Methodenartikel

Toepassing van optogenetica in combinatie met vezelfotometrie-opname bij de regulatie van neurale circuits - viscerale functies door elektro-acupunctuur

717 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/68667

⸱

19 september 2025

 ,  ,  ,  , 
1Institute of Acupuncture and Moxibustion, China Academy of Chinese Medical Sciences, 2Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Het doel van dit experiment is om een nieuwe benadering vast te stellen voor de gelijktijdige integratie van optogenetica, intracerebrale calciumsignaalregistratie en monitoring van de maagmotiliteit, en een nieuw paradigma te bieden voor real-time monitoring van de relatie tussen somatische stimulatie en neurale circuit-viscerale functie-interacties, die wordt toegepast op acupunctuuronderzoek.

Samenvatting

Dit protocol beschrijft een techniek voor optogenetische manipulatie van specifieke soorten neuronen en real-time registratie van de effecten van elektroacupunctuur bij Zusanli (ST36) op nucleaire calciumsignalen en maagmotiliteit bij muizen onder narcose in vivo. De verkenning van de centrale mechanismen die ten grondslag liggen aan de werkzaamheid van acupunctuur is beperkt door technologische beperkingen. De vooruitgang van optogenetische en optische beeldvormingstechnologie heeft echter de ontwikkeling van de neurowetenschappen gestimuleerd. Vezelfotometrie-opname, waarbij in eerste instantie gebruik wordt gemaakt van genetisch gecodeerde calciumindicatoren om veranderingen in de calciumdynamiek te visualiseren die wijzen op neuronale activiteit, onderscheidt zich als een sleuteltechnologie voor het karakteriseren van hersengedragscorrelaties in vivo. De toepassing van optogenetica maakt de genetische codering van neuronen mogelijk, waardoor ze kunnen worden geactiveerd of geremd als reactie op lichtstimulatie. Dit vermogen vergemakkelijkt het vaststellen van causale verbanden tussen de functie van neurale circuits en gedragsresultaten. Gelijktijdige vezelfotometrie, calciumregistratie en optogenetische stimulatie bieden een methode voor real-time registratie en manipulatie van neuronale activiteit, en dienen als een effectieve benadering om de centrale mechanismen van acupunctuur te onderzoeken. Desalniettemin blijft er een schaarste aan studies die het gelijktijdige gebruik van vezelfotometrie, calciumregistratie, optogenetica en viscerale functiemonitoring in acupunctuuronderzoek documenteren. De resultaten van dit experiment tonen aan dat EA-ST36 de maagmotiliteit zou kunnen reguleren die verband houdt met het PBN-Glu-NTS-, Glu-DMV,ChAT-circuit. Optogenetische stimulatie van dit circuit produceert hetzelfde effect. Na de superpositie van de twee bereiken de veranderingen in het calciumsignaal en de maagmotiliteit hun maximum. Deze studie heeft een nieuwe benadering ontwikkeld voor de gelijktijdige integratie van optogenetische, intracerebrale calciumsignaalregistratie en monitoring van de maagmotiliteit, en biedt een nieuw paradigma voor real-time monitoring van de relatie tussen somatische stimulatie en neurale circuit-viscerale functie-interacties.

Inleiding

In de afgelopen jaren heeft de proliferatie van biomoleculaire fluorescentiesensoren het gebruik van vezelfotometrie in de moleculaire biologie gestimuleerd, waardoor in vivo opname mogelijk is1. Deze vooruitgang maakt het mogelijk om veranderingen in neuronale activiteit in de hersenen in realtime te volgen. De integratie van optogenetica maakt neuronale manipulatie mogelijk, wat het voordeel biedt dat optogenetica en optische vezelopname onmiddellijk worden uitgevoerd door simpelweg de optische vezel in te brengen. In combinatie met registratie van viscerale functies biedt deze methode een goede temporele resolutie en targeting op kernniveau om te observeren hoe acupunctuur viscerale functies moduleert via modificaties van neuronale activiteit.

