Het huidige protocol beschrijft een nieuwe methode om bloedbesmetting in de neusspoelvloeistof van muizen (NLF) te voorkomen. Aangezien deze methode zorgt voor de NLF-verzameling zonder bloedbesmetting, maakt het een nauwkeurigere detectie van immunologische componenten en verschillende respiratoire pathogenen mogelijk.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Verzameling van neusspoelingsvloeistof bij muizen zonder bloedverontreiniging
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Monsters van de bovenste luchtwegen, waaronder neusspoelvloeistof (NLF) en neusuitstrijkjes, zijn nuttig bij het detecteren van ziekteverwekkers, waaronder virussen en bacteriën, die aandoeningen van de luchtwegen kunnen veroorzaken. NLF is gebruikt om cellulaire en humorale componenten in de luchtwegen te onderzoeken, bijvoorbeeld bij het evalueren van de inductie van immunoglobuline (Ig) A na mucosale vaccinaties. Bij experimentele knaagdieren kunnen de NLF-monsters worden verzameld via de transfaryngeale of transtracheale route. Hoewel is gemeld dat de transfaryngeale route efficiënter is bij het verzamelen van de NLF-monsters dan de trans-tracheale route, waren de NLF-monsters die via de transfaryngeale route werden verzameld, vaak besmet met bloed, wat de niveaus van cellulaire en humorale inhoud in de originele NLF-monsters beïnvloedde. Deze studie was dus gericht op het vaststellen van een nieuwe NLF-verzamelingsmethode bij experimentele muizen om bloedbesmetting te minimaliseren. Kortom, voordat de onderkaak van de muis werd gescheiden, werden wattenbolletjes in de mond geplaatst om bloed op te nemen. Toen het bloeden was gestopt, werden de NLF-monsters verzameld door een micropipet in de choana te steken en tweemaal te spoelen met 200 μL fosfaatgebufferde zoutoplossing (eindvolume: 400 μL/muis). Om bloedbesmetting op te sporen, werd een eenvoudige en gevoelige forensische luminoltest gebruikt die hemoglobine detecteert. De luminoltest toonde aan dat bloedbesmetting detecteerbaar was in de NLF-monsters die volgens de conventionele methode werden geoogst (zonder wattenbolletjes), maar niet in die welke volgens de nieuwe methode werden geoogst (met wattenbolletjes). Door de besmetting van bloed waren de totale IgA- en IgG-concentraties in de NLF-monsters hoger bij de conventionele methode dan bij de nieuwe methode; van bloed is bekend dat het veel hogere niveaus van IgA en IgG bevat dan NLF. Daarom kan deze unieke methode worden gebruikt als een eenvoudige en gevoelige methode om NLF-monsters van experimentele muizen te verzamelen om bloedbesmetting te voorkomen.
Inleiding
In zowel klinisch als fundamenteel onderzoek zijn geschikte methoden voor het verzamelen van monsters het meest cruciaal voor het evalueren van de resultaten. Neusspoeling is een irrigatietechniek die wordt gebruikt om de cellulaire en humorale componenten in de luchtwegen te analyseren 1,2,3. Klinisch gezien is neusspoelvloeistof (NLF) gebruikt als een effectief niet-invasief monster voor het ontdekken van biomarkers, met verschillende onderzoeken die het gebruik ervan ondersteunen bij verschillende aandoeningen van de luchtwegen, waaronder sinusitis, cystische fibrose en algemene ademhalingsstoornissen 4,5,6,7. Bij proefdieren is NLF ook gebruikt om modellen van luchtwegaandoeningen te bestuderen, waaronder griep, coronavirusziekte-2019 (COVID-19) en allergische ziekte 3,8,9. Deze methode wordt veel gebruikt om belangrijke inflammatoire biomarkers te bepalen, zoals polymorfonucleaire cellen en cytokines, die vaak worden onderzocht als indicatoren van reacties op allergenen, astma en luchtweginfecties 10,11,12. Om de werkzaamheid en veiligheid van potentiële intranasale vaccinkandidaten te onderzoeken, zijn meer recentelijk NLF-monsters vaak verzameld van proefdieren en zijn de niveaus van pathogene en immunoglobuline (Ig) in NLF-monsters gekwantificeerd als indicatoren13.
