Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Onderzoeksartikel
Deze studie toont aan dat het afkooksel van Yangjing Zhongyu de geassisteerde voortplantingsresultaten verbetert bij vrouwen met een verminderde ovariële reserve door de kwaliteit van eicellen en embryo's te verbeteren. In een rattenmodel van voortijdig ovariumfalen herstelde het afkooksel de hormoonbalans, bevorderde het de ontwikkeling van de follikels en moduleerde het autofagie en lipidenmetabolisme.
Yangjing Zhongyu Decoction (YZD), een traditionele Chinese kruidenformule, is gesuggereerd om de eierstokfunctie en vruchtbaarheidsresultaten te verbeteren, maar gestandaardiseerd klinisch bewijs blijft beperkt. Deze studie evalueerde de effecten van YZD bij vrouwen met een verminderde ovariële reserve (DOR) die IVF/ICSI-ET ondergaan, naast mechanistische validatie in een rattenmodel van voortijdig ovariumfalen (POF). In de klinische studie kregen DOR-patiënten ofwel het standaard GnRH-antagonistprotocol alleen of in combinatie met YZD. De basiskenmerken tussen de groepen waren vergelijkbaar, en de YZD-groep vertoonde een hoger aantal opgehaalde eicellen en embryo's van hoge kwaliteit, evenals verbeterde scores voor het traditionele Chinese geneeskundesyndroom. Tegelijkertijd werd POF geïnduceerd bij ratten en vertoonden dieren die met YZD werden behandeld een verbeterde oestrische cycliciteit, herstel van de serumoestradiolspiegels, vermindering van follikelstimulerend hormoon en gezondere ovariële histologie. Elektronenmicroscopie toonde aan dat YZD overmatige autofagosoomvorming en lipidaccumulatie in eierstokcellen verminderde, wat wijst op regulering van de autofagie-lipidemetabolisme-as. Samen geven deze bevindingen aan dat YZD de ovariële reservefunctie verbetert, de embryonale ontwikkeling verbetert en het zwangerschapspotentieel bij vrouwen met DOR kan vergroten. Dit gestandaardiseerde protocol biedt een reproduceerbaar kader voor de integratie van YZD in cycli van geassisteerde voortplantingstechnologie, ter ondersteuning van het translationele potentieel ervan in de klinische reproductieve geneeskunde.
Verminderde ovariële reserve (DOR) is een klinische aandoening die de reproductieve gezondheid van vrouwen in gevaar brengt en wordt gekenmerkt door een vermindering van het aantal of de kwaliteit van ovariële follikels1. Klinisch wordt dit weerspiegeld door een verlaagd aantal antrale follikels, verlaagde anti-Mülleriaanse hormoonspiegels (AMH) of verhoogde concentraties follikelstimulerend hormoon (FSH)2. DOR is verantwoordelijk voor ongeveer 10% van de gevallen van onvruchtbaarheid en vormt een belangrijke barrière voor een succesvolle conceptie3. In de context van geassisteerde voortplantingstechnologie (ART) wordt de prevalentie van DOR geschat op 19%-26% in de Verenigde Staten4, en het wordt geassocieerd met verminderde zwangerschapspercentages, hogere incidentie van pre-eclampsie en een verhoogd risico op terugkerende miskramen5. Ondanks de beschikbaarheid van meerdere therapeutische benaderingen, blijft het verbeteren van ART-resultaten bij DOR-patiënten een aanzienlijke uitdaging, wat de noodzaak van nieuwe en effectieve interventies onderstreept6.
Yangjing Zhongyu Decoction (YZD), een klassieke formulering van traditionele Chinese geneeskunde (TCM) met meerdere kruiden, wordt al lang toegepast in de reproductieve praktijk7. Er wordt aangenomen dat het de endocriene balans verbetert en de eierstokfunctie ondersteunt, waardoor de resultaten van in-vitrofertilisatie en intracytoplasmatische sperma-injectie-embryotransfer (IVF/ICSI-ET) cycli worden verbeterd8. Voorlopige klinische gegevens suggereren dat YZD de ovariële respons kan verbeteren, maar rigoureuze mechanistische en translationele studies zijn nog steeds beperkt. De precieze biologische routes waarlangs YZD werkt bij DOR-patiënten blijven onduidelijk 9,10. De huidige literatuur geeft aan dat Chinese kruidenverbindingen de micro-omgeving van de eierstokken kunnen beïnvloeden via meerdere mechanismen, zoals het moduleren van AMH-expressie, het remmen van folliculaire atresie-gerelateerde signaalroutes, waaronder PI3K/AKT/mTOR, en het verminderen van oxidatieve stressschade. Deze mechanistische hypothesen zijn echter grotendeels indirect en missen experimentele validatie.
