Deze studie had als doel de effecten van thymoquinon op oxidatieve stress, de Keap-1/Nrf-2 signaalroute en het gedrag in plasma, de hersenschors en de hippocampus van ratten die zijn blootgesteld aan bisfenol A te onderzoeken.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Deze studie had als doel de effecten van thymoquinon op oxidatieve stress, de Keap-1/Nrf-2 signaalroute en het gedrag in plasma, de hersenschors en de hippocampus van ratten die zijn blootgesteld aan bisfenol A te onderzoeken.
Chronische blootstelling aan bisfenol A (BPA), een veelgebruikte omgevingshormoonverstoorder, wordt steeds vaker in verband gebracht met door oxidatieve stress gemedieerde neurotoxiciteit. Thymoquinon (TQ), een bioactief bestanddeel van Nigella sativa, vertoont krachtige antioxidante eigenschappen; echter, het neuroprotectieve potentieel tegen door BPA veroorzaakte toxiciteit is nog onvolledig begrepen. Gezien de alomtegenwoordige aard van BPA-blootstelling wordt het identificeren van effectieve en toegankelijke neuroprotectieve strategieën steeds belangrijker. Deze studie onderzocht de effecten van TQ op oxidatieve stress, Keap-1/Nrf-2 signalering, gedrag en histopathologische veranderingen bij ratten die aan BPA zijn blootgesteld. In totaal werden 24 volwassen mannelijke Wistar Albino-ratten willekeurig toegewezen aan vier groepen (n = 6/groep): controle, BPA, BPA + 10 mg/kg TQ (BPA+TQ I) en BPA + 20 mg/kg TQ (BPA+TQ II). BPA (50 μg/kg) en TQ werden 30 dagen intragastrisch toegediend. Blootstelling aan BPA veroorzaakte significante gedragsproblemen, oxidatieve stress, verstoring van Keap-1/Nrf-2 signalering en duidelijke histopathologische schade in de hippocampus en cerebrale cortex. De behandeling met TQ verbeterde significant de locomotorische activiteit en depressie-achtig gedrag, verlaagde lipideperoxidatie en stikstofoxideniveaus, herstelde de glutathion-gerelateerde antioxidantcapaciteit en normaliseerde de expressie van Keap-1 en Nrf-2 (p < 0,001). Deze beschermende effecten waren sterker bij de hogere TQ-dosis. Gezamenlijk tonen deze bevindingen aan dat thymoquinon door BPA geïnduceerde neurotoxiciteit vermindert door oxidatieve stress en de Keap-1/Nrf-2 signaalroute, wat het potentieel als neuroprotectief middel tegen milieurelevante BPA-blootstelling benadrukt.
Bisfenol A (BPA) is een synthetische verbinding die veel wordt gebruikt in kunststoffen en epoxyharsen en wordt vaak aangetroffen in voedselverpakkingsmaterialen, watersystemen, medische hulpmiddelen en huishoudelijke producten1. Voortdurende blootstelling aan het milieu heeft zorgen gewekt over de mogelijke neurotoxische effecten, vooral onder chronische laagdosisomstandigheden die weerspiegelen de echte menselijke blootstelling.
Hoewel regelgevende instanties zoals de Amerikaanse Food and Drug Administration en de Amerikaanse Environmental Protection Agency 50 μg/kg/dag hebben gedefinieerd als het niveau zonder waargenomen nadelige effecten, wijst opkomend experimenteel en epidemiologisch bewijs erop dat gedrags- en cognitieve veranderingen kunnen optreden bij lagere doseringen. Daarom is de Europese draaglijke dagelijkse inname verlaagd tot 4 μg/kg/dag, wat de noodzaak benadrukt om de mechanistische effecten van milieurelevante BPA-blootstelling 1,2 te onderzoeken.
Oxidatieve stress wordt beschouwd als een centraal mechanisme ten grondslag aan door BPA veroorzaakte neurotoxiciteit. BPA verstoort de cellulaire redoxbalans door het verminderen van antioxidantenverdedigingen zoals glutathion (GSH) en het verhogen van lipideperoxidatiemarkers, waaronder malondialdehyde (MDA)3,4. De upstream regulerende mechanismen die antioxidantresponsen onder BPA-blootstelling aansturen, blijven echter onvoldoende gekarakteriseerd.
