$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Deze studie omvatte 30 gedeeltelijk edentuleuze patiënten die tussen september 2021 en maart 2022 prostodontische zorg zochten bij de Kliniek voor Tandprotheses van het Universitair Tandheelkundig Klinisch Centrum van Kosovo. Ethische goedkeuring werd verkregen van de institutionele beoordelingscommissie (Goedkeuring nr. 378/19), en alle procedures volgden de principes van de Verklaring van Helsinki. Schriftelijke geïnformeerde toestemming werd van alle deelnemers verkregen.
De steekproefgrootte werd bepaald op basis van eerder onderzoek, waaruit blijkt dat 11 tot 30 deelnemers voldoende zijn om significante resultaten te behalen in microbiële en parodontale parameters onder RPD-dragers21,23. Uitgaande van een tweezijdige gekoppelde t-test met een alfaniveau van 0,05, gaf de power-analyse aan dat een steekproefgrootte van 28 deelnemers 80% kracht zou bieden om een statistisch significant verschil van deze grootte te detecteren. Om rekening te houden met mogelijke uitvallers, schreven we 30 deelnemers in. Bovendien was een follow-upperiode van drie maanden voldoende om een toename van de bacteriële lading bij deze patiëntente observeren.
In aanmerking komende patiënten waren voor het eerst gebruikmakend van prothetische toestellen, met zowel aangrenzende als antagonistische natuurlijke gebitten. Uitsluitingscriteria waren onder andere: diepte van >4 mm, immuungecompromitteerde status (bijv. chemotherapie), antibioticagebruik in de afgelopen 90 dagen, zwaar roken (>25 sigaretten/dag) en cognitieve achteruitgang die het begrip van RPD-procedures belemmert.
Alle deelnemers ontvingen geklemde RPD's die werden vervaardigd met een kobalt-chroom metaal frame en acrylhars (polymethylmethacrylaat). Het ontwerp van elke RPD werd aangepast op basis van de classificatie van edentulisme, kwaliteit van de resterende richel en biomechanische overwegingen.
Procedure voor monsterverzameling
Monsterafname werd uitsluitend uitgevoerd op de abutmenttanden van verwijderbare partiële kunstgebitten (RPD's) tussen tijdstippen T0 en T3. Deelnemers werden eerst gevraagd grondig te gorgelen met water om achtergebleven voedselresten te verwijderen. Voor de monsterafname werd de geselecteerde landhoofdtand geïsoleerd met wattenrollen om een droge werkomgeving te behouden. Twee steriele papieren punten (nr. 35; 04 taps toelopend) werden in de gingivale sulcus ingebracht op de mesiale en distale zijden van het buccale oppervlak van de tand en 1 minuut op hun plaats gelaten. De papierpunten werden vervolgens overgebracht naar een steriele microbuis met 1,5 mL normale zoutoplossing en getransporteerd naar een aangewezen microbiologisch laboratorium. De monsters werden opgeslagen bij -20°C tot het DNA-isolatieproces.
Bacteriële DNA-voorbereiding en amplificatie:
De Parodontoscreen-test (Materiaaltabel) werd gebruikt om T. denticola, T. forsythia en P. gingivalis te identificeren met behulp van RT-PCR26. De test bestaat uit: DNA-voorbereiding; realtime PCR-amplificatie met specifieke reagentia (een mengsel voor universele bacteriële amplificatie, een mengsel voor opportunistische bacteriële amplificatie en een mengsel voor menselijke genomische DNA-amplificatie); en het opnemen en interpreteren van versterkingsresultaten.
DNA-extractie werd uitgevoerd met behulp van een DNA-extractiekit (Table of Materials), volgens de richtlijnen van de fabrikant om optimale DNA-kwaliteit te garanderen. De test maakt gebruik van realtime PCR-kwalitatieve analyse met een paraffine-sealed PCR-mix. Deze mix omvat een interne controle om de geldigheid van de PCR-run te verifiëren en een monsterinnamecontrole (SIC) om de extractiekwaliteit te beoordelen en voldoende DNA te bevestigen voor nauwkeurige amplificatie.
