Deze studie presenteert een protocol voor het evalueren van de effecten van curcumine op het gedrag van retinoblastoomcellen door modulatie van de Wnt/β-catenine-route en miR-22-expressie.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Onderzoeksartikel
miR-22-gemedieerde regulatie van Wnt/β-catenine-signalering door curcumine bij retinoblastoom
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Retinoblastoom (RB) is een veel voorkomende intraoculaire kwaadaardige tumor die zuigelingen en kinderen treft, maar de precieze etiologie en pathogenese ervan blijven onvolledig begrepen. Curcumine, een bioactief polyfenol, remt tumorprogressie via microRNA-gemedieerde modulatie van de Wnt/β-catenine-signaleringscascade. Deze studie had tot doel te verduidelijken hoe curcumine de antitumoreffecten in RB medieert door de regulatie van miRNA-22 (miR-22)-expressie te onderzoeken en de onderliggende moleculaire mechanismen te onderzoeken. Twee gevalideerde retinoblastoommodellen (SO-RB50/WERI-Rb-1) werden behandeld met curcumine in verschillende concentraties. Om de regulatie van Wnt/β-catenine-signalering door miR-22 af te bakenen, werden doelwitcellen getransduceerd met een miR-22-nabootsingslentivirus of een niet-functioneel controle-lentivirus. Xenotransplantaattumormodellen werden opgesteld bij muizen met behulp van menselijke RB-cellen om de in vivo effecten van curcumine op tumorgrootte, miR-22-expressie en Wnt/β-catenine-eiwitniveaus te observeren. Cellulaire proliferatie, invasie en apoptose werden beoordeeld met behulp van respectievelijk de CCK-8, Transwell en Annexin V-APC-PI dubbele kleuringstest. miR-22-niveaus werden gekwantificeerd door RT-PCR en Wnt1- en β-catenine-expressieprofielen werden bepaald door Western blot-analyse. Behandeling met curcumine resulteerde in verminderde proliferatie en invasiviteit in RB-cellen, terwijl de apoptose werd versterkt en de miR-22-expressie werd verhoogd. Remming van miR-22 verminderde de effecten van curcumine op de Wnt/β-catenine-signaleringsroute. In xenotransplantaatstudies verminderde curcumine de tumorgrootte aanzienlijk en verbeterde het de miR-22-expressie in de tumoren, waardoor Wnt/β-catenine-signalering effectief werd onderdrukt. Deze bevindingen tonen aan dat curcumine de proliferatie en invasiviteit van RB-cellen remt en tegelijkertijd apoptose bevordert, voornamelijk gemedieerd door miR-22-opregulatie en daaropvolgende remming van de Wnt/β-catenine-route.
Inleiding
Retinoblastoom (RB), een pediatrische maligniteit met hoge agressiviteit die optreedt in netvliesweefsels, vormt een aanzienlijke bedreiging voor de gezondheid, vooral voor kinderen onder de vijf jaar. Genetische mutaties, met name die welke het RB1-gen aantasten, zijn nauw verbonden met de ontwikkeling van deze ziekte1. Gezien de aanzienlijke prevalentie van retinoblastoom (RB) bij zuigelingen en kinderen, in combinatie met het feit dat jaarlijks ongeveer 9000 nieuwe gevallen worden gemeld, voornamelijk in lage-inkomens- en ontwikkelingslanden, is een uitgebreid begrip van de ziektemechanismen absoluut noodzakelijk voor het ontwikkelen van effectieve therapeutische strategieën en het verbeteren van de patiëntresultaten2. In de loop der jaren heeft het onderzoek naar RB zich voornamelijk gericht op genomische veranderingen, met name in miRNA-expressie3. Zeker, miR-34a en miR-22 zijn naar voren gekomen als vitale spelers in de tumorigenese van RB 4,5. Van deze miRNA's heeft miR-22 zijn betrokkenheid bij tumorigenese bij verschillende kankers aangetoond 6,7,8, en beïnvloedt proliferatie, invasie en migratie 6,9. Bovendien heeft eerder onderzoek aangetoond dat de miR-22-expressie verminderd is in zowel muis- als menselijke RB-cellijnen, wat de potentiële rol ervan bij deze ziekte verder benadrukt10.
