Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Protocol voor het bestuderen van Honokiol-regulatie van transformerende groeifactor beta 1/smad-signalering in ultraviolet A-geïnduceerde huidfotoverouderingsmodellen

208 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/70099

⸱

8 mei 2026

 ,  ,  , 
1Plastic Surgery Center, the 988th Hospital of Joint Logistic Support Force of Chinese People's Liberation Army

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol onderzoekt of honokiol UVA-geïnduceerde fotoveroudering in menselijke dermale fibroblasten en muizenhuid verbetert door de TGF-β1/Smad-route te activeren en de MMP-expressie te verminderen.

Samenvatting

Honokiol (HNK), een belangrijk bestanddeel afkomstig van Magnolia officinalis, heeft het potentieel om huidziekten te behandelen. Op dit moment zijn de impact en het werkingsmechanisme van HNK op door ultraviolet A (UVA) veroorzaakte fotoschade in de huid onduidelijk. Een fotoverouderingsschademodel van HDF-cellen en haarloze muizenhuid werd geconstrueerd door UVA-inductie. De impact van HNK op de levensvatbaarheid van normale HDF-cellen en UVA-geïnduceerde HDF-cellen werd onderzocht via de cellevensvatbaarheidstest. SOD, GSH, CAT en MDA-niveaus in HDF-cellen werden gemeten met verschillende kits, en ROS-niveaus werden gemeten met DCFH-DA en Dihydroethidium. SA-β-galactosidase en TUNEL-kleuring detecteerden senescentie en apoptose in HDF-cellen, en flowcytometrie beoordeelde de celcyclusprogressie. Histopathologische schade aan de huid werd beoordeeld door pathologische kleuring. Daarnaast werden immunofluorescentie en Western blot gebruikt om de eiwitniveaus van Ki67, collageen, matrix metalloproteinase (MMP) en TGF-β1/Smad route-geassocieerde eiwitniveaus te beoordelen. De behandeling van HNK (2,5-10 μM) had geen nadelig effect op de normale levensvatbaarheid van HDF-cellen, maar verminderde door UVA geïnduceerde HDF-celschade, waardoor oxidatieve stress en apoptose werden verminderd. UVA induceerde de senescentie van HDF-cellen, induceerde S-fase arrest, verlaagde Ki67, verlaagde het collageengehalte en verhoogde MMP-expressie, terwijl HNK deze door UVA veroorzaakte afwijkingen effectief verzwakte. Daarnaast veroorzaakte UVA diepere rimpels, een lager water- en collageengehalte, en een toename van de epitheeldikte in de huid van de muis, terwijl subcutane injectie van HNK pathologische schade aan huidweefsel verminderde en het water- en collageengehalte verhoogde. Bovendien activeerde HNK de TGF-β1/Smad-route, en de TGF-β1-remmer SB431542 het beschermende effect van HNK tegen fotoverouderingsschade in HDF-cellen verzwakt. Samenvattend heeft HNK het potentieel om een medicijn te zijn om fotoverouderingsschade te verlichten door MMP-expressie te verminderen via activatie van de TGF-β1/Smad-route, waardoor UVA-geïnduceerde fotoveroudering in HDF-cellen en muishuid wordt geremd.

Inleiding

Het proces van huidveroudering is ingewikkeld en verdeeld in twee hoofdvormen: natuurlijke veroudering en fotoveroudering1. Studies tonen aan dat tot wel 80% tot 90% van de huidveroudering wordt veroorzaakt door exogene factoren in het milieu (bijv. ultraviolette straling, luchtvervuiling), waarvan langdurige door ultraviolette straling veroorzaakte fotoveroudering de ernstigste effecten heeft 2,3. Ultraviolette straling wordt onderverdeeld in UVC, UVB en UVA. Omdat UVC de ozonlaag niet kan doordringen, richt het huidige onderzoek naar fotoveroudering zich op UVA (320-400 nm) en UVB (280-320 nm)4,5,6. In vergelijking met UVB heeft UVA minder energie, maar is het meer doordringend, dringt door de epidermis en reikt diep in de huid, wat een belangrijke oorzaak is van ernstige huidverouderingvan 7 jaar. Eerdere studies hebben aangetoond dat de schade veroorzaakt door 57 mJ/cm2 UVB en 20 J/cm2 UVA-bestraling aan HaCaT-cellen vergelijkbaar ismet 8. Huidfotoveroudering veroorzaakt veranderingen in de functie en structuur van de huid, specifiek geuit in het doorhangen van huidoppervlakweefsel, diepere rimpels, verlies van collageen en het verschijnen van een grijze huidkleur die met het blote oog zichtbaar is; In ernstige gevallen kunnen verschillende goedaardige, voorstadia van kanker laesies en tumorenoptreden. Samen met de toename van onderzoek naar veroudering en anti-veroudering zijn de gezondheidsrisico's van fotoveroudering een van de belangrijkste gezondheidszorgen wereldwijd geworden. Daarom is het cruciaal om de pathofysiologische processen te onderzoeken die ten grondslag liggen aan door UVA veroorzaakte fotoverouderingsschade, met het oog op het ontwikkelen van nieuwe therapeutische opties voor de behandeling.

Gewonnen uit Magnolia officinalis, een traditioneel Chinees medicinaal kruid, is Honokiol (HNK) een belangrijke bioactieve verbinding met de chemische formule C18H18O211. HNK vertoont verschillende farmacologische activiteiten, en de fenolhydroxylgroep is zeer gevoelig voor oxidatie en heeft sterke antioxidanten en vrije radicalen afzuigende effecten12. Daarnaast heeft HNK antibacteriële, ontstekingsremmende, antivirale, antitumor-, antidepressiva-, neuroprotectieve en anti-voortijdige eierstokfalen farmacologische effecten 13,14,15,16. Orale HNK is in dierstudies en klinische studies als vrijwel veilig vastgesteld, en er zijn geen significante bijwerkingen vastgesteld 17,18,19. Recente studies hebben aangetoond dat HNK door UVB veroorzaakte huidkanker20 voorkomt en de door UVB veroorzaakte ontstekingsreactie en DNA-hypermethylatie21 remt, wat wijst op het mogelijke gebruik bij de behandeling van huidaandoeningen. In vergelijking met veelgebruikte anti-fotoverouderingsmiddelen, waaronder vitamine C en resveratrol, heeft HNK onderscheidende en superieure eigenschappen: de lipofiele structuur zorgt voor een betere transdermale permeabiliteit dan hydrofiele vitamine C22; en het vertoont een hogere fotostabiliteit en biobeschikbaarheid in vivo dan resveratrol23. Deze preklinische bevindingen ondersteunen het idee dat HNK veelbelovend translationeel potentieel heeft als een veilige en effectieve kandidaat voor huidverzorgingsproducten en klinische interventies tegen door ultraviolet veroorzaakte huidbeschadiging. De impact van HNK-behandeling op huidfotoverouderingsschade veroorzaakt door UVA is echter nog niet gerapporteerd.

