Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Snelle identificatie van Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis en Ureaplasma urealyticum door RNA-amplificatie Lateral Flow Assay

698 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/68413

⸱

20 juni 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The First People's Hospital of Foshan

In dit artikel

Samenvatting

Hier presenteren we een protocol dat de laterale flowtest van RNA-amplificatie demonstreert en evalueren we de werkzaamheid voor het snel detecteren van Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis en Ureaplasmaurealyticum.

Samenvatting

Neisseria gonorrhoeae (NG), Chlamydia trachomatis (CT) en Ureaplasma urealyticum (UU) zijn veel voorkomende pathogenen die in verband worden gebracht met seksueel overdraagbare aandoeningen (SOA's). NG is de veroorzaker van gonorroe, die kan leiden tot verschillende aandoeningen van het urogenitale systeem, waaronder epididymitis, prostatitis, cervicitis en onvruchtbaarheid. CT is een micro-organisme dat verantwoordelijk is voor niet-gonokokken urethritis en bekkenontstekingsziekte. UU wordt in verband gebracht met niet-gonokokken urethritis, cervicitis, prostatitis en onvruchtbaarheid. De huidige moleculaire technologieën voor de analyse van NG, CT en UU zijn vaak complex en tijdrovend. Snelle moleculaire tests voor deze pathogenen kunnen de vroege diagnose van SOA's vergemakkelijken. De RNA-amplificatie laterale flow-assay (RGT) is een methode waarvoor geen nucleïnezuurextractie nodig is. In dit proces worden monsters gelyseerd om nucleïnezuurfragmenten vrij te maken, die vervolgens worden geamplificeerd door middel van omgekeerde transcriptie en transcriptie. Het geamplificeerde RNA-product wordt herkend en gevangen door specifieke sondes, waardoor een RNA-detectiesonde-goudsondecomplex wordt gevormd dat via laterale stroming op een nitrocellulosemembraan kan worden geïmmobiliseerd om zichtbare banden te produceren. De hele procedure duurt minder dan 1 uur. Het doel van deze studie was het evalueren van de werkzaamheid van RGT voor de snelle detectie van NG, CT en UU. In totaal werden 1.416 monsters opgenomen. De consistentie van NG, CT en UU wanneer geanalyseerd door RGT in vergelijking met de polymerasekettingreactie (PCR) fluorescentiesonderingsmethode was respectievelijk 99,03% (307/310), 99,38% (159/160) en 99,02% (303/306). De consistentie van NG, CT en UU wanneer geanalyseerd door RGT in vergelijking met gensequencing was respectievelijk 99,17% (238/240), 98,95% (188/190) en 98,30% (173/176). Vergeleken met de pathogene isolatiekweekmethode waren de detectiepercentages voor NG-, CT- en UU-testen 100,00% (9/9, 17/17, 8/8). De hoge gevoeligheid en specificiteit, het gebruiksgemak en de verminderde tijdsvereisten maken deze test ideaal voor de snelle en nauwkeurige detectie van NG, CT en UU.

Inleiding

Seksueel overdraagbare aandoeningen (soa's) vormen aanzienlijke wereldwijde uitdagingen voor de volksgezondheid, wat leidt tot ernstige genitale en reproductieve morbiditeit en mortaliteit1. Neisseria gonorrhoeae (NG) is de veroorzaker van gonorroe, met jaarlijks ongeveer 87 miljoen nieuwe gevallen gemeld wereldwijd2. Deze ziekteverwekker veroorzaakt voornamelijk ontstekingen door het zuilvormige epitheel van het urogenitale kanaal binnen te dringen3. Chlamydia trachomatis (CT), een ander micro-organisme, is verantwoordelijk voor niet-gonokokken urethritis en bekkeninfecties, goed voor ongeveer 130 miljoen nieuwe gevallen per jaar4. Ureaplasma urealyticum (UU), de eenvoudigste en kleinste zelfreplicerende cel, dringt gemakkelijk beschadigd baarmoederhalsweefsel binnen en wordt geassocieerd met niet-gonokokken urethritis, cervicitis, prostatitis en onvruchtbaarheid5. Al deze infecties zijn vaak asymptomatisch bij zowel vrouwelijke als mannelijke patiënten, maar ze kunnen tot ernstige complicaties leiden als ze niet snel worden behandeld. Maternale infecties kunnen leiden tot ernstige nadelige zwangerschapsuitkomsten, waaronder doodgeboorte, miskraam, vroeggeboorte en directe foetale infectie6. Daarom is de ontwikkeling van een snelle, gevoelige, specifieke en gebruiksvriendelijke methode voor de detectie van pathogenen van het grootste belang.