Curcumine, een belangrijke bioactieve curcuminoïde in Curcuma longa-wortelstokken, is een fundamenteel ingrediënt geweest in de traditionele geneeskunde en de Aziatische keuken11. Het rijke farmacologische profiel, dat antitumor-, antimicrobiële, ontstekingsremmende, antioxiderende en neuroprotectieve effecten omvat, heeft veel aandacht gekregen in biomedisch onderzoek 12,13,14. Talrijke studies hebben de antitumorrol ervan in RB onderzocht, waarbij de invloed ervan op verschillende signaalroutes wordt benadrukt, waaronder NF-KB15, JAK/STAT16 en MRP117. Vergeleken met deze eerder bestudeerde routes kan de curcumine-miR-22/Wnt/β-catenine-as een meer gerichte en specifieke benadering bieden, waardoor de therapeutische werkzaamheid mogelijk wordt verbeterd en off-target effecten worden verminderd.
Eerdere studies hebben gesuggereerd dat curcumine antitumoreffecten bereikt via modulatie van de TET1/Wnt/β-catenine-signaleringsroute-as in hepatocellulair carcinoom18 en darmkankercellen19. Of curcumine de tumorprogressie in RB-cellen kan onderdrukken door de Wnt/β-catenine-signaleringsroute te beïnvloeden, blijft echter onbekend. Recente studies hebben gerapporteerd dat verminderde miR-22-expressie in retinoblastoomcellen en oraal plaveiselcelcarcinoom verband houdt met veranderingen in de activiteit van de Wnt/β-catenine-signaleringsroute20,21. Gezien de praktische toepasbaarheid vertoont curcumine effectieve antitumoractiviteit binnen een gedefinieerd concentratiebereik (10-40 μM in vitro)15,22 en kan het in vivo worden toegediend met beheersbare farmacokinetische eigenschappen, waardoor translationeel onderzoek wordt vergemakkelijkt. Daarom heeft deze studie tot doel een RB-model op te stellen om te onderzoeken of curcumine de miR-22-spiegels verhoogt en vervolgens de Wnt/β-catenine-signaleringsactiviteit verlaagt, wat een potentieel efficiëntere en klinisch relevante therapeutische strategie biedt in vergelijking met conventionele NF-KB-, Jak/STAT- of MRP1-modulatiebenaderingen.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle procedures waarbij dieren betrokken zijn, zijn beoordeeld en goedgekeurd door de Animal Ethics and Welfare Committee (AEWC) van het Tianjin Eye Hospital (goedkeuringsnr. NKYY-DWLL-2023-054). De gebruikte reagentia en de gebruikte apparatuur staan vermeld in de materiaaltabel.
1. Celcultuur
Cellen van de humane retinoblastoomlijnen WERI-Rb-1 en SO-RB50 werden gekweekt in Dulbecco's gemodificeerde Eagle-medium met een hoog glucosegehalte, aangevuld met 10% foetaal runderserum en 1% penicilline-streptomycine. De cellen werden met een geschikte dichtheid in kweekkolven gezaaid en op 37 °C gehouden in een bevochtigde atmosfeer die %CO2 bevatte. Het medium werd elke 2-3 dagen vervangen en de cellen werden gepasseerd met 70%-80% samenvloeiing met behulp van standaard trypsinisatie.
2. Dierproeven
In totaal werden 48 specifiek-pathogeenvrije Balb/c naakte muizen (4 weken oud, 16-18 g) gebruikt. De dieren werden gehuisvest in steriele, individueel geventileerde kooien onder laminaire luchtstroom met gecontroleerde omgevingscondities van 26-28 °C en 40%-60% relatieve vochtigheid. Voer, water en strooisel werden voor gebruik gesteriliseerd. Muizen kregen vrije toegang tot voedsel en water en werden een week geacclimatiseerd voor de experimenten.
3. Groepering en behandeling van dieren
WERI-Rb-1- en SO-RB50-cellen die stabiel werden getransfecteerd met een miR-22-nabootsing of een negatieve controlesequentie werden gebruikt voor tumorinoculatie. Cellen in de logaritmische groeifase werden geoogst, opnieuw gesuspendeerd in steriele fosfaatgebufferde zoutoplossing en aangepast aan een dichtheid van 5 × 107 cellen/ml. Elke muis werd subcutaan geïnjecteerd met 0,1 ml van de suspensie in de rechter voorpoot. Muizen werden willekeurig verdeeld in zes groepen (n = 6 per groep): modelgroep, curcuminegroep, miR-22 nabootsingsgroep, miR-22 nabootsing + curcuminegroep, miR-22 negatieve controlegroep en miR-22 negatieve controle + curcuminegroep. In groepen die curcumine kregen, kregen muizen eenmaal daags intraperitoneale injecties van 15 mg/kg curcumine toegediend, te beginnen onmiddellijk na inoculatie van de tumorcellen. De overige groepen kregen gelijke hoeveelheden DMSO als voertuigbesturing.