Transformerende groeifactor-β1 (TGF-β1) is een multifunctionele cytokine die cruciaal is voor celgroei en -ontwikkeling, weefselherstel en regeneratie, en de groei en ontwikkeling van cellen, weefsels en organen24,25. Er is aangetoond dat TGF-β1 voornamelijk signalen naar de cel stuurt via leden van de Smad-eiwitfamilie, wat leidt tot de specifieke regulatie van transcriptie van downstream doelgenen. Wanneer TGF-β1-signalering wordt geactiveerd, resulteert dit in fosforylering van Smad2 en Smad326,27. Recente studies hebben een sterk verband aangetoond tussen het TGF-β1/Smad-pad en huidfibrose en fotoveroudering28,29. Er is gerapporteerd dat het zoogdierdoelwit van rapamycine de TGF-β1/Smad-route in rattenhuidweefsels activeert, wat op zijn beurt de synthese van ceramiden bevordert, die belangrijk zijn voor het vasthouden van huidvocht en het handhaven van de huidbarrière30. Opmerkelijk is dat er is gerapporteerd dat HNK de TGF-β1/Smad-route in lever-stellate cellen heeft gemoduleerd, wat op zijn beurt leverfibrose31 heeft verlicht. Daarom werden cellulaire en muismodellen van door UVA veroorzaakte fotoverouderingsschade opgezet, met 2,5–10 μM HNK-behandeling in HDF-cellen en 5 mg/kg of 10 mg/kg HNK-interventie bij haarloze muizen, om de effecten van HNK op fotoverouderingsschade en de mogelijke rol ervan bij het moduleren van de TGF-β1/Smad-route te onderzoeken. Deze studie had als doel nieuwe therapeutische strategieën te ontwikkelen voor door UVA veroorzaakte huidfotoschade.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle celkweekexperimenten werden uitgevoerd volgens de institutionele bioveiligheidsrichtlijnen en uitgevoerd onder Biosafety Level 2 (BSL-2) laboratoriumomstandigheden. Dierproeven werden uitgevoerd na goedkeuring van de Animal Ethics Committee van het 988e Ziekenhuis van de Gezamenlijke Logistieke Ondersteuningsmacht van het Chinese Volksbevrijdingsleger (goedkeuringsnummer: 2023-089).

Alle experimentele procedures werden uitgevoerd volgens de institutionele en nationale richtlijnen voor de verzorging en het gebruik van proefdieren. Aan het einde van het experiment werden muizen geëuthanaseerd via een overdosis natriumpentobarbital (100 mg/kg, intraperitoneale injectie). Alle inspanningen werden geleverd om het lijden van dieren tijdens huisvesting, behandeling en bemonstering te minimaliseren. De reagentia, chemicaliën, apparatuur en software die in het protocol worden gebruikt, staan vermeld in de Materiaaltabel.

1. Celkweek en verwerking

  1. Kweek menselijke dermale fibroblasten (HDF) in een fibroblastkweekmedium. Houd de kweek op 37 °C in een omgeving met een verzadigde luchtvochtigheid en 5%CO2.
  2. Vervang het kweekmedium elke 3 dagen en doe HDF door in een verhouding van 1:3 wanneer het confluent is.
  3. Bestral HDF met UVA-lampen (emissiespectrum: 320-400 nm) bij een dosis van 5 J/cm2.
  4. Vul direct na 30 minuten UVA-bestraling aan met vers medium. Herhaal UVA-bestraling eenmaal per dag gedurende 8 opeenvolgende dagenen 32 jaar.
  5. Behandel HDF met 2,5, 5, 10, 20 of 40 μM HNK gedurende 24 uur of 48 uur in de dosisscreeningsexperimenten33. Behandel HDF met 2,5, 5 of 10 μM HNK gedurende 24 uur, gevolgd door UVA-bestraling (5 J/cm2) in latere experimenten.
  6. Blootstel HDF aan 10 μM HNK gedurende 4 uur, incubeer vervolgens met 10 μM TGF-β1 inhibitor SB431542 gedurende 24 uur, en bestral tenslotte met UVA (5 J/cm2) in de HNK+SB431542 groep.

2. Beoordeling van cellevensvatbaarheid

  1. Inoculeer HDF in 96-put celkweekplaten met een dichtheid van 1×104 cellen per put.
  2. Voeg na verschillende behandelingen 10 μL van 10% wateroplosbaar tetrazoliumzoutreagens toe aan elke put tot een eindvolume van 100 μL per put, en incubeer de cellen bij 37°C gedurende 1,5 uur in het donker.
  3. Meet de OD450-waarden van de cellen met behulp van een microplaatlezer.

3. Bepaling van superoxidedismutase (SOD), malondialdehyde (MDA), catalase (CAT) en glutathion (GSH) niveaus

  1. Was HDF met 1 mL voorgekoelde PBS (0,01 M, pH 7,4), voeg 200 μL SOD-monstervoorbereidingsoplossing toe (uit SOD Assay Kit) om cellen 15 minuten op ijs te laten lyseren.
  2. Centrifugeer het lysaat op 8000 × g gedurende 5 minuten bij 4 °C en verzamel het supernatant als proefmonster.
  3. Gebruik een BCA (Bicinchoninezuur) eiwittestkit om de eiwitconcentratie van het supernatant te bepalen en pas het monster aan op 50 μg totaal eiwit in een volume van 50 μL.
  4. Meng het 50 μg eiwitmonster met de SOD-assaybuffer tot een eindreactievolume van 200 μL, en incubeer het mengsel bij 37 °C gedurende 30 minuten in het donker, waarna je de OD450-waarde meet.
  5. Neem hetzelfde cellysaatsupernatant dat voor de SOD-assay wordt gebruikt, meet de CAT-, GSH- en MDA-niveaus met behulp van de respectievelijke assay-kits.

