Dit werk beschrijft een microfluissue-assay die schuifspanning gebruikt om de vorming van tromben in het bloed te triggeren en karakteriseert de trombus aan de hand van meerdere dimensies van uitlezen. De test kan de protrombische neiging van bloedmonsters meten en is daardoor nuttig voor ziektediagnose, geneesmiddelenontdekking, evenals basismechanistische studies gerelateerd aan trombose.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Thrombus Profiling Assay: Een op microfludiica gebaseerd platform voor het volledig karakteriseren van biomechanische trombogenese
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Trombose is een pathologische aandoening die de abnormale ophoping van bloedplaatjes en stollingsfactoren in een bloedvat beschrijft. Hoewel veel onderzoeken zich richtten op de activatie van bloedplaatjes door oplosbare agonisten als onderliggend mechanisme van trombose, is vaak over het hoofd gezien dat de bloedstroom ook de vorming van trombus bevordert. Vooral in de slagaders wordt trombose meestal geassocieerd met arteriële stenose, die de schuifspanning in de bloedstroom verhoogt en het proces van trombogenese bevordert, een fenomeen dat biomechanische trombogenese wordt genoemd. Lange tijd was er geen bioassay beschikbaar om alomvattende en gedetailleerde inzichten te bieden in het proces van biomechanische trombogenese. Om dit aan te pakken werd een trombusprofieltest ontwikkeld door microfluidica te combineren met meerkleurige fluorescentiebeeldvorming, wat een uitgebreide karakterisering van biomechanische trombogenese mogelijk maakt met zeven metingen die de grootte en samenstelling van de trombus en het activatieniveau van de bloedplaatjes behandelen. Deze trombusprofieltest kan worden gebruikt om de protrombotische neiging bij mensen en de effectiviteit van anti-trombotische middelen te evalueren, en is ook nuttig om de mechanismen achter arteriële trombose beter te begrijpen.
Inleiding
Trombose is een hoofdoorzaak van hart- en vaatziekten en veroorzaakt jaarlijks miljoenen sterfgevallen wereldwijd1. Momenteel is er geen bioassay beschikbaar in standaard klinische omgevingen om het risico op trombose te evalueren. Onder de gecommercialiseerde laboratorium- en point-of-care hematologische functie-assays zijn conventionele stollingsassays en aggregometrie onbetrouwbaar gebleken in het voorspellen van trombose of grote nadelige cardiovasculaire gebeurtenissen 2,3,4. Globale trombosetest5, PFA-100/2006, en globale stollingsassays 7,8,9,10,11 hebben ook beperkte gegevens die hun prestaties ondersteunen.
Op basis van het huidige begrip wordt het proces van trombogenese voornamelijk bijgedragen door drie mechanismen. Naast de twee conventioneel erkende mechanismen, namelijk biochemische bloedplaatjesaggregatie en -stolling, is een derde mechanisme dat onderbelicht en vaak onderschat wordt shear-driven platelet-aggregatie, ook wel "biomechanische plaatjesaggregatie" genoemd. Bij biomechanische plaatjesaggregatie dienen hoge schuifspanning en schuifgradiënt als de belangrijkste drijfveer voor plaatjeskruisbinding via GPIbα-von Willebrand-factor (VWF), integrine αIIbβ 3-VWF, en integrine αIIbβ3-fibrinoeninteracties. Bij arteriële trombose dient biomechanische bloedplaatjesaggregatie waarschijnlijk als het meest essentiële mechanisme, aangezien het sterk wordt versterkt door een hoge schuifstroom veroorzaakt door arteriële stenose. Daarom werd trombogenese, veroorzaakt door biomechanische bloedplaatjesaggregatie, 'biomechanische trombogenese' genoemd.
