Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Generatie en genetische manipulatie van menselijke cervicale organoïden

736 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/69617

⸱

10 maart 2026

 ,  ,  , 
1Department of New Biology, DGIST, 2Department of Obstetrics and Gynecology, Kyungpook National University Chilgok Hospital, 3Clinical Omics Institute, Kyungpook National University, 4Department of Obstetrics and Gynecology, Kyungpook National University School of Medicine, 5New Biology Research Center, DGIST, 6Graduate Program in Biomedical Science & Engineering, DGIST

In dit artikel

Samenvatting

We presenteren een gedetailleerd protocol om menselijke cervicale organoïden vast te stellen en genetisch te manipuleren.

Samenvatting

Baarmoederhalskanker is de vierde meest voorkomende kanker bij vrouwen en treft het vaakst de baarmoederectocervix. De baarmoederectocervix is bekleed met gelaagd plaveiselepitheel, bestaande uit basale cellen en differentiërende parabasale en suprabasale cellen. De regeneratie die na cervicale conisatie is waargenomen, wijst op de aanwezigheid van robuuste stamcelactiviteit. Ons begrip van de identiteit en regulerende mechanismen van cervicale stamcellen en hun kwaadaardige transformatieproces is echter beperkt door de beperkte toegang tot menselijk cervixweefsel en het ontbreken van optimale systemen om stamcelactiviteit in de baarmoederectocervix te beoordelen. Recent gevestigde menselijke cervicale organoïden kunnen helpen deze beperkingen te overwinnen en nieuwe mogelijkheden bieden om de cervicale fysiologie en pathologie te bestuderen. Er bestaat echter geen gestandaardiseerde methode om menselijke cervicale organoïden te isoleren en vast te stellen. Hier beschrijven we een methode voor het vestigen van menselijke ectocervicale organoïden. Specifiek presenteren we een protocol om individuele cellen te isoleren uit het menselijke ectocervicale epitheel. Door cervixweefsel te incuberen in een geoptimaliseerde enzymoplossing, pellen we het cervicale epitiheel af om de celopbrengst te maximaliseren en fibroblastbesmetting te minimaliseren. We beschrijven verder de voorwaarden voor het cultiveren van menselijke cervicale organoïden met behulp van een geoptimaliseerde mediumformulering. Daarnaast beschrijven we de procedures voor het doorgeven en genetisch manipuleren van cervicale organoïden. Dit protocol biedt een zeer efficiënte aanpak voor het vestigen van menselijke cervicale organoïden en het gebruik ervan om cervicale stamcellen en ziekten te bestuderen.

Inleiding

De baarmoeder ectocervix is de meest voorkomende plek voor baarmoederhalskanker 1,2. Hoewel baarmoederhalskanker is afgenomen sinds de introductie van het humaan papillomavirus (HPV)-vaccin in ontwikkelde landen, blijft het wereldwijd nog steeds de vierde meest voorkomende kanker onder vrouwen 3,4. Ook blijft de incidentie van cervicale voorstadia toenemen in sommige landen 5,6. Hoewel laaggradige plaveiselachtige intraepitheliale laesie (LSIL) vaak vanzelf terugvalt, brengt hooggradige plaveiselachtige intraepitheliale laesie (HSIL) een risico met zich mee op progressie tot invasieve kanker en vereist meestal chirurgische ingreeps, zoals excisie of conisatie. Deze procedures kunnen de ectocervix verkorten en het risico op miskraam of vroeggeboorte verhogen 7,8. Een dieper begrip van de cervicale biologie, gecombineerd met de ontwikkeling van regeneratieve therapie, kan helpen deze uitdagingen aan te pakken, maar vereist robuuste en fysiologisch relevante modelsystemen.

Diermodellen hebben ons begrip van cervicale homeostase, ziektemechanismen en therapeutische strategieën aanzienlijk vergroot. Hun inherente verschillen met menselijke biologie en pathologie beperken echter hun translationele waarde. Als alternatief zijn organoïden naar voren gekomen als krachtige platforms voor het modelleren van menselijke biologie en ziekten. Organoïden zijn stamcel-afgeleide driedimensionale microstructuren die de histologie en moleculaire signaturen van hun herkomstweefselherhalen. Ze zijn ingezet om diverse menselijke weefselstamcellen te identificeren in meerdere weefsels, waaronder de luchtpijp, slokdarm en baarmoederhals 12,13,14. Bovendien maken organoïden genetische manipulatie mogelijk, waardoor de pathogenese van diverse ziekten kan worden gemodelleerd, waaronder kankers en fibrose 15,16,17. Daarnaast dienen organoïden als een effectief platform voor het screenen van de effectiviteit en toxiciteit van geneesmiddelen of celtherapieën 18,19,20,21.

