Methodenartikel

Kwantificering van violaceïne in Chromobacterium violaceum en de remming ervan door bioactieve stoffen

DOI:

10.3791/68507

⸱

8 augustus 2025

 ,  ,  , 
1Food Research Center, Department of Food and Experimental Nutrition, Faculty of Pharmaceutical Sciences, University of São Paulo (USP)

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het doel van dit protocol is het kwantificeren van de productie van violaceïne door Chromobacterium violaceum ATCC 12472 als een proxy voor het beoordelen van quorum sensing-remming door bioactieve stoffen.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bacteriën communiceren via een systeem dat bekend staat als quorum sensing (QS), waardoor ze hun gedrag kunnen coördineren als reactie op veranderingen in celdichtheid. Dit proces omvat de productie, secretie en detectie van kleine extracellulaire signaalmoleculen, meestal auto-inductoren (AI) genoemd. QS reguleert een breed scala aan genen en functies, waaronder de vorming en verspreiding van biofilm, zwermmotiliteit, productie van virulentiefactoren, antibioticaresistentie en bioluminescentie. QS-remming is een veelbelovende antivirulentiestrategie geworden tegen antibioticaresistente bacteriën, omdat het een lagere selectiedruk uitoefent in vergelijking met traditionele antibiotica. In de bacterie Chromobacterium violaceum ATCC 12472 controleren de QS-eiwitten CviI/CviR, die homoloog zijn aan de LuxI/LuxR-type QS-eiwitten van Aliivibrio fisheri, veel genen, waaronder die welke verantwoordelijk zijn voor de productie van het paarse pigment violaceïne. C. violaceum is veel gebruikt als biosensorstam in QS-remmingsstudies, met name de remming van de productie van violaceïne. Veel verbindingen hebben het potentieel om QS te remmen door zich te binden aan QS-eiwitten, ofwel LuxI- of LuxR-homologen, waardoor QS-circuits worden verstoord. Dit protocol beschrijft de methode voor het kwantificeren van violaceïne geproduceerd door C. violaceum ATCC 12472 en de remming ervan door bioactieve stoffen in concentraties die de bacteriegroei niet beïnvloeden. De hier beschreven test toont een significante vermindering van de productie van violaceïne door de geteste verbindingen. Deze studie benadrukt het potentieel om dit protocol te gebruiken om veelbelovende kandidaten te screenen in QS-remmingsonderzoek.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bacteriën kunnen communiceren via een systeem dat bekend staat als QS, dat een gecoördineerde modulatie van hun gedrag mogelijk maakt als reactie op veranderingen in de celdichtheid. Dit proces omvat de productie, secretie en detectie van kleine extracellulaire signaalmoleculen, ook wel auto-inductoren genoemd, die communicatie tussen verschillende soorten en binnen dezelfde soort mogelijk maken 1,2.

Deze communicatie is in staat om genen en functies te reguleren, zoals de vorming en dispersie van biofilm, beweeglijkheid en adhesie, celproliferatie, synthese van exo-enzymen en sideroforen, sporulatie, zuurresistentie, horizontale genoverdracht, antibioticaresistentie, bioluminescentie, productie van exopolysachariden, onder andere 3,4,5. Gezien de relevantie van QS-gereguleerde fenotypes, is er grote belangstelling voor het ontwikkelen van systemen die in staat zijn om deze cellulaire communicatie te verstoren. De remming van QS-signalering wordt ook wel quorum quenching (QQ)6 genoemd. QQ kan op verschillende manieren voorkomen, waaronder remmers van de synthese van auto-inductoren, enzymatische inactivatie van deze signalen en moleculen met een antagonistisch effect op deze moleculen 4,7.

