Dit protocol presenteert een methode voor het evalueren van reactieve zuurstofspecies (ROS)-gemedieerde apoptose geïnduceerd door natuurlijke verbindingen in niet-kleincellige longkanker (NSCLC)-cellen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Onderzoeksartikel
* These authors contributed equally
Dit protocol presenteert een methode voor het evalueren van reactieve zuurstofspecies (ROS)-gemedieerde apoptose geïnduceerd door natuurlijke verbindingen in niet-kleincellige longkanker (NSCLC)-cellen.
Deze studie onderzoekt het antikankerpotentieel van Pileostegia tomentella, met een bijzondere focus op het vermogen om klassieke apoptose te induceren in H1299 niet-kleincellige longkanker (NSCLC)-cellen via reactieve zuurstofspecies (ROS)-gemedieerde routes. Met behulp van een bioactiviteit-geleide isolatiebenadering werden twee actieve verbindingen, umbelliferone (UMB) en epi-Vogeloside, geïdentificeerd als de belangrijkste cytotoxische bestanddelen. Beide verbindingen vertoonden significante remmende effecten op de levensvatbaarheid van cellen en veroorzaakten effectief apoptotische celdood in H1299-cellen. Mechanistisch onderzoek toonde aan dat behandeling met UMB en epi-Vogeloside leidde tot een duidelijke toename van intracellulaire ROS-niveaus, wat oxidatieve stress als een belangrijke mediator impliceert. Western blot-analyse onthulde verhoogde niveaus van gespleten caspase-3 en verminderde expressie van het anti-apoptotische eiwit Bcl-2, wat wijst op activering van de intrinsieke mitochondriale apoptotische route. Bovendien toonde transcriptomische profilering wijdverspreide veranderingen in genexpressie, wat de verstoring van de cellulaire homeostase verder ondersteunde. Deze resultaten suggereren dat Pileostegia tomentella en zijn actieve bestanddelen veelbelovend zijn als potentiële therapeutische middelen voor longkanker.
Kanker vormt een formidabele wereldwijde uitdaging voor de volksgezondheid, gekenmerkt door een aanzienlijk jaarlijks sterftecijfer. Niet-kleincellige longkanker (NSCLC) is wereldwijd de belangrijkste oorzaak van kankergerelateerde sterfgevallen en vertegenwoordigt ongeveer 85% van de incidentie van longkanker1. Carcinogenese, een inherent complex samenspel van moleculaire en cellulaire processen, wordt kritisch beïnvloed door verstoringen in de homeostase van reactieve zuurstofspecies (ROS). ROS, waaronder onstabiele oxidanten zoals superoxide-anionen, hydroxylradicalen en waterstofperoxide, zijn bijproducten van het normale cellulaire metabolisme en voeren essentiële functies uit bij signalering, proliferatie, differentiatie en apoptose2. Een onbalans in ROS-concentraties kan oxidatieve stress versnellen, waardoor geprogrammeerde celdoodroutes mogelijk worden geactiveerd, met name autofagie en apoptose, waardoor de proliferatie en overleving van kankercellen worden belemmerd3. Bijgevolg vertonen ROS een dubbele rol in de oncologie, waarbij ze zowel als promotors als onderdrukkers van tumorprogressie fungeren. In het afgelopen decennium zijn de therapeutische strategieën voor NSCLC aanzienlijk vooruitgegaan, met de ontwikkeling van nieuwe antikankermiddelen die zijn ontworpen om deze dichotome aard van ROS te benutten, wat een bijzonder levendig onderzoeksgebied vertegenwoordigt4.
Van talrijke chemisch gesynthetiseerde middelen tegen kanker, zoals adriamycine (doxorubicine), cisplatine en cyclofosfamide, is bekend dat ze apoptose in kankercellen induceren door de productie van ROS te bevorderen5. Ondanks de vooruitgang in gerichte therapieën en immunotherapeutische antilichamen, blijft chemotherapie op basis van platina de hoeksteen van de behandeling van NSCLC-patiënten. Desalniettemin maakt het ontstaan van resistentie en nadelige bijwerkingen van chemotherapie de ontwikkeling van nieuwe anti-NSCLC-geneesmiddelen noodzakelijk. Bijgevolg wordt het onderzoeken van natuurlijke bronnen voor antikankerverbindingen steeds meer erkend vanwege het belang en het potentieel ervan. Recent onderzoek heeft aangetoond dat bepaalde plantenextracten en hun actieve componenten krachtige eigenschappen tegen kanker vertonen, gekenmerkt door lage toxiciteit, hoge specificiteit en het vermogen om zich op meerdere routes te richten6. Met name sommige van deze natuurlijke verbindingen kunnen ROS-niveaus en signalering7 moduleren, waardoor autofagie of apoptose in kankercellen wordt geïnduceerd en therapeutische effecten worden uitgeoefend 8,9.