Snelle en nauwkeurige detectie van ziekteverwekkers is van cruciaal belang voor een effectieve diagnose en behandeling van ziekten. Traditionele kweekmethoden, die de isolatie, kweek en identificatie van ziekteverwekkers vereisen, hebben aanzienlijke nadelen, waaronder tijdrovend en een lage gevoeligheid. Hoewel gensequencing een hoge nauwkeurigheid heeft, vereist het een complexe omgeving en apparatuur, waardoor het kostbaar en ook tijdrovend is. Conventionele moleculaire technologieën voor de analyse van NG, CT en UU zijn algemeen aanvaard; Deze methoden zijn echter vaak ingewikkeld en tijdrovend en vereisen geavanceerde instrumentatie, getrainde technici en langere verwerkingstijden. Daarom is er een dringende behoefte aan een eenvoudige en betrouwbare moleculaire diagnostische methode om de beperkingen van conventionele benaderingen aan te pakken. De RNA-amplificatie laterale flowtest (RGT) biedt een snel, gevoelig en specifiek alternatief zonder dat er complexe procedures nodig zijn 7,8. Bij deze methode worden monsters direct gelyseerd om nucleïnezuurfragmenten vrij te maken zonder nucleïnezuurextractie, en deze fragmenten worden geamplificeerd door omgekeerde transcriptie en transcriptie. Het geamplificeerde RNA-product wordt vervolgens herkend en gevangen door specifieke sondes, waardoor een RNA-detectiesonde-goudsondecomplex wordt gevormd, dat via laterale stroming op een nitrocellulosemembraan kan worden geïmmobiliseerd om zichtbare banden9 te creëren. Het hele proces duurt minder dan 1 uur, waardoor het zeer geschikt is voor laboratoriumtests in noodgevallen.

In deze studie hebben we 1.416 monsters gerekruteerd om het gebruik van RGT voor de detectie van NG, CT en UU te evalueren. Monsters werden geanalyseerd met behulp van RGT, PCR-fluorescentiesondering, gensequencing en pathogene isolatiekweekmethoden. De resultaten gaven aan dat de RGT-methode nauwkeurig en consistent was met conventionele diagnostische methoden. Concluderend maken de hoge gevoeligheid en specificiteit, het gebruiksgemak en de verminderde tijdsvereisten deze test ideaal voor de snelle en nauwkeurige detectie van NG, CT en UU, wat wijst op een veelbelovende toepassing ervan bij de voorlopige medische diagnose van seksueel overdraagbare aandoeningen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Deze studie werd uitgevoerd in overeenstemming met de ethische richtlijnen en goedkeuring verleend door de Institutional Review Board van het First People's Hospital of Foshan, provincie Guangdong, China (Ethical Review Document No. LR (2025) 136). In totaal werden 1.416 genitale uitstrijkjes (716 van vrouwelijke patiënten, 700 van mannelijke patiënten) prospectief verzameld van personen die klinisch verdacht werden van SOA's en die in de voorgaande 14 dagen geen antibioticabehandeling hadden ondergaan (Aanvullende tabel 1). Voor elke deelnemer werden tegelijkertijd gepaarde uitstrijkjes verkregen en parallel geanalyseerd: één met de testmethode (RGT) en de andere met behulp van de referentiemethode (respectievelijk PCR-fluorescentiesondering, gensequencing en pathogene isolatiecultuur). De overeenkomst tussen de methoden werd gekwantificeerd met behulp van de Kappa-coëfficiënt van Cohen (κ), waarbij de interpretatie werd geleid door de criteria van Landis en Koch.

