat de cellen vervolgens hechten en groeien tot ~70% samenvloeiing vóór transfectie.
  2. Herhaal de transfectieprocedure zoals beschreven in de stappen 1.3 tot en met 1.7 en wijzig alleen de hoeveelheden plasmide als volgt: N-plasmide: 1,3 μg, Luc-T20-plasmide: 2 μg, S-plasmide: 0,0032 μg en M-IRES-E-plasmide: 0,66 μg.
  3. Was de kweekschaal voorzichtig twee keer met 1 ml ijskoude PBS en voeg vervolgens 1 ml 4% paraformaldehyde (PFA) fixatieoplossing toe bij kamertemperatuur (RT) gedurende 15 minuten.
  4. Was de cellen gedurende 2 x 5 minuten met 1 ml PBS bij RT en permeabiliseer de cellen vervolgens door gedurende 10 minuten 1 ml 0,25% Triton X-100 bij RT toe te voegen.
  5. Was de cellen gedurende 2 x 5 minuten met 1 ml PBS bij RT en voeg vervolgens 1 ml 5% runderserumalbumine (BSA) toe bij RT gedurende 1 uur om niet-specifieke antilichaaminteracties te blokkeren.
  6. Voeg ~200 μL primaire antilichaamoplossing toe (genoeg om de glazen bodem te bedekken) en incubeer een nacht bij 4 °C.
    OPMERKING: De primaire antilichaamoplossingen worden bereid door verdunning in 5% BSA opgelost in PBS in de volgende verdunningsverhoudingen: het anti-S-antilichaam van de muis bij 1:200, het anti-Sec61β-antilichaam bij konijnen bij 1:200, het anti-GM130-antilichaam bij konijnen bij 1:200 en het anti-ERGIC53-antilichaam bij konijnen bij 1:200. De 5% BSA/PBS-oplossing diende als zowel het verdunningsmiddel als de blokkerende buffer om niet-specifieke binding tijdens daaropvolgende immunofluorescentiekleuringsprocedures te minimaliseren.
  7. Verwijder de primaire antilichaamoplossing en was de cellen vervolgens 3 x 5 minuten met 1 ml PBS bij RT.
  8. Voeg fluorescentie-geconjugeerde secundaire antilichaamoplossing toe bij RT gedurende 1 uur en was de cellen vervolgens 3 x 5 minuten met 1 ml PBS bij RT.
    NOTITIE Alle volgende stappen moeten worden uitgevoerd in het donker of bij minimale blootstelling aan licht om fotobleken van fluorescerende conjugaten te voorkomen en de signaalintegriteit te behouden. Twee soorten fluorescentie-geconjugeerde secundaire antilichamen, die zijn afgeleid van muis of konijn, worden gebruikt om het S-eiwit of de celorganelmarkereiwitten te kleuren.
  9. Kleur de kernen gedurende 5 minuten met 2,5 μg/ml Hoechst-oplossing bij RT en was de cellen vervolgens 3 x 5 minuten met 1 ml PBS bij RT.
  10. Observeer de kleuring van het S-eiwit of organel en verkrijg beelden met behulp van een confocale microscoop met de volgende parameters: PMT-modus ingesteld op VBF (geen middeling, lijnsequentiële scan) met autoconfocale opening. Gebruik voor kanaal 1 (FITC) de 488 nm-laser met 25% vermogen met 500 - 548 nm emissie, HV 525 V, versterking 1x en offset 5%. Gebruik voor kanaal 2 (Alexa Fluor 594) de 594 nm-laser op 25% vermogen met 610 - 670 nm emissie, HV 500 V, versterking 1x en offset 5%. Gebruik voor kanaal 3 (DAPI) de 405 nm-laser met 25% vermogen met 430 - 470 nm emissie, HV 490 V, versterking 1x en offset 5%.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