De groeiende dreiging van antibioticaresistentie heeft geleid tot onderzoek naar alternatieve therapieën, waaronder quorum sensing-remmers (QSI's), die de bacteriële communicatie verstoren zonder ziekteverwekkers direct te doden. Deze verbindingen kunnen synergetische effecten vertonen in combinatie met antibiotica, waardoor de bacteriële gevoeligheid wordt verbeterd en lagere antibioticadoses mogelijk zijn, wat een belangrijke strategie is om de ontwikkeling van resistentie te vertragen. Resveratrol en kanamycine vertragen bijvoorbeeld samen de groei van Aeromonas hydrophila 8, terwijl N-acetylcysteïne synergetisch werkt met tobramycine om de biofilms van Pseudomonas aeruginosa te verstoren5.

Met overmatig gebruik van antibiotica en stagnerende ontwikkeling van geneesmiddelen, bieden antivirulentiebenaderingen zoals QS-remming een paradigmaverschuiving9. In plaats van zich te richten op levensvatbaarheid, richten ze zich op virulentiefactoren, waardoor bacteriën minder schadelijk en kwetsbaarder worden voor immuniteit van de gastheer of antibiotica5. Deze strategie legt een zwakkere selectiedruk op in vergelijking met traditionele antibiotica, waardoor resistentie wordt geminimaliseerd en de gunstige microbiota behouden blijft10,11. Ondanks veelbelovende laboratoriumresultaten blijft validatie in de echte wereld door middel van klinische proeven onderbelicht12. QS-remming is een veelbelovende aanvulling op antibiotica, maar de vertaling ervan naar de praktijk vereist verder bewijs van werkzaamheid en veiligheid in complexe biologische omgevingen.

C. violaceum is een bèta-proteobacterie die violette kolonies vormt met een glad en glanzend oppervlak. Het zijn facultatieve anaërobe bacillen en vormen geen sporen13. Het mechanisme van QS in C. violaceum omvat een positieve feedbacklus op basis van het gensysteem analoog aan het lux-model van Aliivibrio fisheri, dat de eiwitten CviI (homoloog aan LuxI) en CviR (homoloog aan LuxR) bevat; Figuur 1). Violaceïne vertoont biocide activiteit tegen verschillende organismen, waaronder schimmels, bacteriën, nematoden en virussen, vooral tijdens de microbiële stationaire groeifase, wanneer de bevolkingsdichtheid extreem hoog is en de voedingsstoffen bijna uitgeput zijn. Bijgevolg kan de productie van violaceïne worden beschouwd als een concurrerende strategie om het voortbestaan van de microbiële koloniete verlengen 14.

Planten produceren verbindingen die afkomstig zijn van het secundaire metabolisme, die een cruciale rol spelen bij het vergroten van hun vermogen om zich aan te passen aan ongunstige omgevingen. Deze metabolieten, zoals alkaloïden, fenolen, flavonoïden, chinonen, tannines, terpenen en lectines, worden algemeen erkend als afweermechanismen tegen herbivoren en micro-organismen15. Het potentieel van plantaardige verbindingen als QSI heeft speciale aandacht getrokken vanwege de dynamische interacties tussen planten en micro-organismen. Studies naar interacties tussen planten en pathogenen in de rhizosfeer hebben aangetoond dat planten kunnen reageren op bacteriële auto-inductoren door bioactieve stoffen af te scheiden die kunnen werken als remmers tegen ziekteverwekkers16.

In deze studie beschrijven we een praktische methode die gericht is op het kwantificeren van de productie van violaceïne door C. violaceum, met de nadruk op de remming ervan door bioactieve stoffen. Deze methode dient als een eerste screeningsinstrument voor het selecteren van verbindingen met potentiële QSI-activiteiten. Het biedt een snelle en praktische aanpak voor toekomstige therapeutische ontwikkeling tegen Gram-negatieve pathogene bacteriën. Dit gestandaardiseerde protocol zal nuttig zijn omdat het een gedetailleerde beschrijving geeft die in eerdere studies niet is gedaan en die in de toekomst een vergelijking tussen verschillende onderzoeken zal vergemakkelijken 17,18,19.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Voorbereiding op de cultuur (figuur 2)

  1. Kweek in een reageerbuis een cultuur van 5 ml van C. violaceum ATCC 12472 in Luria Bertani bouillon (LB: trypton 10 g/L, gistextract 5 g/L, 5g/L NaCl) bij 30 °C in een schudbroedmachine (220 rpm) gedurende 24 uur.
  2. Pas de teelt aan op een OD595 van 0,1 in LB-bouillon, wat overeenkomt met ongeveer 1 x 108 kve/ml.