OPMERKING: Het testprotocol voor CT en UU volgt identieke procedurele stappen als die beschreven voor NG, met aanpassingen beperkt tot pathogeenspecifieke reagentia. Gedetailleerde formuleringen van reagentia worden gegeven in stap 2.1 (Aanvullende Tabel 2, Aanvullende Tabel 3 en Aanvullende Tabel 4).

1. Afname van monsters

  1. Toepasbaar monstertype: Verzamel genitale uitstrijkjes (vrouwelijk cervicaal uitstrijkje, mannelijk urethrale uitstrijkje).
  2. Verzameling proefmonsters
    1. Steek het genitale uitstrijkje 2-3 cm in de mannelijke urethrale opening of ongeveer 1-2 cm in de vrouwelijke cervicale opening.
    2. Draai één keer en houd deze 10 s vast.
    3. Verwijder het wattenstaafje en steek het in de opvangbuis met 1 ml normale zoutoplossing.
    4. Breek de staart van het wattenstaafje af, gooi deze weg en draai vervolgens de dop van de buis vast.
    5. Noteer de verzameltijd en voer de test onmiddellijk uit.
  3. Opslag en transport van monsters
    1. Transporteer monsters binnen 4 uur bij kamertemperatuur (RT) of binnen 24 uur bij 2-8 °C met een ijspak.
    2. Bewaar de resterende celpellets van bewerkte monsters gedurende 3 maanden bij -20 °C of maximaal 6 maanden bij -80 °C als de tests niet tijdig kunnen worden uitgevoerd.

2. Voorbereiding

  1. Reagentia
    1. Voor reagentia van de NG-nucleïnezuurtest wordt verwezen naar aanvullende tabel 2.
    2. Voor reagentia van de CT-nucleïnezuurtest, zie aanvullende tabel 3.
    3. Voor reagentia van de UU-nucleïnezuurtest wordt verwezen naar aanvullende tabel 4.
    4. Opslag: Bewaar alle reagentia bij temperaturen van -40 °C tot -15 °C en de detectiekaarten bij temperaturen tussen 2 °C en 30 °C.
      OPMERKING: De versterkingsbuffer en detectieoplossing moeten vóór gebruik in evenwicht worden gebracht met RT, op basis van de dagelijkse detectievereisten. Na het bereiken van RT moeten ze worden bewaard bij 4 °C en kunnen ze worden gebruikt voor de volgende detectie. Vermijd herhaaldelijk invriezen en ontdooien. Het amplificatie-enzym moet worden bewaard bij -20 °C, behalve tijdens het experimentele proces. Een verhoging van de opslagtemperatuur kan leiden tot een afname of verlies van enzymactiviteit.
  2. Eisen aan de experimentele omgeving
    1. Voer het experiment uit in vier fysiek gescheiden zones:
      1. Bereidingsgebied voor reagens: Handhaven op 22 ± 1°C met positieve luchtdruk (High-efficiency Particulate Air (HEPA)-gefilterde luchtdebiet ≥ 0,3 m/s). Bewaar vooraf gealkaliceerde reagentia in UV-gesteriliseerde kasten.
      2. Monstervoorbereidingsgebied: Voer alle handelingen uit in een biologische veiligheidskast van klasse II die is voorbehandeld met 70% ethanol.
      3. Versterkingsgebied: Gebruik thermische cyclers op trillingsdempers.
      4. Productanalysegebied: Gebruik een UV-gesteriliseerde bank (30 minuten blootstelling voor/na gebruik).
    2. Regel het personeel en de luchtstroom in elke sectie om kruisbesmetting als volgt te voorkomen:
      1. Zorg voor een unidirectionele luchtstroom van de reagensbereiding naar de productanalysezones.
      2. Zorg voor onderdruk in het monstervoorbereidingsgebied (-5 Pa ten opzichte van aangrenzende zones).
      3. Beperk de verplaatsing van personeel; Ontsmet handschoenen met 75% ethanol voordat de zone overgaat.
      4. Installeer luchtsluisdeuren met vergrendelingssystemen (minimaal 30 s vertraging tussen de openingen).
    3. Gebruik zonespecifieke verbruiksartikelen (bijv. centrifugebuisjes, pipetpunten, enz.) en gooi verbruiksartikelen na eenmalig gebruik weg.
    4. Zorg voor netheid en kwaliteitscontrole:
      1. Reinig banken dagelijks met 10% natriumhypochloriet gevolgd door 75% ethanol of gedestilleerd water.
      2. Valideer de steriliteit van verbruiksartikelen via endotoxinetesten (Limulus-amebocytenlysaattest, <0,25 EU/ml).
      3. Bewaak de luchtkwaliteit wekelijks met behulp van bezinkplaten (tryptische soja-agar [TSA]-agar, ≤5 kolonievormende eenheid (CFU)/plaat na 4 uur blootstelling).
  3. Kwalificaties van het personeel
    1. Beschikken over certificaten of kwalificaties met betrekking tot PCR-technologie om de nauwkeurigheid en betrouwbaarheid van dit experiment te garanderen.