Pileostegia tomentella Hand. Zucc, een overblijvend kruid uit het geslacht Clematis binnen de Buttercupaceae-familie, komt voornamelijk voor in regio's als Japan, Noord-Korea en China. De verschillende componenten van de plant, waaronder wortels, stengels, bladeren en bloemen, staan bekend om hun geneeskrachtige eigenschappen en bieden voordelen zoals warmteafvoer, ontgifting, vermindering van zwelling, pijnverlichting en antibacteriële en ontstekingsremmende effecten. Recent onderzoek heeft licht geworpen op de kankerbestrijdende activiteiten van Hoshi Hairy Vine-extracten of actieve ingrediënten, waarbij tumoronderdrukkende effecten worden aangetoond op een reeks kankers, waaronder glioom-, borst-, darm- en baarmoederhalskanker10. De specifieke antikankermechanismen van Pileostegia tomentella, met name de potentiële rol ervan bij het moduleren van ROS om autofagie of apoptose in kankercellen te induceren, blijven echter grotendeels onontgonnen.
Ondanks de toenemende belangstelling voor natuurlijke verbindingen voor kankertherapie, blijven de pro-apoptotische mechanismen van de belangrijkste bestanddelen van Pileostegia tomentella bij longkanker onontgonnen. Deze studie is een pionier op het gebied van de identificatie en mechanistische dissectie van schermbloem en epi-Vogeloside als selectieve ROS-afhankelijke apoptose-inductoren bij NSCLC.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De reagentia en apparatuur die in dit onderzoek zijn gebruikt, staan vermeld in de materiaaltabel.
1. Chemische samenstelling van Pileostegia tomentella en voorspelling van NSCLC-doelen
De chemische bestanddelen van Pileostegia tomentella werden geanalyseerd met behulp van hoogwaardige vloeistofchromatografie in combinatie met lineaire ionenval-Orbitrap-massaspectrometrie (HPLC-LTQ/MS). De extracten werden opgelost in geschikte oplosmiddelen en vóór injectie gefiltreerd. Chromatografische scheiding werd bereikt met behulp van een kolom met omgekeerde fase onder een gradiënt-elutieprogramma dat was afgestemd op de samengestelde klassen. Massaspectrometriegegevens werden verzameld in positieve elektrospray-ionisatiemodus over een massabereik van 100-1500 m/z. Moleculaire structuren van geïdentificeerde verbindingen werden getekend met behulp van generieke chemische tekensoftware en opgeslagen in SDF-formaat. Deze structurele bestanden werden ingediend bij een online tool voor het voorspellen van doelen om potentiële biologische doelen te identificeren, waarbij de top 20 doelen werden geselecteerd voor verdere validatie. NSCLC-geassocieerde doelen werden opgehaald uit een openbaar toegankelijke genendatabase. De overlappende doelen uit beide datasets werden geïdentificeerd als potentiële therapeutische doelen van Pileostegia tomentella.
2. Component-target netwerkconstructie
Eiwit-eiwitinteractiegegevens voor voorspelde doelen werden verkregen uit een open-access eiwitinteractiedatabase. Interactiegegevens werden geïmporteerd in algemene netwerkvisualisatiesoftware om het compound-target-interactienetwerk te bouwen. Topologische eigenschappen van het netwerk, waaronder mate van centraliteit, tussenheid en nabijheid, werden geanalyseerd met behulp van ingebouwde analytische hulpmiddelen om belangrijke regulerende knooppunten te identificeren.