Talrijke studies hebben de duidelijke regulerende invloed van acupunctuur op de gastro-intestinale functie geïllustreerd 2,3,4, hoewel de precieze centrale mechanismen ongrijpbaar blijven. Veel oude Chinese medische boeken, zoals HuangDiNeiJing, vermeldden ook dat de ST36 (aan de laterale zijde achter het kniegewricht, ongeveer 2 mm inferieur aan de caput-fibula5) vaak wordt gebruikt om gastro-intestinale aandoeningen te behandelen. Recente studies hebben aangetoond dat kernen die betrokken zijn bij maagfysiologische processen (bijv. voedingsgedrag6, stoppen met eten7, onderdrukking van eetlust8) en pathologische processen (bijv. maagpijn9, maagdisfunctie10) de parasubthalamische kern (PSTn), dorsale raphe nucleus (DRN), laterale parabrachiale kern (LPB), kern van het solitaire kanaal (NTS) en dorsale motorische kern van de vagus (DMV) omvatten. Studies hebben aangetoond dat elektroacupunctuur op ST36 het aantal c-Fos+-cellen in DMV kan verhogen, waardoor de c-Fos+-expressie in de caudale subkern van NTS11 wordt vergroot. Bovendien is gedocumenteerd dat de paracentrische kern (PBN) betrokken is bij de samenstelling van het paracentrische nucleaire complex, kan doordringen tot aan de medulla oblongata NTS, die een belangrijke rol speelt bij de integratie van viscerale sensorische informatie, zoals gastro-intestinale signalen12,13. De bovenstaande informatie suggereert dat acupunctuur mogelijk de maagmotiliteit zou kunnen moduleren, mogelijk verband kan houden met het neurale circuit PBN Glu-NTSGlu-DMV ChAT. Glutamaterge neuronen zijn voornamelijk betrokken bij de LPB en NTS14, terwijl cholinerge neuronen voornamelijk betrokken zijn bij de DMV tijdens maagfysiologische en pathologische processen15. Het onderzoeken van de regulerende effecten van acupunctuur op neurale circuits en viscerale functies kan een beter begrip van acupunctuurmechanismen opleveren en theoretische ondersteuning bieden voor klinische acupunctuurinterventies bij viscerale ziekten.

Vanwege technische beperkingen is er echter beperkt onderzoek gedaan naar de neurale circuitmechanismen van elektroacupunctuur bij het moduleren van viscerale functies. Daarom presenteert de huidige studie vereenvoudigde richtlijnen om het gedetailleerde proces van virusinjectie te introduceren. Met name de methodologie die in dit artikel wordt uiteengezet, kan worden gebruikt om de circuitmechanismen op te helderen die betrokken zijn bij de regulatie van acupunctuur van diverse viscerale functies.

Daarom heeft deze studie tot doel de regulerende effecten van acupunctuur op de maagmotiliteit te onderzoeken, die mogelijk verband houden met het PBN Glu-NTSGlu-DMV ChAT neurale circuit door optogenetica te combineren met vezelfotometrie voor opname van calciumbeeldvorming. Het doel is om een protocol op te stellen voor calciumbeeldvorming en optogenetische synchronisatie, waarbij een nieuw onderzoekskader wordt geïntroduceerd voor het onderzoeken van viscerale functie en neurale circuits.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle procedures volgden de richtlijnen voor de verzorging en het gebruik van proefdieren, opgesteld door de National Institutes of Health en kregen goedkeuring van de Animal Care and Use Ethics Committee van het Institute of Acupuncture & Moxibustion, Chinese Academy of Medical Sciences. Volwassen mannelijke C57-muizen met een gewicht van 25 g werden gebruikt voor virale injectie en implantatie van optische vezels. Het protocol dierproeven hield zich strikt aan de eisen van de nationale norm "Guidelines for Ethical Review of Welfare of Laboratory Animals" (GB/T 35892-2018) en werd goedgekeurd door de Ethische Commissie van de instelling.

OPMERKING: Houd de omgeving schoon tijdens het proces van virusinjectie en implantatie van optische vezels. Draag maskers tijdens de hele operatie. Na de virale periode met hoge expressie (21-28 dagen) werden elektroacupunctuur bij ST36 en optogenetische manipulaties uitgevoerd om de maagmotiliteit vast te leggen. Dieren werden gehuisvest in de dierenfaciliteit van het Institute of Acupuncture and Moxibustion, Chinese Academy of Medical Sciences, onder gecontroleerde omstandigheden (temperatuur: 22-24 °C, vochtigheid: 50%-60%, 12 uur licht-donkercyclus), met vrije toegang tot voedsel en water. Specifieke informatie over de gebruikte reagentia en apparatuur is te vinden in de Materiaaltabel.