3. Lyseer de cellen om RNA te extraheren

  1. Verwerking van monsters
    1. Draai de monsterafnamebuis 2.600 keer/min gedurende 10 s om de cellen van de staafkop in de oplossing los te maken.
    2. Breng 1 ml van de oplossing over in een microcentrifugebuisje van 1,5 ml met behulp van een gekalibreerde pipet die is ingesteld op 1000 μl.
    3. Centrifugeer gedurende 2 minuten bij 12.000 × g bij 25 °C.
    4. Aspireer 950 μL van het bovenstaande op zonder de pellet te verstoren. Resuspendeer de pellets in 25 μl restoplossing door 10 keer op en neer te pipetteren met een gekalibreerde pipet van 200 μl die is ingesteld op 50 μl.
  2. Lysis van monsters en kwaliteitscontrolematerialen
    1. Pre-equibilrate cell lysis buffer en negatieve controle bij 25 °C gedurende 15 min.
    2. Centrifugeer de kwaliteitscontrolematerialen bij 1000 × g gedurende 10 s bij 25 °C om ervoor te zorgen dat alle poeders op de bodem van de buis bezinken.
    3. Voeg 30 μL lysisbuffer toe aan de kwaliteitscontrolematerialen en 20 μL aan de samples.
    4. Incubeer gedurende 10 minuten bij 25 °C.
      OPMERKING: Bij het gebruik van de cellysisbuffer is het essentieel om deze grondig te mengen. Meng door 15 keer te pipetteren (200 μL tip) en voeg zowel de deeltjes als de vloeistof toe aan het neerslag. Zorg voor positieve controle in een UV-behandelde bioveiligheidskast van klasse II, gevolgd door 10% ontsmetting van natriumhypochloriet.