In eerdere onderzoeken is een veelgebruikte methode om biomechanische bloedplaatjesaggregatie experimenteel te observeren de microfluidische stenose-assay, waarbij een plaats van ernstige stenose in een rechte kanaal wordt ingebed. Wanneer bloed over het kanaal wordt geperst onder een fysiologische wandschuifspanning, ontstaat er pathologisch hoge schuifspanning rond de stenotische plaats, wat de ophoping van bloedplaatjes aandrijft en een trombus vormt. Eerdere onderzoeken gebruikten echter slechts één (voor bloedplaatjes, wat de trombusgrootte weerspiegelt)15,16,17,18,19 of hooguit twee (één voor bloedplaatjes en één voor een andere biomarker) uitlezing13,20, die daardoor niet in staat is een volledige karakterisering van de trombus te bereiken.
Onlangs is een trombusprofielassay ontwikkeld, die meerkleurige fluorescentiebeeldvorming in de microfluidische stenosetest bevat, waarbij realtime tracking van 7 biomarkers wordt bereikt (bloedplaatjes, fibrinogeenniveau, von Willebrand-factorniveau, P-selectine-expressieniveau, fosfatidylserine-blootstellingsniveau, uitgebreide integrine αIIbβ 3-expressieniveau, volledig actieve integrine αIIbβ3 expressieniveau) in een trombus, wat de basis vormt voor een uitgebreide karakterisering van biomechanische trombogenese21. In dit werk worden gedetailleerde protocollen verstrekt over de voorbereiding en uitvoering van de trombusprofileringsassay, evenals de bijbehorende data-analyse. De benodigde hardware voor de test omvat een omgekeerde meerkleurige fluorescentiemicroscoop en een microfluïdisch systeem. De test gebruikt een relatief kleine hoeveelheid menselijk volbloed (minder dan 2 mL), heeft een hoge kosteneffectiviteit (~$12 per monster) en levert resultaten binnen 30 minuten. De assay kan de multidimensionale prothrombotische afwijkingen van individuen nauwkeurig detecteren en de effecten van anti-trombotische middelen evalueren bij het veranderen van de grootte, samenstelling en activatiestatus van de trombocyten, waarmee de brede toepassing voor zowel onderzoek als klinische doeleindenin de toekomst wordt ondersteund. Het is opmerkelijk dat de test vers verzameld hepariniseerd bloed moet gebruiken. Het bewaren van het bloed bij 4 °C of langer dan 6 uur, of het gebruik van antistollingsmiddelen anders dan heparine, voorkomt ofwel de vorming van trombus of geeft onnauwkeurige resultaten.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Dit protocol volgt de richtlijnen van en is goedgekeurd door de Human Research Ethics Committee van de University of Texas Medical Branch. De experimentele hardware-opstelling bestaat uit een microfluidisch apparaat, perfusiecomponenten (connectoren, slangen, spuit en spuitpomp) en een omgekeerde microscoop met optische componenten die helderveld- en meerkleurige fluorescentiebeeldvorming mogelijk maken. Een multi-LED vuurtoren en een multi-pass filterkubus worden in de microscoop gebruikt om 4 fluorescerende kanalen te splitsen met minimale wederzijdse doorloop: excitatie: 391/32, 479/33, 554/24, 638/31, en emissie: 435/30, 519/25, 594/32, 695/58. Draag persoonlijke beschermingsmiddelen, waaronder handschoenen, oogbescherming en een laboratoriumjas, voor alle experimentele procedures. De reagentia en de gebruikte apparatuur worden vermeld in de Materiaaltabel.
1. Voorbereiding van microfludiïdische apparaten
- Ontwerp een mastermal met rechthoekige kanalen (200 μm breed × 50 μm hoog) die een plek met 80% luminale vernauwing bevatten. Elk kanaal heeft speciale inlaten en uitlaten voor buisverbindingen (Figuur 1; zie Aanvullend Bestand 1 voor het oorspronkelijke ontwerpbestand).
- Op basis van het ontwerp gebruik je een siliciumwafer om een SU-8 fotoresist-mastermal te vervaardigen via standaard fotolithografie. Plak de mal vast op de bodem van een 15 cm petrischaal (Figuur 2A).