3. Analyse van de verrijking van de KEGG-route
Functionele verrijking van voorspelde doeleiwitten werd uitgevoerd met behulp van KEGG-routeanalyse via openbaar beschikbare verrijkingstools en statistische software. Routes met aangepaste p-waarden van minder dan 0,05 werden als significant beschouwd. Significante routes werden geïntegreerd met compound-target-gegevens om een "compound-target-pathway"-interactienetwerk op te bouwen met behulp van generieke netwerkvisualisatiesoftware. Analyse van de netwerktopologie bracht de belangrijkste biologische regulerende hubs aan het licht, die de multi-component en multi-target mechanismen van Pileostegia tomentella illustreren.
4. Extractie van de bestanddelen van Pileostegia tomentella
Gedroogde wijnstokstengels van Corydalis spinosa werden vermalen tot een fijn poeder. Het poedervormige materiaal werd geëxtraheerd met 70% ethanol onder ultrasone behandeling bij kamertemperatuur gedurende een bepaalde periode. Het ruwe extract werd gefilterd en geconcentreerd onder verminderde druk. Vloeistof-vloeistofverdeling werd uitgevoerd met behulp van oplosmiddelen met toenemende polariteit, waaronder petroleumether, ethylacetaat en n-butanol. De ethylacetaatfractie, die in voorlopige tests de hoogste biologische activiteit vertoonde, werd verzameld, geconcentreerd, gevriesdroogd en opgeslagen bij -20 °C tot verder gebruik.
5. Cellijn en behandelingsvoorwaarden
De humane longkankercellijn H1299 werd gekweekt in RPMI 1640-medium aangevuld met 10% foetaal runderserum bij 37 °C in een bevochtigde atmosfeer met 5% CO2 . Cellen werden gezaaid met een geschikte dichtheid en lieten ze een nacht vóór de behandeling hechten. De cellen werden blootgesteld aan verschillende concentraties (500 μg/ml, 750 μg/ml en 1.000 μg/ml) van twee teststoffen, UMB en epi-Vogeloside, zoals vermeld in tabel 1. Na 24 uur incubatie onder standaard kweekomstandigheden werden de cellen geoogst voor daaropvolgende analyses om de biologische effecten van de verbindingen te beoordelen.
6. MTT-test voor de levensvatbaarheid van cellen
De cytotoxische effecten van de verbindingen werden geëvalueerd met behulp van een colorimetrische MTT-test. H1299-cellen werden met een bepaalde dichtheid in platen met 96 putjes gezaaid en 's nachts laten hechten. De cellen werden vervolgens gedurende 72 uur onder standaard kweekomstandigheden met de teststoffen behandeld. Na de behandeling werd aan elk putje een oplossing van MTT toegevoegd en geïncubeerd om levensvatbare cellen in staat te stellen MTT om te zetten in onoplosbare paarse formazankristallen. Na incubatie werd het medium verwijderd en werden de formazankristallen opgelost in dimethylsulfoxide (DMSO). De extinctie werd gemeten bij 570 nm met behulp van een microplaatlezer. De extinctiewaarden komen overeen met de levensvatbaarheid van de cellen en bieden een kwantitatieve beoordeling van de cytotoxiciteit van de verbinding.
7. Beoordeling van de integriteit van het membraan via LDH-afgifte
De integriteit van het celmembraan werd beoordeeld door de afgifte van lactaatdehydrogenase (LDH) te meten als indicator van cytotoxiciteit. H1299-cellen werden gedurende 24 uur, 48 uur of 72 uur met de teststoffen behandeld. Op elk tijdstip werden kweeksupernatanten verzameld en onderworpen aan een LDH-activiteitstest volgens het protocol van de fabrikant. Aangezien LDH alleen vrijkomt uit cellen met beschadigde membranen, weerspiegelen de gemeten absorptiewaarden de mate van membraanschade die in de loop van de tijd door de verbindingen wordt veroorzaakt.
8. Flowcytometrische analyse van apoptose
De inductie van apoptose werd beoordeeld door middel van flowcytometrie met behulp van Annexine V en 7-Aminoactinomycine D (7-AAD) kleuring. Na behandeling met de teststoffen werden H1299-cellen verzameld door centrifugatie, gewassen met koude fosfaatgebufferde zoutoplossing en opnieuw gesuspendeerd in bindingsbuffer. Cellen werden vervolgens geïncubeerd met Annexin V geconjugeerd aan een fluorescerende kleurstof en 7-AAD volgens het kleuringsprotocol. Monsters werden onmiddellijk geanalyseerd door middel van flowcytometrie. Deze methode maakte differentiatie mogelijk tussen levensvatbare cellen (ongekleurd), vroege apoptotische cellen (Annexin V-positief, 7-AAD-negatief) en late apoptotische of necrotische cellen (positief voor beide kleuren).