4. Meting van cellulaire ROS-niveaus

  1. Behandel HDF-cellen met verschillende omstandigheden, spoel twee keer met 500 μL PBS en meng goed met 500 μL fluorescerende sonde van 10 μM reactieve zuurstofsoorten en incubeer bij 37 °C gedurende 20 minuten uit de buurt van licht.
  2. Centrifugeer op 1000 × g gedurende 5 minuten op kamertemperatuur om de cellen te verzamelen, en spoel daarna twee keer met 500 μL PBS.
  3. Susseer de cellen opnieuw in een 500 μL celkweekmedium en analyseer vervolgens de kleuring met flowcytometrie.
  4. Registreer de fluorescentieintensiteit met behulp van flowcytometrie-analysesoftware en bereken vervolgens ROS-niveaus op basis van de fluorescentieintensiteit waarbij een hogere ROS overeenkomt met sterkere groene fluorescentie.

5. Senescentie-geassocieerde β-galactosidase (SA-β-galactosidase) kleuring

  1. Zaad HDF in 6-put celkweekplaten met een dichtheid van 1×106 cellen per put en kweek volgens therapie. Na verschillende behandelingen was je HDF één keer met 2 ml PBS.
  2. Voeg 1 ml β-galactosidase kleurfixatiemiddel toe aan elke put en incubeer de cellen op kamertemperatuur met fixatief gedurende 15 minuten.
  3. Was de cellen drie keer met 2 mL PBS, voeg 1 mL kleuringswerkoplossing toe aan elke put en incubeer dan 's nachts in het donker bij 37°C.
  4. Observeer en fotografeer de cellen met een lichtmicroscoop (senescente cellen lijken blauw).

6. Celcyclus-assay

  1. Zaad HDF in 6-wellplaten bij 1×106 cellen per put; na verschillende behandelingen, spoel je cellen twee keer met 2 mL PBS.
  2. Centrifugeer op 1000 × g gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur om cellen te verzamelen, voeg 1 mL 70% ethanol (celfixatief) toe en meng voorzichtig door te pipetteren. Plaats de vaste cellen 12 uur in een koelkast van 4°C.
  3. Bereid 500 μL per monster van celkleuringsoplossing voor door propidiumjodide (PI, eindconcentratie 50 μg/mL) en RNaseA (eindconcentratie 200 μg/mL) te mengen in PBS. Blootstel cellen aan 500 μL kleuringsoplossing, en incubeer in het donker bij 37°C gedurende 30 minuten.
  4. Beoordeel de fluorescentieintensiteit met behulp van flowcytometrie. Voer celcyclusanalyse uit met een flowcytometer.

7. TUNEL-vlekken

  1. Blootstel HDF-cellen van verschillende behandelgroepen aan 1 mL 4% paraformaldehyde en incubeer bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten.
  2. Voeg 1 ml PBS met 0,3% Triton X-100 toe aan de cellen en incubeer 5 minuten op kamertemperatuur.
  3. Was de cellen twee keer met PBS en voeg dan 500 μL TUNEL assayoplossing druppelgewijs toe om de cellen gelijkmatig te bedekken. Incubeer 1,5 uur in het donker op 37°C.
  4. Voeg 200 μL DAPI-kleuringsoplossing toe om de cellen te bedekken en incubeer 10 minuten buiten het licht bij 25 °C.
  5. Sluit de cellen af met een fluorescentiesignaalconserveringsmedium, waarna je ze observeert en fotografeer met een fluorescentiemicroscoop (TUNEL-positieve cellen tonen groene fluorescentie).

8. Immunofluorescentiekleuring

  1. Zaad HDF-cellen uit verschillende behandelgroepen in 12-wellplaten. Zodra de celdichtheid 50%-60% bereikt, stel je de cellen bloot aan 1 mL 4% paraformaldehyde en incubeer je ze 25 minuten op kamertemperatuur.
  2. Voeg 1 ml 5% runderserumalbumine (BSA) druppelwijs toe om het celoppervlak te blokkeren, en incubeer bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten.
  3. Voeg 500 μL primaire antilichamen Ki67 (1:300), collageen I (1:100), matrixmetalloproteïnase (MMP)-1 (1:50) of MMP-3 (1:100) dropwise toe en incubeer bij 4°C gedurende de nacht.
  4. De volgende dag incubeer je de cellen met 500 μL fluoresceïne-isothiocyanaat (FITC)-gelabeld secundair antilichaam (1:100) bij 37°C buiten het licht gedurende 1 uur.
  5. Voeg 200 μL DAPI-kleuringsoplossing toe om de cellen te bedekken, incubeer 10 minuten weg van licht, observeer met een fluorescentiemicroscoop en analyseer met beeldanalysesoftware (collageen I en MMP-1 positieve cellen tonen rode fluorescentie, Ki67- en MMP-3-positieve cellen vertonen groene fluorescentie).

9. ELISA

  1. Voeg 100 μL HDF-celkweeksupernatant toe aan putten met MMP-1 of MMP-3 ELISA kitplaten, en incubeer bij 37°C gedurende 2 uur.
  2. Was de putten drie keer met 200 μL PBS, voeg vervolgens 100 μL van het bijbehorende antilichaam toe aan elke put en incubeer 1 uur in het donker bij 37 °C.
  3. Spoel de putten 3 keer met 200 μL waspadding (inbegrepen in de kit), schud overtollige oplossing eraf en incubeer de monsters met 100 μL streptavidin-HRP gedurende 30 minuten bij 37°C in het donker.
  4. Na het spoelen met PBS voeg je 100 μL substraat A en B toe volgens de instructies van de kit en breng je 10 minuten in het donker op 37°C incubatie.
  5. Voeg 50 μL afsluitoplossing toe, meng goed, beoordeel de OD450-waarde met een microplaatlezer en bereken de concentratie.