Deze studie pakt deze lacunes aan door klinische evaluatie te integreren met experimentele verificatie. In het bijzonder onderzochten we de effecten van YZD bij vrouwen met DOR die ART ondergingen en onderzochten we de mechanistische onderbouwing ervan met behulp van een tripterygiumglycoside-geïnduceerd DOR-rattenmodel. In de dierproeven volgden we endocriene markers (oestradiol en FSH), het aantal antrale follikels, de vorming van autofagosomen en de accumulatie van lipiden in eierstokweefsel. Door klinische resultaten te combineren met experimentele mechanistische gegevens, biedt dit werk een gestandaardiseerd protocol voor het opnemen van YZD in IVF/ICSI-ET-cycli en biedt het nieuw bewijs ter ondersteuning van het potentieel ervan als aanvullende therapie voor het verbeteren van de ovariële reserve en reproductieve resultaten bij DOR-patiënten. De nieuwigheid van deze studie ligt in de dubbele benadering - het koppelen van gestandaardiseerde klinische toepassing aan mechanistische inzichten - die zowel de klinische vertaling als het theoretische begrip van YZD in de reproductieve geneeskunde bevordert.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Alle klinische procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de Verklaring van Helsinki en werden goedgekeurd door de ethische commissie van het Shanghai Changhai Hospital (goedkeuring nr. CHEC2022-156). Van alle deelnemers werd schriftelijke geïnformeerde toestemming verkregen. Dierproeven werden goedgekeurd door de ethische commissie van het Changhai Medical College (goedkeuring nr. CHEC2022-156) en voldeed aan de nationale normen voor de verzorging van proefdieren.
Klinische kenmerken
Werving en groepering van patiënten
Van augustus 2022 tot maart 2023 werden 78 onvruchtbaarheidspatiënten met de diagnose nier-yin-deficiëntie10-syndroom en die op zoek waren naar ART gerekruteerd uit het Reproductive Medicine Center van het First Affiliated Hospital van de Naval Medical University en de polikliniek van het Yueyang-ziekenhuis, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine. Deelnemers werden willekeurig toegewezen aan een controlegroep of een behandelingsgroep (elk 39 gevallen) met behulp van SPSS 23.0 willekeurige getallengeneratie.
Diagnostische criteria
De westerse medische diagnose volgde het advies van het Comité van de American Society for Reproductive Medicine (ASRM) uit 2020 over ovariële reserve-indicatoren11. Criteria waren onder meer FSH ≥ 10 IE/L, oestradiol ≥ 80 pg/ml, aantal antrale follikels (AFC) < 7 en AMH < 0,5-1,1 ng/ml. Het nier-yin-deficiëntiesyndroom werd gediagnosticeerd volgens de gynaecologie van de traditionele Chinese geneeskunde12 en de diagnostische werkzaamheidscriteria van TCM-syndromen13.
In- en uitsluitingscriteria
Inclusiecriteria werden gepland IVF/ICSI-ET met behulp van een antagonistisch protocol; voorgeschiedenis van slechte ovariële respons (< 5 opgehaalde eicellen); leeftijd 20-40 jaar; voldoen aan de criteria van zowel DOR als TCM-syndroom; en ondertekende geïnformeerde toestemming. Uitsluitingscriteria waren onder meer endometriumpathologie (poliepen, tuberculose, dysplasie, kanker), misvorming van de baarmoeder, comorbiditeiten (diabetes, lupus), recente hormoontherapie (< 3 maanden), voorgeschiedenis van bekkenchirurgie, chromosomale afwijkingen of geneesmiddelallergie. Eliminatiecriteria werden toegepast voor protocolafwijking, bijwerkingen, terugtrekking of spontane conceptie binnen 2 weken na inschrijving.
Medicatie methode
Beide groepen ondergingen een basisevaluatie op menstruatiedag 2-3 door middel van transvaginale echografie en hormoontesten. De controlegroep kreeg het antagonistische regime: recombinant FSH of humaan menopauzale gonadotrofine, aanvangsdosis 225 IE/dag intramusculair gedurende 5 dagen, gevolgd door dosisaanpassing op basis van follikelgroei. Wanneer de diameter van de leidende follikel meer dan 12 mm bedroeg, werd de GnRH-antagonist (0,125 mg/dag subcutaan) gestart en voortgezet tot de trigger. Wanneer ≥ 1 follikel 18 mm bereikte, ≥ 2 17 mm bereikte, of ≥ 3 16 mm bereikte, werd de eisprong geactiveerd met 250 μg recombinant hCG, gevolgd door het ophalen van de eicel na 34-36 uur.