De Kelch-achtige ECH-geassocieerde eiwit 1 (Keap-1)/nucleaire factor erytroïde 2-gerelateerde factor 2 (Nrf-2) route is een belangrijk endogeen antioxidant verdedigingsmechanisme. Onder oxidatieve stresscondities dissocieert Nrf-2 van Keap-1, transloceert naar de kern en activeert de antioxidantrespons-elementafhankelijke genexpressie5. Ondanks de gevestigde rol in cellulaire verdediging is regio-specifieke modulatie van Keap-1/Nrf-2 signaaloverdracht in de hersenen tijdens milieugerelateerde BPA-blootstelling niet uitgebreid onderzocht in combinatie met gedragsuitkomsten.
Thymoquinon (TQ), het belangrijkste bioactieve bestanddeel van Nigella sativa zaadolie, is een lipofiel benzoquinon dat de bloed-hersenbarrière kan passeren. TQ vertoont antioxidante, ontstekingsremmende en anti-apoptotische eigenschappen, deels door activatie van NRF-2 signalering en versterking van de endogene antioxidantcapaciteit5,6. Hoewel eerdere studies de beschermende effecten van TQ in verschillende neurotoxiciteitsmodellen hebben aangetoond, ontbreekt een geïntegreerde methodologische benadering die oxidatieve stressmarkers, Keap-1/Nrf-2-signalering en gedragsparameters binnen hetzelfde BPA-blootstellingsparadigma evalueert 5,6,7.
Hier beschrijven we een reproduceerbaar experimenteel protocol om biomarkers van oxidatieve stress, expressie van de Keap-1/Nrf-2-routen en gedragsveranderingen in een rattenmodel van milieurelevante BPA-blootstelling te beoordelen, en om de neuroprotectieve effecten van thymoquinon over meerdere hersengebieden te evalueren.
We stelden de hypothese op dat blootstelling aan BPA met lage doseringen gedragsstoornissen veroorzaakt door oxidatieve stress-gemedieerde disregulatie van de Keap-1/Nrf-2 signaalroute, en dat thymoquinon deze effecten vermindert door het redoxevenwicht te herstellen en Nrf-2-afhankelijke antioxidantresponsen te activeren.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Alle experimentele procedures werden goedgekeurd door de Institutionele Dierproeven Lokale Ethische Commissie (Goedkeuringsnr: 68429034/07).
Dieren en experimenteel ontwerp
Vierentwintig volwassen mannelijke Wistar Albino-ratten (200-250 g) werden verkregen uit het Experimental Animal Research Laboratory en individueel ondergebracht onder gecontroleerde omstandigheden (12 uur licht/donker cyclus, 24 ± 2 °C) met ad libitum toegang tot standaard voedsel en kraanwater. Dieren werden gewend aan laboratoriumomstandigheden voorafgaand aan het experiment, dat 32 dagen duurde.
Ratten werden willekeurig toegewezen aan experimentele groepen met behulp van een computergegenereerde eenvoudige randomisatiemethode om selectiebias te minimaliseren, met gelijke aantallen dieren toegewezen aan elke groep (n = 6/groep): controle, BPA, BPA + 10 mg/kg thymoquinon (BPA + TQ I), en BPA + 20 mg/kg thymoquinon (BPA + TQ II). De steekproefgrootte werd bepaald door een a priori vermogensanalyse met behulp van G*Power-software (versie 3.1). Op basis van effectgroottes gerapporteerd in eerdere studies 5,6,7 waarin BPA-geïnduceerde neurotoxiciteit en antioxidantinterventies werden geëvalueerd, met name voor biochemische en gedragsmatige uitkomstmaten, werd aangenomen dat een statistische macht van 0,80 werd aangenomen voor eenrichtings-ANOVA. Onder deze omstandigheden was minimaal zes dieren per groep vereist om statistisch significante verschillen tussen experimentele groepen te detecteren.