2. Samenstelling voorbereiding

  1. Voeg op een plaat met 96 putjes met platte bodem LB-bouillon en de bioactieve stof toe volgens een seriële verdunningsberekening, volgens de onderstaande beschrijving. Afhankelijk van hun oplosbaarheid worden bioactieve stoffen meestal verdund in pure DMSO of een DMSO: water-oplossing (1:1).
    OPMERKING: In methodologieën die QSI beoordelen, is het van cruciaal belang ervoor te zorgen dat de gebruikte concentraties lager zijn dan de minimale remmende concentratie (sub-MIC), wat betekent dat ze de bacteriegroei niet beïnvloeden. Daarom wordt aanbevolen om groeicurve-assays uit te voeren in verschillende concentraties om te bevestigen dat de verbinding specifiek de cel-tot-celcommunicatie remt in plaats van de microbiële levensvatbaarheid. Zie aanvullende figuur 1 voor groeicurvetests van de geteste bioactieve stoffen die in dit protocol worden gebruikt.
  2. Om de concentratie van bioactieve stoffen in de put te berekenen, rekening houdend met een stamoplossing van farnesol en linalool bij 20 mg/ml en een doelconcentratie van 200 μg/ml in de put, evenals resveratrol bij 2,5 mg/ml in de stockoplossing en 25 μg/ml in de put, voert u de berekening als volgt uit:
    C1V1 = C2V2
    20.000 μg/ml x V1 = 200 μg/ml x 200 μL
    V1 = 40.000/20.000 μL
    V1 = 2 μL
    waarbij C1 = concentratie van de standaardoplossing (20 mg/ml, wat overeenkomt met 20.000 μg/ml); V1 = volume van de toe te voegen stockoplossing; C2 = gewenste eindconcentratie (200 μg/ml); V2 = eindvolume in de put (200 μL).

3. Seriële verdunning20 en plaatvoorbereiding (figuur 3)

OPMERKING: Seriële verdunning wordt gebruikt voor het snel evalueren van een reeks concentraties van een geteste verbinding. In dit proces wordt de verbinding achtereenvolgens verdund in een constante verhouding, in dit geval 1:2. Elke verdunning vermindert de concentratie van de verbinding met de helft ten opzichte van de vorige concentratie, wat resulteert in een reeks afnemende concentraties20.