Onlangs hebben twee onafhankelijke groepen menselijke cervicale organoïde systemen vastgesteld22,23. Voortbouwend op deze vooruitgang verbeterden we de efficiëntie van cervicale organoïde kweek aanzienlijk en identificeerden we menselijke cervicale stamcellen13. Bovendien hebben we, door het cervicale epitheel af te pellen, de inclusie van fibroblasten onder het cervicale epitheel geminimaliseerd. Door het gebruik van cervicale organoïden met genetische manipulatie hebben we de rol van microbiële metabolieten en hun downstream-routes blootgelegd bij het handhaven van cervixhomeostase en het voorkomen van precancereuze progressie. Daarom zal een gestandaardiseerd en geoptimaliseerd protocol voor het genereren, onderhouden en genetisch modificeren van cervicale organoïden dienen als een essentieel hulpmiddel om de cervixbiologie en -pathologie te bestuderen.

In dit artikel presenteren we een gedetailleerd en geoptimaliseerd protocol voor het genereren en doorgeven van menselijke cervicale organoïden. We beschrijven ook een protocol voor hun genetische manipulatie via elektroporatie.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Celisolatie en organoïdekweek met menselijke baarmoederhalsweefsels zijn goedgekeurd en uitgevoerd in overeenstemming met alle relevante ethische voorschriften door de interne beoordelingscommissies van DGIST, Daegu, Korea en Chilgok Kyungpook National University Hospital, Gyeongsangbuk-do, Korea (DGIST-20210401-BR-112-01 en KNUCH-2020-12-020-001). Menselijke ectocervicale weefsels werden geleverd door de afdeling Verloskunde en Gynaecologie van het Chilgok Kyungpook National University Hospital. Gezonde cervicale weefsels werden verkregen van patiënten die een totale laparoscopische hysterectomie ondergingen voor hun goedaardige baarmoederziekten. Alle patiënten hebben geïnformeerde toestemming verkregen.

1. Enkelcelisolatie uit ectocervicale weefsels

OPMERKING: Dit protocol begint met een biopsie van een biopsie van ongeveer 5 mm × 5 mm × 5 mm (Figuur 1).