Bij experimentele muizen kan NLF worden verzameld met behulp van de transfaryngeale of transtracheale methode. Bij de transfaryngeale methode werd de kop van de muizen, inclusief het palatopharyngeale gebied, gescheiden van het strottenhoofd en vervolgens werd een katheter via de farynxopening in de choana ingebracht om fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) te injecteren en NLF uit het neusgatte verzamelen 14. De transtracheale methode kreeg toegang tot de luchtwegen via de luchtpijp zonder het hoofd af te snijden, en NLF werd uit het neusgat verzameld, waardoor het risico op bloedbesmetting werd geminimaliseerd. Hoewel deze twee primaire methoden zijn gebruikt voor NLF-verzameling bij experimentele muizen, hebben beide conventionele methoden hun eigen beperkingen. Het is aangetoond dat de transtracheale methode lagere hoeveelheden NLF oplevert dan de transfaryngeale methode vanwege het lekken van transtracheale spoelvloeistof in de mondholte. De vorige studie toonde aan dat, na injectie van PBS, de teruggewonnen vloeistofvolumes in NLF respectievelijk 70%-80% en 90%-100% waren in de transtracheale en transfaryngeale methoden14. Hoewel de transfaryngeale methode als beter kan worden beschouwd met grotere hoeveelheden NLF dan de trans-tracheale methode, was bloedbesmetting tijdens de procedure tot op zekere hoogte onvermijdelijk14,15. Evenzo hebben verschillende onderzoeken gemeld dat NLF-monsters vaak besmet waren met hoge niveaus van bloedserumeiwitten 16,17,18. Dit kan de detectie en kwantificering van NLF-specifieke biomarkers voor luchtwegaandoeningen verstoren19. Dit kan ook van invloed zijn op de concentraties van Ig, met name IgA en IgG, in NLF-monsters, aangezien bloed grotere hoeveelheden IgA en IgG bevat dan NLF.
Om deze uitdagingen aan te gaan, was deze studie gericht op het vaststellen van een unieke, eenvoudige en betrouwbare transfaryngeale methode voor het verzamelen van NLF-monsters van experimentele muizen, het maximaliseren van de monsteropbrengst en het minimaliseren van bloedbesmetting. Tijdens de experimentele processen werden wattenbolletjes in de mond van de muis geplaatst om bloedbesmetting te remmen, en vervolgens werd PBS geïnjecteerd om NLF-monsters uit het neusgat te verzamelen. De niveaus van bloedbesmetting in NLF werden bepaald met behulp van een forensische techniek, op luminol gebaseerde chemiluminescentie, die semi-kwantificering van hemoglobine (Hb) -niveaus in NLF-monsters mogelijk maakt; de luminolreactie in NLF verzameld met de nieuwe methode was negatief. De huidige nieuwe methode kan dus de NLF-monsterkwaliteit verbeteren voor verschillende biologische experimenten, zoals antilichaamenzymgekoppelde immunosorbenttesten (ELISA's), cytokineprofielen, immunologische en medische biomarkerbepalingen en modellen voor respiratoire aandoeningen bij muizen.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle experimentele procedures werden goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van de Faculteit der Geneeskunde van de Universiteit van Kindai en uitgevoerd volgens de criteria die zijn uiteengezet door de National Institutes of Health (NIH)20. In deze studie werden 4 maanden oude mannelijke C57BL/6-muizen gebruikt. Informatie over reagentia en apparatuur die in dit onderzoek zijn gebruikt, staat vermeld in de materiaaltabel.
1. NLF-collectie
- Euthanaseer een muis met 5% isofluraan21 volgens institutioneel goedgekeurde protocollen.
- Plaats de muis op zijn rug op een operatieplaat en fixeer hem door alle vier de ledematen vast te pinnen.
- Neem bloed af uit het hart met behulp van een spuit van 1 ml.
- Open de buikholte met een schaar om de viscerale organen en het middenrif bloot te leggen.
