Testen Nicotine Tolerantie in Bladluizen Met behulp van een kunstmatige dieet Experiment

Samenvatting

In deze video en test is aangetoond dat de tests van de tolerantie van nicotine om twee soorten bladluizen die een tabaksplanten teistert in het veld en een dat niet.

Samenvatting

Planten kunnen upregulate de productie van vele verschillende seconday metabolieten in reactie op insecten voeden. Een van deze metabolieten, nicotine, is goed te weten insectendodende eigenschappen hebben. Een reactie van tabaksplanten te herbivorie, of wordt aangevreten door insecten op, is het verhogen van de productie van deze neurotoxische alkaloïde. Hier zullen we zien hoe het opzetten van een experiment om dit vraag of een tabak-aangepaste stam van de groene perzikluis, Myzus persicae, kunnen hogere niveaus van nicotine tolereren dan de een stam van dit insect dat niet onveilig tabak in te pakken het veld.

Protocol

In dit experiment zijn 4 volwassen bladluizen ingesloten in een klein plastic bekertje. Ze voeden van vloeibaar dieet gepipetteerd tussen de twee lagen van parafilm strekte zich over de bovenkant van de beker. Na 3 dagen voeding, is de toxiciteit van diëten met verschillende concentraties nicotine in vergelijking met diëten controle door het tellen van volwassen en larvale bladluizen in elke beker.

1. Maak oplossingen die sucrose en 20 aminozuren. Bladluizen kunnen bestaan ​​op dit dieet, het reproduceren van op normale niveaus, gedurende tenminste 1 week. Zie bijgevoegd bestand voor de kunstmatige voeding.
2. Aliquot 1 mL van dit dieet in 6 verschillende Eppendorf buisjes met nicotine. Label ze met betrekking tot de verschillende concentraties nicotine gebruikt, variërend van 0-500μM.
3. Selecteer 4 bladluizen, rood of groen, en in deze experimentele kopjes.
4. Bij het selecteren van bladluizen, is het belangrijk dat zij van consequent leeftijd. Typisch, op zoek naar bladluizen van vergelijkbare grootte en kleur (de rode bladluizen donkerder als ze ouder zijn).
5. Bedek de beker met een stuk Parafilm. Omsluiten het dieet tussen de twee stukken van Parafilm. Gedeeltelijk stretch het tweede parafilm niveau rond de randen van de beker. Aliquot het vloeibaar dieet tussen de lagen, en sluit de bovenste laag naar beneden.
6. Bewaar deze bekers in de insect kamer onder lampen in een lange-dag fotoperiode voor drie dagen, waarna de gegevens voor het experiment kunnen worden verzameld.

Ga naar Annual Reviews van Plant Biology voor meer informatie over dit protocol en de plant immuun voor insecten herbivorie.