  1. Plaats het gebiopteerde weefsel in een petrischaal van 10 cm en was het één keer met ijskoude DPBS (zonder calcium en magnesium) om bloed en vuil te verwijderen.
    OPMERKING: Menselijk baarmoederhalsweefsel werd binnen 3 uur na de operatie naar het laboratorium gebracht in ijskoude Advanced DMEM/F12 en direct na aankomst verwerkt.
  2. Breng het weefsel over naar een 1,5 mL buis met 1 mL Dispase-oplossing (2,4 U/mL) en incubeer 1 uur bij 37 °C met zachte beweging op een buisrotator (20 rpm).
    OPMERKING: De Dispase-oplossing (2,4 U/mL) werd direct voor gebruik vers bereid door Dispasepoeder op te lossen tot de werkconstante in ijskoude DPBS.
  3. Breng het monster over in een nieuwe petrischaal van 10 cm. Scheid voorzichtig de witte epitheellaag van de rest van het weefsel met een pincett.
  4. Gebruik scherpe pincetten om het epitheeloppervlak voorzichtig los te maken als een intact lak. Breng de geïsoleerde epitheellaag onmiddellijk over in een 50 mL kegelvormige buis die op ijs wordt gehouden.
    OPMERKING: Als het oppervlakte-epitheel niet gemakkelijk kan worden afgepeld, schraap dan het oppervlak met een stompe pincett.
  5. Voeg 1 ml van een recombinante trypsine-gebaseerde dissociatieoplossing toe aan het gepelde of geschraapte monster en breng het hele mengsel over in een 50 mL conische buis.
  6. Bewaar het resterende weefsel van de vorige stap in de andere 50 mL conische buis.
  7. Incubeer de 50 mL conische buis met cerviciaal epitheel bij 37 °C gedurende 5 minuten met zachte beweging op een buisrotator (20 rpm).
  8. Voeg 10 ml vers bereide ijskoude Blocking Buffer (PBS met 2% rundvleesserum (BCS)) toe aan de celsuspensie om de enzymatische reactie te stoppen.
  9. Centrifugeer de buis op 450 × g gedurende 5 minuten bij 4 °C. Verwijder het supernatant voorzichtig en gooi het weg.
    OPMERKING: Als er zichtbaar bloed wordt gezien in het gedissocieerde weefsel of het weefsel plakkerig lijkt, ga dan door met de volgende stap. Anders kun je naar stap 1.13 gaan.
  10. Voeg 1 mL 1X RBC-lysisbuffer en 20 μL DNase (10 U/μL voorraad) toe aan de pellet. Incubeer 5 minuten op kamertemperatuur om rode bloedcellen te lyseren en plakkerig DNA af te breken.
  11. Voeg 10 mL ijskoude Blocking Buffer (PBS met 2% rundvleesserum (BCS)) toe aan de celsuspensie om de enzymatische reactie te stoppen.
  12. Centrifugeer de buis op 450 × g gedurende 5 minuten bij 4 °C. Verwijder het supernatant voorzichtig en gooi het weg.
  13. Was de celpellet met ijskoude Blocking Buffer (PBS met 2% rundvleesserum (BCS)).
  14. Centrifugeer de buis op 450 × g gedurende 5 minuten. Verwijder het supernatant voorzichtig en gooi het weg.
  15. Sussief de celpellet opnieuw in 200-500 μL organoïde kweekmedium.
  16. Tel het celaantal met een hemocytometer en trypan blue oplossing. De verwachte celopbrengst ligt tussen de 50.000 en 500.000 cellen per biopsiemonster.

2. Ectocervicale organoïde zaaien en cultuur

  1. Sussen 500-2.000 levensvatbare cellen opnieuw in een eindvolume van 50 μL organoïde kweekmedium (samenstelling beschreven in de materiaallijst) in een microcentrifugebuis van 1,5 mL. De levensvatbaarheid van cellen werd beoordeeld door trypan blue uitsluiting vóór het zaaien.
  2. Voeg 50 μL van een basalmmembraanmatrix (bijv. matrigel) toe aan de celsuspensie. Meng voorzichtig op ijs om bubbelvorming te voorkomen en doseer het 100 μL mengsel in de binnenkant van een celkweekinzet die in een 24-wells plaat wordt geplaatst. Alle procedures waarbij basale membraanmatrix werd behandeld, werden uitgevoerd op ijs of bij 4 °C om voortijdige gelatie te voorkomen, tenzij anders gespecificeerd.
  3. Incubeer de plaat 20-30 minuten bij 37 °C totdat het basale membraanmatrix-celmengsel is gestold.
  4. Zodra het mengsel is gestold, voeg je 400 μL organoïde kweekmedium toe aan de put onder de insert.
  5. Kweek de organoïden 1-2 weken totdat ze een gemiddelde diameter van 150-250 μm bereiken (de maximale diameter is ongeveer 500 μm).
    OPMERKING: Wanneer de organoïden een geschikte grootte bereiken en het concentrische lamellaire patroon van uienschil-achtige microstructuren vertonen, overweeg indien nodig passasie.