BPA (50 μg/kg) en TQ (10 of 20 mg/kg) werden intragastrisch toegediend door gavage 1x daags gedurende 30 dagen. Alle behandelingen werden vers voorbereid en toegediend met een totaal volume van 1 mL/kg. De BPA-dosis die in de huidige studie werd gebruikt (50 μg/kg/dag) werd geselecteerd op basis van de aanduiding als een no-observated-nadelige effectenniveau en referentiedosis door de United States Environmental Protection Agency en de U.S. Food and Drug Administration. Deze dosis is veelvuldig toegepast in experimentele studies om milieurelevante BPA-blootstelling te modelleren en om mogelijke neurogedrags- en biochemische veranderingen te onderzoeken die optreden op blootstellingsniveaus die voorheen als veilig werden beschouwd. Belangrijk is dat het verzamelen van experimenteel bewijs erop wijst dat nadelige neurologische en gedragsmatige effecten kunnen optreden bij of onder deze dosis, wat de relevantie ondersteunt voor het beoordelen van laag-dosis BPA-toxiciteit 1,2. De selectie van TQ-doses (10 en 20 mg/kg) was gebaseerd op eerdere experimentele studies die de neuroprotectieve en antioxidante effectiviteit aantoonden zonder toxiciteitte veroorzaken 5,6,7. Deze doses zijn veelvuldig gebruikt in knaagdiermodellen van neurotoxiciteit, oxidatieve stress en neuroontsteking, en liggen ruim onder de gerapporteerde toxiciteitsdrempels voor herhaalde toediening. Er werd geen pilot-dosisbepalingsstudie uitgevoerd; De dosiskeuze werd geleid door literatuurprecedentie en vastgestelde veiligheidsprofielen om zowel effectiviteit als translationele relevantie te waarborgen.
BPA werd 30 dagen achter elkaar toegediend. Gedragsbeoordelingen werden uitgevoerd op dag 31 en 32 na de laatste blootstelling. Dieren werden op dag 32 geofferd na het voltooien van alle gedragsonderzoeken. Deze tijdlijn was ontworpen om voldoende tijd te bieden voor gedragsevaluatie, terwijl mogelijke verstorende effecten van acute behandeling of procedurele stress op latere biochemische, moleculaire en histopathologische analyses worden geminimaliseerd. Thymoquinon werd 1x daags direct na BPA toegediend via dezelfde intragastrische route. Gedragstests werden uitgevoerd na de laatste BPA- en TQ-toedieningen. De experimentele tijdlijn wordt samengevat in Figuur 1.
Meting van lichaamsgewicht
Lichaamsgewichten werden gemeten met behulp van een gekalibreerde digitale precisiebalans (±0,1 g gevoeligheid). Elke rat werd 's ochtends afzonderlijk gewogen vóór de behandeling, en metingen werden geregistreerd op dag 1, 10, 20 en 32 onder gestandaardiseerde omstandigheden om variabiliteit te minimaliseren (Figuur 2).
Gedragsbeoordelingen
Alle gedragsparameters werden beoordeeld door één enkele waarnemer die blind was voor groepstoewijzing om waarnemersbias en variabiliteit tussen de waarnemers te minimaliseren. Dieren waren minstens 30 minuten gewend aan de testruimte voorafgaand aan gedragstesten om nieuwigheidsstress te verminderen.
Het gecombineerde gebruik van de open veldtest (OFT) en de gedwongen zwemtest (FST) maakt een uitgebreide evaluatie van door BPA veroorzaakte neurogedragstoxiciteit mogelijk, aangezien is aangetoond dat BPA zowel emotionele reactiviteit als locomotorische activiteit bij knaagdierenverandert 2,3. OFT-afgeleide lokomotorische uitkomsten werden meegenomen tijdens de interpretatie van FST-immobiliteit om potentiële verstorende effecten gerelateerd aan veranderde motorische activiteit te minimaliseren.