4. Meting van tumorgewicht en -volume
De tumoropnamesnelheid was ongeveer 80%-90% bij xenogetransplanteerde naakte muizen. De tumorgrootte werd wekelijks gemeten met behulp van een digitale schuifmaat, waarbij de langste diameter werd geregistreerd als lengte (L) en de kortste diameter werd geregistreerd als breedte (W). Het tumorvolume werd berekend met behulp van de formule V = (L × W2)/2. Muizen werden regelmatig gecontroleerd op tumorgroei en gezondheidstoestand, en humane eindpunten werden toegepast als tumoren groter waren dan 1.500mm3 of als dieren tekenen van angst of gewichtsverlies vertoonden. Aan het einde van week 4 werden muizen geëuthanaseerd door CO2 -inhalatie, gevolgd door cervicale dislocatie om de dood te garanderen. Tumoren werden onmiddellijk na verwijdering ontleed en gewogen.
5. microRNA-transfectie
Synthetische oligonucleotiden, waaronder de miR-22-nabootser, negatieve controle, anti-miR-22 (20-methoxy-gemodificeerd), anti-miR negatieve controle, Wnt1-specifieke siRNA's en controle-siRNA, werden gebruikt voor transfectie. De cellen bij 70%-80% samenvloeiing werden gezaaid in platen met 6 putjes één dag vóór transfectie. Transfectie werd uitgevoerd met behulp van een op lipiden gebaseerd reagens volgens de instructies van de fabrikant. Voor elke put werden de nucleïnezuren verdund in serum-vrij middel en gecombineerd met het transfectiereagens in de aanbevolen verhouding om complexen te vormen, die 15-20 minuten bij kamertemperatuur werden geïncubeerd alvorens druppelsgewijs aan cellen in volledig medium werden toegevoegd. Het uiteindelijke volume per put was 2 ml. Na 6 uur incubatie bij 37 °C met 5% CO2 werd het medium vervangen door vers compleet medium. De cellen werden 48 uur lang aangehouden voordat de volgende tests plaatsvonden. De efficiëntie van de transfectie werd geëvalueerd door kwantitatieve PCR in real-time. Drie verschillende siRNA's gericht tegen Wnt1 (si-Wnt1-1: 5'-CCAAGAGTCTGCAACTGGTACTCGA-3'; si-Wnt1-2: 5'-CGAGAAACGGCGTTTATCTTCGCTA-3'; si-Wnt1-3: 5'-GCTTCCTCATGAACCTTCACAACAA-3') werden afzonderlijk of als een equimolair mengsel gebruikt om off-target effecten te minimaliseren.
6. Cel tellende Kit-8 (CCK-8) test
Cellen werden gezaaid in platen met 96 putjes met een dichtheid van 5 × 103 cellen per putje in 100 μL volledig medium en lieten ze een nacht hechten. Na behandeling met de aangegeven concentraties curcumine gedurende de aangegeven duur, werd 10 μL CCK-8 werkoplossing rechtstreeks aan elk putje toegevoegd. Putten die alleen medium bevatten, dienden als blanco controles. De platen werden gedurende 4 uur geïncubeerd bij 37 °C met 5% CO2 , waarna de extinctie werd gemeten bij 490 nm met behulp van een microplaatlezer. De levensvatbaarheid van cellen werd berekend als:
Levensvatbaarheid (%) = 
x 100
Er werden dosis-responscurven gegenereerd en de halfmaximale remmende concentratie (IC50) van curcumine werd dienovereenkomstig bepaald.
7. Transwell-test
Voor de migratietest werden cellen gesuspendeerd in serumvrij medium en gezaaid in de bovenste kamers van Transwell-inserts (poriegrootte 8 μm) bij 3 × 105 cellen in 200 μL per insert. De onderste kamers werden gevuld met 600 μL compleet medium met 10% foetaal runderserum als chemolokstof. De platen werden gedurende 24 uur geïncubeerd bij 37 °C met 5% CO2 . Na incubatie werden niet-migrerende cellen aan de bovenkant van het membraan voorzichtig verwijderd met een steriel wattenstaafje. De inserts werden tweemaal gespoeld met met fosfaat gebufferde zoutoplossing, gedurende 30 minuten gefixeerd in 5% glutaaraldehyde bij 4 °C, opnieuw gespoeld en gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur gekleurd met 0,1% kristalviolet. Overtollige kleurstof werd verwijderd door te wassen in PBS. Membranen werden aan de lucht gedroogd en gemigreerde cellen werden gevisualiseerd onder een omgekeerde microscoop met een vergroting van 400×. Voor kwantificering werden drie willekeurige velden per invoeging afgebeeld en werd het gemiddelde aantal cellen berekend.