- Bereid het PDMS-mengsel voor door de prepolymeerbasis en het uithardingsmiddel te mengen in de siliconenelastomeerkit met een gewichtsverhouding van 10:1. Giet het mengsel op de hoofdmal (Figuur 2B).
- Plaats de plaat met het PDMS-mengsel in een vacuümdesiccator om te ontgassen en opgesloten luchtbellen te verwijderen.
OPMERKING: Houd de plaat minimaal 2 uur onder vacuüm totdat de belletjes volledig zijn verwijderd. - Thermisch uitharden van het PDMS-mengsel door het te incuberen bij 75 °C gedurende 2 uur.
- Snijd voorzichtig de uitgeharde PDMS uit de mastermal (Figuur 2C, D) en verdeel deze in afzonderlijke chipunits.
- Maak de inlaat en uitlaat door gaten te ponsen op de aangewezen plekken met een sondenaald (Figuur 2E).
OPMERKING: Gebruik een persluchtreiniger om eventueel restafval uit de geponste gaten te verwijderen. Om oppervlaktevervuiling te minimaliseren, maak je de PDMS-apparaten schoon met lijmafdichtingstape voordat je ze hecht. - Spray in een chemische kap 75% ethanol op een taadoekje en gebruik het natgemaakte taakdoekje om glazen glaasjes schoon te maken en schoon te maken. Laat de glazen dia's drogen.
- In een chemische kap behandel je de glazen slides en PDMS-chips met een hoogfrequente generator voor respectievelijk 30 seconden en 20 s, en lijn je vervolgens elke chip uit met een glazen slide. Druk de chip voorzichtig op het oppervlak van de glazen glijbaan zodat deze kan worden gebonden.
OPMERKING: Deze stap moet in een chemische kap worden uitgevoerd omdat de hoogfrequente generator tijdens gebruik ozon produceert, wat schadelijk is voor de gezondheid. - Verbind de apparaten thermisch door ze 150 °C gedurende 15 minuten te incuberen. Na het afkoelen zijn de apparaten klaar voor gebruik (Figuur 2F).
- Bewaar de apparaten op kamertemperatuur onder stofvrije omstandigheden.
- Gebruik een tang om het plastic deel van de sondenaalden te verwijderen en buig de metalen buizen tot 90°. Deze gebogen buizen zullen worden gebruikt als connectoren voor de microfluidische apparaten.
2. Fluorescentiesensorvoorbereiding
OPMERKING: Het experiment gebruikt in totaal 7 fluorescerende sensoren: SZ22-FITC, fibrinogen-Alexa Fluor 405, 2.2.9-Alexa Fluor 555, AK4-Alexa Fluor 647, Annexin V-Pacific Blue, MBC 370.2-Alexa Fluor 555, PAC-1-Alexa Fluor 647. Hiervan zijn fibrinogen, 2.2.9 en MBC 370.2 alleen commercieel verkrijgbaar in de niet-geconjugeerde vorm en moeten ze fluorescerend geconjugeerd worden in het laboratorium.
- Om fibrinogeen te conjugeren met Alexa Fluor 405:
- Maak een verse 0,1 M natriumbicarbonaatbuffer, pH 8,5.
- Verdun de fibrinogenvoorraad tot 1 mg/mL in fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS; 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 1,8 mM KH2PO4, pH 7,4).
- Voeg 1/10 volume natriumbicarbonaatbuffer toe aan de fibrinogeenoplossing.
- Meng 1 ml fibrinogeen met 1 mg Alexa Fluor 405 NHS-ester en incubeer 1 uur op kamertemperatuur op een rotator. Bescherm tegen licht.