3. Organoïde dissociatie en herzaaiing

  1. Voeg 1 ml Dispase-oplossing (2,4 U/mL) toe bovenop de celkweekinzet en dissocieer voorzichtig de basale membraanmatrix met een pipet.
  2. Breng het dispase-basaal membraanmatrixmengsel over in een 15 mL buis en incubeer 1 uur bij 37 °C.
  3. Voeg 10 ml vers bereide ijskoude Blocking Buffer (PBS met 2% rundvleesserum (BCS)) toe aan de celsuspensie om de enzymatische reactie te stoppen.
  4. Centrifugeer de buis op 450 × g gedurende 5 minuten bij 4 °C.
  5. Verwijder het supernatant en suspendeer de pellet opnieuw in 200 μL TrypLE Express.
  6. Incubeer 5 minuten op 37 °C.
  7. Voeg 1 ml ijskoude blokkeringsbuffer toe (PBS met 2% rundkalfserum (BCS)) en pipetteer voorzichtig om het enzym te neutraliseren.
  8. Filter de suspensie door een 40 μm celfilter om losse cellen te verkrijgen.
  9. Centrifugeer de buis op 450 × g gedurende 5 minuten bij 4 °C. Verwijder het supernatant voorzichtig en gooi het weg.
  10. Sussief de celpellet opnieuw in 200-500 μL organoïde kweekmedium.
  11. Tel het celaantal met een hemocytometer en trypan blue oplossing. De verwachte celopbrengst ligt tussen de 50.000 en 500.000 cellen per put van een 24-put celcultuurinsert.
  12. Vervolgens worden 500-2.000 cellen opnieuw opgehangen in 50 μL organoïde kweekmedium (samenstelling beschreven in de materiaallijst). Voeg 50 μL basalmembraanmatrix toe aan de celsuspensie. Meng voorzichtig, vermijd bubbelvorming en doseer het 100 μL mengsel in het interieur van een celkweekinzet die in een 24-wells plaat is geplaatst.
  13. Incubeer de plaat 20-30 minuten bij 37 °C totdat het basale membraanmatrix-celmengsel is gestold.
  14. Zodra het mengsel volledig is gestold (meestal na 20-30 minuten bij 37 °C), voeg je 400 μL organoïde kweekmedium toe aan de put onder het insert.
  15. Kweek de organoïden gedurende 1-2 weken in organoïde kweekmedium (samenstelling beschreven in de materiaallijst) met behulp van een 3D extracellulaire matrix-ingebedde methode. Houd de culturen op 37 °C, 5% CO₂ in een bevochtigde broedmachine. Vervang het medium elke 2-3 dagen en monitor de groei totdat organoïden een gemiddelde diameter van 150-250 μm bereiken.
  16. Voer de organoïden door voor de volgende ronde wanneer ze een geschikte grootte hebben bereikt en vertoon indien nodig het concentrische lamellaire patroon van uienschilachtige microstructuren.

4. Genetische manipulatie van menselijke cervicale organoïden door elektroporatie

OPMERKING: Dit protocol is gebaseerd op het gebruik van een Lonza Amaxa 4D-Nucleofector en de P4 Primary Cell 4D-Nucleofector X Kit (#V4XP-4032).