  1. Voeg in de eerste kolom van de seriële verdunning 196 μL LB-bouillon toe (in ons voorbeeld kolommen 3, 5 en 7). Voeg op de volgende putjes van de seriële verdunning 100 μL LB-bouillon toe (in ons geval kolommen 4, 6 en 8).
  2. Voeg vervolgens 2x de hoeveelheid bioactieve stof toe die in de vorige stap is berekend (2.2) om seriële verdunning uit te voeren. De berekening resulteerde in 2 μL van elke geteste verbinding om de uiteindelijke concentratie in de eerste put te bereiken, dus voeg 4 μL van de verbinding toe (kolommen 3, 5 en 7).
  3. Breng de helft van het totale volume van de put (100 μL) over naar de volgende kolom (in ons geval kolommen 4, 6 en 8), enzovoort tot de laatst gewenste concentratie, als u een seriële verdunning uitvoert. Vergeet niet om de inhoud grondig te mengen voor de overdracht.
    OPMERKING: In deze experimentele opstelling hebben we voor de eenvoud slechts twee concentraties gebruikt en passen alle verbindingen in slechts één plaat.
  4. Voer het experiment uit in ten minste drievoud per concentratie van elke verbinding. Drie biologische replicaten worden ook aanbevolen. Vervang de tip en herhaal de procedure tot de laatst gewenste concentratie. Neem in de laatste kolom (in ons geval 4, 6 en 8) er 100 μL uit en gooi deze weg.
  5. Voeg 80 μL LB bouillon toe aan alle putjes, in totaal 180 μL (rijen B tot D). Voeg vervolgens 20 μl van de C. violaceum-cultuur toe die in stap 1.2 is gestandaardiseerd, zodat het uiteindelijke volume 200 μl per putje bedraagt (rijen B tot D). Zorg ervoor dat u bij het vervangen van putjes elke keer de pipetpunten vervangt om te voorkomen dat hogere concentraties tussen de putjes worden overgedragen of dat er verontreiniging ontstaat.
  6. Als de verbinding is opgelost in een oplosmiddel, zorg er dan voor dat u de controle met dat oplosmiddel voorbereidt. We gebruikten DMSO. Bereid in dit geval een oplosmiddelcontrole voor, dit zal de onbehandelde controle zijn - CU (zonder bioactieve stof; kolom 9). Voeg 2 μL DMSO toe per controleputje. Dit geeft een maximale concentratie van 1% DMSO in de test.
    LET OP: DMSO bij 1% heeft geen invloed op de bacteriegroei21,22.
  7. Bereid de blanco voor, of kleurcontrole als u gepigmenteerde verbindingen gebruikt, zonder bacteriën. Nadat u 80 μL LB-bouillon aan alle putjes hebt toegevoegd, in totaal 180 μL (rijen B tot en met D, zoals eerder beschreven), voegt u 20 μL LB-bouillon toe aan de overeenkomstige lege putjes, in totaal 200 μL (rijen E tot G). Dit wordt gedaan omdat er enige achtergrondkleuring van kristalviolet is die moet worden afgetrokken van de OD-metingen, zoals zal worden beschreven in stap 5 van dit protocol.
  8. Als een kolom leeg blijft, vul deze dan met 200 μL LB-bouillon of steriel gedestilleerd water (kolommen 1, 2, 10, 11 en 12). Deze stap is belangrijk om overmatige uitdroging van het medium in de broedmachine te voorkomen.

4. Incubatie en extractie van violaceïne

  1. Bedek de plaat met een deksel of een afdichtingsfilm (zoals aangegeven in de materiaaltabel) om verdamping te voorkomen, afhankelijk van de gebruikte spectrofotometer.
  2. Incubeer de plaat bij 30 °C en roer gedurende 24 uur bij 130 tpm. Haal vervolgens de plaat uit de broedmachine, plaats deze in een droogbroedmachine bij 60 °C, verwijder het deksel en laat de plaat volledig drogen (ongeveer 8 uur).
  3. Nadat de plaat is opgedroogd, haalt u deze uit de broedmachine en voegt u 200 μL pure DMSO toe aan elk putje en bedekt u deze. Plaats de plaat in een broedmachine op 25°C terwijl u gedurende 30 minuten op 130 tpm schudt om het violaceïnepigment op te lossen.
  4. Verwijder na deze tijd de plaat uit de broedmachine en breng 100 μL over naar een andere microtiter, vermijd contact tussen de punt en de wanden van de put.

5. Kwantificering van de productie van violaceïne

  1. Kwantificeer de hoeveelheid violaceïneproductie door de extinctie bij 595 nm te meten met behulp van een geschikte plaatspectrofotometer (Materiaaltabel). De remming van violaceïnepigment is evenredig met lagere absorptiewaarden.
  2. Kwantificeer de productie van violaceïne door een negatieve controle (onbehandelde controle) te gebruiken als referentie voor de productie van 100% violaceïne (tabel 1). Trek eerst de absorptiewaarde van de blanco af van elke behandeling om de absorptie te verkrijgen die uitsluitend overeenkomt met het violaceïnepigment (exclusief interferentie van de bouillon of samengestelde kleur). Bereken vervolgens het percentage violaceïneproductie voor elke behandeling met behulp van de volgende vergelijking.
    %violaceïneproductie = (OD van de bioactieve stof / OD van onbehandelde controle) x 100
  3. Bereken de statistische analyses in drie replicaten. De resultaten kunnen worden ingediend bij ANOVA, gevolgd door de Tukey-test met behulp van de GraphPad Prism 8.0-software. De waarde van p <0,05 werd als statistisch significant beschouwd.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Voor de hier getoonde resultaten werden drie bioactieve stoffen gebruikt die eerder door onze onderzoeksgroep8 waren bestudeerd, resveratrol, farnesol en linalool. Elke verbinding werd getest op zijn vermogen om de productie van violaceïne te remmen in C. violaceum ATCC 12472, een fenotype dat wordt gereguleerd door het QS-systeem via het vioABCDE-operon 23.