- Verwijder de opslagbuffer uit een zuiveringskolom door de kolom te centrifugeren op 1.100 × g gedurende 2 minuten en verwijder de doorstroom. Laad de reactieoplossing op de kolom, monteer de kolom op een compatibel verzamelflesje en centrifugeer op 1.100 × g gedurende 5 minuten om het fibrinogen-Alexa Fluor 405 te oogsten.
- Gebruik een spectrofotometer om de absorptie te meten bij 280 nm (A280; eiwitsignaal) en 405 nm (A405; kleurstofsignaal) golflengte. Bereken de eiwitconcentratie en de F/P-verhouding (fluorescentie: eiwitmolaire verhouding).
OPMERKING: De F/P-verhouding moet tussen de 8 en 10 liggen. - Bewaar fibrinogen-Alexa Fluor 405 bij 4 °C in het donker.
- Om 2.2.9 en MBC 370.2 antilichamen te conjugeren met Alexa Fluor 555:
- Maak een verse 0,1 M natriumbicarbonaatbuffer, pH 8,5.
- Verdun de antistofvoorraad tot 1 mg/mL in een aminevrije buffer.
- Voeg 1/10 volume natriumbicarbonaatbuffer toe aan de antistofoplossing.
- Meng een antilichaam van 100 μL met 1 flesje (100 μg) Alexa Fluor 555 NHS-ester en incubeer 1 uur bij kamertemperatuur op een rotator. Bescherm tegen licht.
- Verwijder de opslagbuffer uit een zuiveringskolom door de kolom te centrifugeren op 1.100 × g gedurende 2 minuten en verwijder de doorstroom. Laad de reactieoplossing op de kolom, monteer de kolom op een compatibel verzamelvatbuisje en centrifugeer op 1.100 × g gedurende 5 minuten om de 2.2.9- of MBC 370.2-Alexa Fluor 555 te oogsten.
- Gebruik een spectrofotometer om de absorptie te meten bij 280 nm (A280; eiwitsignaal) en 555 nm (A555; kleurstofsignaal) golflengte. Bereken de antilichaamconcentratie en de F/P-verhouding (fluorescentie: antilichaam-molaire verhouding).
OPMERKING: De F/P-verhouding zou in het bereik van 1-1,5 moeten liggen. - Bewaar 2.2.9- en MBC 370.2-Alexa Fluor 555 in 4 °C in het donker.
OPMERKING: Vermijd overetikettering - een hoge F/P-verhouding kan de biologische functie aantasten.
3. Bloedafname van menselijke proefpersonen
OPMERKING: Deze procedure moet worden uitgevoerd door gekwalificeerd medisch personeel (bijv. bevoegde verpleegkundigen, gecertificeerde flebotomisten). Verkrijg ook schriftelijke geïnformeerde toestemming van de deelnemers aan het onderzoek.
- Bereid de spuit voor door 500 μL Tyrode buffer (12 mM NaHCO3, 10 mM Hepes, 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 5,5 mM D-glucose, 0,5% rundereserumalbumine, pH 7,4) te aspireren met 0,32 U/mL heparine per 10 mL bloed dat wordt verzameld.
- Verzamel bloed via venipunctie. Gebruik een lege spuit om de eerste 2 ml bloed op te vangen om weg te gooien. Daarna wissel je over naar de heparine-bevattende spuit om het bloedmonster te verzamelen. Trek de spuit langzaam om de activatie van de bloedplaatjes te minimaliseren.
- Breng het verzamelde bloed over in een 15 mL centrifugebuis en houd deze onder de 37 °C.
OPMERKING: Bloedmonsters moeten binnen 6 uur na afname worden gebruikt voor experimenten.
4. Trombusprofileringsassay
OPMERKING: Het wordt aanbevolen om alle procedures met bloedhantering waar mogelijk in een bioveiligheidskast uit te voeren om bloedvergieten bij de experimentator te voorkomen. Als dit niet mogelijk is, gebruik dan een splash shield op het werkbank.
