Hier presenteren we een protocol voor de isolatie, zuivering en kweek van primaire marginale cellen uit de muis stria vascularis, en voor het opstellen van in vitro modellen van oxidatieve stress en cellulaire senescentie om cochleaire laterale wandaandoeningen te bestuderen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Isolatie en kweek van primaire marginale cellen van de stria vascularis uit neonatale muizen
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De stria vascularis is een belangrijke structuur in het binnenoor die verantwoordelijk is voor het genereren en behouden van het endocochleaire potentiaal (EP), en de disfunctie ervan hangt nauw samen met verschillende vormen van gehoorverlies. De stria vascularis bestaat uit marginale cellen, intermediaire cellen en basale cellen, waarvan marginale cellen een centrale rol spelen bij de aanmaak en het onderhoud van de EP. Daarom is het opzetten van een in vitro primaire kweekmodel van marginale cellen essentieel om de biologische kenmerken van de stria vascularis en de betrokkenheid ervan bij gehoorverliesgerelateerde aandoeningen te onderzoeken.
In deze studie hebben we met succes primaire marginale cellen geïsoleerd en gekweekt uit de stria vascularis van neonatale muizen. Triculaire weefsels werden verkregen door microdissectie, verteerd met type II collagenase en gezuiverd door differentiële platering om de meeste fibroblasten te verwijderen, waarbij gekweekte cellen op dag 7 meer dan 80% confluentie bereikten. Immunofluorescentiekleuring toonde stabiele expressie van cytokeratine 18 (CK18) en kaliumspanningsgestuurde kanaalsubfamilie Q lid 1 (KCNQ1), waarmee succesvolle isolatie, hoge zuiverheid en behouden fysiologische functie van marginale cellen werd bevestigd.
Op basis van dit model werden in vitro oxidatieve stress- en cellulaire senescentiemodellen ontwikkeld met respectievelijk waterstofperoxide (H2O2) en D-galactose. Behandelde cellen vertoonden significant verhoogde intracellulaire niveaus van reactieve zuurstofsoorten (ROS) en senescence-geassocieerde β-galactosidase (SA-β-gal) positiviteit, wat wijst op een hoge gevoeligheid van primaire marginale cellen voor oxidatieve stress en senescence-inducerende stimuli. Gezamenlijk stelt deze studie een stabiel en reproduceerbaar systeem vast voor de kweek en modellering van primaire marginale cellen van muis, waarmee een betrouwbaar in vitro platform wordt geboden voor het onderzoeken van disfunctie van stria vascularis en aanverwante mechanismen.
Inleiding
In het auditieve systeem werken verschillende weefsels binnen de cochlea samen om complexe geluidsgolven om te zetten in elektrische signalen1. De stria vascularis reguleert de ionische samenstelling van de endolymfe en genereert het Endo-cochleaire Potentiaal (EP), waardoor de cochleaire homeostase behouden blijft en de normale functie van de binnen- en buitenhaarcellen wordt gegarandeerd. Het bestaat uit drie verschillende celtypen: marginale cellen, intermediaire cellen en basale cellen. Marginale cellen vormen een gepolariseerde epitheelmonolaag die direct naar de endolymfe gericht is en wordt afgesloten door strakke verbindingen. Het basolaterale membraan van marginale cellen is verrijkt met twee belangrijke kaliumtransporters, Na⁺/K⁺-ATPase en NKCC1, die betrokken zijn bij het reguleren van natrium- en kaliumionentransport in de stria vascularis. De functie van Na⁺/K⁺-ATPase is aangetoond direct geassocieerd met EP 2,3. KCNQ1/KCNE1 K⁺-kanalen bevinden zich op het apicale membraan van marginale cellen en genereren een extra K⁺-diffusiepotentiaal dat bijdraagt aan de vorming van EP4. Marginale cellen zijn verrijkt met meerdere kaliumgerelateerde eiwitten en dienen als de kernceleenheid die kaliumrecycling in de cochleaire endolymfe aanstuurt. Marginale cellen zijn dus de belangrijkste cellen die verantwoordelijk zijn voor het genereren en onderhouden van de EP.