- Snijd met een schaar in het middenrif en de ribben om het juiste atrium zichtbaar te maken.
- Prik met een schaar in het rechter atrium om het bloed verder te verwijderen.
- Plaats drie wattenbolletjes in de bek van het dier terwijl je aan de tong trekt.
- Scheid de onderkaak met een schaar terwijl u het hoofd optilt (neus omhoog) om bloedbesmetting bij NLF te voorkomen.
- Vervang de wattenbolletjes door nieuwe om bloedbesmetting te voorkomen.
- Nadat het bloeden is gestopt, injecteert u 200 μl steriel PBS in de choana en vangt u NLF dat uit de neusgaten wordt uitgestoten op in een tube van 1,5 ml.
- Herhaal stap 1.10 nog een keer.
2. Detectie van bloedverontreiniging door luminolchemoluminescentie
- Los 1 mg luminol en 5 mg natriumperoxide (Na2O2) op met 1 ml steriel water en gebruik een tube van 1,5 ml om de bouillonoplossing te maken.
OPMERKING: De uiteindelijke concentratie is 1 mg/ml luminol en 5 mg/ml Na2O2. - Dek de tube af met aluminiumfolie en bewaar deze tot gebruik bij 4 °C.
- Verdun de voorraadoplossing 10-voudig met gedeïoniseerd water om een werkende oplossing te maken.
OPMERKING: De uiteindelijke concentratie is 0,1 mg/ml luminol en 0,5 mg/ml Na2O2. - Pipetteer 2 μL van de NLF-monsters in putjes van een plaat met 96 putjes.
- Voeg 100 μL van de verdunde luminoloplossing toe aan elk putje.
- Schud de plaat met 96 putjes kort om de monsters te mengen met de luminoloplossing.
- Observeer direct luminol chemiluminescentie in het donker.
- Kwantificeer de Hb-concentratie indien nodig met behulp van een luminometer.
3. Kwantificering van IgA en IgG door ELISA's
- Smeer putjes van platen met 96 putjes in met 100 μL/putje van een totaal anti-muis IgA (20 ng/putje; 200 ng/ml) of IgG (10 ng/putje; 100 ng/ml) antilichaam (zie materiaaltabel).
- Sluit de platen af en incubeer ze een nacht bij 4 °C.
- Was de borden driemaal met telkens 300 μl/putje van een wasbuffer met 0,05% Tween 20 in PBS en dep de borden vervolgens op keukenpapier.
- Voeg aan elk putje 200 μL van een testverdunningsmiddel met 10% foetaal runderserum (FBS) en 0,2% Tween 20 in PBS toe.
- Incubeer de platen gedurende 60 minuten bij kamertemperatuur (RT).
- Zuig het verdunningsmiddel op en dep de platen vervolgens op keukenpapier.
- Bereid 100 ng/ml van een muis IgA- of IgG-standaard voor met het testverdunningsmiddel en maak tweevoudige seriële verdunningen: 50 ng/ml, 25 ng/ml, 12,5 ng/ml, 6,25 ng/ml, 3,13 ng/ml, 1,56 ng/ml en 0,78 ng/ml.
OPMERKING: Het vereiste volume van elke standaard is 100 μL per putje. - Verdun de monsters met het testverdunningsmiddel in de juiste verdunningen: serum (104 tot 106), NLF (10, 50, 200 en 500) en BALF (101 tot 104).
OPMERKING: Het vereiste volume van elk monster is 100 μL per putje. - Voeg 100 μL IgA- of IgG-standaarden en monsters toe aan de daarvoor bestemde putjes.
- Incubeer de platen 75 minuten bij RT.
- Was de borden driemaal met telkens 300 μL/putje van de wasbuffer en dep de borden vervolgens op keukenpapier.
- Verdun een peroxidase-geconjugeerd anti-muis F(ab')2-antilichaam (zie materiaaltabel) met het testverdunningsmiddel in de juiste verdunning: 104-voudige verdunning.
OPMERKING: Het vereiste volume is 100 μL per putje. - Voeg aan elk putje 100 μl van het verdunde peroxidase-geconjugeerde anti-muis F(ab')2-antilichaam toe.