10. Beeldverouderingsschade bij muismodelconstructie

  1. Huisdieren SPF-kwaliteit vrouwelijke SKH1 haarloze muizen (15-20 g, 4-5 weken oud) bij 22 °C met 55%-60% luchtvochtigheid en bieden autonome toegang tot voedsel en water. Desinfecteer regelmatig faciliteiten, waaronder voedselcontainers, waterflessen en drinktuiten.
  2. Wijs muizen willekeurig toe aan de controlegroep (n=6) en de modelgroep (n=18). Bestralen modelgroepmuizen met UVA bij 0,35 J/cm2 gedurende 8 weken34; House Control Group muizen in dezelfde omgeving zonder UVA-straling.
  3. Verdeel de modelgroep muizen gelijk in 3 subgroepen (n=6 elk).
  4. Geef subcutane injecties van HNK van 5 mg/kg of 10 mg/kg in 100 μL volume twee keer per week aan twee subgroepen tijdens UVA-bestraling (geregistreerd als respectievelijk de 5 mg/kg HNK-groep en 10 mg/kg HNK-groep). Geef twee keer per week subcutane injecties van 100 μL zoutoplossing aan de derde subgroep tijdens UVA-bestraling (record als UVA-groep).
  5. Evalueer de huidrimpelvorming en het watergehalte na succesvolle modellering35.
  6. Euthanaseer muizen met natriumpentobarbital (100 mg/kg) intraperitoneaal en verzamel vervolgens dorsale huidweefsels voor verdere experimenten.

11. Meting van huidcollageen I-inhoud

  1. Verzamel 50 mg dorsale huidweefsels van de muis, maal ze grondig in vloeibare stikstof en lys ze met 500 μL voorgekoelde RIPA-lysisbuffer gedurende 30 minuten op ijs.
  2. Centrifugeer het lysaat op 8000 × g gedurende 5 minuten bij 4 °C, verzamel het supernatant en meet het collageengehalte met een pro-collageen I C peptide-assay kit volgens de instructies van de fabrikant.

12. Hematoxyline- en eosinekleuring (HE)

  1. Hecht muishuidweefsels in 10 mL 4% paraformaldehyde bij kamertemperatuur gedurende 24 uur, droog in gradiënt ethanol (50%, 75%, 95%, 100%, elk gedurende 5 minuten), leg in paraffine en snijd in plakjes van 4 μm.
  2. Bak de plakjes 8 uur op 65°C, deparaffiniseer twee keer in xyleen gedurende 10 minuten en hydrateer ze in gradiëntethanol bij kamertemperatuur.
  3. Beits de plakjes 8 minuten met een hematoxyline-oplossing, spoel 1 minuut met stromend kraanwater, differentieer met differentiatieoplossing 30 seconden en kleur 1 minuut met eosine op kamertemperatuur.
  4. Dehydrateer de gekleurde plakjes in gradiëntethanol, zuiver in xyleen, sluit af met montagemedium en bekijk onder een microscoop (De celkern lijkt blauwpaars, terwijl het cytoplasma, de collageenvezels en erytrocyten in verschillende mate roze lijken).

13. Masson-kleuring

  1. Kleur paraffinedelen van muizenhuidweefsels met Masson trichrome kleurkit36. Deparaffine-secties in xyleen twee keer gedurende 10 minuten, voeg Weigert ijzerhematoxyline kleuroplossing toe en kleur 10 minuten.
  2. Differentieer met een zuur ethanoldifferentiatie-oplossing gedurende 30 seconden, spoel 5 minuten met stromend kraanwater, en kleur dan druppels met een Ponceau-fuchsin kleuroplossing gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Doe reverse blueing met Masson's blue solution en spoel daarna 1 minuut met gedestilleerd water.
  3. Bereid een zwakke zuurwerkoplossing voor in een verhouding van gedestilleerd water: zwakke zuuroplossing (geleverd in de kit) = 2:1; Voeg 1 ml zwakke zuurwerkoplossing druppelgewijs toe en was het 30 seconden op kamertemperatuur.
  4. Giet overtollige vloeistof eraf, voeg druppelgewijs 1 ml fosfomolybdische zuuroplossing toe en behandel het 2 minuten op kamertemperatuur. Voeg 1 ml van de zwakke zuurwerkoplossing toe druppels, en was dan 30 seconden af.
  5. Giet overtollige vloeistof eraf, voeg 1 ml anilineblauwe kleuroplossing druppelgewijs toe en beits 1 minuut. Voeg 1 ml zwakke zuurwerkoplossing druppelloos toe en was het 30 seconden.
  6. Dehydrateer snel in 95% ethanol gedurende 2 seconden. Dehydrateer twee keer in absolute ethanol, elke keer 10 seconden.
  7. Na het drogen maak je de delen los met xyleen en monteer je ze met neutrale lijm. Observeer de verdeling van collageenvezels in elke groep onder een microscoop (collageenvezels zijn blauw, terwijl spiervezels, cytoplasma en erytrocyten felrood zijn en celkernen duidelijk blauwzwart).

14. Meting van huidweefsel ROS-niveaus

  1. Neem bevroren stukken muizenhuidweefsel (bereid binnen 1 uur na excisie), breng 1 ml reinigingsoplossing druppelwijs over het hele oppervlak van de sectie en laat het 10 minuten op kamertemperatuur staan.
  2. Schud de wasoplossing eraf en voeg vervolgens 1 mL 10 μM reactieve zuurstofprobe drop-wise toe om de secties gelijkmatig te bedekken; Incubeer 30 minuten op 37 °C weg van licht.
  3. Spoel de secties twee keer af met PBS, voeg dekkingsdoeken toe en observeer met een fluorescentiemicroscoop (ROS-positieve gebieden vertonen rode fluorescentie; hoe lager het ROS-niveau, hoe zwakker het rode fluorescentiesignaal).

15. Testen van biochemische indicatoren

  1. Verzamel muizenserum en bereid detectiereagentia voor volgens de instructies van de bijbehorende assaykits.
  2. Meet de activiteiten van aspartaattransaminase (AST) en alaninetransaminase (ALT) in muizenserum met behulp van de respectievelijke kits.
  3. Bepaal de niveaus van ureumstikstof (BUN) en creatinine (CRE) in het muizenserum met behulp van de respectievelijke kits.