De resultaten bevestigen de werkzaamh...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De eerste methode voor het extraheren en karakteriseren van violaceïne uit C. violaceum ontstond in de jaren 1990, gericht op het identificeren van geschikte koolstofbronnen voor pigmentsynthese. In dit proces werd violaceïne - samen met de cellen en het kweekmedium - gedroogd, opnieuw gesuspendeerd in ethanol en vervolgens gescheiden door extractie van supernatant. De violaceïne, nu opgelost in ethanol, werd vervolgens opnieuw gedroogd, wat een zuivere, droge vorm van het pigme...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

We willen de National Conseil for Scientific Development (CNPQ) bedanken via subsidies #403661/2023-4 en #444794/2024-7 en beurs #306685/2022-1, en de Sao Paulo Research Foundation (FAPESP) voor de subsidies #2024/05158-6 en 2023/17090-4 en de financiële steun aan het Food Research Center (FoRC) #2013/07914-8.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
DMSO Synth
FarnesolSigma-AldrichF20395%
LinaloolSigma-AldrichL260297%
Luria-Bertani MediumDifco244620
Optical Adhesive FilmThermo Fisher4311971MicroAmp
ResveratrolSigma-AldrichR5010≥99% (HPLC)
Synergy HTX multi-mode readerBiotek
Tissue Culture Plates 96 wellKasviK12-096