- Incubeer de platen 75 minuten bij RT.
- Was de borden vijf keer met telkens 300 μL/putje van de wasbuffer en dep de platen vervolgens op papieren torens.
- Voeg aan elk putje 100 μl van een substraatoplossing met tetramethylbenzidine (TMB) en waterstofperoxide toe.
- Incubeer de platen 5 minuten bij RT.
- Voeg 50 μL van een stopoplossing, 2 N zwavelzuur (2N H2SO4), toe aan elk putje.
- Meet de extinctie bij 450 nm met behulp van een microplaatlezer.
- Bepaal de concentraties van IgA en IgG in elk monster door gebruik te maken van de standaardcurven.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Met behulp van de conventionele of nieuwe methode werden NLF-monsters verzameld van C57BL/6-muizen via de transfaryngeale route. Zoals te zien is in figuur 1, waren de NLF-monsters die met de conventionele methode werden verzameld licht roze getint (figuur 1A); de NLF-monsters die met de nieuwe methode werden verzameld, waren duidelijk (Figuur 1B). Aangezien het verschil het gevolg leek te zijn van ...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Neusspoeling is een waardevolle techniek voor het verkrijgen van biochemische, cytologische en biologische informatie bij aandoeningen van de luchtwegen, zoals griep en COVID-1923. Naast het identificeren van verschillende infiltrerende cellen, kan de niet-cellulaire samenstelling van de luchtwegen worden onderzocht aan de hand van de NLF-monsters met behulp van verschillende methoden, zoals ELISA's, immunoblot en kwantitatieve polymeraseke...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
We danken Seiichi Omura, Ph.D., Cong Thanh Nguyen, MD, Ph.D., Kota Moriguchi, MD, Ph.D., Reona Shiro, MD, en Sandesh Rimal, MS, Afdeling Microbiologie, Kindai University Faculteit der Geneeskunde, en Hirotaka Ebina, Ph.D., Shinya Okamura, Ph.D., en Yasuo Yoshioka, Ph.D., Virus Vaccine Group, BIKEN Innovative Vaccine Research Alliance Laboratories, Research Institute for Microbial Diseases, Universiteit van Osaka, voor nuttige discussies. We betuigen ook onze dankbaarheid aan de leden van het Life Science Research Institute, Kindai University, voor hun uitstekende technische assistentie. Dit werk werd ondersteund door het Ministerie van Onderwijs, Cultuur, Sport, Wetenschap en Technologie, Japan, via de Monbukagakusho (MEXT, 2021-2025) Scholarship (I.A.), Grant-in-Aid for Scientific Research KAKENHI van de Japan Society for the Promotion of Science (JSPS) JP23K06493 (F.S.), JP21K07287/JP24K10500 (A.-M.P.), en JP22K18378/JP24K10163 (I.T.), en Kindai University Research Enhancement Grant KD2406 (F.S.) en KD2506 (I.T.).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Animal fixation needle | Natsume Seisakusho Co., Ltd., Tokyo, Japan | KN-358-A | We fixed a mouse with animal fixation needles. Stainless steel; total length, 23 mm; and needle tip, 15 mm. |
| BD OptEIATM TMB Substrate Reagent Set | BD Biosciences, San Diego, CA, USA | 555214 | We added 100 μL of TMB substrate solution per well. |
| Bell Jar | NA | NA | We used a bell jar for anesthesia. |
| Clear Flat-Bottom Immuno Nonsterile 96-Well Plates | ThermoFisher Scientific, Rochester, NY, USA | 442404 | We used Clear Flat-Bottom Immuno Nonsterile 96-Well Plates with MaxiSorp surface treatment for enzyme-linked immunosorbent assays. |
| Cotton ball | Sansho Co., Ltd., Tokyo, Japan | 94-1951 | We used cottons balls to avoid blood contamination. The diameter of cotton balls was 7 mm. |
| Fetal bovine serum | Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA | 172012-500 ML | We added 10% of fetal bovine serum to the assay diluent. |