8. Bijlage V-APC-PI-test
De cellen van elke groep werden geoogst, tweemaal gewassen met voorgekoelde fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) en gecentrifugeerd bij 300 × g gedurende 5 minuten bij 4 °C. De pellet werd geresuspendeerd in 300 μL 1× bindingsbuffer met een dichtheid van ongeveer 1 × 106 cellen/ml. Annexine V-APC (5 μL) werd toegevoegd en de monsters werden gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur in het donker geïncubeerd. Onmiddellijk vóór de flowcytometrie werd 5 μl propidiumjodide toegevoegd aan 200 μl van de celsuspensie en gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd. Monsters werden geanalyseerd op een flowcytometer met behulp van geschikte kanalen (APC en PI) en gegevens werden verwerkt met standaard poortstrategieën om levende, vroeg apoptotische, late apoptotische en necrotische cellen te onderscheiden.
9. qRT-PCR-profilering
Totaal RNA werd geëxtraheerd met behulp van een fenol-chloroformmethode en de concentratie en zuiverheid werden bepaald door middel van ultraviolette spectrofotometrie. Voor reverse transcriptie werd 1 μg totaal RNA gebruikt in een reactie van 20 μL met een reverse transcription mastermix volgens het protocol van de fabrikant. Kwantitatieve PCR werd uitgevoerd in reacties van 20 μl met 2 μl cDNA, 10 μl SYBR Green mastermix en 0,4 μM van elke primer. De reacties werden uitgevoerd op een real-time PCR-systeem met het volgende cyclusprogramma: 95 °C gedurende 1 minuut, gevolgd door 40 cycli van 95 °C gedurende 15 s en 63 °C gedurende 25 s, met fluorescentie-acquisitie aan het einde van elke cyclus. Er werd een analyse van de smeltcurve uitgevoerd van 55 °C tot 95 °C om de productspecificiteit te verifiëren. Elk monster werd in drievoud geanalyseerd en de relatieve expressie werd gekwantificeerd met behulp van de 2-ΔΔCt-methode. U6 diende als het referentiegen voor microRNA-kwantificering en β-actine werd gebruikt voor mRNA-normalisatie.
De primersequenties waren als volgt: U6: vooruit 5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3', achteruit 5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'; miR-22: vooruit 5'-GCCTGAAGCTGCCAGTTGA-3', achteruit 5'-GTGCAGGGTCGAGGT-3'; Wnt1: vooruit 5'-CGATGGTGGGGTATTGTGAAC-3', achteruit 5'-CCGGATTTTGGCGTATCAGAC-3'; β-actine: vooruit 5'-AGTGTGACGTGGACATCCGCAAAG-3', achteruit 5'-ATCCACATCTGCTGGAAGGTGGAC-3". De versterkingsgegevens werden verwerkt met behulp van de systeemsoftware. Alle primers zijn verkregen van een commerciële aanbieder.
10. Westerse vlek
Eiwitten werden geëxtraheerd uit gekweekte cellen of weefsels met behulp van een lysisbuffer met proteaseremmers, en eiwitconcentraties werden bepaald met behulp van de bicinchoninezuurmethode. Gelijke hoeveelheden eiwit (40 μg per baan) werden gescheiden door 10% SDS-PAGE onder constante spanning (80 V voor het stapelen van gel en 120 V voor het oplossen van gel) en overgebracht naar polyvinylideendifluoridemembranen met behulp van een nat transfersysteem bij 100 V gedurende 90 minuten. De membranen werden geblokkeerd in 5 % magere melk bereid in Tris-gebufferde zoutoplossing met 0,1 % Tween-20 (TBST) gedurende 1 uur bij kamertemperatuur. Primaire antilichamen tegen Wnt1, β-catenine en β-actine werden 1:1000 verdund in TBST met 1% magere melk en een nacht met de membranen geïncubeerd bij 4 °C. Na driemaal wassen met TBST (elk 10 minuten), werden de membranen gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd met een mierikswortelperoxidase-geconjugeerd secundair antilichaam (verdunning 1:5000). Na nog eens drie wasbeurten met TBST werden eiwitbanden gevisualiseerd met behulp van een verbeterd chemiluminescentiedetectiereagens en werden signalen vastgelegd met een digitaal beeldvormingssysteem. Bandintensiteiten werden gekwantificeerd met behulp van ImageJ-software.