FST: Depressie-achtig gedrag werd beoordeeld met de verplichte zwemtest op dag 32, voorafgegaan door een 15 minuten durende pre-test sessie die 24 uur eerder werd afgenomen. Ratten werden individueel geplaatst in cilindrische tanks (35 cm diameter, 50 cm hoogte) gevuld met water (30 cm diep, 25 ± 1 °C) en mochten 5 minuten zwemmen. Immobiliteit, zwem- en klimgedrag werden opgenomen met een videocamera en offline geanalyseerd om gedragswanhoop te evalueren7.
OFT: Angstachtig gedrag en spontane locomotorische activiteit werden geëvalueerd met de open veldtest op dag 31. Elke rat werd afzonderlijk geplaatst in een witte plexiglazen arena (90 cm x 35 cm), verdeeld in 24 gelijke vierkanten, en mocht 5 minuten vrij verkennen. Bewegingen werden opgenomen met een videocamera. Tijd doorgebracht in centrale en perifere zones en het aantal kruisingen met alle vier de poten werden gekwantificeerd als indices van angstgerelateerd gedrag en voortbeweging8.
Monsterverzameling
Op dag 32 werden ratten diep verdoofd met intramusculaire ketamine (45 mg/kg) en xylazine (5 mg/kg). Voldoende diepte van de anesthesie werd bevestigd door het ontbreken van de pedaalterugtrekkingsreflex. Bloed werd afgenomen via een hartpunctie met een steriele spuit, en er werd ongeveer 3-5 ml bloed van elk dier afgenomen. De euthanasie werd voltooid door bloedverlies onder diepe anesthesie. Bloedmonsters werden overgebracht in buisjes met anticoagulantia en gecentrifugeerd op 3.000 x g gedurende 10-15 minuten bij 4 °C. Het gescheiden plasma werd gealiquoteerd en opgeslagen bij −80 °C tot biochemische analyse.
De hippocampus en linker hersenhelft werden snel ontleed, gewogen, ingevroren in vloeibare stikstof en opgeslagen bij −80 °C voor latere biochemische analyses, terwijl de rechterhersenhelft werd vastgesteld in 10% neutraal gebuffreerd formaline voor histopathologische en immunohistochemische evaluaties. Om methodologische consistentie te waarborgen en variabiliteit tussen monsters te minimaliseren, werd de linkerhersenhelft systematisch toegewezen voor biochemische metingen en de rechterhersenhelft voor morfologische analyses bij alle dieren. Belangrijk is dat formalinefixatie strikt beperkt was tot weefsels die waren aangewezen voor histologische en immunohistochemische procedures, en er werd geen vast weefsel gebruikt voor eiwitgebaseerde biochemische assays, waardoor fixatie-gerelateerde eiwitafbraak werd voorkomen. Voor biochemische beoordelingen werden gedefinieerde hoeveelheden bevroren hersenweefsel (meestal 50-100 mg per assay) gehomogeniseerd met assay-specifieke homogenisatiebuffers en gestandaardiseerde weefsel-naar-bufferverhoudingen volgens de eisen van elke biochemische parameter. Alle analyses werden uitgevoerd met gelijke weefselhoeveelheden binnen elke assay in de experimentele groepen.
De totale eiwitconcentratie in weefselhomogenaten werd bepaald met behulp van een fluorometrische eiwittest volgens de instructies van de fabrikant. Alle biochemische parameters werden gemeten met gestandaardiseerde en gelijke eiwitconcentraties binnen elke assay om vergelijkbaarheid tussen monsters en experimentele groepen te waarborgen.
Beoordeling van oxidatieve stressparameters
Lipideperoxidatie werd beoordeeld door MDA-niveaus te meten met de thiobarbiturzuur-reactieve stoffen (TBARS)-methode in plasma- en weefselmonsters7. Verminderde thiol (RSH) en GSH-niveaus werden spectrofotometrisch bepaald met behulp van 5,5′-dithiobis-(2-nitrobenzoëzuur) (DTNB)-gebaseerde assays7. Totale stikstofoxide (NO) niveaus in plasma- en weefselhomogenaten werden gemeten met behulp van de Griess-reactie na nitraatreductie7. Alle biochemische parameters worden uitgedrukt als nmol/g eiwit of μmol/g weefsel, zoals aangegeven in Figuur 3 en Figuur 4. Alle biochemische assays werden in dubbele vorm uitgevoerd en de gemiddelde waarden werden gebruikt voor statistische analyse.