- Verdun VWF-monomeer tot 2 μg/mL in PBS. Voorcoat de microfluïdische apparaten met VWF-monomeer en incubeer 1 uur bij kamertemperatuur.
- Incubeer het bloedmonster met een fluorescerende sensor Set 1 of 2 gedurende 10 minuten op kamertemperatuur:
- Set 1: SZ22-FITC (0,5 μg/mL), fibrinogeen-Alexa Fluor 405 (60 μg/mL), 2.2.9-Alexa Fluor 555 (1 μg/mL), AK4-Alexa Fluor 647 (1 μg/mL).
- Set 2: SZ22-FITC (0,5 μg/mL), Annexin V-Pacific Blue (1 μg/mL), MBC 370.2-Alexa Fluor 555 (1 μg/mL), PAC-1-Alexa Fluor 647 (1 μg/mL).
OPMERKING: Omdat twee sensorsets afzonderlijk moeten worden gebruikt, moet elk bloedmonster minstens twee keer worden getest (eenmaal met sensor Set 1 en één keer met sensor Set 2) om een volledige dataset te verkrijgen.
- Verbind een microfluïdisch apparaat met inlaat- en uitlaatconnectoren en slangen. Verbind het andere uiteinde van de inlaatconnector met een buisje met PBS, en het andere uiteinde van de uitlaatconnector met een spuit. Bevestig de spuit op een spuitpomp. Bevestig het microfluïdisch apparaat op een omgekeerde microscoop en manoeuvreer handmatig de trap om de plaats van stenose onder de microscoop te vinden (Figuur 3A).
- Vul het microfluidische kanaal en de slang met PBS met behulp van de spuitpomp bij een debiet van 0,5 mL/min. Zorg ervoor dat er geen luchtbellen aanwezig zijn rond de plaats van de stenose.
- Verbind de inlaatbuis met het bloedmonster en perfusie het bloedmonster via het microfluidische kanaal met behulp van de spuitpomp met een debiet van 0,018 mL/min (Figuur 3A).
- Stel de belichtingstijd en versterking van elk fluorescentiekanaal in. Voer realtime multikleurige fluorescentiebeeldvorming uit door af te wisselen tussen de 4 kanalen, waarbij één soort fluorofoor tegelijk wordt excgereciteerd. Ondertussen vind je het focusvlak van de trombus en registreer je signalen op de plaats van stenose, meestal 15-30 minuten (Figuur 4).
OPMERKING: De belichtingstijd van elk kanaal moet worden aangepast zodat het fluorescerende signaal gemakkelijk te onderscheiden is zonder verzadiging (Figuur 4). In het huidige systeem geven gezonde proefpersonen doorgaans het volgende signaalintensiteitsbereik binnen de gevormde trombus: SZ22-FITC, 70-110; fibrinogen-Alexa Fluor 405, 60-100; 2.2.9-Alexa Fluor 555, 70-110; AK4-Alexa Fluor 647, 45-75; Annexin V-Pacific Blue, 35-65; MBC 370.2-Alexa Fluor 555, 45-85; PAC-1-Alexa Fluor 647, 10-30. Opmerkelijk is echter dat een klein deel van gezonde proefpersonen een niet-typische uitslag zou geven. Daarom wordt aanbevolen om ten minste 5 gezonde proefpersonen bloedmonsters te testen om zeker te zijn dat de blootstellingstijd voor elk kanaal correct is gekozen.
5. Data-analyse
- Open het databestand met ImageJ 1.53 (Fiji, National Institutes of Health).
OPMERKING: Elk bestand moet in totaal 4 video's van 4 verschillende kanalen bevatten. De volgende procedure is over het algemeen toepasbaar op elk tijdstip waarin de gebruiker geïnteresseerd is in analyse. - Gebruik het SZ22-FITC-kanaal om de contour van de trombus te identificeren en gebruik 'Polygonselecties' om ruwweg het oppervlak van de trombus te selecteren (Figuur 5A,B).