11. Luciferase-test
Een wild-type reporterplasmide (Wnt1-WT) met de 3′UTR van Wnt1 met voorspelde miR-22-bindingsplaatsen en een mutante reporter (Wnt1-MUT) met verstoorde bindingsplaatsen werden geconstrueerd. Menselijke retinoblastoomcellen werden gezaaid in platen met 24 putjes met een dichtheid van 1 × 105 cellen per putje en samen getransfecteerd met Wnt1-WT of Wnt1-MUT reporterplasmiden samen met een miR-22-nabootsing of negatieve controle met behulp van een op lipiden gebaseerd transfectiereagens. Voor elke put werden 500 ng reporterplasmide en 50 nM miRNA-nabootsing of -controle gebruikt. Na 48 uur incubatie bij 37 °C met 5 % CO2 werden de cellen gelyseerd in 100 μL passieve lysisbuffer. Firefly- en Renilla-luciferase-activiteiten werden achtereenvolgens gemeten met behulp van een dual-luciferase reporter-assay-systeem volgens het protocol van de fabrikant. De luciferase-activiteit van Firefly werd genormaliseerd naar Renilla-luciferase-activiteit om de transfectie-efficiëntie te controleren. Elke toestand werd getest in drievoudige putten en herhaald in drie onafhankelijke biologische replicaten.
12. Statistische analyse
Alle gegevens worden gepresenteerd als gemiddelde ± standaarddeviatie (SD) van ten minste drie onafhankelijke biologische replicaten. Statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van statistische software. Vergelijkingen tussen meerdere groepen werden uitgevoerd door middel van eenrichtingsvariantieanalyse (ANOVA), gevolgd door de post-hoctest van Tukey. Een p-waarde van <0,05 werd als statistisch significant beschouwd.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Dosisafhankelijke antiproliferatieve en anti-invasieve effecten van curcumine op menselijke retinoblastoomcellen, vergezeld van deactivering van de Wnt/β-catenineroute
Menselijke RB-cellen werden behandeld met verschillende curcuminedoses gedurende een periode van 24 uur. De bevindingen onthulden een dosisafhankelijke afname van de levensvatbaarheid en invasie van cellen, in combinatie met een toename van apoptose. In het bijzonder, naarmate de concentratie van curcum...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Curcumine, een polyfenol afgeleid van Curcuma longa-wortelstokken, staat bekend om zijn ontstekingsremmende, anti-angiogene, antiproliferatieve en antioxiderende eigenschappen23,24. Bovendien heeft het antitumorale eigenschappen, met name het vermogen om apoptose in kwaadaardige cellen te induceren25. Hoewel eerder onderzoek de nadruk heeft gelegd op de groeionderdrukkende effecten van curcumine op RB-cell...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.