1. Preoperatieve voorbereiding

  1. Desinfecteer het chirurgische instrument dat een sterilisatie op hoge temperatuur heeft ondergaan en reinig het operatiegebied met 70% ethanol.
  2. Anesthesie: Dien een intraperitoneale injectie van 1,25% tribroomethanol (0,2 ml/10 g gewicht) toe aan de muis. Evalueer de afwezigheid van de teenknijpreflex om de diepte van de anesthesie te meten.
  3. Scheer het haar van het hoofd en plaats de muizen in een stereotactisch frame dat is uitgerust met oor- en tandstangen. Breng erytromycinezalf aan op de ogen van de muizen om schade door chirurgisch licht te voorkomen.
  4. Week de optische vezelhuls (adereindhuls: 1,25 mm witte huls, vezeltype: 200/0,37, vezellengte: 5,5 mm, adereindhulsnaaldmodel: V8475) gedurende 30 minuten in 75% ethanol en spoel vervolgens de 70% ethanol af met zoutoplossing.
  5. Laad de micro-injector (1 μL) met paraffine (800-900 nL). Smelt de glazen buis en trek deze in twee delen. Slijp een deel aan de punt met behulp van een naaldslijpmachine om als injectienaald te dienen. Om de gasdichtheid van de microinjector te garanderen, vult u de buis met paraffine en sluit u deze met een lijmpistool aan op de microinjector op de punt.

2. Virale injectie operatie

  1. Snijd de hoofdhuid langs de middellijn van de ogen naar de achterkant van de nek om de schedel te onthullen. Snijd vervolgens de nekspieren weg om het achterhoofdsbeen bloot te leggen. Veeg het botoppervlak af met H2O2 gedurende 30 s en reinig het vervolgens met een droog wattenstaafje om onderhuidse fascia en bindweefsel te verwijderen (Figuur 1A).
    OPMERKING: Deze stap is bedoeld om het bedekken van tandcement op het achterhoofdsbeen te vergemakkelijken, waardoor de optische vezel stabieler wordt gefixeerd.
  2. Zet de schedel waterpas.
    1. Nivellering op de X-as: Markeer twee punten die zich op 3,5 mm afstand van het Bregema-punt in de coronale hechting bevinden en verbind de twee punten om een lijn te vormen. Het middelpunt van deze lijn is de nul. De absolute waarde van het verschil in de Z-as op het botoppervlak op 3,5 mm afstand van de oorsprong moet ≤ 0,03 mm zijn.
    2. Nivellering van de Y-as: Markeer twee punten die 3,5 mm verwijderd zijn van het Lambda-punt in de lambdoïde hechtdraad, stel het middelpunt van de twee punten in en verbind dit middelpunt met het Lambda-punt om een lijn te vormen. Het middelpunt van deze lijn is nog een nul. De absolute waarde van het verschil tussen de Z-as en de nul waarop het botoppervlak tijdens de X-as is afgesteld, moet ≤ 0,03 mm zijn.
  3. Markeer de stereotactische coördinaten van de virusinjectie met een markeerstift. Voor PBN: -1,1 mm anterieur-posterieur (AP, Y-as), -5,45 mm mediaal-lateraal (ML, X-as), -3,3 mm dorsaal-ventrale (DV, Z-as) (met bregma als nulpunt); Voor NTS: -0,35 mm AP, 0,2 mm ML, -3,3 mm DV (met het hoogste punt van het achterhoofdsbeen als nulpunt); Voor DMV: -0,35 mm AP, 0,0 mm (het hoogste punt van het achterhoofdsbeen), -3,5 mm DV (met het hoogste punt van het achterhoofdsbeen als nulpunt) (Figuur 1B). Gebruik een snelle microboor (boordiameter van 0,8 mm) om de schedel binnen te dringen op de aangewezen plaatsen om het hersenoppervlak bloot te leggen. Gebruik vervolgens een fijne tang om de dura mater voorzichtig te doorboren en te verwijderen, breng een zoutoplossing aan op de geboorde opening om vocht op het hersenoppervlak te houden.
  4. Breng Single Bond Universal lijm aan op het schedeloppervlak (met uitzondering van het geboorde gebied) en stel het gedurende 30 s bloot aan licht om uit te harden. Het is belangrijk om een droog schedeloppervlak te behouden voordat u de universele lijm met enkelvoudige binding aanbrengt om een sterke hechting te garanderen. Bovendien moet de lijm tijdens het aanbrengen op de spieren worden vermeden.
  5. Bevestig de microinjector op de mechanische arm van een stereotactisch apparaat. Vul met 250 nL virus (rAAV-CaMKIIα-CRE-WPRE-hGH polyA). Bij contact met de naaldpunt met het hersenoppervlak, stelt u de diepte (Z) in op 0. Laat de naald zakken naar de doelplaats in de parabrachiale kern (PBN) en injecteer het virus in het PBN-gebied met een snelheid van 35 nL/min. Houd de naald na injectie 10 minuten op zijn plaats en trek deze vervolgens terug met een snelheid van 6 mm/min. Dompel de naald vervolgens onder in een Eppendorf-buis met zoutoplossing voor reiniging (Figuur 1C,D).
    OPMERKING: De injectiedoses van alle volgende virussen zijn 250 nL; DMV is 100 nL16,17.
  6. Gebruik hetzelfde protocol om rAAV-CaMKIIα-DIO-ChrimsonR-WPRE's in de nucleus tractus solitarius (NTS) en rAAV-ChAT-GCamp6s-WPRE-hGH-polyA in de dorsale motorische kern van de vagus (DMV) te injecteren (Figuur 1D). Alle virustiters zijn ≥ 1 × 1012 VG/ml.