- Voor elk kanaal gebruik je Image -> Adjust -> Threshold om de achtergrond te elimineren (Figuur 5C), en gebruik vervolgens Analyze -> Measure om het oppervlak en de gemiddelde intensiteit van het signaal binnen de trombus te meten.
OPMERKING: SZ22-FITC kleurt bloedplaatjes en weerspiegelt daarmee de grootte van de tromben. In Set 1 weerspiegelt fibrinogen-Alexa Fluor 405 het verrijkingsniveau van fibrinogeen, 2.2.9-Alexa Fluor 555 het von Willebrand-factor (VWF) verrijkingsniveau, en AK4-Alexa Fluor 647 weerspiegelt de expressie van P-selectie. In Set 2 weerspiegelt Annexine V-Pacific Blue fosfatidylserine (PS) blootstelling, MBC 370.2-Alexa Fluor 555 integrine αIIbβ3 activatie van de uitgebreide conformatie (E+ αIIbβ3), en PAC-1-Alexa Fluor 647 integrine αIIbβ3 volledige activatie (Act. αIIbβ3)21.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De trombusprofileringsassay perfuseert bloed via een stenotisch kanaal om door schuif aangedreven trombusvorming mogelijk te maken, en voert realtime meerkleurige fluorescentiebeeldvorming uit om multidimensionale informatie over de gevormde trombus te verzamelen. Door experimenten uit te voeren met zowel Set 1- als Set 2-sensoren, zou men de trombus moeten kunnen karakteriseren in aspecten zoals grootte, verrijking van crosslinking-eiwitten (von Willebrand-factor, fibrinogen), evenals h...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Door de microfluidische stenosetest te combineren met meerkleurige fluorescentiebeeldvorming, biedt de trombusprofieltest een handige en krachtige methode om biomechanische trombogenese en plaatjesmechanobiologie te bestuderen. Ondertussen is de assay nuttig in een breed scala aan toepassingen. Zo kan het bijvoorbeeld worden gebruikt om anti-trombotische middelen te screenen die specifiek de biomechanische plaatjesaggregatie remmen, waarbij het moleculaire doelwit en werkingsmechanisme k...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben geen belangenconflicten om te melden.
Dankbetuigingen
Onderzoek gerelateerd aan dit artikel en de ontwikkeling van de trombusprofieltest in het Chen-laboratorium werden ondersteund door een subsidie van het National Heart, Lung, and Blood Institute R00HL153678 (Y.C.), National Institute on Aging, de Claude D. Pepper Older Americans Independence Center Award #P30-AG024832 (Y.C.), UTMB Team Science Pilot Research Award (Y.C.), American Heart Association Postdoctoral Fellowship 20POST35080023 (Y.C.), en American Heart Association Transformational Project Award 25TPA1471420 (Y.C.). Dit werk werd deels uitgevoerd bij de San Diego Nanotechnology Infrastructure (SDNI) van UCSD, een lid van de National Nanotechnology Coordinated Infrastructure, die wordt ondersteund door de National Science Foundation (Grant ECCS-2025752).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 10-mL spuiten | Henke Sass Wolf | 5100-X00V0 | Bloedmonsterverzameling |
| 15-mL falcon buizen | Genesee Scientific | 28-101 | Bloedmonsteropslag |
| 1-mL gasdicht glazen spuit | Hamilton | 81331 | Hardware assemblage |
| 2.2.9 | MERU VasImmune | Thrombuskleuring | |
| 20 X1/2 Proefnaalden | McMaster-Carr | M919 | Maken van PDMS-apparaten |