  1. Na isolatie uit menselijke cervixcelsuspensie, breng je 100.000-200.000 cellen over naar elke 1,5 mL buis.
  2. Centrifugeer de buizen op 450 × g gedurende 3 minuten bij 4 °C. Verwijder het supernatant voorzichtig en gooi het weg.
  3. Suspendeer de celpellet opnieuw in 20 μL van het Nucleofector Solution/Supplement-mengsel uit de P4 Primary Cell 4D-Nucleofector X Kit. Het mengsel wordt bereid door 16,4 μL nucleofectoroplossing en 3,6 μL supplement per buis te combineren.
  4. Voeg 300 nM aan controle- of doel-siRNA-oligo toe aan elke buis met de resuspendeerde cellen. Meng voorzichtig door te pipetteren.
    OPMERKING: Het volume van het siRNA-oligo mag niet meer dan 2 μL per buis overschrijden.
  5. Breng voorzichtig het nucleofectiemengsel (20 μL cellen geresuspendeerd in een nucleofectoroplossing/supplementmengsel + maximaal 2 μL siRNA; totaal 20-22 μL) over in de elektroporatiecuvettevaten van de P4 primaire cel 4D-nucleofector X kit.
  6. Tik voorzichtig op de nucleocuvettevaten om ervoor te zorgen dat het monster de onderkant van de cuvette bedekt.
  7. Sluit het deksel van de Nucleocuvette Vessels en plaats het in de retainer van een ingeschakelde 4D-Nucleofector-eenheid.
    OPMERKING: Zorg voor de juiste oriëntatie van de nucleokuvettevaten in de retainer.
  8. Start het nucleofectieproces. Stel de EA-125 pulscode in voor elke cuvette met het P4 primaire celproces.
  9. Na voltooiing verwijder je voorzichtig de Nucleocuvette Vessels uit de retainer.
  10. Incubeer de nucleocuvettevaten op kamertemperatuur gedurende 10 minuten om de cellen te laten stabiliseren.
  11. Open het deksel van de nucleocuvettevaten, voeg 180 μL 37 °C voorverwarmd organoïdekweekmedium toe aan elke cuvet, en breng de celsuspensie voorzichtig over in een nieuwe 1,5 mL buis voor heropsuspensie.
  12. Neem een volume celsuspensie met 500-2.000 cellen en hersuspendeer dit in organoïde kweekmedium tot een eindvolume van 50 μL.
    OPMERKING: Gooi de resterende cellen uit stap 4.12 niet weg. Ze worden gebruikt in stap 4.14.
  13. Kweken de organoïden door het protocol van Methode 2 te volgen: Ectocervix Organoïde Zaaien en Kweeken. Vergelijk de effecten van het siRNA door verschillende factoren te beoordelen, waaronder het aantal, de grootte en structuur van de resulterende organoïden.
  14. Doseer de resterende cellen uit stap 4.12 in een 96-well ultralow attachment plate en incubeer 48 uur bij 37 °C.
  15. Na 48 uur breng je de cellen over in een buis van 1,5 mL en centrifugeer je op 450 × g gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg.
  16. Gebruik de celpellet voor realtime PCR-experimenten om de knockdown van de doelgenen te bevestigen en om eventuele veranderingen in genexpressie te beoordelen.
    OPMERKING: Alle menselijke baarmoederhalsweefsels en celsuspensies moeten worden behandeld als mogelijk besmettelijk materiaal. Voer alle procedures uit met primaire menselijke monsters in een gecertificeerde bioveiligheidskast volgens BSL-2 praktijken en in overeenstemming met institutionele ethische en bioveiligheidsvoorschriften. Draag geschikte persoonlijke beschermingsmiddelen (labjas, handschoenen en oogbescherming) en desinfecteer werkoppervlakken en apparatuur na gebruik met een door de instelling goedgekeurd desinfectiemiddel. Enzymatische reagentia (bijv. dispase- en dissociatie-enzymen zoals TrypLE Express) kunnen huid- en oogirritatie veroorzaken en aerosolen produceren tijdens pipetten; Vermijd de vorming van aerosolen, houd buisjes waar mogelijk dicht en spoel direct met water bij contact, terwijl je de instellingen en de SDS-richtlijnen van de fabrikant volgt. Voer al het biologische afval (inclusief matrixhoudende materialen en besmette kunststoffen) af volgens de richtlijnen van de instelling. Voor siRNA-elektroporatie volgt u de elektrische veiligheidsinstructies van de fabrikant: zorg dat cuvetten correct zitten en het deksel volledig gesloten is voordat pulsen worden gestart, vermijd het gebruik van het apparaat met natte handschoenen of bijna-mors, inspecteer het apparaat en accessoires op schade, en vermijd direct contact met de cuvetelektroden direct na het pulseren.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

3D-cultuur van de cervicale organoïde bij mensen

Vers geïsoleerde menselijke ectocervicale weefsels werden in de hierboven genoemde volgorde gedissocieerd tot enkele cellen, die vervolgens werden geplateerd bovenop 24-wells celkweekinserts en gekweekt om cervicale organoïden te vormen zoals beschreven in dit protocol (Figuur 1). Menselijke cervicale organoïden groeien tot 500 μm in diameter vanuit enkele cellen ge...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

In dit manuscript beschrijven we het protocol voor het vestigen en doorgeven van menselijke cervicale organoïden. We bieden ook een protocol voor genetische manipulatie ervan, wat de studie van de cervicale biologie en pathologie aanzienlijk vooruit helpt. Hoewel we het protocol specifiek hebben geoptimaliseerd voor menselijke baarmoederhalsorganoïden, kan ons protocol met kleine aanpassingen worden toegepast op andere organoïdesystemen.