3. Implantaatchirurgie met optische vezels

  1. Zet de glasvezelhuls vast met de optrodehouder en bevestig deze aan de mechanische arm van het stereotactische apparaat. Stel de implantatiecoördinaten in die overeenkomen met een positie ongeveer 100 μm boven de DMV-injectieplaats van het virus (Figuur 1E, F).
  2. Meng 1-3 g tandheelkundig cement met 1 ml geharde hars op kamertemperatuur tot een geheel. Dien het mengsel onmiddellijk toe rond de optische vezelhuls en op het schedeloppervlak, waarbij 5 mm van het bovenste gedeelte van de optische vezeladereindhuls bloot blijft. Zodra het cement is gestold, draait u de schroef van de houder los, tilt u deze op en verwijdert u de houder (Afbeelding 1G).
  3. Gebruik resorbeerbare chirurgische hechtingen (6-0) om de achterste achterhoofdshuid van muizen te hechten. Haal de muizen uit het stereotactische kader en plaats ze in een warme omgeving om te herstellen van de anesthesie. Zodra de dieren onbeperkte bewegingsvrijheid vertoonden, werden ze verplaatst naar een schone en ruime kooi voor accommodatie, met 4-5 muizen die samen werden gehuisvest en vrije toegang kregen tot voedsel en water.
    OPMERKING: Tijdens het experiment werd waargenomen dat een grotere kooi gunstig is voor de normale beweging van muizen en cruciaal is voor het behoud van hun gewicht. De grotere ruimte verkleint ook de kans op onbedoeld contact met de geïmplanteerde vezel, waardoor mogelijke schade tot een minimum wordt beperkt. Muizen met een gewicht van 25 g of meer vertoonden significante veranderingen in de intragastrische druk bij acupunctuur.

