De studie werd uitgevoerd in overeenstemming met de Verklaring van Helsinki en de ethische richtlijnen van het ziekenhuis en werd goedgekeurd door Wuxi Second People's Hospital, Jiangnan University Medical Center en de ethische commissies (Ethisch Nr. 2024-Y-231). Alle menselijke biologische monsters (veneus bloed en serumaliquoten) werden strikt in overeenstemming met de bioveiligheidsvoorschriften behandeld (GB 19489-2008). Alle werkzaamheden werden uitgevoerd in een bioveiligheidskast om besmetting van monsters en blootstelling van personeel te voorkomen. De verwijdering van gebruikte biologische monsters, besmette pipettips en microcentrifugebuizen vond plaats volgens de normen voor medisch afvalbeheer: monsters en besmette materialen werden 30 minuten geautoclaveerd bij 121 °C en vervolgens overgedragen aan gekwalificeerde medische afvalverwerkingsinstellingen voor centrale behandeling om de bioveiligheid te waarborgen.
Onderzoeksontwerp
Dit was een retrospectieve cohortstudie met één centrum om de prognostische waarde van preoperatieve serum-HGF-niveaus en IBPS te onderzoeken voor de postoperatieve pathologische uitkomsten van OSCC-patiënten. Dit studieontwerp volgt de REMARK-richtlijnen (Tumor Marker Prognostic Study Report Recommendations). De populatie die van januari 2020 tot december 2022 de tandheelkundige afdeling van het Wuxi Tweede Volksziekenhuis, Jiangnan University Medical Center, bezocht, werd geselecteerd als studiepopulatie. In totaal werden 170 gevallen aan informatie verzameld, 165 gevallen werden na uitsluiting opgenomen, 7 gevallen verloren tijdens de follow-upperiode, en uiteindelijk 79 gevallen in A-groep (gezonde controlegroep, gezonde mensen die in dezelfde periode in het ziekenhuis werden opgenomen voor lichamelijk onderzoek) en 79 gevallen in B-groep (OSCC-groep, patiënten met OSCC) werden opgenomen. Het stroomdiagram van deze studie is geïllustreerd in Figuur 1. Geschikte proefpersonen werden opgehaald via het elektronische medische dossiersysteem van het ziekenhuis en de database van het fysisch onderzoekscentrum, en gedetailleerde klinisch-pathologische gegevens verzameld van de A-groep (gezonde controlegroep) en de B-groep (OSCC-groep). Voerde een postoperatieve follow-up uit bij B-groep patiënten tijdens het onderzoek om recidief, metastase en overleving vast te leggen. Alleen een gezonde controlegroep werd opgenomen om differentiële expressie van ontstekingsmarkers tussen OSCC-patiënten en gezonde individuen te identificeren, wat een rationele basis biedt voor het vaststellen van de cutoffwaarde voor de zelfgeconstrueerde IBPS. De prognostische waarde van IBPS geëvalueerd en deze geverifieerd binnen de OSCC-patiëntencohort op basis van hun postoperatieve pathologische uitkomsten. Dit studieontwerp zorgde voor de nauwkeurigheid van de gegevens en de wetenschappelijke validiteit van de studie door strikte groeperingscriteria, gestandaardiseerde laboratoriumtestprocessen en systematisch opvolgmechanisme, en bood een rigoureus onderzoekskader voor het analyseren van de prognostische waarde van HGF-niveaus en IBPS-scores in de postoperatieve pathologische uitkomsten van OSCC, wat naar verwachting een wetenschappelijke basis zal vormen voor de ontwikkeling van gepersonaliseerde prognostische beoordelingsprotocollen en therapeutische Strategieën in de kliniek.
Inclusie- en uitsluitingscriteria
Inclusiecriteria: (1) Patiënten gediagnosticeerd met OSCC21; (2) Leeftijd 40–65 jaar; (3) Met volledige klinische informatie; (4) Een uitgebreid sequentieel behandelplan ontvangen op basis van een operatie en aangevuld met selectieve radiotherapie; (5) Patiënten met goede naleving en bereidheid om samen te werken aan het behandelplan dat door de studie is ontwikkeld; (6) De algehele mentale toestand van de patiënten is goed, hun lichaam is in grote lijnen gezond en zij kunnen hun klachten over hun symptomen eerlijk uiten en relevante vragen van zorgprofessionals beantwoorden; (7) De patiënten en hun families werden geïnformeerd en stemden ermee in, en ondertekenden een formulier voor geïnformeerde toestemming.