| Forceps (Micro tweezers for research experiments, curved tip) | Sansho Co., Ltd., Tokyo, Japan | 91-1506 | We used forceps for disection. Model, HSC 551-10; and overll all length, 105 mm. |
| Forceps (Precision tweezers) | Sansho Co., Ltd., Tokyo, Japan | 91-2772 | We used forceps for disection. Model, HSC 607-12; overll all length, 120 mm; and tip diameter, 0.3 mm. |
| Goat Anti-Mouse IgA-UNLB | SouthernBiotech, Birmingham, AL, USA | 1040-01 | We coated Clear Flat-Bottom Immuno Nonsterile 96-Well Plates with 100 μL/well (20 ng/well) of total immunoglobulin A. |
| Isoflurane | Viatris Inc., Canonsburg, PA, USA | NA | We used isoflurane for anesthesia. |
| Luminol Rection Reagent Set | FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation, Osaka, Japan | 124-06511 | We used a luminol reaction reagent set to detect hemoglobin in NLF samples. |
| Microtube | Watson Co., Ltd., Tokyo, Japan | 131-7155C | We used microtubes for collecting NLF and BALF (1.5-mL microtube with lockining-cap, round bottom, soft touch-cap). |
| Milli-Q water | Merck KGaA, Darmstadt, Germany | Milli-Q Direct 8 | We used MilliQ water to make a luminol rection solution. |
| Mini-Shaker PSU-2T | Biosan Ltd., Riga, Latvia | PSU-2T | We shaked 96-well plates using the Mini-Shaler PSU-2T. |
| Mouse strain | CLEA Japan, Inc., Tokyo, Japan | NA | we used 4-month-old C57BL/6 male mice. |
| Nunc MicroWell 96-Well, Nunclon Delta-Treated, Flat-Bottom Microplate | Thermo Fisher Scientific Nunc A/S . Kamstrupvej,Roskilde, Denmark | 136101 | We used the NuncTM MicroWellTM 96-Well, Nunclon Delta-Treated, Flat-Bottom Microplate for the luminol test. |
| Peroxidase-conjugated AffiniPure F(ab')2 Fragment Goat Anti-Mouse IgG, F(ab')2 Fragment Specific (minimal cross-reaction to Human, Bovine, and Horse Serum Proteins) | Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA, USA | 115-036-072 | We added 100 μL of peroxidase-conjugated AffiniPure F(ab')2 fragment goat anti-mouse IgG, F(ab')2 fragment specific, as the detection antibody (10,000-fold dilution) to each well. |
| Phosphate-buffered saline | Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA | D8537-500ML | We used Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline (modified without calcium chloride and magnesium chloride, liquid, sterile-filtered, suitable for cell cullture) for NLF and BALF collection. |
| Pipette | Watson Co., Ltd., Tokyo, Japan | NA | We used a 200-μL pipette for nasal lavage. |
| Pipette tip | Watson Co., Ltd., Tokyo, Japan | NA | We used a 200-μL multifit pipette tip for nasal lavage. |
| Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monolaurate (Tween 20) | FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation, Osaka, Japan | 167-11515 | We added 0.05% of Tween 20 to the washing buffer and 0.2% of Tween 20 to the assay diluent. |
| Purified Goat anti-mouse IgG (minimal x-reactivity) Antibody | BioLegend, San Diego, CA, USA | 405301 | We coated Clear Flat-Bottom Immuno Nonsterile 96-Well Plates with 100 μL/well (10 ng/well) of total immunoglobulin G. |
| Small scissors, double-pointed | Sansho Co., Ltd., Tokyo, Japan | 91-7005 | We used scissors for disection. Model, S-4A; and overll all length, 115 mm. |
| Sulfuric acid | Wako Pure Chemical Industries, Ltd, Tokyo, Japan | 192-04755 | We added 50 μL of 2 N sulfuric acid to each well to stop the reaction. |
| Surflo intravenous catheter | Terumo Corporation, Tokyo, Japan | SR-FS2032 | We used a surflo intravenous catheter and injected PBS into the trachea for bronchoalveolar lavage. Catheter, 20G; catheter length, 32 mm; catheter inner diameter, 0.80 mm; catheter outer diameter, 1.1 mm; and inner needel, 22G. |
