Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Ontwikkeling en standaardisatie van een ex vivo micromethode voor intracellulaire kwantificatie van vincristine in primaire ALLE cellen door LC-MS/MS

463 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/69535

⸱

23 januari 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Leukemia Biology Laboratory, Boldrini Children's Center, 2Mass Spectrometry Laboratory, Boldrini Children's Center, 3Boldrini Children's Center

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol had als doel een LC-MS/MS-methode op te zetten en te optimaliseren voor de relatieve kwantificering van vincristine-accumulatie in primaire pediatrische ALLE cellen.

Samenvatting

Het kwantificeren van intracellulaire vincristine (VCR) in primaire acute lymfoblastische leukemie (ALL) cellen van kinderen is essentieel voor het begrijpen van monsterspecifieke verschillen in medicijnopname en voor het ondersteunen van experimentele studies met schaarse patiëntmateriaal. Hier presenteren we een gestroomlijnde LC-MS/MS-micromethode die specifiek is geoptimaliseerd voor primaire ALLE cellen verkregen via patiënt-afgeleide xenografts (PDX), waarbij belangrijke uitdagingen worden aangepakt zoals beperkte celbeschikbaarheid, kleine celgrootte en de noodzaak van reproduceerbaar herstel na meerdere wasstappen. Tijdsverloop-assays variërend van 1 tot 5 uur toonden aan dat een incubatieperiode van 3 uur de hoogste en meest consistente intracellulaire VCR-niveaus oplevert, met een lagere variabiliteit tussen replicaten. Methodeoptimalisatie toonde ook aan dat het gebruik van 2,5 × 106 cellen per conditie de analytische robuustheid verbetert vergeleken met 1 × 106 cellen, die een grotere verspreiding vertoonden in herhaalde experimenten. Aanvullende cruciale verfijningen waren onder meer het gebruik van koud methanol om de efficiëntie van eiwitneerslag te verbeteren en de invoering van een interne standaard om procedurele variatie te monitoren en te minimaliseren. De methode maakt een gevoelige en precieze kwantificering van intracellulaire videorecorder mogelijk over relevante concentratiebereiken, hoewel de laagst geteste dosis (0,01 μM) na de 3 uur durende incubatie niet kwantificeerbaar was. Al met al biedt deze micromethode een praktische, reproduceerbare en schaalbare aanpak voor het meten van intracellulaire VCR in primaire ALLE monsters. Het ontwerp ondersteunt vergelijkende analyses, validatie van ex vivo modellen en toekomstige methodologische toepassingen gericht op het integreren van intracellulaire geneesmiddelkwantificatie in bredere farmacologische beoordelingen.

Inleiding

Acute lymfoblastische leukemie (ALL) is goed voor ongeveer 25% van alle kinderkankers en blijft de meest voorkomende kinderziekte 1,2. Hoewel de vooruitgang in therapie de overlevingskansen aanzienlijk heeft verbeterd, die nu boven de 90% uitkomen, blijft de biologische complexiteit van ALL inspanningen aandrijven om hulpmiddelen te ontwikkelen die de ziekte beter karakteriseren op cellulair niveau3.

Vinca-alkaloïden, met name videorecorders, zijn belangrijke componenten van ALLE behandelprotocollen. Omdat VCR zijn cytotoxische effecten intracellulair uitoefent, is het begrijpen van de opname en accumulatie ervan in leukemische cellen fundamenteel voor studies naar medicijnrespons, farmacodynamiek en cellulair gedrag in ex vivo systemen. De meeste beschikbare benaderingen voor het beoordelen van intracellulaire geneesmiddelniveaus zijn echter gebaseerd op indirecte metingen of semi-kwantitatieve methoden, waarbij reproduceerbaarheid en gevoeligheidbeperkt worden 5,6,7.

Tegelijkertijd zijn veel onderzoeken nog steeds sterk afhankelijk van leukemiecellijnen, die niet de biologische heterogeniteit en klinische relevantie hebben van door patiënten afgeleide primaire cellen. Primaire monsters brengen vaak uitdagingen met zich mee, zoals beperkte celaantallen, variabele monsterkwaliteit en de noodzaak van zeer gevoelige analysetechnieken die in staat zijn om laag-abundantie intracellulaire verbindingen te detecteren8.