4. RNA isotherme amplificatie

  1. Pre-equilibratie van de versterkingsbuffer
    1. Ontdooi de versterkingsbuffer en balanceer gedurende 15 minuten bij 25 °C ± 1 °C.
  2. Controle instellen
    1. Neem zowel positieve als negatieve controle op in elke experimentele run.
  3. Buis etikettering
    1. Label versterkingsbuisjes op basis van het aantal monsters.
  4. Reactie assemblage
    1. Pipetteer 17 μL amplificatiebuffer in elke buis met behulp van een gekalibreerde pipet van 20 μL. Voeg 2 μL van het monster of controlelysaat rechtstreeks toe aan de bufferdruppel.
      OPMERKING: Zorg ervoor dat het lysaat de buffer binnendringt zonder in contact te komen met de buiswand (indien nodig kort centrifugeren bij 500 × g gedurende 5 s). Sluit de buisjes onmiddellijk af om besmetting met spuitbussen te voorkomen.
  5. Thermische activering
    1. Incubeer buizen in een voorverwarmde thermische cycler volgens het volgende programma:
      Stap 1: 95 °C gedurende 2 min (denaturatie)
      Stap 2: 42 °C gedurende 2 min (primer gloeien).
  6. Enzymatische amplificatie
    1. Voeg 1 μL amplificatie-enzym toe aan elk buisje en meng door het buisje 5 keer te tikken, gevolgd door een korte centrifugatie (500 × g gedurende 5 s). Breng de buizen onmiddellijk gedurende 45 minuten over naar een tweede voorverwarmde thermische cycler bij 42 °C.
      OPMERKING: Gebruik aparte broedstoven om temperatuurschommelingen te voorkomen, de ene ingesteld op 95 °C en de andere op 42 °C. Houd voor meervoudige bemonsteringsruns de resterende amplificatiebuizen op 42 °C terwijl u het amplificatie-enzym aan de laatste amplificatiebuis toevoegt.

5. Laterale flow-test

  1. Pre-equilibratie van de detectieoplossing
    1. Breng de detectievloeistof gedurende 10 minuten over naar de broedmachine bij 42 °C.
  2. Homogenisering
    1. Vortex de detectieoplossing met 2.600 keer/min gedurende 15 s totdat de kleur uniform is.
  3. Temperatuurbehoud
    1. Bewaar de detectieoplossing voor gebruik gedurende ≤30 minuten op 25 °C ± 2 °C.
  4. Reactie initiatie
    1. Voeg 30 μL detectieoplossing toe aan elke amplificatiebuis met behulp van een gekalibreerde pipet van 20-200 μL.
      OPMERKING: De punt van de pipet moet tijdens het doseren in een hoek van 45° contact maken met de wand van de buis om luchtbelvorming te voorkomen.
  5. Kruising
    1. Meng de oplossing door 5 keer op en neer te pipetteren en incubeer in een voorverwarmde broedmachine bij 53 °C gedurende 10 minuten.
  6. Voorbereiding van het analyseapparaat
    1. Haal de detectiekaarten uit de foliezakjes.
      OPMERKING: Raak de toepassingszone van het monster niet aan.
  7. Voorbeeld toepassing
    1. Breng het hele mengsel over naar de preparaatpoort van de detectiekaart met behulp van een pipet van 20-200 μl.
    2. Plaats de detectiekaart onmiddellijk gedurende 15 minuten in een broedmachine van 42 °C.

6. Analyse van de resultaten

  1. Gecontroleerde omgeving voor uitlezing
    1. Houd de detectiekaarten tijdens de visuele interpretatie in een voorverwarmde broedmachine op 53 °C om de signaalintensiteit te stabiliseren.
  2. Protocol voor visuele interpretatie
    1. Lees de testresultaten direct af door visuele inspectie van de banden op de detectiekaarten binnen 10-20 minuten.
      OPMERKING: Het resultaat wordt na 20 minuten ongeldig.
  3. Voor de interpretatiematrix voor de interpretatie van RGT-resultaten, zie aanvullende tabel 5.
    OPMERKING: Visuele interpretatie van het resultaat wordt weergegeven in figuur 1.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Consistentie van de RGT- en PCR-fluorescentiesonderingsmethoden
In totaal werden 310 monsters geanalyseerd voor NG, bestaande uit 161 vrouwen en 149 mannen. Het positieve toevalspercentage was 98,78% (95%CI: 93,39%-99,97%), terwijl het negatieve toevalspercentage 99,12% was (95% BI: 96,87%-99,89%). Het totale toevalspercentage was 99,03% (95% BI: 97,20%-99,80%). De Kappa-consistentiewaarde was 0,975 (95% BI: 0,947-1,003, Z...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

In deze studie werd RGT gebruikt om soa-pathogenen te detecteren, waaronder NG, CT en UU. Wanneer de RGT-test werd uitgevoerd onder strikte operationele protocollen, vertoonde deze een sterke overeenstemming met gevestigde diagnostische methoden zoals PCR-fluorescentiesondering, gensequencing en technieken voor het isoleren van pathogenen. De gevoeligheid en specificiteit van de RGT-test waren vergelijkbaar met of overtroffen die van eerder gerapporteerde methodologieën, zoals blijkt uit...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen.