De behandelingsgroep volgde hetzelfde protocol met de toevoeging van Yangjing Zhongyu Decoction (YZD), 2x daags oraal toegediend (ochtend en avond), één afkooksel per dag, beginnend vanaf de dag 2-3 van de menstruatiecyclus tot de triggerdag. De klinische formule bevatte Rehmannia 12 g, Paeonia lactiflora 12 g, Cornus officinalis 10 g en Angelica sinensis 12 g.
Indicatoren voor observatie
Klinische resultaten omvatten basislijnparameters van leeftijd, BMI (berekend als gewicht (kg)/lengte² (m²)), onvruchtbaarheidsduur, FSH, dosis/duur gonadotropine, nier-yin-deficiëntiesyndroomscores, aantal antrale follikels (beoordeeld door transvaginale echografie, 2-9 mm in diameter), opgehaalde eicellen, metafase II (MII) eicellen (geïdentificeerd bij het ophalen van de eicel), bevruchte embryo's, splitsingen, embryo's van hoge kwaliteit (gedefinieerd volgens standaard embryologische laboratoriumcriteria), en klinisch zwangerschapspercentage, dat werd gedefinieerd als de aanwezigheid van een zwangerschapszak op echografie na 6-7 weken zwangerschap.
Proefdieren
Hier werden 30 vrouwelijke Sprague-Dawley-ratten (8 weken oud, 160-200 g) geacclimatiseerd onder gecontroleerde omstandigheden (23 ± 2 °C, 40%-45% luchtvochtigheid, 12 uur licht/donkercyclus) met ad libitum voedsel en water.
Voorbereiding van geneesmiddelen
YZD werd bereid met Rehmannia 30 g, Angelica 15 g, Paeonia lactiflora 15 g en Cornus officinalis 15 g. De kruiden werden in water afgebakend, gefilterd door een filter met 200 mazen en geconcentreerd onder verminderde druk bij 70 °C. De uiteindelijke oplossingen voor lage, gemiddelde en hoge doses waren 0,34 g/ml, 0,68 g/ml en 1,35 g/ml, wat overeenkomt met 0,5x, 1,0x en 1,2x van de klinische dosis YZD. Afkooksels werden bewaard bij 4 °C.
Modelleren en groeperen
Een DOR-model werd geïnduceerd door intraperitoneale injectie van tripterygiumglycosiden (40 mg/kg per dag gedurende 15 dagen). Ratten werden willekeurig toegewezen aan blanco (n = 6), model (n = 6) en YZD-behandelingsgroepen (lage, gemiddelde en hoge doses; n = 6 elk). Toediening via een maagsonde (10 ml/kg lichaamsgewicht) werd 1x daags gedaan, beginnend vanaf de eerste dag van de injectie met tripterygiumglycosiden die gedurende 15 dagen werd voortgezet.
Vaginale cytologie
De stadia van de oestrische cyclus werden beoordeeld door middel van vaginale exfoliatieve cytologie. Vaginale uitstrijkjes werden eenmaal daags (08:00-10:00) afgenomen met steriele wattenstaafjes, verdund in 30 μL zoutoplossing en onderzocht onder een lichtmicroscoop bij een vergroting van 100x. De observatieperiode duurde 15 opeenvolgende dagen. De normale oestruscyclusindex werd gedefinieerd als het percentage ratten dat gedurende deze periode regelmatige oestrische cycli van 4-5 dagen vertoonde.
Hormoon testen
Volbloed werd aan het einde van de behandelingsperiode van 15 dagen onder narcose door middel van een hartpunctie afgenomen, gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur laten stollen en gedurende 15 minuten bij 1000 x g bij 4 °C gecentrifugeerd om serum te verkrijgen. E2- en FSH-niveaus werden gemeten door ELISA volgens de instructies van de fabrikant.
Histologie van de eierstokken
Eierstokweefsel werd onmiddellijk na euthanasie verzameld door chirurgische verwijdering van beide eierstokken, gespoeld in een koude zoutoplossing om bloed te verwijderen en vervolgens gedurende 24-48 uur gefixeerd in 4% paraformaldehyde bij 4 °C. Weefsels werden gedehydrateerd in gesorteerde ethanol, geklaard in xyleen, ingebed in paraffine en doorsneden bij 4-5 μm. Secties werden gekleurd met hematoxyline en eosine, gedehydrateerd, gewist en gemonteerd.
Statistische analyse
Gegevens werden geanalyseerd met behulp van SPSS 26.0. Normale variabelen werden uitgedrukt als gemiddelde ± SD en vergeleken met de t-toets; niet-normale variabelen als mediaan (IQR) en vergeleken door de Mann-Whitney U-test. Categorische variabelen werden uitgedrukt in % en vergeleken met de chi-kwadraattoets. p < 0,05 werd als statistisch significant beschouwd. Voor consistentie werden dezelfde statistische methoden toegepast op figuuranalyses (geen aparte beschrijving van de t-toets van de student).