Vloeistofchromatografie-tandem massaspectrometrie (LC-MS/MS) biedt de specificiteit en gevoeligheid die nodig zijn voor precieze kwantificering van chemotherapeutische middelen, maar gestandaardiseerde protocollen voor het direct meten van intracellulaire VCR in primaire leukemische cellen blijven schaars. Het opzetten van robuuste micromethoden die compatibel zijn met beperkte patiëntmateriaal kan een breed scala aan toepassingen faciliteren, waaronder farmacologische profilering, evaluatie van geneesmiddel-celinteracties en vergelijkende studies over ziektesubtypes of therapeutische aandoeningen.

In dit protocol beschrijven we de ontwikkeling en optimalisatie van een micromethode voor ex vivo kwantificering van intracellulaire VCR in primaire leukemische cellen met LC-MS/MS. Om voldoende materiaal voor methodeontwikkeling te verkrijgen, werden patiëntmonsters getransplanteerd in immuundeficiënte NSG-muizen om PDX-modellen9 te genereren. Na de expansie in vivo werden menselijke leukemische cellen geïsoleerd en gecryoppreserve10. Daarna werden ze ontdooid, geïncubeerd met videorecorder, gewassen, gelyseerd en geanalyseerd met LC-MS/MS om de intracellulaire geneesmiddelniveaus te bepalen.

Deze methode biedt verschillende voordelen: het vereist een klein aantal cellen (2,5 miljoen), is gevoelig en snel, en compatibel met klinisch relevante primaire monsters. Omdat het direct de intracellulaire geneesmiddelinhoud meet, biedt het een betrouwbaar kwantitatief hulpmiddel voor onderzoekers die medicijnopname, cellulaire reacties op chemotherapieën of andere farmacologische vragen bij hematologische maligniteiten onderzoeken.

Over het geheel genomen breidt dit protocol de analytische toolkit uit die beschikbaar is voor het bestuderen van pediatrische ALL en kan het gemakkelijk worden aangepast voor andere geneesmiddelen of monstertypen, wat toekomstige onderzoeken naar leukemiebiologie, geneesmiddelgedrag en precisiefarmacologie ondersteunt.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

De leukemiemonsters die in deze studie werden gebruikt, werden verkregen uit bio-gebankte buisjes van patiënten die werden behandeld bij Centro Infantil Boldrini, die het gebruik van hun cellen toestonden via een informed consent-formulier. Het project werd goedgekeurd door de Institutionele Ethische Commissie (CAAE 34601120.7.0000.5376). De protocollen voor de generatie van PDX bij dieren werden uitgevoerd in overeenstemming met de regelgeving en ethische richtlijnen van de Commissie Dierenethiek (Comissão de Ética no Uso de Animais) van het Centro Infantil Boldrini (CEUA/Boldrini 0011-2020).