| 20-mL spuiten | Henke Sass Wolf | 5200-X00V0 | Bloedmonsterverzameling |
| 70% ethanol | Sigma-Aldrich | EX0281-1 | Ontsmetting van gasdichte spuiten en reiniging van glasplaatjes |
| AK4-Alexa Fluor 647 | BioLegend | 304918 | Thrombuskleuring |
| Alexa Fluor 405 NHS Ester | Invitrogen | A30000 | Fibrinogeenlabeling |
| Alexa Fluor 555 antilichaam labelset | Invitrogen | A88065 | MBC 370.2 en 2.2.9 labelen |
| Annexin V-Pacific Blue | Invitrogen | 501121505 | Thrombuskleuring |
| Reinigingsduster | Office Depot | 911245 | Maken van PDMS-apparaten |
| Craft Hobbymesjesset met houten doos | Excel Blades | 44282 | Maken van PDMS-apparaten |
| De-ioniseren water | ThermoFisher Scientific | 751-628 | Spoelen van gasdichte spuiten |
| Desiccator | Bel Art | F420270000 | Degassing van PDMS |
| Wegneembare multifunctionele laboratoriumschouderblad | LevGo | 17211 | Mengen van de siliconenelastomeerbasis en het uithardingsmiddel |
| Spinkolom voor kleurstoffen en biotine verwijdering | Zeba | A44296S | Fibrinogeenlabeling |
| Fibrinogeen | Innovative Research | IHUFBG25MG | Thrombuskleuring |
| Fusion 200-X spuitpomp | Chemyx Inc. | 0720X | Hardware assemblage |
| Heparine | Sigma-Aldrich | H3149 | Anticoagulatie van bloedmonsters |
| Hoogfrequent generator | Electro-technic product Inc. | BD-20 | Maken van PDMS-apparaten |
| Menselijke VWF monomer | Sino Biological Inc. | 10973-H08C | Microfluidische apparaatcoating |
| Image J v1.53 software | Fiji, National Institute of Health | Gegevensanalyse | |
| Omgekeerde microscoop | Leica | DM IL LED; filter kubus: Leica DFT51010; vuurtoren: LED5 | Hardware assemblage |
| Kimwipes | Kimberly- Clark Professional | 34120 | Reiniging van glasplaatjes |
| Luer lock-doppen | International Medical Industries, Inc. | 57100B | Bloedmonsterverzameling |
| MBC 370.2 | Kerafast | EBW104 | Thrombuskleuring |
| Microscoop dekglasjes | Paul Marienfeld GmbH & Co. KG | ES0107222 | Maken van PDMS-apparaten |
| Mini-Razor Blade Scraper | Stanley | 28-100 | Maken van PDMS-apparaten |
| NanoDrop 2000 UV-Vis Spectrofotometer | Thermo Scientific | ND-2000 | Eiwitconcentratie en F/P verhoudingsmeting |
| Oven | Lab-Line Instruments | 3512 | Maken van PDMS-apparaten |
| PAC-1-Alexa Fluor 647 | BioLegend | 362806 | Thrombuskleuring |
| Kunststof beker | ThermoFisher Scientific | S04589 | Mengen van de siliconenelastomeerbasis en het uithardingsmiddel |
| SU-8 fotoresist master mal | UC San Diego Nano3 Nanofabrication Cleanroom Facility | Maken van PDMS-apparaten | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Krayden Dow | DC4019862 | PDMS |
| SZ22-FITC | Beckman Coulter | IM 1756U | Thrombuskleuring |
| Slang | Cole -Palmer Instrument Co. | 06422-01 | Hardware assemblage |
Referenties
- Lindstrom, M., et al. Global burden of cardiovascular diseases and risks collaboration, 1990-2021. J Am Coll Cardiol. 80 (25), 2372-2425 (2022).
- Lim, H. Y., O'malley, C., Donnan, G., Nandurkar, H., Ho, P. A review of global coagulation assays - is there a role in thrombosis risk prediction. Thromb Res. 179, 45-55 (2019).
- Paniccia, R., Priora, R., Liotta, A. A., Abbate, R. Platelet function tests: A comparative review. Vasc Health Risk Manag. 11, 133-148 (2015).