Dankbetuigingen

We danken Wuhan Zhongzhi Bio-technologies Inc. voor de reagentia en technische begeleiding die voor deze studie zijn aangeboden.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
10% (w/v)  sodium hypochloritePreparation in the laboratory.Preparation in the laboratory.Verdunde bleekvloeistofoplossing voor decontaminatie en inactivering van pathogenen op apparatuur of oppervlakken.
75% (v/v) ethanolAnte Food Co., Ltd (Anhui,China)http://www.antegroup.com/product_detail_cn/id/81.htmlAqueuze ethanoloplossing voor oppervlaktedesinfectie
Adjustable-volume Pipette (0.5–10 μL)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101004Micropipet voor eenkanaals gebruik voor nauwkeurige behandeling van volumes op microliterschaal.
Adjustable-volume Pipette (100–1000 μL)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101014Eenkanaalspijp voor nauwkeurige behandeling van grote vloeistofvolumes.
Adjustable-volume Pipette (10–100 μL)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101008Eenkanaalpijp geoptimaliseerd voor tussenvolumes, vaak gebruikt in moleculaire biologieprotocollen.
Adjustable-volume Pipette (20–200 μL)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101009Eenkanaalpijp voor overdrachten van mediumvolumes, geschikt voor nauwkeurige afmetingen van reagentia.
Biosafety cabinet (HF Safe-1200)HealForce Bio-Meditech Holdings Limited (Hong Kong, China)HF Safe-1200Een bioveiligheidscabinet van klasse II dat zorgt voor bescherming van personeel, monsters en omgeving tijdens het omgaan met pathogene micro-organismen of celculturen.
Centrifuge TubesHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Guangzhou, China)Guangzhou Yuexiu Medical Device Filing No. 20210414Voor extractie van nucleïnezuur, celpelleting en andere laboratoriumprocedures.
Chlamydia trachomatis (CT) Nucleic Acid Assay (RNA Amplification-Lateral Flow Assay)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC.(Wuhan, China)A.10.309-STD-RG-002Voor kwalitatieve detectie van Chlamydia trachomatis nucleïnezuur RNA in genitale en urinewegmonsters.
CO2 IncubatorThermo Fisher Scientific(Asheville, USA) LLCSN:300504406Gebruikt voor celkweek, biedt een stabiele omgeving met gecontroleerde temperatuur (37°C), vochtigheid en CO2 concentratie (meestal 5%) om optimale celgroei te garanderen.
Culture Plate Corning Incorporated (Corning, USA)50 mm ´ 9 mmVoor adherante celkweek en uitbreiding.
Detection Kit for Nucleic Acid to Chlamydia trachomatis (CT) (PCR-Fluorescence Probing)Fosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., LtdChina Medical Device Registration Certificate No. 20143402234Voor kwalitatieve detectie van nucleïnezuur van Chlamydia trachomatis in genitale en urinewegmonsters.