Dankbetuigingen
Nationale Stichting voor Natuurwetenschappen van China (82271218); Tianjin Eye Hospital Science Fund (Algemeen Project ykyb1908).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Annexin V-APC/PI dual staining kit | Solarbio | CA1020 | kwantitatief beoordelen van apoptose in RB-cellen via flowcytometrie |
| CCK-8 Assay Kit | Beyotime | C0038 | de absorptie op 490 nm meten voor het evalueren van de celproliferatiecapaciteit |
| CO2 incubator | Eppendorf | optimale kweekcondities (37°C, 5% CO2, en verzadigde luchtvochtigheid) behouden voor RB-celpropagatie | |
| Curcumine | Sigma | C1386 | Onderzoek naar de antitumoreffecten van Curcumine op Retinoblastoom (RB) |
| ECL chemiluminescent substraat | Bioss | C05-07004 | eiwitbanden visualiseren in Western blot-analyse |
| Fetal Bovine Serum (FBS) | VivaCell | C04001-500 C04002-500 | Celkweek |
| Flow cytometry | Beckman Coulter | Gallios | kwantitatief analyseren van de apoptosesnelheid van cellen |
| ImageJ Software | National Institutes of Health | versie 6 | Western blot-bandanalyse, beoordeling van eiwitexpressieniveaus |
| Inverted microscope | Olympus | CKX53 | beobachten en tellen van invasieve cellen bij 400× vergroting in de Transwell-assay |
| Lipofectamine 3000 | Invitrogen | L3000015 | Celtransfectie |
| Microplate reader | Thermo | K3 | enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kwantificering |
| miR-22 mimic Lentivirus | Hanheng Biotechnology | hsa-miR-22 | een stabiel getransfecteerde cellijn voor dierproeven opzetten |
| Multiplex real-time PCR systeem | Bio-Rad | CFX384 | kwantitatieve RT-PCR (qRT-PCR) uitvoeren voor nauwkeurige genexpressieanalyse |
| Penicillin-Streptomycin (PS) | Abbkine | BMC1030 | Toegevoegd aan celkweekmedia om bacteriële besmetting te voorkomen |
| Protein Extraction Kit | Solarbio | BC3640-50T | eiwitisolatie uit cellulaire en weefselmonsters |
| psiCHECK-2 vector | promega | JR20110328 | constructie van Wnt1-WT (wild-type) en Wnt1-MUT (mutante) reporterplasmiden voor het onderzoek naar de interactie tussen miR-22 en Wnt1 3'UTR |
| PVDF membrane | Merck | ISEQ00010 | eiwitblottaging |
| Rabbit IgG secundair antilichaam | Cell Signaling Technologies | 14708 | Western blot detectie door binding aan het primaire antilichaam |
| SPSS statistische software | IBM | SPSS 20.0 | statistische analyse uitvoeren op de experimentele gegevens |
| SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix Kit | Invitrogen | 11752-050 | reverse transcriptie van RNA naar cDNA voor daaropvolgende RT-PCR-analyse |
| SYBR Premix Ex Taq II Kit | TaKaRa Bio | RR820A | Voor RT-PCR om de expressie van Wnt1, β-actine en andere doelgenen kwantitatief te detecteren |
| TRIzol reagent | Invitrogen | 12183-555 | RNA-extractie uit zowel cellulaire als weefselmonsters |
| UV spectrofotometer | Beckman | DU800 | de concentratie en zuiverheid van RNA-monsters bepalen |
| Wnt1 antilichaam | Abcam | ab15251 | Western blot-analyse om Wnt1-eiwitopsporing te detecteren |
| β-actine antilichaam | Abcam | ab8227 | gebruikt als interne referentie om de eiwitbelasting in Western blot-analyses te normaliseren |
| β-catenine antilichaam | Cell Signaling Technologies | 37447 | Western blot-analyse om β-catenine eiwitexpressie te detecteren |
Referenties
- Dimaras, H., et al. Retinoblastoma. Nat Rev Dis Primers. 1, 15021(2015).
- Pandey, A. N. Retinoblastoma: An overview. Saudi J Ophthalmol. 28 (4), 310-315 (2014).
- Rushlow, D., et al. Detection of mosaic RB1 mutations in families with retinoblastoma. Hum Mutat. 30 (5), 842-851 (2009).
- Yin, W., Gao, F., Zhang, S. MicroRNA-34a inhibits the proliferation and promotes the chemosensitivity of retinoblastoma cells by downregulating Notch1 expression. Mol Med Rep. 22 (2), 1613-1620 (2020).
- Liu, M., Wang, S. M., Jiang, Z. X., Lauren, H., Tao, L. M. Effects of miR-22 on viability, migration, invasion and apoptosis in retinoblastoma Y79 cells by targeting high-mobility group box 1. Int J Ophthalmol. 11 (10), 1600-1607 (2018).
- Guo, S., et al. miR-22 inhibits osteosarcoma cell proliferation and migration by targeting HMGB1 and inhibiting HMGB1-mediated autophagy. Tumour Biol. 35 (7), 7025-7034 (2014).
- Poliseno, L., et al. Identification of the miR-106b~25 microRNA cluster as a proto-oncogenic PTEN-targeting intron that cooperates with its host gene MCM7 in transformation. Sci Signal. 3 (117), ra29(2010).
- Zhang, J., et al. microRNA-22, downregulated in hepatocellular carcinoma and correlated with prognosis, suppresses cell proliferation and tumourigenicity. Br J Cancer. 103 (8), 1215-1220 (2010).