Exclusiecriteria: (1) Patiënten met gecombineerde kwaadaardige tumoren anders dan OSCC; (2) Patiënten met een combinatie van ernstige systemische ziekten of immuunsysteemaandoeningen; (3) Patiënten met gecombineerde hemorragische stollingsstoornis, of ernstige hart-, lever- of nierfunctiestoornissen, ernstige hart- en vaatziekten of andere, ernstigere ziekten; (4) Gecombineerde chronische infectieziekten, gecombineerd met andere seksueel overdraagbare aandoeningen (bijv. syfilis, gonorroe, enz.); (5) Gecombineerde afwijkingen in hersenen, harten, levers en nierfuncties; (6) Patiënten die betrokken zijn geweest bij klinische geneesmiddelproeven of klinische studies; (7) Verzoek om behandeling te stoppen of automatisch te ontslaan om persoonlijke redenen; (8) Andere aandoeningen die, naar het oordeel van de studiearts, niet zouden moeten worden opgenomen; (9) Andere omstandigheden die de indicatoren van follow-up observatie beïnvloeden.
Groeperingsmethode
De proefpersonen werden verdeeld in twee groepen: A-groep: gezonde controlegroep (n = 79), B-groep: OSCC-groep (n = 79).
Indicatorverzameling
Verzamelde basisinformatie over patiënten in beide groepen.
Monsterverzameling
Nuchtere veneuze bloedmonsters (5 mL) van alle deelnemers vroeg in de ochtend voor de operatie verzameld en tijdens het transport op kamertemperatuur (25 ± 2 °C) gehouden. Bloedmonsters werden binnen 30 minuten (1.800 s) na afname verwerkt. Het supernatantserum werd na centrifugatie bij 3.000 × g gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur (25 ± 2 °C) overgebracht in 0,5 mL aliquots met behulp van steriele polypropyleen microcentrifugebuizen. Alle aliquots werden onmiddellijk in een -80 °C ultra-lage temperatuur vriezer geplaatst voor langdurige opslag tot analyse, en herhaalde vries-dooicycli vermeden (indien nodig was niet meer dan 1 vries-dooicyclus toegestaan).
Serum HGF-niveau
De serum HGF-concentraties werden bepaald met behulp van een commerciële enzym-gekoppelde immunosorbentassay (ELISA) kit volgens de instructies van de fabrikant22. Kort ontdooid ik serummonsters bij 4 °C gedurende 30 minuten om eiwitdenaturatie te voorkomen, daarna verdund ik het in een verhouding van 1:1 met de kit geleverde verdunningsbuffer. Standaarden, controles en verdunde serummonsters (100 μL per put) toegevoegd aan de ELISA-plaat en geïncubeerd bij 37 °C gedurende 60 minuten. Na het vijf keer wassen van het bord met de meegeleverde wasbuffer, voegde ik het primaire antistofconjugaat toe en incubereerde het bij 37 °C nog eens 30 minuten. Na een tweede wasbeurt werd het chromogene substraat toegevoegd en werd de reactie 15 minuten in het donker geïncubeerd bij 37 °C, waarna de reactie werd beëindigd met de stopoplossing. De absorptie werd gemeten bij 450 nm met een ELISA-lezer binnen 10 minuten na beëindiging. Standaard kwaliteitscontroleprocedures geïmplementeerd gedurende de hele assay, inclusief het gebruik van door de kit geleverde kalibratoren en controles. De intra-assay variatiecoëfficiënt (CV) was < 5% en de inter-assay CV was < 8%, wat betrouwbare analytische prestaties bevestigde.
IBPS-berekening
De serummonsters werden geanalyseerd met de XN3000 automatische hematologie-analysator en de bijbehorende reagentia23. De serummonsters werden ontdooid bij 4 °C gedurende 20 minuten en in evenwicht gebracht tot kamertemperatuur (25 ± 2 °C) gedurende 10 minuten voordat het werd getest. Routinematige bloedtesten werden uitgevoerd bij 25 ± 2 °C om de tellingen van leukocyten, neutrofielen, lymfocyten en bloedplaatjes te bepalen, waarna de NLR (Neutrofielentelling/lymfocytentelling) en PLR (Bloedplaatjestelling/lymfocytentelling) werden berekend. Reguliere kalibratie van testinstrumenten werd uitgevoerd bij 25 °C, met intrabatch CV < 3% en interbatch CV < 5% voor bloedroutine-indicatoren. Een immunoturbidimetrische assay gebruikt om het serum CRP-gehalte in de automatische biochemische analyzer te meten. De serummonsters werden 20 minuten ontdooid bij 4 °C en 5 minuten in evenwicht gebracht tot 37 °C voordat ze werden gedetecteerd. De assay werd uitgevoerd bij 37 °C met een incubatietijd van 10 minuten, en de reactie continu gevolgd op 546 nm. Het instrument werd strikt volgens de handleiding bediend om de test te voltooien. CRP-detectie met intrabatch CV < 4% en interbatch CV < 6%. De score werd uitgevoerd volgens onze zelfgemaakte IBPS-schaal. Het IBPS-scoresysteem verwijst naar de constructiemethode van eerdere ontstekingsprognosescores en past de gewichten van indicatoren aan op basis van de pre-experimentele resultaten van deze studie. NLR-waarde ≤3,0 werd als 0 punten gegoogd, 3,0–5,0 als 1 punt, >5,0 als 2 punten. PLR-waarden ≤150 werden als 0 punten beoordeeld, 150–300 als 1 punt, en >300 als 2 punten. CRP-gehalte ≤50 mg/L was 0 punten, 50–100 mg/L was 1 punt en >100 mg/L was 2 punten. Totale IBPS-score = CRP-score + NLR-score + PLR-score. Stratifikatiecriteria: ≤ 4 punten voor middelmatig tot laag risico, 5–6 punten voor hoog risico. De cutoffwaarden en scorecriteria voor NLR, PLR en CRP zijn bepaald op basis van eerder gepubliceerde inflammatoire prognostische scores gecombineerd met exploratieve data-analyse in de huidige studiepopulatie, in plaats van statistische optimalisatie zoals de Youden-index of de receiver operating characteristic curve analyse.