Veiligheid en afvalverwerking
Paraformaldehyde-, xyleen- en tripterygiumglycosiden werden behandeld in gecertificeerde zuurkasten met handschoenen, veiligheidsbrillen en laboratoriumjassen; gemorste vloeistoffen en verontreinigde wegwerpartikelen werden ingezameld in geëtiketteerde containers voor gevaarlijk afval en afgevoerd volgens de institutionele bioveiligheidsSOP. Alle procedures met paraformaldehyde, xyleen en tripterygiumglycosiden werden uitgevoerd in zuurkasten met de juiste persoonlijke beschermingsmiddelen (handschoenen, laboratoriumjassen, veiligheidsbrillen). Chemisch afval en kadavers van dieren werden verwijderd volgens de institutionele bioveiligheidsrichtlijnen.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Klinische kenmerken
Tijdens het onderzoek trokken 3 patiënten in de controlegroep zich terug vanwege een COVID-19-infectie en 1 werd uitgesloten vanwege een abnormale leverfunctie, waardoor er 35 patiënten overbleven. In de behandelingsgroep trokken 4 zich terug vanwege COVID-19 en 35 patiënten voltooiden het onderzoek. Zo werden in totaal 70 proefpersonen opgenomen in de uitein...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
In deze studie onderzochten we de mogelijke rol van Yangjing Zhongyu Afkooksel (YZD) als aanvullende therapie voor verminderde ovariële reserve (DOR) bij geassisteerde voortplantingstechnologie (ART). Klinische bevindingen toonden aan dat patiënten die YZD kregen naast het standaard antagonistprotocol significant hogere aantallen opgehaalde eicellen en embryo's van hoge kwaliteit bereikten. Hoewel de zwangerschapspercentages niet significant verschilden tussen de groepen, werd er een gun...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs hebben verklaard dat er geen concurrerende belangen bestaan.
De steun voor dit werk komt van het National Key Research and Development Program of China (Subsidienummer: 2018YFC1004900): studie naar het effect en het mechanisme van Yangjing Zhongyu Afkooksel op het reguleren van de microbiële metaboliet erucamide in folliculaire vloeistof om de eierstokfunctie bij ratten te verbeteren (Subsidienummer: 2024QN027)
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Centrifuge | Serumscheiding (1000 x g, 15 min, 4 °C) | Eppendorf 5810R | 5811 000.012 |
| Katoenen wattenstaafjes (sterieel) | Verzameling van vaginale cytologiemonsters | Jiangsu Kangjian Medical Supplies | KJ-MW-01 |
| ELISA-kit voor E2 | Serum estradiol kwantificering (rat) | Elabscience Biotechnology Inc. | E-EL-0152 |
| ELISA-kit voor FSH | Serum FSH kwantificering (rat) | Elabscience Biotechnology Inc. | E-EL-R0391 |
| Ethanol (70–100%) | Gegradueerde dehydratie voor histologie | Sinopharm Chemical Reagent Co., China | 100092683 |
| Glaze platen & dekglasjes | Sample montage | Citotest Scientific, China | 7101/1812 |
| Hematoxylinen & Eosin | Kleuroplossing voor histologie | Beyotime Biotechnology, China | C0105S |
| Optische microscoop | Histologie en cytologie observatie | Olympus (generiek, geen handelsmerk) | CX23 |
| Paraffine | Inbeddingsmedium | Leica Biosystems | 39601095 |
| Paraformaldehyde (4%) | Fixatief voor weefselvoorbereiding | Sigma-Aldrich | P6148 |
| Zoutoplossing (0.9%) | Vaginale uitstrijk bereiding | Sinopharm Chemical Reagent Co., China | 10019318 |
| Sprague–Dawley ratten | Experimentele dieren (vrouwelijk, 8 weken, 160–200 g) | Beijing Weitong Lihua Experimental Animal Tech Co., Ltd. | SCXK(Beijing)2024-0011 |
| SPSS-software | Statistische analyse (ver. 26.0) | IBM Corp. | RRID:SCR_002865 |
| Transmissie-elektronenmicroscoop | Ultrastructuur observatie | JEOL Ltd. | JEM-1400Plus |
| Tripterygium glycosiden | Inductie van DOR rattenmodel | Generieke leverancier (geen handelsmerk) | TG-001 |
| Xyleen | Opruimingsreagens voor histologie | Sinopharm Chemical Reagent Co., China | 10023418 |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.