16. Western blot

  1. Verzamel 50 mg weefsel of 1×10à 6 cellen, lys de monsters op ijs gedurende 30 minuten met 200 μL RIPA-lysisbuffer om eiwitten te verkrijgen.
  2. Centrifugeer op 8000 × g gedurende 5 minuten bij 4 °C en verzamel het supernatant. Beoordeel het eiwitgehalte in cellen en weefsels met behulp van de BCA eiwitconcentratie-assaykit.
  3. Voer elektroforese uit van monsterproteïnen op 12% SDS-PAGE gel en breng gescheiden eiwitten over naar PVDF-membranen bij 4 °C.
  4. Blokkeer PVDF-membranen met 5% BSA gedurende 3 uur bij kamertemperatuur. Spoel de membranen 3 keer met TBST (bevat 20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl en 0,1% Tween-20), en incubeer dan de nacht bij 4°C met primaire antilichamen: P53 (1:1000), P21 (1:1000), P16 (1:100), collageen I (1:1000), Cycline A2 (1:500), cycline-afhankelijke kinase 2 (CDK2, 1:1000), MMP-1 (1:500), MMP-3 (1:1000), TGF-β1 (1:1000), Smad2 (1:100), Smad3 (1:1000), p-Smad2 (1:1000) of p-Smad3 (1:1000).
  5. Op de tweede dag was je de membranen 3 keer met TBST en broed je dan uit met 1 mL geitenanti-konijn IgG (1:10000) op kamertemperatuur gedurende 2 uur. Breng 500 μL van het enhanced chemiluminescence (ECL) reagens gelijkmatig aan op de membranen en scan ze vervolgens met een gelbeeldvormingssysteem.
  6. Voer grijswaardenanalyse uit met beeldanalysesoftware. Druk het relatieve expressieniveau uit als de verhouding van de grijze waarde tot die van GAPDH.

17. Statistische analyse

  1. Voor in vitro celgebaseerde assays worden alle experimenten onafhankelijk drie keer herhaald (n=3, biologische replica's).
  2. Voor in vivo dierproeven worden 6 muizen per groep opgenomen (n=6), wat voldoet aan de 3R-principes voor laboratoriumdierenwelzijn en ethiek.
  3. Alle resultaten worden uitgedrukt als gemiddelde ± standaarddeviatie. Voer statistische analyses uit met behulp van statistische analysesoftware. De normaliteit van de gegevens werd getest met de Shapiro-Wilk-test.
  4. Voor normaal verdeelde data gebruik je eenrichtings-ANOVA voor multigroepsvergelijking, gevolgd door Tukey's post-hoc test voor paargewijze vergelijkingen tussen groepen. Voor niet-normaal verdeelde data past u de niet-parametrische Kruskal-Wallis-test toe. P< 0,05 duidt op een significant verschil.
  5. Genereer grafieken met behulp van grafische software.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

HNK verlicht oxidatieve stressschade in HDF-cellen veroorzaakt door UVA
De effecten van verschillende concentraties van HNK-behandeling gedurende 24 of 48 uur op de levensvatbaarheid van HDF-cellen werden onderzocht met een cellevensvatbaarheidstest om te screenen op de juiste concentratie en behandelingsduur. De resultaten toonden aan dat 2,5, 5 en 10 μM HNK de levensvatbaarheid van normale HDF-cellen na 24 uur of 48 uur behandeling niet significant beïnvloedden, wat...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Ultraviolet licht is een omgevingsfactor die cellen en organismen schaadt. Eerdere studies hebben gerapporteerd dat UVA, met zijn hoge penetratievermogen, het belangrijkste type ultraviolet licht is dat het aardoppervlak38 bereikt. Fibroblasten zijn belangrijke functionele cellen in de dermis, en hun veroudering kan direct of indirect de huidverouderingveroorzaken. UVA-geïnduceerde fotoverouderingsschade in het HDF-celmodel en he...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs bevestigen dat zij geen financiële belangenconflicten hebben.