Detection Kit for Nucleic Acid to Neisseria Gonorrhoeae (NG)(PCR-Fluorescence Probing)Fosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., LtdChina Medical Device Registration Certificate No. 20173401080Voor kwalitatieve detectie van nucleïnezuur van Neisseria gonorrhoeae in genitale en urinewegmonsters.
Detection Kit for Nucleic Acid to Ureaplasma Urealyticum (UU) (PCR-Fluorescence Probing)Fosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., LtdChina Medical Device Registration Certificate No. 20173400536Voor kwalitatieve detectie van nucleïnezuur van Ureaplasma Urealyticum in genitale en urinewegmonsters.
DMEM mediumThermo Fisher Scientific Inc.(Waltham, USA)11965092Voor Chlamydia trachomatis kweek.
Filter Pipette Tips (10 μL)Guangzhou Surbiopure Biotechnology Co., Ltd (Guangzhou, China)TF-10-BXLVoor precies pipetteren in de experimenten.
Filter Pipette Tips (200 μL)Guangzhou Surbiopure Biotechnology Co., Ltd (Guangzhou, China)TF-200-BXLVoor precies pipetteren in de experimenten.
Genital swabHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Guangzhou, China)Hz112Steriele wattenstaafjes met katoen voor het verzamelen van klinische monsters van genitale mucosale oppervlakken.
Gibco Fetal Bovine Serum (FBS)Thermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, USA)10270106Voor Chlamydia trachomatis kweek.
Glass slidesHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Guangzhou, China)Guangzhou Yuexiu Medical Device Filing No. 20210414Standaard glasplaten met anti-fade behandeling voor het bereiden van celuitstrijkjes of weefselsecties, compatibel met Gram-kleuringsprotocollen.
Goldenstar RT6 cDNA Synthesis Kit Ver2Beijing Tsingke Biotech Co., Ltd (Beijing, China)TSK302SVoor de synthese van de eerste streng cDNA in de eerste stap van de tweede RT-PCR. Het bevat alle reagentia die nodig zijn voor de synthese van cDNA uit RNA.
Gram Stain KitBaso Diagnostics,Inc. (Zhuhai, China)BA4012Een kleurset die kristalviolet, jodium, ontkleurmiddel en safranine bevat voor het onderscheiden van Neisseria Gonorrhoeae. 
IBM SPSS Statistics (V25.0)International Business Machines Corporation (New York, USA)Version 25.0Voor data-analyse.
Infrared sterilizerHuaxixinrui (Qingdao) Analytical Instruments Co., Ltd.MJ-200WVoor onmiddellijke decontaminatie van inoculatiespijkers of pincetten, minimalisering van kruisbesmetting in bioveiligheidskasten.
Inoculation loopBKMAM Biotechnology Co., Ltd.(Hunan, China)110306002Voor overdracht van microbiële monsters, strijken of inoculeren.
Inverted Microscope (IX-51)Olympus Corporation (Tokyo, Japan)Asset Code of Labortory:  71807101Voor het observeren van adherante cellen of dynamische live-cell in kweekschotels.
MALDI Biotyper automated microbial mass spectrometry systemBruker Daltonics GmbH & Co. KG (Bremen, Germany)National Medical Device Import Registration No. 20182222017Een MALDI-TOF-massaspectrometriesysteem voor snelle microbiële