4. Operatie voor het inbrengen van ballonnen

  1. Op het hoogtepunt van de virale expressie (21-28 dagen), vast je de muizen 4-5 uur. Verdoof de muizen vervolgens via intraperitoneale injectie van 1,25% tribroomethanol (0,1 ml/10 g gewicht). Dien 15 minuten later een intraperitoneale injectie van 10% ethylcarbamaatoplossing toe (0,15 ml/10 g gewicht). Evalueer de diepte van de anesthesie door de afwezigheid van een teenknijpreflex te bevestigen.
  2. Scheer het haar van de buik- en ST36-regio. Zet het verwarmingskussen aan en stel het in op een temperatuur van 37 °C, waarbij het dier gedurende de hele operatie op het verwarmingskussen blijft om een constante lichaamstemperatuur te garanderen.
  3. Sluit de latexballon aan op de spuit en spuit er lucht in om te controleren of de latexballon (BS4 73-2787) geen luchtlekkage heeft.
  4. Stel de maag en een deel van de twaalfvingerige darm bloot onder het xiphoid-proces. Maak een kleine incisie in de twaalfvingerige darm van ongeveer 0,3 cm lang, 0,5-1 cm distaal van de pylorus.
  5. Steek de ballon in de maag langs de darmrichting door de incisie in de twaalfvingerige darm, met de knoop bij de pylorus.
  6. Verwijder de naald van de spuit, vul 5 ml zuiver water, laat de lucht ontsnappen en verbind het andere uiteinde van de ballon met de spuit. Trek de luer-vergrendeling van de spuit omhoog om het gas uit de ballon te evacueren en laat vervolgens de luer-vergrendeling zakken om het zuivere water in de ballon te injecteren. Sluit het geheel aan op een driewegkraan en een drukopnemer.

5. Synchrone registratie van intragastrische druk en calciumbeeldvorming

  1. Schakel het Neurolog Digitimer-model, CED Micro1401-4, Inper Studio, meerkanaals glasvezelopnamesysteem, Inper Signal-software en Spike 2-software in. Stel de Inper-software in, calciumsignaalregistratie wordt geactiveerd door Spike2-software en optogenetische stimulator, en zorg ervoor dat laserstimulatie en calciumsignaalacquisitie door de Inper-software overeenkomen met de intragastrische drukregistratie door Spike2-software.
  2. Open alle driewegkranen die op de ballon zijn aangesloten, draai aan de ZERO-knop op het Neurolog digitimer Model en observeer op de Spike 2-software of de basislijn is aangepast naar punt 0. Nadat de druk in de ballon is geëgaliseerd met de atmosferische druk, injecteert u zuiver water in de ballon totdat de intragastrische druk 15-35 cm H2O wordt weergegeven. Zodra zowel de intragastrische druk als de calciumsignalen een stabiele toestand bereiken, registreert u een basislijn van 60 s van intragastrische druk en calciumsignalen in de DMV (Figuur 2A).

6. Elektro-acupunctuur bij ST36 en laserstimulatie

  1. Steek een acupunctuurnaald (0,25 mm × 25 mm) in het linker ST36-acupunt en sluit deze aan op een elektroacupunctuurapparaat (10 Hz, 1 mA). Dien elektro-acupunctuur toe gedurende 60 s terwijl u veranderingen in de intragastrische druk en calciumsignalen registreert.
  2. Na stabilisatie van de baseline intragastrische druk en calciumsignalen, toedienen optogenetische stimulatie (635 nm, 5 ms, 5 Hz, 30 mW) door de vezel gedurende 60 s, waarbij veranderingen in intragastrische druk en calciumsignalen worden gecontroleerd.
  3. Zodra de basislijn van intragastrische druk en calciumsignalen weer stabiliseert, combineert u elektroacupunctuur bij ST36 (10 Hz, 1 mA) met optogenetische stimulatie (635 nm, 5 ms, 5 Hz) gedurende 60 s, en registreert u veranderingen in intragastrische druk en calciumsignalen.

7. Histologisch onderzoek van virale injectie en vezelplaatsing

  1. Na voltooiing van de bovengenoemde protocollen, perfuseer de muizen met zoutoplossing en fixeer met 4% paraformaldehyde via het hart onmiddellijk. Oogst de hersenen van de muizen. Voer gradiëntdehydratatie uit met 20% en 30% sucrose-oplossingen en snijd vervolgens na inbedding met snelvriesinbeddingsmiddel. Vergelijk de hersenplakjes met de hersenkaarten van muizen om te zien of de posities van virusinjectie en glasvezelimplantatie nauwkeurig waren. De nauwkeurige positionering van virale injecties en vezelimplantaten bevestigde de validiteit van de intragastrische druk- en calciumsignaalgegevens (Figuur 1H,I).