De essentiële informat...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

Geen enkele

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door een subsidie van het Ministerie van Volksgezondheid en Welzijn (RS-2024-00439434 voor Y. Jeong).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
P4 Primary Cell 4D-Nucleofector X KitLonzaV4XP-4032
96-well ultralow attachment plateSPL39796
Cell strainer 40 µmSPL93040
50 mL conical tube 500/boxSLPSPL50050
15 ml Conical tubeSarstedt62.554.502
CryoPure Tube 1.8 mL -whiteSarstedt72.379P
37 °C, 5 % CO2 incubatorEppendorf9734IQ905476
Cell culture insertSPL37024
Amaxa 4D-NucleofectorLonzaAAF-1003X
Blocking buffer (2% BCS in DPBS)Gibco / WelgeneBCS: 26010074; DPBS: LB001-02
Dispase II powderGibco17105041
DNAse IEnzynomicsM059L
MatrigelCorning356231
RBC lysis bufferBiosesangR2015
TrypLE ExpressGibco12605
Wash buffer (HBSS)JBIBL003-1
Advanced DMEM/F12Gibco12634028
GlutaMAX supplementGibco35050-061
Penicillin–streptomycinBiowestL0022-100
HEPESGibco15630-080
B27 supplementGibco17504044
NogginPeproTech118214
N-acetyl-l-cysteineSigmaA9165
Y-27632STEMCELL Technologies72307
FGF2PeproTech100-18B-50UG
FGF7PeproTechAF-100-19-250UG
A83-01SelleckchemS7692 
ForskolinSigmaF6886
Neuregulin 1PeproTech100-03-50UG
NGFPeproTechAF-450-01-100UG
R-spondinSinobiological11083-HNAS
HGFPeprotech100-39H-250ug
FGF10Peprotech100-26
Petridish 35 mm SPL10035
Organoid media recipe
NameCompanyCatalog Numberconcentratie
Advanced DMEM/F12Gibco12634028
GlutaMAX supplementGibco35050-0611x
Penicillin–streptomycinBiowestL0022-1001x
HEPESGibco15630-08010 mM
B27 supplementGibco175040441x
zonder vitamine A
NogginPeproTech118214100 ng/ml
N-acetyl-l-cysteineSigmaA91651 mM
Y-27632STEMCELL Technologies7230710 µM
FGF2PeproTech100-18B-50UG50 ng/ml
FGF7PeproTechAF-100-19-250UG25 ng/ml
FGF10Peprotech100-26100 ng/ml
A83-01SelleckchemS7692 500 nM
ForskolinSigmaF688610 µM
Neuregulin 1PeproTech100-03-50UG50 ng/ml
NGFPeproTechAF-450-01-100UG20 ng/ml
R-spondinSinobiological11083-HNAS100 ng/ml
HGFPeprotech100-39H-250ug25 ng/ml