9. Kwantificering van intracellulaire ROS
Intracellulaire reactieve zuurstofspecies (ROS)-niveaus werden gemeten met behulp van een op fluorescentie gebaseerde test. H1299-cellen werden gezaaid in platen met 12 putjes met een dichtheid van 1 × 105 cellen per putje en gekweekt tot het bereiken van ongeveer 80% samenvloeiing. De cellen werden vervolgens gedurende 72 uur behandeld met de aangewezen verbindingen. Na de behandeling werden de cellen geïncubeerd met 1 μM van de ROS-gevoelige fluorescerende sonde 2',7'-dichloordihydrofluoresceïnediacetaat (DCFH-DA) bij 37 °C gedurende 30 minuten in het donker. Na incubatie werden cellen geoogst en werd de fluorescentie-intensiteit gemeten bij een emissiegolflengte van 525 nm met behulp van een fluorescentiemicroplaatlezer. De fluorescentie-intensiteit komt overeen met de intracellulaire ROS-niveaus.
10. Real-time kwantitatieve PCR (RT-qPCR)
H1299-cellen werden gezaaid in platen met 6 putjes met een dichtheid van 2 × 105 cellen per putje en gekweekt tot het bereiken van ongeveer 80% samenvloeiing. De cellen werden vervolgens gedurende 72 uur behandeld met de aangewezen verbindingen. Totaal RNA werd geëxtraheerd met behulp van een veelgebruikte fenol-chloroformmethode. Complementaire DNA-synthese (cDNA) werd uitgevoerd met behulp van een reverse transcriptiekit volgens de instructies van de fabrikant. Kwantitatieve real-time PCR (qRT-PCR) werd uitgevoerd met behulp van een real-time PCR-systeem met specifieke primers (vermeld in tabel 2). Relatieve genexpressieniveaus werden berekend met behulp van de vergelijkende Ct-methode, waarbij huishoudgenen werden gebruikt als interne controles.
11. Immunoblotting voor eiwitexpressie
Western blot-analyse werd uitgevoerd op H1299-cellen die werden gekweekt en behandeld. Het totale eiwit werd geëxtraheerd met behulp van een geschikte lysisbuffer en lysaten werden geklaard door centrifugatie bij 10.000 × g gedurende 15 minuten bij 4 °C. Eiwitconcentraties werden bepaald met behulp van een spectrofotometrische test. Gelijke hoeveelheden eiwit uit elk monster werden gescheiden door SDS-PAGE en overgebracht naar een polyvinylideendifluoride (PVDF) membraan. De membranen werden gedurende 2 uur bij kamertemperatuur geblokkeerd met 5% magere droge melk en vervolgens een nacht bij 4 °C geïncubeerd met primaire antilichamen specifiek voor Bcl-2, caspase-3, PARP1, BAX, GAPDH en Tubuline bij geoptimaliseerde verdunningen. Na het wassen werden de membranen gedurende 2 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd met geschikte secundaire antilichamen. Eiwitbanden werden gevisualiseerd en in beeld gebracht met behulp van een chemiluminescerend substraat. Densitometrische analyse werd uitgevoerd met beeldanalysesoftware en de bandintensiteiten werden genormaliseerd naar GAPDH en Tubulin als belastingscontroles.
12. Immunofluorescentiemicroscopie van Caspase-3
De expressie en subcellulaire lokalisatie van caspase-3, een belangrijk apoptotisch eiwit, werden geëvalueerd door middel van immunofluorescentiekleuring. Na de behandeling werden H1299-cellen gefixeerd met paraformaldehyde, gepermeabiliseerd met een milde wasmiddeloplossing en geïncubeerd met een primair antilichaam tegen caspase-3. Een fluorescerend gelabeld secundair antilichaam werd vervolgens aangebracht om het primaire antilichaamsignaal te detecteren. Celkernen werden tegengekleurd met behulp van een DNA-bindende fluorescerende kleurstof. De gekleurde cellen werden gevisualiseerd onder een fluorescentiemicroscoop. De intensiteit en cellulaire distributie van het fluorescentiesignaal leverden kwalitatieve en ruimtelijke informatie op over caspase-3-activering, wat de betrokkenheid ervan bij de door de verbinding geïnduceerde apoptotische respons ondersteunde.