1. Monstervoorbereiding en medicijnincubatie (Dag 1)

  1. Bereiding van het materieel en werkoplossingen
    1. Weeg 2,5 mg vincristinesulfaat (molecuulmassa: 923 g/mol) en los dit op in 2,0 mL dimethylsulfoxide (DMSO) in een 2,0 mL microbuis om een 1,354 mM voorraadoplossing te bereiden. Vortex tot volledig opgelost.
      VOORZICHTIG: DMSO is een irritatie; Draag handschoenen en behandel het met een chemische afzuigkap.
    2. Bereid de 100 μM werkoplossing voor door 147,71 μL van de VCR-standaardoplossing te mengen met 1.852,28 μL DMSO in een 2,0 mL microbuis. Vortex grondig.
    3. Verdeel 500 μL van de werkoplossing over vier 0,6 mL microbuizen en sla deze op bij -20 °C gedurende enkele maanden. Vermijd het ontdooien van de aliquots meer dan drie keer.
    4. Bereid een 100 μM vinblastine (VINB) werkoplossing voor door 181,81 μL van een 1,1 mM stockoplossing (Vinblastinesulfaat 1 mg/mL, molecuulmassa: 909,07 g/mol) te mengen met 1.818,19 μL steriel ultrazuiver water in een 2,0 mL microbuis. Vortex tot homogeen.
    5. Aliquot werkt de VINB-oplossing op dezelfde manier als voor videorecorder.
    6. Bereid een methanol + 0,1 μM VINB-oplossing voor door 49,95 mL methanol te mengen met 50 μL van de VINB-werkoplossing in een 50 mL buis. Vortex tot homogeen. Bewaar het tot 3 maanden bij -20 °C.
      VOORZICHTIG: Methanol is giftig en brandbaar; Behandel met de juiste PBM in een dampkap.
    7. Bereid een oplossing van water + 0,1% mierenzuur door 49,95 mL ultrazuiver water te mengen met 50 μL mierenzuur in een buis van 50 mL. Vortex goed. Bewaar op kamertemperatuur (RT).
      VOORZICHTIG: Mierenzuur is corrosief; Hanteer met handschoenen en oogbescherming.
  2. Ontdooien en wassen van primaire cellen
    1. Ontdooi celmonsters door het flesje voorzichtig te draaien in een beker met 15 mL gedestilleerd water van 37 °C totdat het volledig ontdooid is.
      OPMERKING: Informatie over de celverzamelings- en vriesprotocollen is te vinden in eerdere publicaties 9,10.
    2. Breng de inhoud van het flesje over naar een 50 mL conische buis met 10-15 mL steriel 1x PBS met een steriele wegwerppipet. Centrifugeer op 300 × g gedurende 5 minuten op tijdscontrole.
    3. Gooi het supernatant weg door de buis om te draaien.
    4. Suspendeer de pellet opnieuw in 10 mL AIM V medium met een wegwerp Pasteur-pipet. Tel levensvatbare cellen en meet de gemiddelde celgrootte met een geautomatiseerde teller.
      OPMERKING: Het gebruik van cellen die minstens 80% levensvatbaarheid vertonen ten opzichte van het totale aantal verzamelde cellen wordt aanbevolen.
    5. Bereken het volume dat nodig is om 2,5 × 106 levensvatbare cellen te verzamelen met een eenvoudige verhouding gebaseerd op de gemeten concentratie. Als de concentratie bijvoorbeeld 5 × 106 cellen/mL is, is het vereiste volume 0,5 mL.
      OPMERKING: Voer elke behandeling driemaal uit voor reproduceerbaarheid van de gegevens. Behalve de middelgrote grootte van de cellen die in de geautomatiseerde celteller worden geleverd; Gebruik het om het volume van de cellen te berekenen.
  3. Drugsbehandelingsopzet
    1. Bereken het volume VCR-werkoplossing dat nodig is om een uiteindelijke concentratie van 1 μM te bereiken in een totaal volume van 2,0 mL. Vortex de standaardoplossing voordat je pipetteert.
    2. Voeg AIM V medium toe, dan 2,5 × 10 cellen van6 liter, en tenslotte de VCR-oplossing aan een 2,0 mL microbuis. Vortex kort en draai lichtjes naar beneden (5 s) om vloeistof van de buisdop op te vangen.
    3. Incubeer de open buizen bij 37 °C, 5%CO2 gedurende 3 uur.
    4. Na de incubatie sluit je de deksels en centrifugeer je de monsters op 300 × g gedurende 5 minuten bij RT.
    5. Verwijder het supernatant voorzichtig met een pipet, voeg dan 1 mL PBS op RT toe aan de buis.
    6. Herhaal de centrifugatie bij 300 × g gedurende 5 minuten bij RT, verwijdering van supernatant en PBS-wash nog twee keer, voor in totaal drie wasbeurten.
    7. Verwijder voorzichtig alle supernatant met een pipet, suspendeer de pellet opnieuw in 100 μL PBS en laat vortexen totdat de pellet volledig is hersteld.
    8. Voeg 400 μL koud methanol + 0,1 μM vinblastine (-20 °C) direct toe aan het monster, waarbij contact met de buiswanden wordt vermeden.
    9. Bewaar de monsters een nacht bij -80 °C.
      OPMERKING: Monsters kunnen enkele weken worden bewaard bij -80 °C (veilige stop).