8. Gegevensanalyse

  1. Analyseer calciumsignaalgegevens met behulp van Inper Data Analysis-software en maagmotiliteitsgegevens van Spike2-software. Vergelijk de verschillen tussen calciumsignalen of amplitudes van de maagmotiliteit op het moment van stimulatie (60 s) en die vóór stimulatie (60 s) om de regulerende effecten van verschillende stimuli op de maagmotiliteit en calciumsignalen te observeren. Alle gegevens in figuur 2 zijn de originele gegevensgrafieken.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Virussen werden geïnjecteerd in de parabrachiale kern (PBN), nucleus tractus solitarius (NTS) en dorsale motorische kern van de vagus (DMV) van muizen, met een vezel geïmplanteerd in DMV (Figuur 1A-G). Tijdens de piekperiode van virale expressie werden variaties in intragastrische druk en calciumsignalen binnen de DMV geregistreerd na elektroacupunctuur op ST36 en optogenetische stimulatie. Het doel van deze studie is het observeren van de r...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Het centrale wetenschappelijke onderzoek van acupunctuur heeft betrekking op de regulatie van doelorganen door acupuntstimulatie van autonome zenuwen. De bevindingen van Q. Ma suggereerden dat de invloed van acupunctuur op de modulatie van de orgaanfunctie op afstand voortkomt uit somatische autonome reflexen die sympathische en/of parasympathische routes activeren, vooral die welke verband houden met gastro-intestinale aandoeningen en systemische ontsteking18. De...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren geen belangenconflicten.

Dankbetuigingen

Deze studie werd gefinancierd door de National Natural Science Foundation of China (nr. 82174518, 82474661), de Fundamental Research Funds for the Central Public Welfare Research Institutes (ZZ-2023008) en het Scientific and Technological Innovation Project van de China Academy of Chinese Medical Sciences (CI2021A03402).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Virus
rAAV-CaMKIIα-CRE-WPRE-hGH polyA (AAV2/9)BrainVTACat#PT-0020
rAAV-CaMKIIα-DIO-ChrimsonR-WPREs (AAV2/9)BrainVTACat#PT-12637
rAAV-ChAT-GCamp6s-WPRE-hGH-polyA (AAV2/9)BrainVTACat#PT-10973
Andere
1 μL microinjectorHamilton80135
3M EPSP Single Bond Universal AdhesiveDental World Official41269
AcupunctuurnaaldZhongYanTaiHe0.25/13s
CED Micro1401-4CED(Engeland)1401-4
Tandcement/Hars dat bij kamertemperatuur hardtYAMAHACHI DENTALN/A
Fijne pincettenRWDF11028-13
GlasbuisWorld Precision Instruments504949
HANS-200AHANS InstituteHANS-200
Inper Signal (software)InperN/A
Inper Studio(Venus)InperB1502
LatexballonHarward ApparatusBS4 73-2787
Multikanaals optisch vezel opname systeem(Vista Pro)InperR5268
Neurolog digitimer Model DigitimerNL900D
Optische vezel ferrule InperV8475
Spike 2(software)CED(Engeland)N/A
Stereotaxische instrumenten (met coördinaten calculator)David Kopf InstrumentsKOPF 942
TribromoethanolSigmaT48402
tribromoethanolSigma T48402