13. Transcriptomische sequencing
Om de cellulaire transcriptionele respons op de testverbindingen te profileren, werd totaal RNA geëxtraheerd uit behandelde H1299-cellen en beoordeeld op integriteit met behulp van standaard kwaliteitscontrolemethoden. Sequencingbibliotheken werden voorbereid volgens vastgestelde protocollen en onderworpen aan sequencing met hoge doorvoer met behulp van een sequencingplatform van de volgende generatie. Ruwe sequentiegegevens werden verwerkt via een conventionele bio-informaticapijplijn, die kwaliteitscontrole, filtering, afstemming op het referentiegenoom en kwantificering van de overvloed aan transcripten omvatte. Differentiële genexpressieanalyse werd uitgevoerd om genen te identificeren met statistisch significante veranderingen in expressie na behandeling. Verrijkings- en routeanalyses van de differentieel tot expressie gebrachte genen werden uitgevoerd om de belangrijkste biologische processen die door de verbindingen worden beïnvloed op te helderen, waardoor een uitgebreid transcriptomisch overzicht van hun moleculaire effecten werd verkregen.
14. Statistische analyse
Alle gegevens worden uitgedrukt als het gemiddelde ± standaarddeviatie (SD) van ten minste drie onafhankelijke experimenten. Statistische significantie tussen groepen werd bepaald met behulp van standaardmethoden, waaronder Student's t-test of eenrichtings-ANOVA, indien van toepassing. Verschillen werden als statistisch significant beschouwd voor P-waarden kleiner dan 0,05.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Screening van de belangrijkste componenten van Pileostegia tomentella tegen longkanker
Een overzicht van de experimentele opzet wordt weergegeven in figuur 1. HPLC-LTQ/Orbitrap MS werd gebruikt om zeven belangrijke bioactieve bestanddelen in Pileostegia tomentella te karakteriseren (Tabel 3). Vervolgens werd een in silico doelvoorspelling uitgevoerd op deze verbindingen ...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Niet-kleincellige longkanker (NSCLC) blijft een urgent wereldwijd gezondheidsprobleem, gekenmerkt door zijn agressieve biologie, snelle klinische progressie en hoog metastatisch potentieel, wat vaak resulteert in slechte patiëntresultaten12. Hoewel standaardinterventies, zoals chirurgische resectie, radiotherapie en chemotherapie, therapeutisch voordeel bieden bij ziekte in een vroeg stadium, neemt hun effectiviteit in gevorderde stadia af als gevolg van de opkoms...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.
Dit werk werd ondersteund door het High-level Key Discipline Construction Project of Traditional Chinese Medicine - Ethnic Minority Pharmacy (Zhuang Pharmacy) van de State Administration of Traditional Chinese Medicine (nr. zyyzdxk-2023165); het Talent Cultivatie Programma "Jeugdproject" van Guangxi International Zhuang Medical Hospital (nr. 2022001); het Multidisciplinair Cross-Innovation Team Project in Chinese Geneeskunde van Guangxi (nr. GZKJ2309); het High-Level Talent Cultivation Innovation Team Program van de Guangxi University of Traditional Chinese Medicine (nr. 2022A008); het belangrijkste onderzoeks- en ontwikkelingsproject van de afdeling Wetenschap en Technologie van Guangxi (nr. Gui Ke AB21196057); het driejarige actieplan 2023 voor de bouw van talentteams op hoog niveau van het Guangxi International Zhuang Medical Hospital (nrs. GZCX20231203, GZCX20231202); de derde batch van het "Qihuang Project" High-Level Talent Team Cultivation Program van de Guangxi University of Traditional Chinese Medicine (nr. 202414).