Van de stria vascularis (SV) is aangetoond dat het een cruciale rol speelt in de pathogenese van meerdere aandoeningen die geassocieerd zijn met sensorineuraal gehoorverlies (SNHL), waaronder leeftijdsgebonden gehoorverlies (ARHL), geluidsgeïnduceerd gehoorverlies (NIHL), erfelijk gehoorverlies (HHL) en door medicijnen veroorzaakt gehoorverlies (DIHL). Daarnaast zijn verschillende andere gehoorstoornissen, zoals auto-immuun binnenoorziekte (AIED), auto-inflammatoire binnenoorziekte (AID) en de ziekte van Ménière (MD), hoewel etiologisch verschillend, ook aangetoond in recente studies dat SV betrokken zijn bij hun onderliggende pathogene mechanismen 5,6. Daarom is het opstellen van betrouwbare cellulaire modellen voor het onderzoeken van de pathogenese van gehoorverlies essentieel. Studies hebben aangetoond dat verminderde marginale celdichtheid een sterke voorspeller is van de EP gedurende de levensduur van de muis, terwijl de atrofie van de stria vascularis een vroege karakteristieke laesie in ARHL 7,8 vertegenwoordigt. In vitro kweek van marginale cellen kan een betrouwbaar model bieden voor het bestuderen van de pathogenese van ARHL en het verkennen van potentiële therapeutische doelwitten. Naast ARHL hebben recente studies een hoge correlatie en mogelijk onderliggende relatie tussen de stria vascularis en andere auditieve aandoeningen aan het licht gebracht, wat suggereert dat in vitro marginale celmodellenbredere toepassingen kunnen hebben.
Deze studie beschrijft een protocol voor de dissectie en kweek van de stria vascularis uit neonatale muizencochleae, gevolgd door de zuivering van marginale cellen met behulp van differentiële plating, waarmee een betrouwbaar cellulair model wordt geleverd voor onderzoek naar stria vascularis-gerelateerde pathologieën.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
De neonatale muisjongen (P0-3) werden geleverd door Biont. Alle experimentele procedures waren in overeenstemming met de Richtlijnen voor de Zorg en het Gebruik van Proefdieren, gepubliceerd door de United States National Institutes of Health (NIH-publicatie, herzien 2011) en goedgekeurd door de Animal Ethics Committee van het Renmin Hospital van de Universiteit van Wuhan (WDRM202400019).
1. Sterilisatie en materiaalvoorbereiding
- Bereid de dissectiegereedschappen voor, waaronder twee paar microdissectie-tangen, één standaard tang, één paar chirurgische schaar en één paar micro-dissectieschaar. Steriliseer alle gereedschappen met een autoclaaf en droog ze 4 uur in een oven van 60 °C.
- Bereid 100 mL epitheelcelmedium-dierlijk (EpiCM-a-medium) voor volgens de instructies van de fabrikant. Voeg foetaal rundereserum (FBS), epitheliale celgroeisupplement (EpiCGS-a) en penicilline/streptomycine-oplossing toe aan het basale medium om de uiteindelijke concentraties van 2% FBS, 1% EpiCGS-a en 1% penicilline/streptomycine te bereiken.
- Desinfecteer het stereomicroscooppodium en de behuizing met 75% ethanol. Plaats vervolgens de autoclaveerde dissectiegereedschappen en de gedesinfecteerde microscoop in een biologische veiligheidskast. Blootstel alle items 30 minuten aan UV-licht om volledige steriliteit te waarborgen voordat de dissectieprocedure wordt gestart.
2. Dissectie en isolatie van temporale botten voor auditieve epitheelverzameling
- Euthanaser neonatale muisjongen (P0-3) na 4% isoflurane anesthesie, desinfecteer met 75% ethanol en voer onthoofding uit op ijs. Gebruik indien nodig andere ethisch goedgekeurde methoden.
- Immobiliseer het hoofd, open de hoofdhuid langs de sagittale hechting met een microdissectieschaar, scheid de hoofdhuid bidig en verwijder deze eruit.
- Snijd het hoofd van de neonatale muis langs de middenlijn met behulp van een microdissectieschaar. Verwijder hersenweefsel met een tang om de slaapbeenderen bloot te leggen (Figuur 1A).
- Observeer bilaterale temporale botten aan de schedelbasis, verwijder andere onnodige botten en behoud het temporale botweefsel met de cochlea (Figuur 1B).
- Breng één temporale bot over in een 35 mm steriel schaaltje met verse Hank's Balanced Salt Solution (HBSS) op ijs.
- Breng het andere slaapbeen onder de microscoop, zet het temporale botweefsel vast met één paar pincetten, en gebruik een ander paar om het oppervlakspierweefsel stomp te dissectieren totdat de witte halfronde hoekbeenring zichtbaar is (Figuur 1C). Na bevestiging van de cochleaire positionering wordt de stompe dissectie naar beneden voortgezet totdat doorschijnend cochleair weefsel is waargenomen (Figuur 1D).