Referenties

  1. Li, S., et al. Perspective of calcium imaging technology applied to acupuncture research. Chin J Integr Med. 30 (1), 3-9 (2024).
  2. Xu, X., et al. Mechanism of electro-acupuncture in alleviating intestinal injury in septic mice via polyamine-related M2-macrophage polarization. Front Immunol. 15, e1373876(2024).
  3. Yaklai, K., Pattanakuhar, S., Chattipakorn, N., Chattipakorn, S. C. The role of acupuncture on the gut-brain-microbiota axis in irritable bowel syndrome. Am J Chin Med. 49 (2), 285-314 (2021).
  4. Wang, X. Y., Wang, H., Guan, Y. Y., Cai, R. L., Shen, G. M. Acupuncture for functional gastrointestinal disorders: a systematic review and meta-analysis. J Gastroenterol Hepatol. 36 (11), 3015-3026 (2021).
  5. China Association of Acupuncture and Moxibustion. Nomenclature and location of acupuncture points for laboratory animals Part 3: Mouse. World J Acupunct Moxibustion. 35 (2), 160-166 (2025).
  6. Chen, J., et al. A vagal-NTS neural pathway that stimulates feeding. Curr Biol. 30 (20), 3986-3998 (2020).
  7. Campos, C. A., Bowen, A. J., Schwartz, M. W., Palmiter, R. D. Parabrachial CGRP neurons control meal termination. Cell Metab. 23 (5), 811-820 (2016).
  8. Zhang, T., Perkins, M. H., Chang, H., Han, W., de Araujo, I. E. An inter-organ neural circuit for appetite suppression. Cell. 185 (14), 2478-2494 (2022).
  9. Zhang, F. C., et al. A vagus nerve dominant tetra-synaptic ascending pathway for gastric pain processing. Nat Commun. 15 (1), 9824(2024).
  10. Dong, W. Y., et al. Brain regulation of gastric dysfunction induced by stress. Nat Metab. 5 (9), 1494-1505 (2023).
  11. Iwa, M., Tateiwa, M., Sakita, M., Fujimiya, M., Takahashi, T. Anatomical evidence of regional specific effects of acupuncture on gastric motor function in rats. Auton Neurosci. 137 (1-2), 67-76 (2007).
  12. Browning, K. N., Travagli, R. A. Central nervous system control of gastrointestinal motility and secretion and modulation of gastrointestinal functions. Compr Physiol. 4 (4), 1339-1368 (2011).
  13. Sun, L., et al. Parabrachial nucleus circuit governs neuropathic pain-like behavior. Nat Commun. 11 (1), 21(2020).
  14. Simpson, E., et al. Lights, fiber, action! A primer on in vivo fiber photometry. Neuron. 112 (5), 718-739 (2024).
  15. Tao, J., et al. Highly selective brain-to-gut communication via genetically defined vagus neurons. Neuron. 109 (13), 2106-2115 (2021).
  16. Yao, L., Ye, Q., Liu, Y., et al. Electroacupuncture improves swallowing function in a post-stroke dysphagia mouse model by activating the motor cortex inputs to the nucleus tractus solitarii through the parabrachial nuclei. Nat Commun. 14 (1), 810(2023).
  17. Lyu, Q., Xue, W., Liu, R., et al. A brain-to-gut signal controls intestinal fat absorption. Nature. 634 (8035), 936-943 (2024).
  18. Ma, Q. Somatotopic organization of autonomic reflexes by acupuncture. Curr Opin Neurobiol. 76, e102602(2022).
  19. Liu, S., et al. A neuroanatomical basis for electroacupuncture to drive the vagal-adrenal axis. Nature. 598 (7882), 641-645 (2021).
  20. Liu, S., et al. Somatotopic organization and intensity dependence in driving distinct NPY-expressing sympathetic pathways by electroacupuncture. Neuron. 108 (3), 436-450 (2020).
  21. Luo, L. Architectures of neuronal circuits. Science. 373 (6559), eabg7285(2021).
  22. Yuan, Z., et al. A corticoamygdalar pathway controls reward devaluation and depression using dynamic inhibition code. Neuron. 111 (23), 3837-3853 (2023).
  23. Feng, J., et al. Monitoring norepinephrine release in vivo using next-generation GRABNE sensors. Neuron. 112 (12), 1930-1942 (2024).
  24. Smith, J., et al. Regulation of stress-induced sleep fragmentation by preoptic glutamatergic neurons. Curr Biol. 34 (1), 12-23 (2024).
  25. Li, Y., Liu, Z., Guo, Q., Luo, M. Long-term fiber photometry for neuroscience studies. Neurosci Bull. 35 (3), 425-433 (2019).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Optogenetische stimulatieregistratie van calciumsignalenregulatie van neurale circuitsmaagmotiliteitviscerale functiegenetisch gecodeerde indicatorenreal time registratiecorrelatie tussen brein en gedrag

Gerelateerde artikelen