2. Monsterverwerking voor LC-MS/MS (Dag 2)

  1. Monsterextractie
    1. Koel de centrifuge vooraf tot 4 °C voordat je monsters uit de -80 °C vriezer haalt.
    2. Onmiddellijk na het nemen van de monsters uit de vriezer centrifugeer je ze op 13.000 × g gedurende 20 minuten bij 4 °C.
    3. Breng 300 μL supernatant over naar een 1,5 mL microbuis.
    4. Droog de monsters volledig met een vacuümconcentrator op 40-45 °C gedurende 1 uur en 40 minuten.
      OPMERKING: Gedroogde pellets kunnen enkele weken bij -20 °C worden bewaard (veilige stop).
    5. Sussief elke pellet opnieuw in 400 μL water + 0,1% mierenzuur (eerder bereid). Vortex voorzichtig totdat de pellet volledig is opgelost.
    6. Centrifugeer de monsters opnieuw op 13.000 × g gedurende 20 minuten op 4 °C.
    7. Breng 300 μL supernatant over naar een 2,0 mL schroefbovenbuis voor LC-MS/MS-analyse.

3. LC-MS/MS opstelling en gegevensverzameling

  1. Mobiele fasevoorbereiding en kolomconditionering
    1. Bereid oplosmiddel A voor door ultrazuiver water te mengen met 0,1% mierenzuur.
    2. Bereid oplosmiddel B voor door acetonitril te mengen met 0,1% mierenzuur.
      VOORZICHTIG: Acetonitril is giftig en brandbaar; Aanhouden in een chemische dampkap.
    3. Sonicaer elk oplosmiddel 5 minuten in een ultrasoon bad. Verbind de flessen met de pompmodule en spoel het systeem bij hoge stroom om verontreinigingen te verwijderen.
    4. Installeer een omgekeerde fase BEH C18-kolom (1,7 μm, 2,1 mm × 50 mm).
      OPMERKING: Voor de analyse gebruikte deze studie een Acquity H-klasse chromatografisch systeem gekoppeld aan een Xevo TQS-Micro triple-quadrupole massaspectrometer.
    5. Gebruik een binaire gradiënt bestaande uit oplosmiddelen A en B, beide eerder voorbereid.
    6. Voer de chromatografische gradiënt uit van 5% tot 95% van oplosmiddel B gedurende de eerste 2 minuten, gevolgd door 2 minuten oplosmiddel A voor kolomreiniging en herequilibratie.
    7. Stel de debiet in op 0,2 mL/min gedurende de 4 minuten durende rit. Houd de kolomtemperatuur op 40 °C en injecteer 10 μL van elk monster.
  2. LC-MS/MS-methode opstelling
    1. Open de LC-MS/MS-software. Klik op Bestand > New > MS Method om een nieuwe methode te starten.
    2. Ga naar het tabblad Functie en stel het functietype in op multiple reaction monitoring (MRM). Voer ionovergangen en parameters in Tabel 1 voor VCR en VINB (interne standaard) in.
    3. Stel de verwervingstijd in op 4 minuten. Klik op Aanvullen om op te slaan.
      OPMERKING: Niet langer dan 4 minuten om te zorgen voor een herevenwichtigheid van de kolom tussen de injecties.
    4. Configureer UHPLC-parameters onder Inlet Method > Edit LC Method en sla op als een .mth-bestand (Tabel 2).
    5. Stel bronparameters in onder het tabblad Tune volgens Tabel 3. Sla op als een .tun-bestand.
    6. Sla de volledige methode op: Bestand > Sla op als en exporteer als een .mth-bestand.
  3. Een voorbeeldlijst maken en de run starten
    1. Open in het startscherm van de software Voorbeeldlijst en maak een lijst aan met de namen van de monsters, injectievolumes, buisposities en de te gebruiken methode.
    2. Plaats een flesje met ultrazuiver water in de autosamplerbak en merk het aan als een leeg. Loop de blanke test tussen elke set driedubbele injecties om overdracht te voorkomen.
      OPMERKING: Zorg ervoor dat de kolomdruk (ΔP) stabiel is en minder dan 10 psi voordat de run begint.
    3. Selecteer de gewenste rijen in de Voorbeeldlijst en klik op Run > OK om te beginnen met de gegevensverzameling.