Naast hersenweefselanalyses werden biochemische schattingen uitgevoerd in bloedmonsters om de systemische oxidatieve status te evalueren die door BPA-blootstelling werd veroorzaakt. De plasma-lipideperoxidatieniveaus werden bepaald met de TBARS-methode en de resultaten werden uitgedrukt als MDA-equivalenten. Verminderde sulfhydryl (RSH) niveaus werden gemeten met DTNB, en de totale NO-niveaus werden beoordeeld met behulp van de Griess-reactie na nitraatreductie, zoals eerder beschreven7. Absorptiewaarden werden spectrofotometrisch geregistreerd bij 532 nm (TBARS), 412 nm (RSH) en 540 nm (NO). Alle assays werden dubbel uitgevoerd onder gestandaardiseerde omstandigheden.
BPA is een alomtegenwoordige omgevingstoxicant die in de systemische circulatie terechtkomt en multi-orgaaneffecten uitoefent; Daarom leveren circulerende oxidatieve stressmarkers aanvullende informatie die de totale redoxonbalans 1,2 weerspiegelt. Beoordeling van bloedgebaseerde biochemische parameters maakt evaluatie mogelijk van de relatie tussen centrale en perifere oxidatieve veranderingen en verhoogt de translationele relevantie van de bevindingen, aangezien dergelijke markers vaak worden gebruikt in omgevings- en klinische studies om blootstellingsgerelateerde toxiciteit te monitoren.
Western blot-analyse
Western blot-analyse werd uitgevoerd om de Keap-1- en Nrf-2-eiwitniveaus in hippocampusweefsel te bepalen. Ongeveer 50 mg weefsel werd gehomogeniseerd in 500 μL RIPA-buffer met een proteaseremmer-cocktail. Homogenaten werden gecentrifugeerd op 14.000 x g gedurende 10 minuten bij 4 °C, en de supernatanten werden verzameld. De eiwitconcentraties werden bepaald met behulp van een fluorometrische eiwitkwantificatietest volgens de instructies van de fabrikant, en de concentraties werden berekend op basis van een standaard kalibratiecurve. Gelijke hoeveelheden eiwit (30 μg) werden gemengd met Laemmli-buffer met β-mercaptoethanol, verhit op 95 °C gedurende 5 minuten, gescheiden op 10% SDS-PAGE-gels en 60-90 minuten overgebracht op PVDF-membranen bij 110 V. Membranen werden geblokkeerd met 3% BSA en 's nachts geïncubeerd bij 4 °C met primaire antilichamen tegen Keap-1 en Nrf-2 (1:3000) en β-actine (1:1000), gevolgd door incubatie met HRP-geconjugeerde secundaire antilichamen. Eiwitbanden werden visualiseerd door chemiluminescentie, en bandintensiteiten werden gekwantificeerd door densitometrische analyse en genormaliseerd tot β-actine.
Histopathologische analyse
Hersenweefselmonsters uit de rechterhersenhelft werden gefixeerd in 10% neutraal gepufferd formaline gedurende 72 uur, gedehydrateerd via een gegradueerde ethanolserie, vrijgemaakt in xyleen en ingesloten in paraffine volgens standaard histologische procedures9. Verse weefsels waren gereserveerd voor biochemische analyses. Coronale doorsneden (5 μm) werden genomen op het niveau van de hippocampale en entorhinale cortex op basis van een rathersenatlas10. Vier opeenvolgende secties per dier werden op glazen glaasjes gemonteerd voor histologische en immunohistochemische evaluaties, zodat een consistente doorsnededikte en anatomische lokalisatie werden gegarandeerd. Secties werden gedeparaffiniseerd, gerehydrateerd en gekleurd met hematoxyline en eosine (H&E) volgens routinematige kleuringsprotocollen11. Histopathologisch onderzoek werd uitgevoerd onder lichtmicroscopie door één getrainde waarnemer die blind was voor de experimentele groepen om bias te minimaliseren en variabiliteit tussen waarnemers te elimineren.