- Chen, H., et al. miR-22 inhibits the proliferation, motility, and invasion of human glioblastoma cells by directly targeting SIRT1. Tumour Biol. 37 (5), 6761-6768 (2016).
- Martin, J., et al. Differentially expressed miRNAs in retinoblastoma. Gene. 512 (2), 294-299 (2013).
- Hewlings, S. J., Kalman, D. S. Curcumin: A review of its effects on human health. Foods. 6 (10), 92(2017).
- He, Y., et al. Curcumin, inflammation, and chronic diseases: how are they linked. Molecules. 20 (5), 9183-9213 (2015).
- Anand, P., Sundaram, C., Jhurani, S., Kunnumakkara, A. B., Aggarwal, B. B. Curcumin and cancer: an "old-age" disease with an "age-old" solution. Cancer Lett. 267 (1), 133-164 (2008).
- Khadrawy, Y. A., Hosny, E. N., Eldein Mohamed, H. S. Assessment of the neuroprotective effect of green synthesized iron oxide nanoparticles capped with curcumin against a rat model of Parkinson's disease. Iran J Basic Med Sci. 27 (1), 81-89 (2024).
- Mu, Y. T., et al. Curcumin suppressed proliferation and migration of human retinoblastoma cells through modulating NF-κB pathway. Int Ophthalmol. 40 (10), 2435-2440 (2020).
- Li, Y., Sun, W., Han, N., Zou, Y., Yin, D. Curcumin inhibits proliferation, migration, invasion and promotes apoptosis of retinoblastoma cell lines through modulation of miR-99a and JAK/STAT pathway. BMC Cancer. 18 (1), 1230(2018).
- Sreenivasan, S., Ravichandran, S., Vetrivel, U., Krishnakumar, S. In vitro and in silico studies on inhibitory effects of curcumin on multi drug resistance associated protein (MRP1) in retinoblastoma cells. Bioinformation. 8 (1), 13-19 (2012).
- Zhu, J., Qu, J., Fan, Y., Zhang, R., Wang, X. Curcumin inhibits invasion and epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma cells by regulating TET1/Wnt/β-catenin signal axis. Bull Exp Biol Med. 173 (6), 770-774 (2022).
- Lu, Y., Zhang, R., Zhang, X., Zhang, B., Yao, Q. Curcumin may reverse 5-fluorouracil resistance on colonic cancer cells by regulating TET1-NKD-Wnt signal pathway to inhibit the EMT progress. Biomed Pharmacother. 129, 110381(2020).
- Sreenivasan, S., Thirumalai, K., Danda, R., Krishnakumar, S. Effect of curcumin on miRNA expression in human Y79 retinoblastoma cells. Curr Eye Res. 37 (5), 421-428 (2012).
- Yuan, S., et al. miR-22 promotes stem cell traits via activating Wnt/β-catenin signaling in cutaneous squamous cell carcinoma. Oncogene. 40 (39), 5799-5813 (2021).
- Sreenivasan, S., Thirumalai, K., Krishnakumar, S. Expression profile of genes regulated by curcumin in Y79 retinoblastoma cells. Nutr Cancer. 64 (4), 607-616 (2012).
- Park, W., Amin, A. R., Chen, Z. G., Shin, D. M. New perspectives of curcumin in cancer prevention. Cancer Prev Res (Phila). 6 (5), 387-400 (2013).
- Gupta, S. C., Patchva, S., Aggarwal, B. B. Therapeutic roles of curcumin: Lessons learned from clinical trials. AAPS J. 15 (1), 195-218 (2013).
- Reuter, S., Eifes, S., Dicato, M., Aggarwal, B. B., Diederich, M. Modulation of anti-apoptotic and survival pathways by curcumin as a strategy to induce apoptosis in cancer cells. Biochem Pharmacol. 76 (11), 1340-1351 (2008).
- Yu, X., et al. Curcumin exerts antitumor effects in retinoblastoma cells by regulating the JNK and p38 MAPK pathways. Int J Mol Med. 38 (3), 861-868 (2016).
- Sreenivasan, S., Krishnakumar, S. Synergistic effect of curcumin in combination with anticancer agents in human retinoblastoma cancer cell lines. Curr Eye Res. 40 (11), 1153-1165 (2015).
- Jiao, D. M., et al. Exploration of inhibitory mechanisms of curcumin in lung cancer metastasis using a miRNA-transcription factor-target gene network. PLoS One. 12 (2), e0172470(2017).