Dankbetuigingen

Geen enkele

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
ALT activity assay kitBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaP2711Malanine transaminase activity detection kit
Amplex Red CRE assay kitBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaS0291Screatinine detection kit
AntiFade mounting mediumBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaP0126fluorescence signal preservation mounting medium
AST activity assay kitBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaP2715Saspartate transaminase activity detection kit
BCA protein assay kitBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaP0012protein concentration determination kit
BSASigma-Aldrich, St. Louis, MO, USAV900933blocking reagent for non-specific binding
BUN Assay kitBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaS0574Sblood urea nitrogen detection kit
CAT Assay kitBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaS0051catalase activity detection kit
CCK-8 reagentSigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA96992cell viability assay solution which is a water-soluble tetrazolium salt
CDK2 antibodyInvitrogen, Carlsbad, CA, USAPA5-79024primary antibody for CDK2 detection
Chemiluminescent agent ECLMedChemExpress, Monmouth Junction, NJ, USAHY-K1005enhanced chemiluminescence detection reagent
Collagen I antibodyInvitrogen, Carlsbad, CA, USAPA1-26204primary antibody for collagen I detection
Cyclin A2 antibodyInvitrogen, Carlsbad, CA, USAPA5-34682primary antibody for Cyclin A2 detection
DAPI staining solutionSigma-Aldrich, St. Louis, MO, USAD9542nuclear staining dye
DCFH-DA fluorescent probeMedChemExpress, Monmouth Junction, NJ, USAHY-D0940reactive oxygen species fluorescent probe
Differentiation solutionBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaC0161sreagent for hematoxylin differentiation step
Dihydroethidium probeBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaS0063reactive oxygen species probe
Fibroblast culture mediumSunncell Biotechnology Co., Ltd., Wuhan, Hubei, ChinaSNPM-H342complete culture medium for fibroblast growth
FITC-labeled goat anti-rabbit IgGInvitrogen, Carlsbad, CA, USAF-2765fluorescein isothiocyanate (FITC)-labeled secondary antibody
Flow cytometryBD biosciences, San Jose, CA, USABD FACSCaliburTMflow cytometer
FlowJo softwareBD biosciences, San Jose, CA, USAv10.8flow cytometry analysis software
Fluorescence microscopeLeica, Heidelberg, GermanyDM IL LEDmicroscope for fluorescence imaging
GAPDH antibodyInvitrogen, Carlsbad, CA, USAPA1-987internal control antibody for protein normalization
gel imaging systemInvitrogen, Carlsbad, CA, USAiBright CL1500imaging system for protein detection
goat anti-rabbit IgGInvitrogen, Carlsbad, CA, USA31460secondary antibody for immunodetection
Graphpad Prism 9.0 softwareGraphPad Software, San Diego, CA, USAPrism 9.0graphing software
GSH Assay kitBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaS0053glutathione content detection kit
HE staining kitBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaC0105Shistological staining kit for tissue morphology analysis
HNKMedChemExpress, Monmouth Junction, NJ, USAHY-N0003honokiol, bioactive compound
Human dermal fibroblastsSunncell Biotechnology Co., Ltd., Wuhan, Hubei, ChinaSNP-H342primary human skin fibroblast cells
IBM SPSS Statistics 26.0 softwareIBM Corporation, Armonk, NY, USAIBM SPSS Statistics 26.0statistical analysis software
ImageJ softwareWayne Rasband, National Institute of Mental Health, USAversion 1.54himage analysis software
Ki67 antibodyInvitrogen, Carlsbad, CA, USAMA5-14520primary antibody for cell proliferation marker detection
Light microscopeLeica, Heidelberg, GermanyDM3000optical microscope for brightfield imaging
Masson trichrome staining kitSolarbio, Beijing, ChinaG1340collagen and connective tissue staining kit
MDA Assay kitBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaS0131Smalondialdehyde level detection kit (lipid peroxidation marker)
Microplate ReaderThermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA1410101absorbance measurement instrument for cell-based assays
MMP-1 antibodyInvitrogen, Carlsbad, CA, USAPA5-27210primary antibody for matrix metalloproteinase-1 detection
MMP-1 ELISA kitEnzyme-linked Biotechnology, Shanghai, Chinaml038199quantitative detection of MMP-1 in biological samples
MMP-3 antibodyAbcam, Cambridge, MA, USAab52915primary antibody for matrix metalloproteinase-3 detection
MMP-3 ELISA kitEnzyme-linked Biotechnology, Shanghai, Chinaml105322quantitative detection of MMP-3 in biological samples
Neutral gumBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaC0173mounting medium
P16 antibodyInvitrogen, Carlsbad, CA, USAPA5-20379primary antibody for p16 protein detection
P21 antibodyInvitrogen, Carlsbad, CA, USAMA5-14949primary antibody for p21 protein detection
P53 antibodyAbcam, Cambridge, MA, USAab131442primary antibody for p53 protein detection
paraformaldehydeSolarbio, Beijing, ChinaP1110cell and tissue fixation reagent
PIBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaST512propidium iodide for DNA staining in cell cycle analysis
Pro-collagen I C peptide assay kitTAKARA, Tokyo, JapanMK101collagen synthesis detection kit
p-Smad2 antibodyInvitrogen, Carlsbad, CA, USA44-244Gprimary antibody for phosphorylated Smad2 detection
p-Smad3 antibodyInvitrogen, Carlsbad, CA, USA44-246Gprimary antibody for phosphorylated Smad3 detection
PVDF membranesInvitrogen, Carlsbad, CA, USA88520protein transfer membrane for western blotting
RIPA lysis bufferBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaP0013Bprotein extraction buffer for cell and tissue lysates
RNaseABeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaST579ribonuclease for RNA removal during DNA staining
SA-β-galactosidase staining kitBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaC0602cellular senescence detection kit
SB431542MedChemExpress, Monmouth Junction, NJ, USAHY-10431TGF-β1 signaling pathway inhibitor
SDS-PAGE gelsInvitrogen, Carlsbad, CA, USAWG1403