Immunohistochemische analyse
Interessegebieden, waaronder de hippocampus en de entorhinale cortex, werden geselecteerd op basis van hun kwetsbaarheid voor door BPA veroorzaakte neurotoxiciteit en hun rol in cognitieve en emotionele regulatie 1,2. Immunohistochemische kleuring voor Nrf-2 en Keap-1 werd uitgevoerd op paraffine-ingebedde hersensecties. Secties werden gedeparaffiniseerd in xyleen, gerehydrateerd via gegradueerde ethanolseries en onderworpen aan warmte-geïnduceerde antigeenterugwinning in een citraatbuffer (pH 6,0). De endogene peroxidaseactiviteit werd vóór de incubatie getemperd.
Secties werden 's nachts geïncubeerd bij 4 °C met primaire antistoffen tegen Nrf-2 (1:100) en Keap-1 (1:200). De detectie werd uitgevoerd met een commercieel verkrijgbaar, kant-en-klare polymeer-gebaseerde HRP-detectiesysteem met soortspecifieke secundaire antilichamen die geconjugeerd waren aan mierikswortelperoxidase, volgens de instructies van de fabrikant. Immunoreactiviteit werd gevisualiseerd met 3,3′-diaminobenzidine (DAB) als chromogeen, gevolgd door tegenkleuring met hematoxyline. Delen waren uitgedroogd, schoongemaakt en bedekt.
Negatieve controlesecties werden parallel verwerkt zonder primaire antistofincubatie. Voor kwantitatieve analyse werden per dier drie niet-aangrenzende secties geëvalueerd. Beelden werden voor alle groepen met identieke belichtingsinstellingen gemaakt. Zestien niet-overlappende velden per sectie werden geanalyseerd met behulp van ImageJ-software. Interessegebieden werden handmatig afgebakend, achtergrondkleuring werd afgetrokken en immunoreactiviteit werd uitgedrukt als gemiddelde grijze waarde. De gemiddelde waarde per dier werd berekend en gebruikt voor statistische analyse.
Histopathologische scoring
Histopathologische veranderingen werden semi-kwantitatief geëvalueerd op H&E-gekleurde doorsneden. Tien willekeurig geselecteerde, niet-overlappende velden per sectie werden onderzocht en pathologische parameters werden onafhankelijk gescoord. De ernst van de schade in de hippocampus en de entorhinale cortex werd beoordeeld met een vierpuntsschaal op basis van het aandeel getroffen cellen: score 0 (<5%), score 1 (≤ eenderde), score 2 (een derde tot tweederde deel) en score 3 (> tweederde derde). Gemiddelde scores per dier werden gebruikt voor statistische analyse.
Statistische analyse
De gegevens werden geanalyseerd met SPSS-software (versie 29.0) en worden gepresenteerd als gemiddelde ± standaarddeviatie (SD). De steekproefgrootte werd bepaald op basis van eerdere studies en vermogensanalyse, waaruit bleek dat zes dieren per groep >80% vermogen leveren om biologisch relevante verschillen te detecteren. De normaliteit van de gegevensverdeling werd beoordeeld met behulp van de Shapiro-Wilk-test. De homogeniteit van varianties werd geëvalueerd met behulp van de Levene-test. Groepsvergelijkingen werden uitgevoerd met eenrichtingsvariantieanalyse (ANOVA) gevolgd door Tukey's post hoc test. De statistische significantie werd vastgesteld op p < 0,05.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Lichaamsgewicht
Er werden geen statistisch significante verschillen in lichaamsgewicht waargenomen tussen groepen op dag 1 en 32 van de studie (F(3,20)=2,750, p > 0,05; Figuur 2).