BIJDRAGE VAN DE AUTEUR:
Wen Zhong, Leimin Jiang en Bing Qing hebben in gelijke mate bijgedragen aan dit werk en delen het eerste auteurschap. Ze waren primair verantwoordelijk voor het experimenteel ontwerp, de gegevensverzameling en de interpretatie van de resultaten. Xiumei Ma voerde data-analyse uit en droeg bij aan de voorbereiding van het manuscript. Shi Xianyi, Deng Qingmei en Zhou Guangyun namen deel aan het opzetten van onderzoeken, het verzamelen van gegevens en literatuuronderzoek. Jiangcun Wei, de corresponderende auteur, hield toezicht op de analyse en interpretatie van de gegevens en speelde een leidende rol bij het opstellen en herzien van het manuscript.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Annexin V–PE / 7-AAD Apoptosis Detection Kit | BD Biosciences | 556547 | Flow cytometry-based apoptosis detection |
| Antibody: BAX | Abcam | ab32503 | Western blot for pro-apoptotic protein |
| Antibody: Bcl-2 | Abcam | ab182858 | Western blot/immunofluorescence |
| Antibody: Cleaved Caspase-3 | Abcam | ab32042 | Western blot / IF |
| Antibody: GAPDH | Abcam | ab8245 | Interne controle in Western blot |
| Antibody: PARP1 | Abcam | ab32064 | Western blot voor apoptosemarker |
| Antibody: Tubulin | Abcam | ab78078 | Interne controle in Western blot |
| ChemDraw | PerkinElmer Informatics | CCG821391 | Structuurtekening van kleine moleculen |
| Chemiluminescence Imaging System | Tanon Science & Technology | Tanon 5200 | Voor het visualiseren van eiwitbanden |
| Cytoscape | Cytoscape.org | https://cytoscape.org | Netwerkconstructie en -analyse |
| DAPI Nuclear Stain | Sigma | D9542 | Blauwe nucleaire tegenstengel voor IF |
| DAVID | NIH | https://david.ncifcrf.gov | Functionele annotatie en KEGG-padverrijking |
| DMSO | Sigma | MFCD00002089 | Wordt gebruikt om formazankristallen op te lossen |
| Ethanol (voor extractie) | Sigma | MFCD00003568 | Ultrasoon geassisteerd extractieoplosmiddel |
| Ethyl Acetaat | Sigma | MFCD00009171 | Wordt gebruikt voor bioactieve fractionering |
| FITC-geconjugeerd secundair antilichaam | Abcam | ab6785 | Wordt gebruikt in immunofluorescentie |
| Flow Cytometer | Thermo Scientific | A29001 | Wordt gebruikt voor apoptose- en ROS-detectie |
| Fluorescentiemicroscoop | Olympus Corporation | BX53F | Voor beeldvorming van immunofluorescentie-preparaten |
| Vriesdroger | Labconco Corporation | 7670520 | Voor lyofilisatie en bewaring van monsters |
| GeneCards | Weizmann Institute | https://www.genecards.org | Genendatabase voor ziekterelevantie |
| HPLC-LTQ-Orbitrap Mass Spectrometry | Thermo Scientific | IQLAAEGAAVFACZMAIK | Verbindingsidentificatie door MS |
| Illumina NovaSeq-sequencingplatform | Illumina Inc. | 20012850 | Wordt gebruikt voor RNA-seq |
| LDH-cytotoxiciteitsassaykit | Beyotime | C0016 | Voor het meten van LDH-vrijlating als cytotoxiciteitsindicator |
| Microplate Reader | Thermo Scientific | VL0000D0 | Voor absorptiemetingen in MTT- en LDH-assays |
| MTT-celviabiliteitsassaykit | Beyotime | C0009S | Wordt gebruikt voor MTT-assay om celviabiliteit te beoordelen |
| qPCR-machine | Thermo Scientific | 4485701 | Voor genexpressieanalyse |
| R-software | R Foundation | https://www.r-project.org | Statistische berekening en padplotten |
| Reverse Transcription Kit (RT Kit) | Vazyme | MR201 | Voor cDNA-synthese |
| RNA-seq-bibliotheekvoorbereidingskit | Illumina Inc. | 20020594 | Bibliotheekvoorbereiding voor sequencing |
| SwissTargetPrediction | Swiss Institute | http://www.swisstargetprediction.ch | Hulpmiddel voor compound-doelwitvoorspelling |
| SYBR Green qPCR Mix | Vazyme | Q311-02 | Voor kwantitatieve PCR |
| TRIzol-reagens (RNA-extractie) | Sigma | T3934 | Voor totale RNA-extractie |
| Ultrasoonreiniger | Branson | M1800-CPXH | Voor ultrasoon geassisteerde extractie |
| Western Blot-apparaat | Thermo Scientific | A56727 | Gelelektroforese en eiwitoverdracht |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.