OPMERKING: Stappen 2.6-2.7 moeten op ijs worden uitgevoerd. - Met behulp van een microdissectie-pincet verwijder je voorzichtig een klein stukje van de botwand bij de apicale bocht van de cochlea, steek voorzichtig één kant van de tang in de cochlea en scheid je de botwand van het membraanvormige labyrint. Verwijder de botwand en verleng het membraanvormige labyrintweefsel in verse Hank's Balanced Salt Solution (HBSS) (Figuur 1E).
- Bevestig het basilaire membraan met één paar pincet en scheid de stria vascularis zorgvuldig met een ander paar tang. Breng het over naar een 1,5 mL microcentrifugebuis met 1 mL 1mg/mL collagenase type II-oplossing die op ijs wordt geplaatst (Figuur 1F).
- Herhaal bovenstaande stappen om de stria vascularis van de andere kant te oogsten.
3. Enzymatische disaggregatie voor het verkrijgen van marginale cellen van stria vascularis
- Incubeer de microcentrifugebuis met het oogstte weefsel in 1 mg/mL collagenase type II-oplossing bij 37 °C gedurende 30 minuten.
OPMERKING: De collagenase type II-oplossing werd bereid door collagenase type II te verdunnen in fosfaatgeborduurde zoutoplossing (PBS; 2,7 mM KCl, 2,0 mM KH₂PO₄, 137 mM NaCl, 10 mM Na2HPO4). - Centrifugeer de buis op 300 × g gedurende 8 minuten.
- Verwijder voorzichtig het supernatant. Voeg 1 ml kweekmedium toe om de vertering te beëindigen, tritureer voorzichtig om de cellen opnieuw te laten ophangen, en centrifugeer opnieuw bij 300 × g gedurende 8 minuten.
- Aspireer het supernatant en voeg 1 ml verse kweekmedium toe. Tritureren om een single-cell suspension te verkrijgen, de suspensie overbrengen naar een 15 mL conische buis en extra medium toevoegen om het totale volume aan te passen tot 10 mL.
- Meng de celsuspensie grondig door herhaald pipetteren en breng vervolgens 1 mL van de suspensie over naar elke put van een 6-wellplaat. Kweek de cellen in 2 mL DMEM aangevuld met 2% FBS, 1% EpiCGS-a en 1% penicilline/streptomycineoplossing bij 37 °C in een 5% CO2-incubator.
- Vervang de medium dagelijks en houd de celstatus in de gaten. Geclusterde groei van marginale cellen kan doorgaans 2 dagen na het plateren worden waargenomen.
4. Zuivering van marginale cellen
- Op dag 3 van de kweek observeer je het verschijnen van talrijke spoelvormige fibroblasten rondom de keienachtige clusters van marginale cellen (Figuur 2B).
- Door gebruik te maken van verschillen in adhesiesnelheden, pipeteert u voorzichtig om de spilvormige fibroblasten gedeeltelijk te verwijderen. Spoel met een pipet van 1 mL de gebalanceerde zoutoplossing van de D-Hanks voorzichtig door over grote gebieden in elk van de vier kwadranten. Monitor de celzuivering onder een microscoop en pas de kracht en richting van het pipetten dienovereenkomstig aan. Over het algemeen wordt spoelen met grote gebieden twee keer uitgevoerd. Na elke ronde wordt de fibroblastdichtheid microscopisch onderzocht; Op basis van deze observaties wordt lokaal zacht gepipetterd toegepast op dichtbevolkte fibroblastgebieden om een sobere en gelijkmatige verspreiding over het kweekgerecht te bereiken.
OPMERKING: Een geschikte dichtheid van fibroblasten werd behouden, omdat volledige verwijdering of overmatige zuivering de groei van primaire cellen kan beperken. We raden aan een verhouding van ongeveer 2:1 tussen marginale cellen en fibroblasten te behouden. - Stop de zuivering wanneer fibroblasten onder microscopisch onderzoek dun verspreid lijken te zijn over marginale celclusters. Verwijder het supernatant en voeg 2 ml vers kweekmedium toe om de teelt voort te zetten.