Referenties

  1. Singh, D., et al. Global estimates of incidence and mortality of cervical cancer in 2020:a baseline analysis of the WHO Global Cervical Cancer Elimination Initiative. Lancet Glob Health. 11 (2), e197-e206 (2023).
  2. Worldwide cancer data. , World Cancer Research Fund International. https://www.wcrf.org/cancer-trends/worldwide-cancer-data/ (2022).
  3. Cohen, P. A., Jhingran, A., Oaknin, A., Denny, L. Cervical cancer. Lancet. 393 (10167), 169-182 (2019).
  4. Kwak, K., Hwang, S. S. Predicted cervical cancer prevention: impact of National HPV Vaccination Program on young women in South Korea. Cancer Res Treat. 56 (3), 898-908 (2024).
  5. Kim, J., Lee, D., Son, K. B., Bae, S. The burden of cervical cancer in Korea:a population-based study. Int J Environ Res Public Health. 17 (17), 6308(2020).
  6. Chang, H. K., Seo, S. S., Myong, J. P., Yu, Y. L., Byun, S. W. Incidence and costs of cervical intraepithelial neoplasia in the Korean population. J Gynecol Oncol. 30 (3), e37(2019).
  7. Anwar, A., et al. Pregnancy outcome after electrosurgical cervical cone biopsy using Fischer cone biopsy excisor. J Matern Fetal Neonatal Med. 29 (3), 477-481 (2016).
  8. Pils, S., Eppel, W., Seemann, R., Natter, C., Ott, J. Sequential cervical length screening in pregnancies after loop excision of the transformation zone conisation: a retrospective analysis. BJOG. 121 (4), 457-462 (2014).
  9. Lee, C. J., Nam, Y., Rim, Y. A., Ju, J. H. Advanced animal replacement testing strategies using stem cell and organoids. Int J Stem Cells. 18 (2), 107-125 (2025).
  10. Jeong, Y. Methods to identify epithelial stem cells. Organoid. 2, e24(2022).
  11. Dutta, D., Heo, I., Clevers, H. Disease modeling in stem cell-derived 3D organoid systems. Trends Mol Med. 23 (5), 393-410 (2017).
  12. Jeong, Y., et al. Identification and genetic manipulation of human and mouse oesophageal stem cells. Gut. 65 (7), 1077-1086 (2016).
  13. Myeong, J., et al. Microbial metabolites control self-renewal and precancerous progression of human cervical stem cells. Nat Commun. 16 (1), 2327(2025).
  14. Rock, J. R., et al. Basal cells as stem cells of the mouse trachea and human airway epithelium. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (31), 12771-12775 (2009).
  15. Rajkumar, S., et al. Loss of ubiquitin-specific protease 11 mitigates pulmonary fibrosis in human pluripotent stem cell-derived alveolar organoids. Int J Stem Cells. 18 (2), 205-213 (2025).
  16. Ko, K. P., et al. Key genetic determinants driving esophageal squamous cell carcinoma initiation and immune evasion. Gastroenterol. 165 (3), 613-628 (2023).
  17. Choi, Y. J., et al. YAP1 regulates esophageal stem cells' self-renewal and differentiation. Biochem Biophys Res Commun. 726, 150280(2024).
  18. Oh, B., Kim, J., Kim, N., Jeong, Y. Lung cancer organoid system to evaluate the cytotoxicity of natural killer cells. Int J Stem Cells. 18 (1), 99-106 (2025).
  19. Han, K., et al. Synergistic drug combinations for cancer identified in a CRISPR screen for pairwise genetic interactions. Nat Biotechnol. 35 (5), 463-474 (2017).
  20. Jeong, Y., et al. Role of KEAP1/NFE2L2 mutations in the chemotherapeutic response of patients with non-small cell lung cancer. Clin Cancer Res. 26 (1), 274-281 (2020).
  21. Zhang, S., et al. Genetically defined, syngeneic organoid platform for developing combination therapies for ovarian cancer. Cancer Discov. 11 (2), 362-383 (2021).
  22. Lohmussaar, K., et al. Patient-derived organoids model cervical tissue dynamics and viral oncogenesis in cervical cancer. Cell Stem Cell. 28 (8), 1380-1396 (2021).
  23. Chumduri, C., et al. Opposing Wnt signals regulate cervical squamocolumnar homeostasis and emergence of metaplasia. Nat Cell Biol. 23 (2), 184-197 (2021).
  24. He, X. C., et al. PTEN-deficient intestinal stem cells initiate intestinal polyposis. Nat Genet. 39 (2), 189-198 (2007).
  25. Wang, S., et al. Pten deletion leads to the expansion of a prostatic stem/progenitor cell subpopulation and tumor initiation. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (5), 1480-1485 (2006).
  26. Yanagi, S., et al. Pten controls lung morphogenesis, bronchioalveolar stem cells, and onset of lung adenocarcinomas in mice. J Clin Invest. 117 (10), 2929-2940 (2007).
  27. Jeong, Y., et al. Role of KEAP1/NRF2 and TP53 mutations in lung squamous cell carcinoma development and radiation resistance. Cancer Discov. 7 (1), 86-101 (2017).
  28. Liu, C., et al. Single-cell dissection of cellular and molecular features underlying human cervical squamous cell carcinoma initiation and progression. Sci Adv. 9 (4), eadd8977(2023).
  29. Koster, S., et al. Modelling Chlamydia and HPV co-infection in patient-derived ectocervix organoids reveals distinct cellular reprogramming. Nat Commun. 13 (1), 1030(2022).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Menselijke ectocervixorganoïdcultuurisolatie van enkelvoudige cellengelaagd plaveiselpitheelelektroporatiestamcelactiviteitimmunofluorescente kleuringdrugscreening
Generatie en genetische manipulatie van menselijke cervicale organoïden
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.