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mukherjee, S., Bassler, B. L. Bacterial quorum sensing in complex and dynamically changing environments. Nat Rev Microbiol. 17 (6), 371(2019).
  2. Lima, E. M. F., Winans, S. C., Pinto, U. M. Quorum sensing interference by phenolic compounds - A matter of bacterial misunderstanding. Heliyon. 9 (7), (2023).
  3. Papenfort, K., Bassler, B. L. Quorum sensing signal-response systems in Gram-negative bacteria. Nat Rev Microbiol. 14 (9), 576-588 (2016).
  4. Grandclément, C., Tannières, M., Moréra, S., Dessaux, Y., Faure, D. Quorum quenching: role in nature and applied developments. FEMS Microbiol Rev. 40 (1), 86-116 (2016).
  5. Lima, E. M. F., de Almeida, F. A., Sircili, M. P., Bueris, V., Pinto, U. M. N-acetylcysteine (NAC) attenuates quorum sensing regulated phenotypes in Pseudomonas aeruginosa PAO1. Heliyon. 9 (3), (2023).
  6. Allen, R. C., Popat, R., Diggle, S. P., Brown, S. P. Targeting virulence: can we make evolution-proof drugs. Nat Rev Microbiol. 12 (4), 300-308 (2014).
  7. Kalia, V. C., Patel, S. K. S., Kang, Y. C., Lee, J. K. Quorum sensing inhibitors as antipathogens: biotechnological applications. Biotechnol Adv. 37 (1), 68-90 (2019).
  8. Santos, C. A., Lima, E. M. F., Franco, B. D. G. deM., Pinto, U. M. Exploring phenolic compounds as quorum sensing inhibitors in foodborne bacteria. Front Microbiol. 12, 735931(2021).
  9. Ahmed, S. A. K. S., et al. Natural quorum sensing inhibitors effectively downregulate gene expression of Pseudomonas aeruginosa virulence factors. Appl Microbiol Biotechnol. 103 (8), 3521-3535 (2019).
  10. Yang, Q., Defoirdt, T. Weak selection for resistance to quorum sensing inhibition during multiple host infection cycles. ISME J. 18 (1), 251(2024).
  11. Defoirdt, T. Specific antivirulence activity, A new concept for reliable screening of virulence inhibitors. Trends Biotechnol. 34 (7), (2016).
  12. Defoirdt, T. Quorum-sensing systems as targets for antivirulence therapy. Trends Microbiol. 26 (4), 313-328 (2018).
  13. Mahendrarajan, V., Easwaran, N. Quorum quenching effects of linoleic and stearic acids on outer membrane vesicle-mediated virulence in Chromobacterium violaceum. Biofouling. , 1-11 (2024).
  14. Durán, N., et al. Advances in Chromobacterium violaceum and properties of violacein-Its main secondary metabolite: A review. Biotechnol Adv. 34 (5), 1030-1045 (2016).
  15. Nazir, N., et al. Characterization of phenolic compounds in two novel lines of Pisum sativum L. along with their in vitro antioxidant potential. Env Sci Pollut Res Int. 27 (7), 7639(2020).
  16. Majdura, J., Jankiewicz, U., Gałązka, A., Orzechowski, S. The role of quorum sensing molecules in bacterial-plant interactions. Metabolites. 13 (1), (2023).
  17. Çevikbaş, H., Ulusoy, S., Kaya Kinaytürk,, N, Exploring rose absolute and phenylethyl alcohol as novel quorum sensing inhibitors in Pseudomonas aeruginosa and Chromobacterium violaceum. Sci Rep. 14 (1), 15666(2024).
  18. Choi, S. Y., Lim, S., Yoon, K. H., Lee, J. I., Mitchell, R. J. Biotechnological activities and applications of bacterial pigments violacein and prodigiosin. J Biol Eng. 15 (1), (2021).
  19. Moradi, F., Hadi, N., Bazargani, A. Evaluation of quorum-sensing inhibitory effects of extracts of three traditional medicine plants with known antibacterial properties. New Microb New Infect. 38 (100769), 100769(2020).
  20. Wiegand, I., Hilpert, K., Hancock, R. E. Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial substances. Nat Protoc. 3 (2), 163-175 (2008).
  21. Scardino, A., et al. Cinnamaldehyde effectively disrupts Desulfovibrio vulgaris biofilms: potential implication to mitigate microbiologically influenced corrosion. Appl Env Microbiol. 91 (5), (2025).
  22. Summer, K., Browne, J., Hollanders, M., Benkendorff, K. Out of control: The need for standardised solvent approaches and data reporting in antibiofilm assays incorporating dimethyl-sulfoxide (DMSO). Biofilm. 4, 100081(2022).
  23. Ravichandran, V., et al. Virtual screening and biomolecular interactions of CviR-based quorum sensing inhibitors against Chromobacterium violaceum. Front Cell Infect Microbiol. 8, (2018).
  24. Lima, E. M. F., de Almeida, F. A., Pinto, U. M. Exploring the antivirulence potential of phenolic compounds to inhibit quorum sensing in Pseudomonas aeruginosa. World J Microbiol Biotechnol. 41 (2), (2025).