5. Immunofluorescentiekleuring
- Op dag 2 na de zuivering onderzoek je de celmorfologie onder een microscoop. Bij het observeren van voldoende celclustervorming en geschikte dichtheid, aspireer kweekmedium en was de cellen drie keer met fosfaatgeboterde zoutoplossing (PBS, pH 7,4).
- Fixeer cellen met 4% paraformaldehyde gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur. Na het verwijderen van de fixatieve oplossing was je cellen drie keer met PBS (5 minuten per was).
- Permeabilize cellen met 0,5% Triton X-100 gedurende 15 minuten. Verwijder de oplossing en was de cellen drie keer met PBS (5 minuten per was).
- Blokkeer cellen met PBS dat 10% geitenserum bevat gedurende 30 minuten op kamertemperatuur.
- Incubeer cellen met konijn anti-muis CK18 monoklonaal antilichaam (verdund 1:300 in PBS met 3% geitenserum) of KCNQ1 Antilichaam (G-8) (verdund 1:100 in PBS met 3% geitenserum) 's nachts bij 4 °C.
- Was cellen drie keer met PBS (10 minuten per was). Incubeer met het bijbehorende secundaire antilichaam (verdund 1:300 in PBS met 3% geitenserum) gedurende 1 uur bij kamertemperatuur.
- Verwijder secundaire antistoffen en was cellen drie keer met PBS (10 minuten per was).
- Breng 1-2 druppels antifade montagemedium met DAPI aan op dia's, monteer dekfolies en onderzoek monsters met een confocaal laserscanningssysteem.
OPMERKING: Behalve bij wasstappen werden alle incubatieoplossingen, inclusief antistoffen, in hoeveelheden toegevoegd die voldoende waren om de cellen volledig te bedekken.
6. H2O2 behandeling en ROS kleuring
- Na 7 dagen kweek, wanneer marginale cellen een confluente monolaag hebben gevormd, induceren ze oxidatieve stress door behandeling met 1 mM H2O2. Bereid de 1 mM werkoplossing voor door de 30% H2O2 bouillon oplossing 1:10.000 te verdunnen in epitheelcelmedium. Incubeer de experimentele groepen met deze werkoplossing, terwijl controlegroepen uitsluitend met epitheelcelmedium worden behandeld.
- Na 16 uur behandeling verwijder je voorzichtig het medium en was je de cellen met PBS. Evalueer intracellulaire ROS-niveaus in marginale cellen met behulp van een Reactive Oxygen Species Assay Kit volgens het protocol van de fabrikant.
- Verwijder het kweekmedium, voeg vervolgens verdunde MitoTracker Red CMXRos (een mitochondriën-selectieve kleurstof) en DCFH-DA toe aan de cellen, en incubeer bij 37 °C in een celkweekincubator gedurende 30 minuten.
- Was de cellen drie keer met PBS (elk 5 minuten), monteer de dekfolies en observeer de monsters met een confocale laserscanningmicroscoop.
7. D-galactosebehandeling en SA-β-gal kleuring
- Na 7 dagen kweek, wanneer marginale cellen een confluente monolaag vormen, werd D-galactosepoeder opgelost in EpiCM-a medium om een werkoplossing van 40 mg/mL D-gal te bereiden. Incubeer experimentele groepen met deze oplossing (2 mL per put van een 6-put plaat, 48 uur, bij 37 °C) om cellulaire senescentie te induceren, terwijl controlegroepen met hetzelfde volume Epi-medium alleen worden behandeld.
- Na 48 uur behandeling verwijder je voorzichtig het medium en was je cellen met PBS. Beoordeel de cellulaire veroudering in marginale cellen met behulp van de SA-β-gal kleuringskit volgens de instructies van de fabrikant.
- Fixeer cellen met fixatieve oplossing voor 15 minuten op kamertemperatuur. Na het verwijderen van het fixatiemiddel spoel je cellen drie keer met PBS (5 minuten per was).
- Incubeer cellen met SA-β-gal kleuringswerkoplossing die 5% X-Gal bevat (1 mL per put van een 6-put plaat) bij 37 °C in een bevochtigde incubator zonderCO2.
- Maak beelden van SA-β-gal kleuring onder helderveldverlichting met een microscoop.