Resultaten van gedragstests
Openveldtestanalyse toonde aan dat BPA-blootstelling de bewegingsactiviteit significant verminderde, wat blijkt uit een lager aantal kruisingen vergeleken met de controlegroep (...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De huidige studie evalueerde de effecten van BPA, een structureel bestanddeel van polycarbonaatkunststoffen die door de USEPA als veilig wordt beschouwd bij een dosis van 50 μg/kg 1,2, op oxidatieve stress, Keap-1/Nrf-2 signalering, gedrag en histopathologische veranderingen in de rattenhersenen. Daarnaast werden de mogelijke neuroprotectieve effecten van TQ, een natuurlijk voorkomende verbinding met goed gedocumenteerde antioxid...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs hoeven geen belangenconflicten aan te geven.
Dit project werd ondersteund door het Bureau voor Coördinatie van Wetenschappelijke Onderzoeksprojecten van de universiteit (projectnummer TIP. A4.24.003).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 5,5'-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid) | Thermo Scientific | 69-78-3 | |
| Benchtop centrifuge NF048 | Nüve | 43560 | |
| Beta_Actin | ThermoFisher Scientific, United States | 7D2C10 | |
| Bisphenol A | Merck | 239658 | |
| BSA solution | Proteintech, United States) | 66201-1-Ig | |
| Butylated hydroxytoluene | Sigma Aldrich | 128-37-0 | |
| Dijital Homojenizatör | Daihan Scientific | https://www.artlaboratuvarcih azlari.com/urun/daihan-hg- 15d-dijital-homojenizator-set -a?srsltid=AfmBOorx_az06ulc HpSzKZsuP8-47Za4BkvLOM2 2Xhp00tgwWhJ-86Vc | |
| Hematoxylin–eosin | Bio Optica | W01030708 | |
| Hydrochloric acid | Merck | 7647-01-0 | |
| Image J software program | NIH; Washington, U.S.A. | https://imagej.net/ij/ | |
| Immunohistochemical staining kit | Lab VisionTM UltraVisionTM Large Volume Detection System: anti-polyvalent | HRP, TA-125-HL | |
| Leica Autocut 14051956472 | Germany | https://www.leicabiosystems. com/histology-equipment/mic rotomes/histocore-autocut/ | |
| Light microscope | Nikon, Eclipse | Ni-U, 940728 | |
| N-(1-Naphthyl)ethylenediamine | Thermo Scientific | 1465-25-4 | |
| Nano Microplate Reader | BMG LABTECH | SPECTROstar Nano | |
| phosphate-buffered saline | Merck | P4417 | |
| Primary antibodies Keap-1 | Proteintech | Cat No. 10503-2-AP, 1:200 | |
| Primary antibodies Nrf-2 | Proteintech | Cat No. 16396-1-AP, 1/100 | |
| Qubit Protein BR Assay Kit | ThermoFisher Scientific-INVITROGEN | Q33211 | |
| sodium citrate | Merck | 03-04-6132 | |
| Sodium Dodecyl Sulfate | Thermo Scientific | 151-21-3 | |
| sodium hydroxide | Merck | 1310-73-2 | |
| Sodium nitrate | Merck | 7631-99-4 | |
| Streptavidin Peroxidase | Thermo Scientific | SHRP248-B | |
| sulfanilamide | Thermo Scientific | 63-74-1 | |
| thiobarbituric acid | Merck | 504-17-6 | |
| TQ | CAYMAN | 490-91-5 | |
| Tricarballylic acid, 99% | Thermo Scientific Chemicals | 139360500 | |
| Trichloroacetic acid | Thermo Scientific Chemicals | 76-03-9 | |
| Tris-HCl | Thermo Scientific | 1185-53-1 | |
| Vanadium(III) chloride | Sigma Aldrich | 7718-98-1 | |
| West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate and the iBright 750 | Thermo Fisher Scientific system | https://www.clinxsci.com/product/mini _chemiluminescence_imaging_system ?gad_source=1&gad_campaignid= 16224184202&gbraid=0AAAAAoN6 UOOtoB8UD0deumBAMD8Xi-1l-&g clid=CjwKCAjwgeLHBhBuEiwA L5gNEXtK2CNSLS1GqllMuNgkrFYD aW7yK585njQjFja485Fkwj9lRUEKD BoCgLoQAvD_BwE | |
| Zinc sulfate solution | Merck | 7733-02-0 |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.