Referenties

  1. Hufstetler, K., Llata, E., Miele, K., Quilter, L. A. S. Clinical updates in sexually transmitted infections, 2024. J Womens Health (Larchmt). 33 (6), 827-837 (2024).
  2. Sunkavalli, A., McClure, R., Genco, C. Molecular regulatory mechanisms drive emergent pathogenetic properties of Neisseria gonorrhoeae. Microorganisms. 10 (5), 922(2022).
  3. Quillin, S. J., Seifert, H. S. Neisseria gonorrhoeae host adaptation and pathogenesis. Nat Rev Microbiol. 16 (4), 226-240 (2018).
  4. Rowley, J., et al. Chlamydia, gonorrhoea, trichomoniasis, and syphilis: global prevalence and incidence estimates, 2016. Bull World Health Organ. 97 (8), 548-562 (2016).
  5. Rittenschober-Boehm, J., et al. Intrauterine detection of Ureaplasma species after vaginal colonization in pregnancy and neonatal outcome. Neonatology. 121 (2), 187-194 (2024).
  6. Liu, T., et al. Analysis of Ureaplasma urealyticum, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium and Neisseria gonorrhoeae infections among obstetrics and gynecological outpatients in southwest China: a retrospective study. BMC Infect Dis. 22 (1), 283(2022).
  7. Song, J., Zhang, L., Zeng, L., Xu, X. Visualized lateral flow assay for dual viral RNA fragment detection. Anal Chem. 95 (30), 11187-11192 (2023).
  8. Dighe, K., Moitra, P., Alafeef, M., Gunaseelan, N., Pan, D. A rapid RNA extraction-free lateral flow assay for molecular point-of-care detection of SARS-CoV-2 augmented by chemical probes. Biosens Bioelectron. 200, 113900(2002).
  9. Liu, C. C., Yeung, C. Y., Chen, P. H., Yeh, M. K., Hou, S. Y. Salmonella detection using 16S ribosomal DNA/RNA probe-gold nanoparticles and lateral flow immunoassay. Food Chem. 141 (3), 2526-2532 (2013).
  10. Pereyre, S., Caméléna, F., Hénin, N., Berçot, B., Bébéar, C. Clinical performance of four multiplex real-time PCR kits detecting urogenital and sexually transmitted pathogens. Clin Microbiol Infect. 28 (5), 733.e7-733.e13 (2022).
  11. Morris, S. R., Bristow, C. C., Wierzbicki, M. R., et al. Performance of a single-use, rapid, point-of-care PCR device for the detection of Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, and Trichomonas vaginalis: a cross-sectional study. Lancet Infect Dis. 21 (5), 668-676 (2021).
  12. Pflüger, L. S., Nörz, D., Grunwald, M., et al. Analytical and clinical validation of a multiplex PCR assay for detection of Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis including simultaneous LGV serotyping on an automated high-throughput PCR system. Microbiol Spectr. 12 (3), e0275623(2024).
  13. Huang, Y., et al. Droplet digital PCR (ddPCR) for the detection and quantification of Ureaplasma spp. BMC Infect Dis. 21 (1), 804(2021).
  14. Ma, Y., et al. Comparison of analytical sensitivity of DNA-based and RNA-based nucleic acid amplification tests for reproductive tract infection pathogens: implications for clinical applications. Microbiol Spectr. 11 (5), e0149723(2023).
  15. Van Der Pol, B., et al. Multicenter comparison of nucleic acid amplification tests for the diagnosis of rectal and oropharyngeal Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae infections. J Clin Microbiol. 60 (1), e0136321(2022).
  16. Luo, H., et al. An isothermal CRISPR-based diagnostic assay for Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis detection. Microbiol Spectr. 11 (6), e0046423(2023).
  17. Tu, Q., et al. Point-of-care detection of Neisseria gonorrhoeae based on RPA-CRISPR/Cas12a. AMB Express. 13 (1), 50(2023).
  18. Caruso, G., Giammanco, A., Virruso, R., Fasciana, T. Current and future trends in the laboratory diagnosis of sexually transmitted infections. Int J Environ Res Public Health. 18 (3), 1038(2021).
  19. Yang, J. L., et al. Comparison of an rRNA-based and DNA-based nucleic acid amplification test for the detection of Chlamydia trachomatis in trachoma. Br J Ophthalmol. 91 (3), 293-295 (2007).
  20. Luo, Z. G., Li, R. P., Wang, Y. B., Shang, X. J., Zhu, J. Y. Real-time fluorescence constant-temperature simultaneous amplification and testing of nucleic acid for detection of Mycoplasma genitalium infection in the genitourinary tract. Zhonghua Nan Ke Xue. 25 (6), Chinese 535-538 (2019).
  21. Zhang, T., et al. Light-up RNA aptamer signaling-CRISPR-Cas13a-based mix-and-read assays for profiling viable pathogenic bacteria. Biosens Bioelectron. 176, 112906(2021).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Snelle moleculaire diagnostiekseksueel overdraagbare aandoeningenpathogeendetectiereverse transcriptiegensequencing
Video binnenkort beschikbaar
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.