De uitgangs- en assemblagestappen van de SARS-CoV-2-levenscyclus zijn minder bestudeerd dan de infectie- en replicatiestappen17,18. Voordat de SC2-VLP-methode werd ontwikkeld, konden deze processen alleen worden onderzocht met behulp van live SARS-CoV-2, waardoor het onderzoek werd beperkt tot BSL-3-laboratoria13. De SC2-VLP-workflow, weergegeven in figuur 1, schetst het exper...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Een eenvoudige en effectieve methode om de levenscyclus van SARS-CoV-2 in celkweeksystemen te modelleren, zonder de beperkingen van BSL-3-laboratoria, vertegenwoordigt een cruciale vooruitgang voor anti-SARS-CoV-2-onderzoek. De SC2-VLP-methode vervult deze behoefte en biedt een robuust en toegankelijk platform. In deze studie bieden we een gedetailleerd protocol voor de SC2-VLP-methode, waarin cruciale experimentele stappen voor het produceren van SC2-VLP's worden geschetst. Daarnaast be...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door het Startup Fund-programma van de Beijing University of Chinese Medicine (BUCM) (90011451310011). We betuigen onze dankbaarheid aan alle leden van het Dr. Ma-lab van BUCM voor de onschatbare discussie en hulp bij de experimenten.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Bovine Serum Albumin (BSA)Cell Signaling Technology9998S
Confocal Laser Scanning MicroscopeOlympusFV3000
DMEMCorning10-013-CV
Fetal Bovine Serum (FBS)ThermofisherA5670402
Goat Anti-Mouse IgG H&L (Alexa Fluor 488) antibodyInvitrogenA11001dilution ratio: IF 1:1000
Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor 594) antibodyAbcamab150080dilution ratio: IF 1:1000
HEK-293T cell lineNational Infrastructure of Cell Line Resource (NICR)NICR-293T-001Om een hoge transfectie-efficiëntie en optimale SC2-VLP productie te garanderen, moeten HEK-293T cellen op een laag passagenummer (≤ P10) worden gehouden.
Hoechst 33342InvitrogenH1399Werkconcentratie: 2,5 μg/mL
Luciferase Reporter Assay SystemPromegaE1500
Luc-T20Addgene177941
Mouse monoclonal anti-GAPDHProteintech60004-1-Igdilution ratio: WB 1:20.000
Mouse monoclonal anti-S RBDAbclonalA23771dilution ratio: IF 1:200
OptiMEMThermofisher31985070serumvrij medium voor transfectie
PEG3350Sigma-AldrichP3635
PEG8000Sigma-AldrichP2139
Penicillin-StreptomycinThermofisher15140122
Polyethyleneimine (PEI)Thermofisher43896.01
Promega passive lysis bufferPromegaE1941
Rabbit polyclonal anti-ACE2Proteintech21115-1-APdilution ratio: WB 1:1000
Rabbit polyclonal anti-ERGIC53Proteintech13364-1-APdilution ratio: IF 1:200
Rabbit polyclonal anti-GM130Proteintech11308-1-APdilution ratio: IF 1:200
Rabbit polyclonal anti-SAbcamab272504dilution ratio: WB 1:1000
Rabbit polyclonal anti-Sec61βProteintech15087-1-APdilution ratio: IF 1:200
Rabbit polyclonal anti-TMPRSS2Abcamab109131dilution ratio: WB 1:1000
SARS-CoV-2 M-IRES-E plasmidAddgene177938
SARS-CoV-2 N plasmidAddgene177959
SARS-CoV-2 Nucleoprotein Rabbit mAbAbclonalA21042dilution ratio: WB 1:4000
SARS-CoV-2 S plasmidAddgene177960
Secondary Antibody, HRP, Goat anti-Mouse IgG (H+L)Invitrogen31460dilution ratio: WB 1:5000
Secondary Antibody, HRP, Goat anti-Rabbit IgG (H+L)Invitrogen31430dilution ratio: WB 1:5000
SpectraMax i3x plate reader Molecular DevicesSpectraMax i3x

Referenties

  1. Narayanan, S. A., et al. A comprehensive SARS-CoV-2 and COVID-19 review, Part 2: host extracellular to systemic effects of SARS-CoV-2 infection. Eur J Hum Genet. 32 (1), 10-20 (2024).
  2. Shang, J., et al. Structural basis of receptor recognition by SARS-CoV-2. Nature. 581 (7807), 221-224 (2020).
  3. Lan, J., et al. Structure of the SARS-CoV-2 spike receptor-binding domain bound to the ACE2 receptor. Nature. 581 (7807), 215-220 (2020).
  4. Zhang, Z., et al. Structure of SARS-CoV-2 membrane protein essential for virus assembly. Nat Commun. 13 (1), 4399(2022).
  5. Han, Y., et al. SARS-CoV-2 N protein coordinates viral particle assembly through multiple domains. J Virol. 98 (11), e0103624(2024).