4. Data-analyse

  1. Datavisualisatie en export
    1. Na voltooiing van de run bekijk je chromatogrammen door een sample te selecteren en op Chromatogram te klikken in de bovenste menubalk.
    2. Klik op het startscherm op TargetLynx, selecteer de bestanden die zojuist zijn uitgevoerd en klik op Proces > Selecteer de vincristine-methode > OK om uitvoertabellen te genereren.
    3. Klik op Rapporteer > Exporttabel en sla de verwerkte gegevens op als een .csv of .xlsx bestand.
      OPMERKING: Exporteer ruwe piekgebieden voor zowel de analyte als de interne standaard.
  2. Dataorganisatie en ratioberekening
    1. Open het geëxporteerde bestand en maak de volgende kolommen aan:
      1. Voorbeeld: Voeg de naam van het monster of het flesje toe.
      2. Uitvoeren: Geef aan welke replicatie de waarde overeenkomt.
      3. VCR-gebied: Voer het gebied onder de piek in voor vincristine.
      4. VINB-gebied: Voer het gebied onder de piek in voor vinblastine.
      5. VCR/VINB-verhouding: Normaliseer elke VCR-waarde door deze te delen door de bijbehorende VINB-waarde.
    2. Voeg kolommen toe voor standaarddeviatiewaarden van VCR-oppervlakte, VINB-oppervlakte en VCR/VINB-verhouding voor elke drievoudige set.
      OPMERKING: Normalisatie met de interne standaard maakt correctie mogelijk voor variatie in extractie- of injectievolume.
  3. Resultaten plotten
    1. Open de gewenste grafieksoftware en selecteer het formaat van de Gegroepeerde Tabel .
    2. Kies Invoer of import van gegevens in een nieuwe tabel, en kies onder Opties Voer 3 replicatiewaarden in naast elkaar geplaatste subkolommen.
    3. Plot alleen de genormaliseerde VCR/VINB-verhoudingen voor elke sample, waarbij ruwe oppervlaktewaarden worden weggelaten.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Vertegenwoordigende chromatografische resultaten verkregen na intracellulaire accumulatie-assays met primaire ALL PDX-cellen geïncubeerd met VCR en VINB zijn weergegeven in Figuur 1. Monsters werden bereid met 2,5 × 10 cellen van6 per conditie. Onder de beschreven chromatografische omstandigheden werd de VCR consequent behouden op 2,85 minuten met minimaal matrixeffect, en de piekvorm was symmetrisch en goed opgelost. Deze profielen illustreren het verwachte chromatografisch gedra...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Nauwkeurige beoordeling van intracellulaire geneesmiddelniveaus in primaire leukemische cellen is essentieel voor het begrijpen van geneesmiddelhantering op cellulair niveau en voor het ondersteunen van de ontwikkeling van functionele assays die moleculaire profilering aanvullen. Bestaande analytische benaderingen vereisen vaak grote aantallen cellen, omvatten lange verwerkingsstappen, of vertrouwen op indirecte uitlezingen die de werkelijke intracellulaire beschikbaarheid van chemothera...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs geven geen belangenconflicten aan.

Dankbetuigingen

Wij danken het Centro Infantil Boldrini en alle patiënten die hun monsters voor de studie hebben gedoneerd. Adrielli C. Soares ontving een beurs van de Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES) en van de São Paulo Research Foundation (FAPESP, 2023/18389-3). José A. Yunes ontving een productiviteitsbeurs van de National Counsel of Technological and Scientific Development (CNPq, 308399/2021-8). Dit werk werd ondersteund door onderzoeksfinanciering van het Braziliaanse ministerie van Volksgezondheid via het PRONON-programma (Programa Nacional de Apoio à Atenção Oncológica, NUP 25000.211174/2019-45).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
2.0 mL screw-top vialFlowsupply8-2400Gebreekt met glazen inserts met veer (5 x 29 mm) van hetzelfde bedrijf (Cat. 5-29015)
2.0 mL screw-top vialFlowsupply8-2400Gebreekt met glazen inserts met veer (5 x 29 mm) van hetzelfde bedrijf (Cat. 5-29015)
AcetonitrileMerck (Sigma-Aldrich)100030
AcetonitrileMerck (Sigma-Aldrich)24010152
AIM VThermo Fisher Scientific12055091
Chromatographic system Acquity UPLC H-ClassWaters Co.https://www.waters.com/nextgen/br/pt/products/chromatography/chromatography-systems/acquity-uplc-h-class-plus-system.html?srsltid=AfmBOoo0mjNgaucBI-Exv97cEmWE96_lVkqKi2IR0IPtA-h1feG-WvtW
Countess 3 FLThermo Fisher ScientificA49892
DMSOMerck (Sigma-Aldrich)D 8418
Falcon 50 mLSarstedt62.547.254
Formic acidMerck (Sigma-Aldrich)F0507
Glass bottleMerck (Sigma-Aldrich)41121800
IncubatorPHCBIMCO-50M-PE
MethanolMerck (Sigma-Aldrich)34860
Microtube 1.5 mLEppendorf41121702
Microtube 2.0 mLEppendorf30120094
PBSMerck (Sigma-Aldrich)PPB006
Speevac miVacFisher Scientific56340
The software for data acquisitionWaters Co.MassLynx
Triple quadrupole mass spectrometer Xevo TQ-S microWaters Co.https://www.waters.com/nextgen/us/en/products/mass-spectrometry/mass-spectrometry-systems/xevo-tq-s-micro.html?srsltid=AfmBOoqqmLRNfHGqvtnwaL7xYOOEXPV3NJ9qYNH9HAwqXKXrMvLRQXSW
Ultrasonic SonicatorQuimisQ335D
Vinblastine 1 mg/mLLibbshttps://www.libbs.com.br/nossos-produtos/antineoplasico-faulblastina/Vinblastine sulfate
VincristineCayman Chemicals11764