PCR-amplificatie werd uitgevoerd met gespecialiseerde strips en doppen, met reagentia waaronder Taq-polymerase-oplossing, een mastermengsel onder de paraffinelaag, een DNA-monster en minerale olie. Het PCR-programma is als volgt: (i) initiële denaturatie bij 80 °C gedurende 30 s, (ii) denaturatie bij 94 °C voor 1 minuut 30 s, (iii) 5 cycli van 30 seconden bij 94 °C (denaturatie), 15 s. bij 64 °C (primerbinding en verlenging, detectie van fluorescentie), (iv) 45 cycli van 10 s. bij 94 °C (denaturatie), 15 s bij 64°C (primerbinding en verlenging, detectie van fluorescentie), (v) 5 s bij 94 °C (definitieve denaturatie).
Fluorescentiedetectie werd uitgevoerd op de Fam- en Hex-detectiekanalen, behalve bij buis nr. 5, die de marker bevatte (waar fluorescentie werd gedetecteerd op de Fam- en Rox-kanalen). Het versterkingsproces werd uitgevoerd met realtime thermische cyclers (Materiaaltabel). De Software RealTime voor het instrument (versie 7.9) werd gebruikt voor de automatische registratie, interpretatie en kwantitatieve analyse van de PCR-amplificatiegegevens, waardoor nauwkeurige schatting van de pathogene belasting mogelijk is.
Microbiële belastingen werden weergegeven als "Lg (genoomequivalenten/monster)". De resultaten werden in drie bereiken gepresenteerd in het Parodontoscreen-testrapport voor elke patiënt, gebaseerd op bacteriële belastingniveaus als volgt: P. gingivalis (normaal <5,0; matig ≥5,0; ernstig >6,0); T. forsythia (normaal <5,0; matig ≥5,0; ernstig >5,5); en T. denticola (normaal <3,5; matig ≥3,5; ernstig >5,0).
Klinisch onderzoek
Het klinisch onderzoek omvatte een gedetailleerde analyse van de parodontale toestand van de abutment- en niet-abutmenttanden bij T0 en T3. De plaque-index (PI) werd geëvalueerd met een tandheelkundige sonde volgens de Silness-Loe-criteria (0-3)27. De tandvleesaandoening werd op zes punten op het tandoppervlak geëvalueerd met behulp van de gingivale index (GI) volgens de volgende criteria: 0, geen ontsteking; 1, milde ontsteking; 2, ontsteking met tandvleesbloedingen tijdens het proberen; 3, ernstige ontsteking met mogelijk spontane tandvleesbloedingen28.
De peildiepte (PD) werd gemeten met de Williams-sonde van de gingivale rand tot het einde van de klinische pocketdiepte29. Tandmobiliteit (TM) werd bepaald door bimanuele palpatie in horizontale en verticale richting, volgens Miller's criterium30.
Alle deelnemers aan het onderzoek kregen adequate niet-chirurgische parodontale behandeling voorafgaand aan het klinisch onderzoek, inclusief verwijdering van tandplak en steensteentjes met ultrasone scaling. Proefpersonen kregen ook instructies in mondhygiëneprocedures, zoals tandenpoetsen en kunstgebitten, evenals advies over het verwijderen van kunstgebitten 's nachts.
Statistische analyse
De gegevens werden geanalyseerd met Microsoft Excel en IBM SPSS Statistics for Windows. Descriptieve statistieken (gemiddelde, standaarddeviatie en bereik) werden berekend voor leeftijd, microbiële belasting en parodontale indices, waaronder PI, GI, PD en TM. Veranderingen in klinische en microbiologische parameters tussen vóór (T0) en 3 maanden na de insertie (T3) werden beoordeeld met behulp van de Wilcoxon signed-rank test voor gepaarde niet-parametrische gegevens. De exacte test van Fisher (Monte Carlo-simulatie, tweezijdig) werd gebruikt om categorische gegevens te evalueren met betrekking tot de classificatie van microbiële belasting. Spearmans rangcorrelatiecoëfficiënt (ρ) werd gebruikt om associaties tussen microbiële belastingen en parodontale parameters te beoordelen. Een p-waarde < 0,05 werd als statistisch significant beschouwd voor alle analyses.