  25. Blosser, R. S., Gray, K. M. Extraction of violacein from Chromobacterium violaceum provides a new quantitative bioassay for N-acyl homoserine lactone autoinducers. J Microbiol Methods. 40 (1), 47-55 (2000).
  26. Zhu, H., He, C. C., Chu, Q. H. Inhibition of quorum sensing in Chromobacterium violaceum by pigments extracted from Auricularia auricular. Lett Appl Microbiol. 52 (3), 269-274 (2011).
  27. Durán, N., Antonio, R. V., Haun, M., Pilli, R. A. Biosynthesis of a trypanocide by Chromobacterium violaceum. World J Microbiol Biotechnol. 10 (6), 686(1994).
  28. Rettori, D., Production Durán, N. extraction and purification of violacein: an antibiotic pigment produced by Chromobacterium violaceum. World J Microbiol Biotechnol. 14 (5), 685(1998).
  29. Cheng, K. -C., Hsiao, H. -C., Hou, Y. -C., Hsieh, C. -W., Hsu, H. -Y., Chen, H. -Y., Lin, S. -P. Improvement in violacein production by utilizing formic acid to induce quorum sensing in Chromobacterium violaceum. Antiox. 11 (5), 849(2022).
  30. Defoirdt, T., Brackman, G., Coenye, T. Quorum sensing inhibitors: how strong is the evidence. Trends Microbiol. 21 (12), 619-624 (2013).
  31. Alyousef, A. A., et al. Myrtus communis and its bioactive phytoconstituent, linalool, interferes with Quorum sensing regulated virulence functions and biofilm of uropathogenic bacteria: In vitro and in silico insights. J King Saud Univ Sci. 33 (7), 101588(2021).
  32. Kanekar, S., Devasya, R. P. Growth-phase specific regulation of cviI/R based quorum sensing associated virulence factors in Chromobacterium violaceum by linalool, a monoterpenoid. World J Microbiol Biotechnol. 38 (2), (2022).
  33. Dias, J. P., Domingues, F. C., Ferreira, S. Linalool reduces virulence and tolerance to adverse conditions of listeria monocytogenes. Antibiotics. 13 (6), 474(2024).
  34. Rodrigues, C. F., Černáková, L. Farnesol and tyrosol: Secondary metabolites with a crucial quorum-sensing role in Candida biofilm development. Genes. 11 (4), (2020).
  35. Hacioglu, M., Yilmaz, F. N., Yetke, H. I., Haciosmanoglu-Aldogan, E. Synergistic effects of quorum-sensing molecules and antimicrobials against Candida albicans and Pseudomonas aeruginosa biofilms: in vitro and in vivo studies. J Antimicrob Chemother. 79 (11), 2828(2024).
  36. Bhattacharyya, S., Agrawal, A., Knabe, C. Sol-gel silica controlled release thin films for the inhibition of methicillin resistant Staphylococcus aureus. Biomater. 35, 509-517 (2014).
  37. Qu, Y., Zou, Y., Wang, G., Zhang, Y., Yu, Q. Disruption of communication: Recent advances in antibiofilm materials with anti-quorum sensing properties. ACS Appl Mater Interfaces. 16 (11), 13353-13383 (2024).
  38. Li, B., et al. Effects of Rhapontigenin as a Novel Quorum-Sensing Inhibitor on Exoenzymes and Biofilm Formation of Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum and Its Application in Vegetables. Molecules. 27 (24), (2022).
  39. Mattio, L. M., Catinella, G., Pinto, A., Dallavalle, S. Natural and nature-inspired stilbenoids as antiviral agents. Eur J Med Chem. 202 (112541), 112541(2020).
  40. Duarte, A., Alves, A. C., Ferreira, S., Silva, F., Domingues, F. C. Resveratrol inclusion complexes: Antibacterial and anti-biofilm activity against Campylobacter spp. and Arcobacter butzleri. Food Res Int. 77, 244-250 (2015).
  41. Martinelli, D., Grossmann, G., Séquin, U., Brandl, H., Bachofen, R. Effects of natural and chemically synthesized furanones on quorum sensing in Chromobacterium violaceum. BMC Microbiol. 4 (1), (2004).
  42. Tan, L. Y., Yin, W. F., Piper Chan, K. G. nigrum, Piper betle and Gnetum gnemon-natural food sources with anti-quorum sensing properties. Sensors. 13 (3), 3975-3985 (2013).
  43. Tan, L. Y., Yin, W. F., Chan, K. G. Silencing quorum sensing through extracts of Melicope lunu-ankenda. Sensors. 12 (4), 4339-4351 (2012).
  44. Oliveira, B. D., et al. Antioxidant, antimicrobial and anti-quorum sensing activities of Rubus rosaefolius phenolic extract. Ind Crops Prod. 84, 59-66 (2016).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Quorum sensingViolace ne kwantificeringRemming van quorum sensingSeri le verdunningMicroplaatassayOptische dichtheidAntibioticaresistentieVirulentiefactoren

Gerelateerde artikelen