Referenties

  1. Inaba, H., Pui, C. H. Advances in the diagnosis and treatment of pediatric acute lymphoblastic leukemia. J Clin Med. 10 (9), 1926(2021).
  2. Pui, C. H., et al. Childhood acute lymphoblastic leukemia: progress through collaboration. J Clin Oncol. 33 (27), 2938-2948 (2015).
  3. Gaudichon, J., et al. Mechanisms of extramedullary relapse in acute lymphoblastic leukemia: reconciling biological concepts and clinical issues. Blood Rev. 36, 40-56 (2019).
  4. Dhyani, P., et al. Anticancer potential of alkaloids: a key emphasis on colchicine, vinblastine, vincristine, vindesine, vinorelbine and vincamine. Cancer Cell Int. 22, 206(2022).
  5. Mateus, A., Matsson, P., Artursson, P. Rapid measurement of intracellular unbound drug concentrations. Mol Pharmaceutics. 10 (6), 2467-2478 (2013).
  6. Chien, H. C., et al. Rapid method to determine intracellular drug concentrations in cellular uptake assays: application to metformin in organic cation transporter 1-transfected human embryonic kidney 293 cells. Drug Metab Dispos. 44 (3), 356-364 (2016).
  7. Calcagno, A. M., Ambudkar, S. V. Analysis of expression of drug resistance-linked ABC transporters in cancer cells by quantitative RT-PCR. Methods Mol Biol. 637, 121-132 (2010).
  8. Richter, M., et al. From donor to the lab: a fascinating journey of primary cell lines. Front Cell Dev Biol. 9, 648272(2021).
  9. Borgmann, A., et al. Childhood ALL blasts retain phenotypic and genotypic characteristics upon long-term serial passage in NOD/SCID mice. Pediatr Hematol Oncol. 17 (8), 635-650 (2000).
  10. Rosati, M. M., Corrêa, J. R., de Sousa Mariano, S., Cardoso, A., Andrés Yunes, J. Murine model of leukemia relapse to induction chemotherapy for acute lymphoblastic leukemia. J Vis Exp. (224), e68797(2025).
  11. Dams, R., Huestis, M. A., Lambert, W. E., Murphy, C. M. Matrix effect in bioanalysis of illicit drugs with LC-MS/MS: influence of ionization type, sample preparation, and biofluid. J Am Soc Mass Spectrom. 14 (11), 1290-1294 (2003).
  12. Yang, Y., Cruickshank, C., Armstrong, M., Mahaffey, S., Reisdorph, R., Reisdorph, N. New sample preparation approach for mass spectrometry-based profiling of plasma results in improved coverage of metabolome. J Chromatogr A. 1300, 217-226 (2013).
  13. Zhang, J., Dasgupta, A., Ayala, R., Bonapace, C., Kassim, S., Faustino, P. J. Internal standard variability: root cause investigation, parallelism for evaluating trackability and practical considerations. Bioanalysis. 16 (15), 771-776 (2024).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Intracellulaire vincristinekwantificering van geneesmiddelenpati ntafgeleide xenograftsprote neprecipitatieinterne standaardpediatrische leukemietijdreeksanalyse
Ontwikkeling en standaardisatie van een ex vivo micromethode voor intracellulaire kwantificatie van vincristine in primaire ALLE cellen door LC-MS/MS
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.