- Lu, Y., et al. Curcumin increases the sensitivity of Paclitaxel-resistant NSCLC cells to Paclitaxel through microRNA-30c-mediated MTA1 reduction. Tumour Biol. 39 (4), 1010428317698353(2017).
- Suresh, R., Ali, S., Ahmad, A., Philip, P. A., Sarkar, F. H. The role of cancer stem cells in recurrent and drug-resistant lung cancer. Adv Exp Med Biol. 890, 57-74 (2016).
- Yang, Z., et al. Retinoblastoma-binding protein 5 regulates H3K4 methylation modification to inhibit the proliferation of melanoma cells by inactivating the Wnt/β-catenin and epithelial-mesenchymal transition pathways. J Oncol. 2023, 5093941(2023).
- Bai, S., Shao, J., Bi, C., Li, F. β-asarone attenuates the proliferation, migration and enhances apoptosis of retinoblastoma through Wnt/β-catenin signaling pathway. Int Ophthalmol. 43 (5), 1687-1699 (2023).
- Yang, M., Li, Y., Wei, W. MicroRNA-188-5p promotes epithelial-mesenchymal transition by targeting ID4 through Wnt/β-catenin signaling in retinoblastoma. Onco Targets Ther. 12, 10251-10262 (2019).
- Shang, S., Hua, F., Hu, Z. W. The regulation of β-catenin activity and function in cancer: Therapeutic opportunities. Oncotarget. 8 (20), 33972-33989 (2017).
- Lu, Y., Wei, C., Xi, Z. Curcumin suppresses proliferation and invasion in non-small cell lung cancer by modulation of MTA1-mediated Wnt/β-catenin pathway. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 50 (9), 840-850 (2014).
- Hao, J., et al. Curcumin suppresses colorectal tumorigenesis via the Wnt/β-catenin signaling pathway by downregulating Axin2. Oncol Lett. 21 (3), 186(2021).
- Shao, J., et al. LincROR mediates the suppressive effects of curcumin on hepatocellular carcinoma through inactivating Wnt/β-catenin signaling. Front Pharmacol. 11, 847(2020).
- Gao, M., Cui, Z., Zhao, D., Zhang, S., Cai, Q. MicroRNA-9 inhibits proliferation and progression in retinoblastoma cells by targeting PTEN. Genes Genomics. 43 (9), 1023-1033 (2021).
- Xu, L., Zhu, S., Tang, A., Liu, W. LncRNA MBLN1-AS1 inhibits the progression of retinoblastoma through targeting miR-338-5p-Wnt/β-catenin signaling pathway. Inflamm Res. 70 (2), 217-227 (2021).
- Fu, C., Wang, S., Jin, L., Zhang, M., Li, M. CircTET1 inhibits retinoblastoma progression via targeting miR-492 and miR-494-3p through Wnt/β-catenin signaling pathway. Curr Eye Res. 46 (7), 978-987 (2021).
- Bi, L. L., Han, F., Zhang, X. M., Li, Y. Y. LncRNA MT1JP acts as a tumor inhibitor via reciprocally regulating Wnt/β-catenin pathway in retinoblastoma. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 22 (13), 4204-4214 (2018).
- Lyv, X., et al. Long noncoding RNA ZFPM2-AS1 knockdown restrains the development of retinoblastoma by modulating the MicroRNA-515/HOXA1/Wnt/β-catenin axis. Invest Ophthalmol Vis Sci. 61 (6), 41(2020).
- He, H., Qin, M. Long non-coding RNA LEF1-AS1 is involved in the progression of retinoblastoma through regulating the Wnt/β-catenin pathway. Clin Exp Pharmacol Physiol. 47 (5), 886-891 (2020).
- Yu, F., Pang, G., Zhao, G. RETRACTED: ANRIL acts as onco-lncRNA by regulation of microRNA-24/c-Myc, MEK/ERK and Wnt/β-catenin pathway in retinoblastoma. Int J Biol Macromol. 128, 583-592 (2019).
- Cruickshank, B. M., et al. LncRNA PART1 promotes proliferation and migration, is associated with cancer stem cells, and alters the miRNA landscape in triple-negative breast cancer. Cancers (Basel). 13 (11), 2644(2021).
- Rysz, J., Konecki, T., Franczyk, B., Ławiński, J., Gluba-Brzózka, A. The role of long noncoding RNA (lncRNAs) biomarkers in renal cell carcinoma. Int J Mol Sci. 24 (1), 643(2022).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.