Vervolgbezoeken
In deze studie werd een gestandaardiseerde follow-up van 20 maanden uitgevoerd om postoperatieve uitkomsten bij patiënten te beoordelen. De vervolgstart was op de dag van de operatie voor de B-groep (OSCC-groep) patiënten, en de eindtijd was 31 augustus 2024. Er werd een combinatie van poliklinische en telefonische follow-up toegepast. Bij elke follow-up werd het lichamelijk onderzoek en beeldvorming uitgevoerd om de aanwezigheid van tumorrecidief of metastase te bevestigen. De primaire prognostische indicatoren waren algehele overleving (OS) en ziektevrije overleving (DFS). OSA werd gedefinieerd als de tijd van de dag van de operatie tot overlijden door welke oorzaak dan ook. DFS werd gedefinieerd als de tijd van de dag van de operatie tot het recidive, de progressie of het overlijden van tumoren door tumorgerelateerde oorzaken.
Berekening van steekproefgrootte
Deze studie gebruikte G*Power 3.1.9.7 voor het schatten van de steekproefgrootte om de prognostische waarde van HGF-niveaus en IBPS-scores voor postoperatieve pathologische uitkomsten bij OSCC-patiënten te verduidelijken. Stel een testniveau van α van 0,05 (bilateraal), testeffectiviteit van 85% en een voorspelde ontstekingsfactor AUC van 0,75, zoals berekend door de software, en 75 gevallen waren nodig in elke groep om te voldoen aan de statistische eisen van ROC-curveanalyse en multifactoriële regressie. Gezien de onzekerheden over mogelijke uitval en ontbrekende gegevens werd de steekproefgrootte van deze studie uiteindelijk vastgesteld op 79 gevallen per groep om te garanderen dat de studie voldoende statistische effectiviteit had om betrouwbare conclusies te trekken.
Statistische analyse
Gebruikte SPSS 28.0 statistische software voor data-analyse. GraphPad Prism 9.0 wordt gebruikt om overlevingscurves te tekenen, terwijl Lucidchart stroomdiagrammen tekent. Ik heb eerst de gegevens in de studie getest op normale verdeling. Vergelijk de basislijnkenmerken tussen de A-groep en de B-groep met een onafhankelijke steekproef t-test voor meetgegevens en een χ2-test voor telgegevens. Beschreef basislijnkenmerken als telling [n (%)] en meetgegevens (uitgedrukt als x ± s). Indicatoren zoals HGF, NLR, PLR en CRP werden uitgedrukt als x ± s, en intergroepsvergelijkingen van deze indicatoren werden ook uitgevoerd met behulp van een onafhankelijke steekproef t-test. Binaire logistische regressieanalyse werd gebruikt om de relatie te onderzoeken tussen HGF-niveaus, IBPS-scores en postoperatieve pathologische uitkomsten (afhankelijke variabele, 1 = nadelig, 0 = gunstig), waarbij positieve regressiecoëfficiënten een positieve correlatie tussen indicatoren en nadelige uitkomsten aangeven. De Kaplan-Meier-methode werd gebruikt om de OS- en DFS-curves van de A-groep en de B-groep uit te zetten, en de log-rank-test werd toegepast om de statistische verschillen in overlevingspercentages tussen groepen te vergelijken. De prognostische waarde van bovenstaande metrieken voor OSCC-patiënten werd geanalyseerd met behulp van de receiver operating characteristic (ROC) curve en het gebied onder de curve (AUC) om de optimale cutoffwaarde, gevoeligheid en specificiteit te bepalen. De telgegevens werden gepresenteerd als n (%) en de vergelijking tussen de groep A en de groep B werd geanalyseerd met behulp van de toets χ2 . Alle statistische tests waren tweezijdig, en P < 0,05 gaf een statistisch significant verschil aan.