Referenties

  1. Gu, Y., Han, J., Jiang, C., Zhang, Y. Biomarkers, oxidative stress and autophagy in skin aging. Ageing Res Rev. 59, 101036 (2020).
  2. Chaudhary, M., Khan, A., Gupta, M. Skin ageing: pathophysiology and current market treatment approaches. Curr Aging Sci. 13 (1), 22-30 (2020).
  3. Lephart, E. D. Equol’s anti-aging effects protect against environmental assaults by increasing skin antioxidant defense and ECM proteins while decreasing oxidative stress and inflammation. Cosmetics. 5 (1), 16 (2018).
  4. Gromkowska-Kępka, K. J., Puścion-Jakubik, A., Markiewicz-Żukowska, R., Socha, K. The impact of ultraviolet radiation on skin photoaging—review of in vitro. studies. J Cosmet Dermatol. 20 (11), 3427-3431 (2021).
  5. Tsai, T. Y., et al. Djulis supplementation against oxidative stress and ultraviolet radiation-induced cell damage: the influence of antioxidant status and aging of skin in healthy subjects. J Cosmet Dermatol. 21 (7), 2945-2953 (2022).
  6. McCormick, E., et al. Topical nanoencapsulated cannabidiol cream as an innovative strategy combating UV-A-induced nuclear and mitochondrial DNA injury: a pilot randomized clinical study. J Am Acad Dermatol. 91 (5), 855-862 (2024).
  7. Ansary, T. M., Hossain, M. R., Kamiya, K., Komine, M., Ohtsuki, M. Inflammatory molecules associated with ultraviolet radiation-mediated skin aging. Int J Mol Sci. 22 (8), 3974 (2021).
  8. Deng, H., et al. Pterostilbene's protective effects against photodamage caused by UVA/UVB irradiation. Pharmazie. 73 (11), 651-658 (2018).
  9. Ho, C. Y., Dreesen, O. Faces of cellular senescence in skin aging. Mech Ageing Dev. 198, 111525 (2021).
  10. Bocheva, G., et al. Protective role of melatonin and its metabolites in skin aging. Int J Mol Sci. 23 (3), 1238 (2022).
  11. Rauf, A., et al. Honokiol: a review of its pharmacological potential and therapeutic insights. Phytomedicine. 90, 153647 (2021).
  12. Cardullo, N., Monti, F., Muccilli, V., Amorati, R., Baschieri, A. Reaction with ROO• and HOO• radicals of honokiol-related neolignan antioxidants. Molecules. 28 (2), (2023).
  13. Prasher, P., et al. Honokiol and its analogues as anticancer compounds: current mechanistic insights and structure-activity relationship. Chem Biol Interact. 386, 110747 (2023).
  14. Xin, L., et al. Honokiol alleviates radiation-induced premature ovarian failure via enhancing Nrf2. Am J Reprod Immunol. 90 (4), e13769 (2023).
  15. Faysal, M., et al. Neuropharmacological potential of honokiol and its derivatives from Chinese herb Magnolia species: understandings from therapeutic viewpoint. Chin Med. 18 (1), 154 (2023).
  16. Fan, X. X., et al. Honokiol improves depression-like behaviors in rats by HIF-1α-VEGF signaling pathway activation. Front Pharmacol. 13, 968124 (2022).
  17. Du, E., et al. Dietary honokiol supplementation improves antioxidant capacity, enhances intestinal health, and modulates cecal microbial composition and function of broiler chickens. Poult Sci. 103 (7), 103798 (2024).
  18. Sarrica, A., Kirika, N., Romeo, M., Salmona, M., Diomede, L. Safety and toxicology of magnolol and honokiol. Planta Med. 84 (16), 1151-1164 (2018).
  19. Zhuang, Q., et al. A validated ultra-HPLC-MS/MS method for determination of honokiol in human plasma and its application to a clinical pharmacokinetic study. Bioanalysis. 11 (11), 1085-1098 (2019).
  20. Guillermo, R. F., et al. Time- and dose-response effects of honokiol on UVB-induced skin cancer development. Drug Discov Ther. 6 (3), 140-146 (2012).
  21. Prasad, R., Singh, T., Katiyar, S. K. Honokiol inhibits ultraviolet radiation-induced immunosuppression through inhibition of ultraviolet-induced inflammation and DNA hypermethylation in mouse skin. Sci Rep. 7 (1), 1657 (2017).
  22. Dikalov, S., Losik, T., Arbiser, J. L. Honokiol is a potent scavenger of superoxide and peroxyl radicals. Biochem Pharmacol. 76 (5), 589-596 (2008).
  23. Shen, C. Y., Jiang, J. G., Yang, L., Wang, D. W., Zhu, W. Anti-ageing active ingredients from herbs and nutraceuticals used in traditional Chinese medicine: pharmacological mechanisms and implications for drug discovery. Br J Pharmacol. 174 (11), 1395-1425 (2017).
  24. Kim, K. K., Sheppard, D., Chapman, H. A. TGF-β1 signaling and tissue fibrosis. Cold Spring Harb Perspect Biol. 10 (4), (2018).
  25. Lodyga, M., Hinz, B. TGF-β1—a truly transforming growth factor in fibrosis and immunity. Semin Cell Dev Biol. 101, 123-139 (2020).
  26. Liu, H., et al. TGF-β/Smads signaling pathway, Hippo-YAP/TAZ signaling pathway, and VEGF: their mechanisms and roles in vascular remodeling-related diseases. Immun Inflamm Dis. 11 (11), e1060 (2023).
  27. Huang, Y., et al. HIF-1α switches the functionality of TGF-β signaling via changing the partners of Smads to drive glucose metabolic reprogramming in non-small cell lung cancer. J Exp Clin Cancer Res. 40 (1), 398 (2021).
  28. Xie, X., et al. Iguratimod inhibits skin fibrosis by regulating TGF-β1/Smad signalling pathway in systemic sclerosis. Eur J Clin Invest. 52 (8), e13791 (2022).
  29. Guo, K., et al. Compound collagen peptide powder improves skin photoaging by reducing oxidative stress and activating TGF-β1/Smad pathway. Photochem Photobiol. 100 (6), 1874-1893 (2024).
  30. Yamane, T., et al. mTOR inhibition by rapamycin increases ceramide synthesis by promoting transforming growth factor-β1/Smad signaling in the skin. FEBS Open Bio. 6 (4), 317-325 (2016).
  31. Kataoka, S., et al. Honokiol acts as a potent anti-fibrotic agent in the liver through inhibition of TGF-β1/SMAD signaling and autophagy in hepatic stellate cells. Int J Mol Sci. 22 (24), 13678 (2021).
  32. Jang, H. Y., et al. Fisetin inhibits UVA-induced expression of MMP-1 and MMP-3 through the NOX/ROS/MAPK pathway in human dermal fibroblasts and human epidermal keratinocytes. Int J Mol Sci. 24 (24), 16212 (2023).
  33. Zheng, X., et al. Honokiol attenuates mitochondrial fission and cell apoptosis by activating Sirt3 in intracerebral hemorrhage. Chin Med J (Engl). 136 (6), 719-731 (2023).
  34. Xia, Y., Zhang, H., Wu, X., Xu, Y., Tan, Q. Resveratrol activates autophagy and protects from UVA-induced photoaging in human skin fibroblasts and the skin of male mice by regulating the AMPK pathway. Biogerontology. 25 (4), 649-664 (2024).