  6. Ghosh, S., et al. beta-coronaviruses use lysosomes for egress instead of the biosynthetic secretory pathway. Cell. 183 (6), 1520-1535.e14 (2020).
  7. Andrews, H. S., Herman, J. D., Gandhi, R. T. Treatments for COVID-19. Annu Rev Med. 75, 145-157 (2024).
  8. Crawford, K. H. D., et al. Protocol and reagents for pseudotyping lentiviral particles with SARS-CoV-2 spike protein for neutralization assays. Viruses. 12 (5), 513(2020).
  9. Sultana, R., Stahelin, R. V. Strengths and limitations of SARS-CoV-2 virus-like particle systems. Virology. 601, 110285(2025).
  10. Xu, R., Shi, M., Li, J., Song, P., Li, N. Construction of SARS-CoV-2 virus-like particles by mammalian expression system. Front Bioeng Biotechnol. 8, 862(2020).
  11. Plescia, C. B., et al. SARS-CoV-2 viral budding and entry can be modeled using BSL-2 level virus-like particles. J Biol Chem. 296, 100103(2021).
  12. Cruz-Cardenas, J. A., et al. A pseudovirus-based platform to measure neutralizing antibodies in Mexico using SARS-CoV-2 as proof-of-concept. Sci Rep. 12 (1), 17966(2022).
  13. Syed, A. M., et al. Rapid assessment of SARS-CoV-2-evolved variants using virus-like particles. Science. 374 (6575), 1626-1632 (2021).
  14. Hoffmann, M., et al. SARS-CoV-2 cell entry depends on ACE2 and TMPRSS2 and is blocked by a clinically proven protease inhibitor. Cell. 181 (2), 271-280 (2020).
  15. Matsuyama, S., et al. Enhanced isolation of SARS-CoV-2 by TMPRSS2-expressing cells. Proc Natl Acad Sci USA. 117 (13), 7001-7003 (2020).
  16. Alegria-Schaffer, A., Lodge, A., Vattem, K. Performing and optimizing Western blots with an emphasis on chemiluminescent detection. Methods Enzymol. 463, 573-599 (2009).
  17. V'Kovski, P., Kratzel, A., Steiner, S., Stalder, H., Thiel, V. Coronavirus biology and replication: implications for SARS-CoV-2. Nat Rev Microbiol. 19 (3), 155-170 (2021).
  18. Yang, H., Rao, Z. Structural biology of SARS-CoV-2 and implications for therapeutic development. Nat Rev Microbiol. 19 (11), 685-700 (2021).
  19. Katiyar, H., Arduini, A., Li, Y., Liang, C. SARS-CoV-2 assembly: Gaining infectivity and beyond. Viruses. 16 (11), 1648(2024).
  20. Klein, S., et al. SARS-CoV-2 structure and replication characterized by in situ cryo-electron tomography. Nat Commun. 11 (1), 5885(2020).
  21. Li, Y., et al. SARS-CoV-2 spike host cell surface exposure promoted by a COPI sorting inhibitor. Acta Pharm Sin B. 13 (7), 3043-3053 (2023).
  22. Dey, D., et al. A single C-terminal residue controls SARS-CoV-2 spike trafficking and incorporation into VLPs. Nat Commun. 14 (1), 8358(2023).
  23. Christie, S. M., et al. Single-virus tracking reveals variant SARS-CoV-2 spike proteins induce ACE2-independent membrane interactions. Sci Adv. 8 (49), eabo3977(2022).
  24. Guo, L., et al. Targetable elements in SARS-CoV-2 S2 subunit for the design of pan-coronavirus fusion inhibitors and vaccines. Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 197(2023).
  25. Mi, D., Hu, J., Qian, Z. A lentiviral pseudotype system to characterize SARS-CoV-2 glycoprotein. Methods Mol Biol. 2610, 187-199 (2023).
  26. Swann, H., et al. Minimal system for assembly of SARS-CoV-2 virus like particles. Sci Rep. 10 (1), 21877(2020).
  27. Xia, B., et al. Extracellular vesicles mediate antibody-resistant transmission of SARS-CoV-2. Cell Discov. 9 (1), 2(2023).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

SARS-CoV-2 VLP'svirusachtige partikelsvirale levenscyclusHEK-293T-cellenspike-eiwitplasmidetransfectieWestern blotconfocale microscopieACE2TMPRSS2luciferase-assay
Productie van een SARS-CoV-2-virusachtig deeltjessysteem om virale levenscycli in vitro te onderzoeken
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.