- Zhang, Y., Jiang, F., Chen, Y., Ju, L. A. Platelet mechanobiology inspired microdevices: From hematological function tests to disease and drug screening. Front Pharmacol. 12, 779753(2021).
- Gorog, D. A., et al. First direct comparison of platelet reactivity and thrombolytic status between Japanese and Western volunteers: Possible relationship to the "Japanese paradox". Int J Cardiol. 152 (1), 43-48 (2011).
- Gorog, D. A., Becker, R. C. Point-of-care platelet function tests: Relevance to arterial thrombosis and opportunities for improvement. J Thromb Thrombolysis. 51 (1), 1-11 (2021).
- Lopez-Jaime, F. J., et al. Clot stiffness measured by seer sonorheometry as a marker of poor prognosis in hospitalized COVID-19 patients. Clin Appl Thromb Hemost. 28, 10760296221112085(2022).
- Bochsen, L., Wiinberg, B., Kjelgaard-Hansen, M., Steinbruchel, D. A., Johansson, P. I. Evaluation of the TEG platelet mapping assay in blood donors. Thromb J. 5, 3(2007).
- Lipets, E. N., Ataullakhanov, F. I. Global assays of hemostasis in the diagnostics of hypercoagulation and evaluation of thrombosis risk. Thromb J. 13 (1), 4(2015).
- Thromboelastography loinc code 67790-6. , LOINC Committee. (2022).
- Volod, O., Viola, F. The quantra system: System description and protocols for measurements. Methods Mol Biol. 2663, 743-761 (2023).
- Nesbitt, W. S., et al. A shear gradient-dependent platelet aggregation mechanism drives thrombus formation. Nature Medicine. 15 (6), 665-673 (2009).
- Chen, Y., et al. An integrin alphaiibbeta3 intermediate affinity state mediates biomechanical platelet aggregation. Nat Mater. 18 (7), 760-769 (2019).
- Li, M., Hotaling, N. A., Ku, D. N., Forest, C. R. Microfluidic thrombosis under multiple shear rates and antiplatelet therapy doses. PLoS One. 9 (1), e82493(2014).
- Colace, T. V., Diamond, S. L. Direct observation of von Willebrand factor elongation and fiber formation on collagen during acute whole blood exposure to pathological flow. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (1), 105-113 (2013).
- Westein, E., et al. Atherosclerotic geometries exacerbate pathological thrombus formation poststenosis in a von Willebrand factor-dependent manner. Proc Natl Acad Sci USA. 110 (4), 1357-1362 (2013).
- Brazilek, R. J., et al. Application of a strain rate gradient microfluidic device to von Willebrand's disease screening. Lab Chip. 17 (15), 2595-2608 (2017).
- Tovar-Lopez, F. J., et al. A microfluidics device to monitor platelet aggregation dynamics in response to strain rate micro-gradients in flowing blood. Lab Chip. 10 (3), 291-302 (2010).
- Kim, D. A., Ku, D. N. Structure of shear-induced platelet aggregated clot formed in an in vitro arterial thrombosis model. Blood Adv. 6 (9), 2872-2883 (2022).
- Receveur, N., et al. Shear rate gradients promote a bi-phasic thrombus formation on weak adhesive proteins, such as fibrinogen, in a vwf-dependent manner. Haematologica. 105 (10), 2471-2483 (2020).
- Din, M., et al. Multi-parametric thrombus profiling microfluidics detects intensified biomechanical thrombogenesis associated with hypertension and aging. Nat Commun. 15, 9067(2024).
- Stein, P. D., Sabbah, H. N. Measured turbulence and its effect on thrombus formation. Circ Res. 35 (4), 608-614 (1974).
- Mahalingam, A., et al. Numerical analysis of the effect of turbulence transition on the hemodynamic parameters in human coronary arteries. Cardiovasc Diagn Ther. 6 (3), 208-220 (2016).
- Thomson, E. E., et al. Gigapixel imaging with a novel multi-camera array microscope. Elife. 11, e74988(2022).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