| Surgical straight scissors | Sansho Co., Ltd., Tokyo, Japan | 91-7004 | We used scissors for disection. Model, S-3B; and overll all length, 120 mm. |
| Surgilcal plate | Natsume Seisakusho Co., Ltd., Tokyo, Japan | KN-321-B | We used a cork board for dissection. Depth, 20 cm; width, 15 cm; and height 3 cm. |
| Synergy H1 Hybrid Multi-Mode Microplate Reader | Agilent Technologies, Inc., Santa Clara, CA, USA | NA | We measured the absorbance of samples at 450 nm, using the Synergy H1 Hybrid Multi-Mode Microplate Reader. |
| Syringe | Terumo Corporation, Tokyo, Japan | SS-01T | We used a 1-mL syringe for blood collection from the heart. |
| Thread | Niccho Kogyo Co., Ltd. Tokyo Japan | NA | We tied a catheter with thread to ensure proper positioning during the procedure. |
Referenties
- Cortegano, I., et al. Age-dependent nasal immune responses in non-hospitalized bronchiolitis children. Front Immunol. 13, 1011607(2022).
- Yao, S., et al. Control of pathogenic effector T-cell activities in situ by PD-L1 expression on respiratory inflammatory dendritic cells during respiratory syncytial virus infection. Mucosal Immunol. 8 (4), 746-759 (2015).
- Gould, V. M. W., et al. Nasal IgA provides protection against human influenza challenge in volunteers with low serum influenza antibody titre. Front Microbiol. 8, 900(2017).
- Casado, B., Pannell, L. K., Viglio, S., Iadarola, P., Baraniuk, J. N. Analysis of the sinusitis nasal lavage fluid proteome using capillary liquid chromatography interfaced to electrospray ionization-quadrupole time of flight-tandem mass spectrometry. Electrophoresis. 25 (8), 1386-1393 (2004).
- Hull, J., Skinner, W., Robertson, C., Phelan, P. Elemental content of airway surface liquid from infants with cystic fibrosis. Am J Respir Crit Care Med. 157 (1), 10-14 (1998).
- Roponen, M., et al. Inflammatory mediators in nasal lavage, induced sputum and serum of employees with rheumatic and respiratory disorders. Eur Respir J. 18 (3), 542-548 (2001).
- Santos Galvão, C. E., et al. Inflammatory mediators in nasal lavage among school-age children from urban and rural areas in São Paulo, Brazil. São Paulo Med J. 122 (5), 204(2004).
- Winkler, E. S., et al. SARS-CoV-2 causes lung infection without severe disease in human ACE2 knock-in mice. J Virol. 96 (1), e01511-e01521 (2022).
- Kieran, T. J., et al. Exploring associations between viral titer measurements and disease outcomes in ferrets inoculated with 125 contemporary influenza A viruses. J Virol. 98 (2), e01661-e01723 (2024).
- Peden, D. B. The use of nasal lavage for objective measurement of irritant-induced nasal inflammation. Regul Toxicol Pharmacol. 24 (1 II), 68-75 (1996).
- Rusznak, C., et al. Mechanisms of pollution-induced allergy and asthma. Rev Fr Allergol Immunol Clin. 38 (7 Suppl. 1), 397-402 (1998).
- Laumbach, R. J., et al. Nasal effects of a mixture of volatile organic compounds and their ozone oxidation products. J Occup Environ Med. 47 (11), 1182-1189 (2005).
- Kawai, A., et al. The potential of neuraminidase as an antigen for nasal vaccines to increase cross-protection against influenza viruses. J Virol. 95 (20), 1180-1201 (2021).
- Cho, S. H., et al. Spontaneous eosinophilic nasal inflammation in a genetically-mutant mouse: Comparative study with an allergic inflammation model. PLoS One. 7 (4), e35114(2012).
- Puchta, A., Verschoor, C. P., Thurn, T., Bowdish, D. M. E. Characterization of inflammatory responses during intranasal colonization with Streptococcus pneumoniae. J Vis Exp. (83), e50490(2014).