8. Statistische analyse
- Voor vergelijkingen tussen H₂O₂-behandelde en controlegroepen met betrekking tot de gemiddelde immunofluorescentieintensiteit van ROS-kleuring, en tussen D-galactose-behandelde en controlegroepen wat betreft het aandeel SA-β-gal-positieve cellen, pas t-tests uit na beoordelingen van normaliteit en log-normaliteit.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Groei en morfologische kenmerken van gekweekte cellen
Met dit protocol hebben we met succes primaire culturen van marginale cellen vastgesteld, geïsoleerd uit de muiscochlea. Op dag 2 van de kweek toonde lichtmicroscopie aan dat de cellen aan het substraat waren gehecht en begonnen clusterkolonies te vormen (Figuur 2Aa). Op dag 3 zuiverden we de cellen (Figuur 2B). Latere waarnemingen in de daaropvolgende dag...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Decennialang richt onderzoek naar gehoorverlies zich voornamelijk op de rol van sensorische haarcellen en hun synaptische verbindingen met spiraalganglionneuronen11. Talrijke gepubliceerde studies zijn gewijd aan het opzetten en optimaliseren van in vitro kweekmodellen van haarcellen, die een onmisbare rol hebben gespeeld bij het onderzoeken van haarcelschade, regeneratie en de effecten van ototoxische geneesmiddelen12,13
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs stellen dat het onderzoek geen commerciële of financiële belangenconflicten heeft.
Dankbetuigingen
Wij spreken onze dank uit aan de afdeling Otolaryngologie-Hoofd- en Halschirurgie van het Renmin Ziekenhuis van de Universiteit van Wuhan (Wuhan, China) en het Onderzoeksinstituut voor Oor-, Neus- en Oorheelkunde-Hoofd- en Halschirurgie, Renmin Ziekenhuis van Wuhan (Wuhan, China) voor hun genereuze steun en aanmoediging. Dit werk werd ondersteund door de National Health Service Center Construction and Incubation Foundation of China (ZX0000000037), de National Natural Science Foundation of China (81700916, 82301294), de Natural Science Foundation van de provincie Hubei (2017CFB242) en het Wetenschappelijk Onderzoeksproject van de Health Commission van de provincie Hubei (WJ2017Q005).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 15 mL Centrifuge Tube | Servicebio | EP-1501-J | gebruik voor cultuur |
| 35 mm Cell Culture Dish | NEST | 706001 | gebruik voor dissectie |
| 4% Paraformaldehyde | Servicebio | G1101 | immunoflurescente kleuring |
| 6-well Plate | Servicebio | CCP-6H | gebruik voor cultuur |
| Alexa Fluor 488-Conjugated Goat Anti-Rabbit Antibody | Proteintech | SA00013-2 | immunoflurescente kleuring |
| Antifade Mounting Medium met DAPI | Absin | abs9235 | immunoflurescente kleuring |
| Cell Counting Kit-8 | Beyotime | C0037 | gebruik voor celtelling |
| Collagenase Type II | Biosharp | BS164 | gebruik voor cultuur |
| Confocal Laser Scanning Systeem | Olympus | FV1200 | immunoflurescente kleuring |
| DCFH-DA | Invitrogen | C2938 | ROS kleuring |
| D-gal | Solarbio | D8310 | gebruik voor celmodellering |
| EpiCM-a Medium | Sciencell | 4131 | gebruik voor cultuur |
| Fine forceps | RWD | F11020-11 | gebruik voor dissectie |
| Goat Serum | Beyotime | C0265 | immunoflurescente kleuring |
| H2O2 | Mkbio | MM0707 | gebruik voor celmodellering |
| Hank's Balanced Salt Solution (HBSS) | Biosharp | BL561A | gebruik voor cultuur |
| Isoflurane | RWD | R510-22-10 | gebruik voor dissectie |
| KCNQ1 Antibody (G-8) | Santa cruz | sc-365186 | immunoflurescente kleuring |
| Microscope | Olympus | SZX7-1063 | gebruik voor dissectie |
| Microscope | Olympus | IX71 | Gebruikt voor het observeren van de resultaten van immunofluorescence kleuring |
| MitoTracker Red CMXRos | Invitrogen | M7512 | ROS kleuring |
| Neonatal Mouse Pups (P0-P3) | geleverd door BIONT | ||
| PBS | Servicebio | G4202 | immunoflurescente kleuring |
| Rabbit Anti-Mouse CK18 Monoclonal Antibody | Proteintech | 10830-1-AP | immunoflurescente kleuring |
| Senescence β-Galactosidase Kleuring Kit | Beyotime | C0602 | veroudering kleuring |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | X100 | immunoflurescente kleuring |
Referenties
- Raphael, Y., Altschuler, R. A. Structure and innervation of the cochlea. Brain Res Bull. 60 (5-6), 397-422 (2003).