  35. Kim, J., Lee, N., Chun, Y. S., Lee, S. H., Ku, S. K. Krill oil's protective benefits against ultraviolet B-induced skin photoaging in hairless mice and in vitro. experiments. Mar Drugs. 21 (9), (2023).
  36. Zhang, C., et al. Combination of lyophilized adipose-derived stem cell concentrated conditioned medium and polysaccharide hydrogel in the inhibition of hypertrophic scarring. Stem Cell Res Ther. 12 (1), 23 (2021).
  37. Sun, G., et al. Panax ginseng Meyer cv. Silvatica phenolic acids protect DNA from oxidative damage by activating Nrf2 to protect HFF-1 cells from UVA-induced photoaging. J Ethnopharmacol. 302 (Pt A), 115883 (2023).
  38. Fadadu, R. P., Wei, M. L. Ultraviolet A radiation exposure and melanoma: a review. Melanoma Res. 32 (6), 405-410 (2022).
  39. Wlaschek, M., Maity, P., Makrantonaki, E., Scharffetter-Kochanek, K. Connective tissue and fibroblast senescence in skin aging. J Invest Dermatol. 141 (4 Suppl), 985-992 (2021).
  40. Duan, Y., et al. Handelin reduces ultraviolet A-induced photoaging by inhibiting reactive oxygen species generation and enhancing autophagy. Tohoku J Exp Med. 259 (3), 189-198 (2023).
  41. Liu, S., et al. Oral supplementation of sea cucumber and its hydrolysate mitigates ultraviolet A-induced photoaging in hairless mice. J Sci Food Agric. 102 (5), 1987-1994 (2022).
  42. Liu, S., et al. Gly-Pro protects normal human dermal fibroblasts from UVA-induced damages via MAPK-NF-κB signaling pathway. J Photochem Photobiol B. 237, 112601 (2022).
  43. Lu, Z., et al. Hesperetin attenuates UVA-induced photodamage in human dermal fibroblast cells. J Cosmet Dermatol. 21 (11), 6261-6269 (2022).
  44. Michel, P., et al. Anti-inflammatory, antioxidant and photoprotective activity of standardised Gaultheria procumbens L. leaf, stem, and fruit extracts in UVA-irradiated human dermal fibroblasts. J Ethnopharmacol. 319 (Pt 2), 117219 (2024).
  45. Fu, H., et al. Tremella fuciformis polysaccharides inhibit UVA-induced photodamage of human dermal fibroblast cells by activating and up-regulating Nrf2/Keap1 pathways. J Cosmet Dermatol. 20 (12), 4052-4059 (2021).
  46. Park, C., et al. Honokiol ameliorates oxidative stress-induced DNA damage and apoptosis of C2C12 myoblasts by regulating ROS generation and the mitochondrial pathway. Anim Cells Syst. 24 (1), 60-68 (2020).
  47. Chen, Q., et al. Metformin attenuates UVA-induced skin photoaging by suppressing mitophagy and the PI3K/AKT/mTOR pathway. Int J Mol Sci. 23 (13), 6969 (2022).
  48. Wang, M., Guo, Y., Wan, M., Chen, Z., Zhong, J. L. TAZ reduces UVA-mediated photoaging through regulation of cell proliferation in skin fibroblasts. Photochem Photobiol. 99 (1), 153-159 (2023).
  49. Han, S., et al. Inhibitory effect of seawater pearl hydrolysate on UVA-induced photoaging of human skin fibroblasts. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 1558288 (2022).
  50. Alam, A., et al. Computational development of new inhibitors for apoptosis stimulating protein of p53 (iASPP) using pharmacophore modeling, docking, and MD simulation approaches. J Cancer Biomol Ther. 1 (2), 1-9 (2024).
  51. Bai, G. L., et al. Rapamycin protects skin fibroblasts from UVA-induced photoaging by inhibition of p53 and phosphorylated HSP27. Front Cell Dev Biol. 9, 633331 (2021).
  52. Zhang, J., Yu, H., Man, M. Q., Hu, L. Aging in the dermis: fibroblast senescence and its significance. Aging Cell. 23 (2), e14054 (2024).
  53. Liu, H., Dong, J., Du, R., Gao, Y., Zhao, P. Collagen study advances for photoaging skin. Photodermatol Photoimmunol Photomed. 40 (1), e12931 (2024).
  54. Fisher, G. J., et al. Skin aging from the perspective of dermal fibroblasts: the interplay between adaptation to the extracellular matrix microenvironment and cell autonomous processes. J Cell Commun Signal. 17 (3), 523-529 (2023).
  55. Li, F., et al. Discovery of matrix metalloproteinase inhibitors as anti-skin photoaging agents. Eur J Med Chem. 267, 116152 (2024).
  56. Song, M. J., et al. Downregulation of carnitine acetyltransferase by promoter hypermethylation regulates ultraviolet-induced matrix metalloproteinase-1 expression in human dermal fibroblasts. J Dermatol Sci. 116 (2), 70-77 (2024).
  57. Choi, S. I., et al. Eisenia bicyclis extract repairs UVB-induced skin photoaging in vitro and in vivo.: photoprotective effects. Mar Drugs. 19 (12), (2021).
  58. Kim, M. K., et al. Dual role of enhancer of zeste homolog 2 in the regulation of ultraviolet radiation-induced matrix metalloproteinase-1 and type I procollagen expression in human dermal fibroblasts. Matrix Biol. 119, 112-124 (2023).
  59. Xue, N., Liu, Y., Jin, J., Ji, M., Chen, X. Chlorogenic acid prevents UVA-induced skin photoaging through regulating collagen metabolism and apoptosis in human dermal fibroblasts. Int J Mol Sci. 23 (13), (2022).
  60. Meng, L., et al. NPRC deletion attenuates cardiac fibrosis in diabetic mice by activating PKA/PKG and inhibiting TGF-β1/Smad pathways. Sci Adv. 9 (31), eadd4222 (2023).
  61. Li, W., et al. Echinacoside exerts anti-tumor activity via the miR-503-3p/TGF-β1/Smad axis in liver cancer. Cancer Cell Int. 21 (1), 304 (2021).
  62. Xiang, D., et al. Physalin D attenuates hepatic stellate cell activation and liver fibrosis by blocking TGF-β/Smad and YAP signaling. Phytomedicine. 78, 153294 (2020).
  63. Jiang, H., Zhou, X., Chen, L. Asiaticoside delays senescence and attenuates ROS generation in UV-exposed cells through regulation of the TGF-β1/Smad pathway. Exp Ther Med. 24 (5), 667 (2022).
  64. Tong, T., Park, J., Moon, Y., Kang, W., Park, T. α-Ionone protects against UVB-induced photoaging in human dermal fibroblasts. Molecules. 24 (9), 1688 (2019).
  65. Liu, X. Y., Hwang, E., Park, B., Xiao, Y. K., Yi, T. H. Photoprotective and anti-inflammatory properties of vina-ginsenoside R7 ameliorate ultraviolet B-induced photodamage in normal human dermal fibroblasts. Appl Biochem Biotechnol. 189 (3), 729-744 (2019).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

TGF-bèta-signaleringSmad-routeHDF-cellenoxidatieve stresscellevensvatbaarheidsassayWestern blotflowcytometrie
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.