- Ghafouri, B., et al. Comparative proteomics of nasal fluid in seasonal allergic rhinitis. J Proteome Res. 5 (2), 330-338 (2006).
- Lindahl, M., Ståhlbom, B., Svartz, J., Tagesson, C. Protein patterns of human nasal and bronchoalveolar lavage fluids analyzed with two-dimensional gel electrophoresis. Electrophoresis. 19 (18), 3222-3229 (1998).
- Lindahl, M., Ståhlbom, B., Tagesson, C. Identification of a new potential airway irritation marker, palate lung nasal epithelial clone protein, in human nasal lavage fluid with two-dimensional electrophoresis and matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight. Electrophoresis. 22 (9), 1795-1800 (2001).
- Schoenebeck, B., et al. Improved preparation of nasal lavage fluid (NLF) as a noninvasive sample for proteomic biomarker discovery. Biochim Biophys Acta Proteins Proteomics. 1854 (7), 741-745 (2015).
- National Research Council (US) Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Guide for the care and use of laboratory animals. , (2011).
- Roustan, A., et al. Evaluating methods of mouse euthanasia on the oocyte quality: Cervical dislocation versus isoflurane inhalation. Lab Anim. 46 (2), 167-169 (2012).
- Park, A. M., Tsunoda, I. Forensic luminol reaction for detecting fecal occult blood in experimental mice. Biotechniques. 65 (4), 227-230 (2018).
- Gao, K. M., et al. Human nasal wash RNA-Seq reveals distinct cell-specific innate immune responses in influenza versus SARS-CoV-2. JCI Insight. 6 (22), e152288(2021).
- Kirkeby, L., et al. Immunoglobulins in nasal secretions of healthy humans: Structural integrity of secretory immunoglobulin A1 (IgA1) and occurrence of neutralizing antibodies to IgA1 proteases of nasal bacteria. Clin Diagn Lab Immunol. 7 (1), 31-39 (2000).
- Webb, J. L., Creamer, J. I., Quickenden, T. I. A comparison of the presumptive luminol test for blood with four non-chemiluminescent forensic techniques. Luminescence. 21 (4), 214-220 (2006).
- Ahmad, I., et al. Exploring the role of platelets in virus-induced inflammatory demyelinating disease and myocarditis. Int J Mol Sci. 25 (6), 3460(2024).
- Olsson, T., Bergström, K., Thore, A. A sensitive method for determination of serum hemoglobin based on iso-luminol chemiluminescence. Clin Chim Acta. 122 (2), 125-133 (1982).
- Van der Meer, W., Dinnissen, J. M. B., de Keijzer, M. H. Evaluation of the Sysmex XT-2000i, a new automated haematology analyser. Sysmex. (2002), Available at: https://www.sysmex.co.jp/en/products_solutions/library/journal/vol12_no2/summary03.html (2002).
- Oshiro, I., Takenaka, T., Maeda, J. New method for hemoglobin determination by using sodium lauryl sulfate (SLS). Clin Biochem. 15 (2), 83-88 (1982).
- Hamaguchi, Y., Oshiro, I., Maeda, J. A study on reaction mechanism of sodium lauryl sulfate-hemoglobin (SLS-Hb), Part 1. Rinsho Byori. 40 (6), 649-654 (1992).
- McGee, D. W., McMurray, D. N. The effect of protein malnutrition on the IgA immune response in mice. Immunology. 63 (1), 25(1988).
- Castigli, E., et al. Impaired IgA class switching in APRIL-deficient mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (11), 3903-3908 (2004).
- Matsuo, K., et al. CCL28-deficient mice have reduced IgA antibody-secreting cells and an altered microbiota in the colon. J Immunol. 200 (2), 800-809 (2018).
- McDonald, K. G., et al. Aging impacts isolated lymphoid follicle development and function. Immun Ageing. 8 (1), 1-12 (2011).
- Abolins, S., et al. The comparative immunology of wild and laboratory mice, Mus musculus domesticus. Nat Commun. 8 (1), 1-13 (2017).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