- Bovee, S., et al. The stria vascularis: Renewed attention on a key player in age-related hearing loss. Int J Mol Sci. 25 (10), 5391(2024).
- Schulte, B. A., Schmiedt, R. A. Lateral wall Na,K-ATPase and endocochlear potentials decline with age in quiet-reared gerbils. Hear Res. 61 (1-2), 35-46 (1992).
- Hibino, H., et al. How is the highly positive endocochlear potential formed? The specific architecture of the stria vascularis and the roles of the ion-transport apparatus. Pflugers Arch. 459 (4), 521-533 (2010).
- Johns, J. D., et al. The role of the stria vascularis in neglected otologic disease. Hear Res. 428, 108682(2023).
- Yu, W., et al. Role of the stria vascularis in the pathogenesis of sensorineural hearing loss: A narrative review. Front Neurosci. 15, 774585(2021).
- Ohlemiller, K. K., et al. Cellular correlates of age-related endocochlear potential reduction in a mouse model. Hear Res. 220 (1-2), 10-26 (2006).
- Mahendrasingam, S., et al. Relative time course of degeneration of different cochlear structures in the CD/1 mouse model of accelerated aging. J Assoc Res Otolaryngol. 12 (4), 437-453 (2011).
- Lee, J. E., et al. Mechanisms of apoptosis induced by cisplatin in marginal cells in mouse stria vascularis. ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec. 66 (3), 111-118 (2004).
- Ohlemiller, K. K., et al. The endocochlear potential as an indicator of reticular lamina integrity after noise exposure in mice. Hear Res. 361, 138-151 (2018).
- Liberman, M. C., Kujawa, S. G. Cochlear synaptopathy in acquired sensorineural hearing loss: Manifestations and mechanisms. Hear Res. 349, 138-147 (2017).
- Levano, S., et al. Whole neonatal cochlear explants as an in vitro model. J Vis Exp. (197), e65160(2023).
- Wu, K. Y., et al. Isolation and culture of primary cochlear hair cells from neonatal mice. J Vis Exp. (199), e65687(2023).
- Schmiedt, R. A., et al. Effects of furosemide applied chronically to the round window: A model of metabolic presbyacusis. J Neurosci. 22 (21), 9643-9650 (2002).
- Kurata, N., et al. Histopathologic evaluation of vascular findings in the cochlea in patients with presbycusis. JAMA Otolaryngol Head Neck Surg. 142 (2), 173-178 (2016).
- Wangemann, P., et al. Loss of KCNJ10 protein expression abolishes endocochlear potential and causes deafness in Pendred syndrome mouse model. BMC Med. 2, 30(2004).
- Ding, L., Wang, J. miR-106a facilitates the sensorineural hearing loss induced by oxidative stress by targeting connexin-43. Bioengineered. 13 (6), 14080-14093 (2022).
- Wan, H., et al. PARP1 inhibition prevents oxidative stress in age-related hearing loss via PAR-Ca(2+)-AIF axis in cochlear strial marginal cells. Free Radic Biol Med. 220, 222-235 (2024).
- Zhang, Y., et al. Decreased poly(ADP-ribose) polymerase 1 expression attenuates glucose oxidase-induced damage in rat cochlear marginal strial cells. Mol Neurobiol. 53 (9), 5971-5984 (2016).
- Fetoni, A. R., et al. Pathogenesis of presbycusis in animal models: A review. Exp Gerontol. 46 (6), 413-425 (2011).
- Marie, A., et al. Senescence-accelerated mouse prone 8 (SAMP8) as a model of age-related hearing loss. Neurosci Lett. 656, 138-143 (2017).
- Li, W., et al. Rodent models in sensorineural hearing loss research: A comprehensive review. Life Sci. 358, 123156(2024).
- Bommakanti, K., et al. Cochlear histopathology in human genetic hearing loss: State of the science and future prospects. Hear Res. 382, 107785(2019).
- Nicolson, T. Navigating hereditary hearing loss: Pathology of the inner ear. Front Cell Neurosci. 15, 660812(2021).
- Liu, W., et al. Applications and challenges of CRISPR-Cas gene-editing to disease treatment in clinics. Precis Clin Med. 4 (3), 179-191 (2021).
- Guo, D., et al. Establishment methods and research progress of livestock and poultry immortalized cell lines: A review. Front Vet Sci. 9, 956357(2022).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
