Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Onderzoeksartikel
* These authors contributed equally
Deze studie stelde een nieuw in vivo beagle-model vast van chronische matige nierinsufficiëntie gecombineerd met atriumfibrilleren via transkatheter nierarterie-embolisatie en snelle atriumpacing, en toonde aan dat deze combinatie de functie van het linker atrium endotheel ernstig verstoorde, de procoagulante activiteit verbeterde en het risico op trombose via inflammatoire en door RAAS gemedieerde routes verhoogde.
Het gelijktijdig voorkomen van boezemfibrilleren (AF) en nierinsufficiëntie (RI) vertegenwoordigt een klinisch complex fenomeen met een hoge prevalentie. Deze studie onderzocht de impact van chronische matige RI gecombineerd met AF op de functie van het linker atrium endotheliaal bij beagles. Chronische RI werd geïnduceerd door transkatheter-embolisatie van de hoofdtak van de linker nierslagader met behulp van gelatinesponskorrels, waarbij dieren drie maanden werden onderhouden om chronische nierparenchymale schade mogelijk te maken. AF werd vervolgens geïnduceerd door continue snelle atriale pacing (basiscycluslengte, 60 ms; spanning, 4 keer de diastolische pacingdrempel; 180 min). Histologische veranderingen werden beoordeeld met behulp van hematoxylin- en eosine kleuring. Parameters geassocieerd met endotheelfunctie, stolling, fibrinolyse, ontsteking en renine–angiotensine–aldosteron-systeem (RAAS) activiteit in plasma- en hartweefsels werden onderzocht met behulp van enzymgebonden immunosorbentassay, kwantitatieve realtime polymerasekettingreactie en western blotting. De resultaten toonden een succesvolle vestiging van een chronisch nierschademodel met matige RI, bevestigd door significant verhoogde plasmacreatinine, ureumstikstof en verminderde creatinine-clearance. De linker atrium endotheelfunctie was significant aangetast bij beagles met gecombineerde RI en AF, vergezeld van verbeterde procoagulerende effecten en verminderde fibrinolyse. De ontstekingsmarkers waren verhoogd na de RI-procedure of AF-inductie en werden verder versterkt in de gecombineerde RI+AF-groep. Daarnaast was RAAS-activiteit, aangetoond door verhoogde renine- en aldosteronspiegels, verhoogd na RI en verder versterkt bij combinatie met AF. Samenvattend heeft deze studie met succes een in vivo diermodel vastgesteld van chronische matige RI gecombineerd met AF bij beagles, waarmee werd aangetoond dat deze combinatie de functie van het linker atrium endotheel significant verstoorde en het risico op trombotische aanvallen verhoogde.
Atriumfibrilleren (AF), de meest voorkomende vorm van aanhoudende hartritmestoornissen, hangt nauw samen met ongunstige klinische uitkomsten. Door de systemische pathofysiologische kenmerken van AF voert deze aritmie vaak ingewikkelde pathofysiologische kruisspraak met een reeks gelijktijdige comorbiditeiten, waaronder cognitieve achteruitgang, depressie en systemische embolie1. Chronische nierziekte (CKD) is geïdentificeerd als een onafhankelijke risicofactor voor zowel de ontwikkeling van AF als het optreden van trombo-emboliën. Ongeveer 15% tot 20% van de patiënten die de diagnose CKD krijgen, wordt getroffen door AF, terwijl het aandeel patiënten dat niervervangende therapie krijgt en AF ontwikkelt varieert van 15% tot 40%. Ondertussen presenteert ongeveer 30% tot 60% van de patiënten die bij AF zijn gediagnosticeerd gelijktijdig lichte tot matige nierinsufficiëntie (RI)3. Daarom is het gelijktijdig voorkomen van AF en RI een complex klinisch fenomeen geworden met een hoge prevalentie onder patiëntenpopulaties. De bidirectionele relatie tussen AF en RI verhoogt het incidentierisico op AF sterk en verergert ook de progressie van nierstoornissen, wat uiteindelijk bijdraagt aan slechtere klinische uitkomsten4.
In eerdere studies werden ratten vaak gebruikt om RI-modellen vast te stellen; hun kleine hartgrootte maakt hen echter ongeschikt voor hart-elektrofysiologische experimenten. Honden daarentegen worden vaak gebruikt in middelgrote en grote dieren modellen van nierinsufficiëntie, waarbij nefrectomie de primaire modelleringsmethode is5. Desalniettemin gaat deze aanpak gepaard met een beperkt succespercentage van modellering. Belangrijker nog, omdat nefrectomie geen directe nierparenchymale schade veroorzaakt, slaagt zij er niet in de pathologische processen van nierinsufficiëntie effectief te simuleren. Daarom is het essentieel om een geschikt diermodel met RI en AF te ontwikkelen. Opmerkelijk is dat Liang Z et al. met succes een mild RI-model bij beagles hebben vastgesteld door te emboliseren van kleine takken van de nierslagader in de linker nier gedurende twee weken met behulp van gelatinesponskorrels, wat geassocieerd was met AF6; echter, een observatieperiode van twee weken wordt over het algemeen als onvoldoende beschouwd voor het simuleren van klinische CKD, omdat de kenmerkende kenmerken van chronische nefropathie, waaronder glomerulosclerose en tubulointerstitiele fibrose, langdurige periodes van aanhoudende nierparenchymale schade vereisen om zich volledig te ontwikkelen in diermodellen 7,8. Dit benadrukt de noodzaak van een chronisch model met een langere observatieperiode die de progressieve aard van klinische CKD nauwkeuriger recapituleert.
De huidige studie was daarom bedoeld om een diermodel te ontwikkelen van chronische matige RI gecombineerd met AF door transkatheter-embolisatie van de hoofdromp van de linker nierslagader bij beagles uit te voeren en de dieren drie maanden te onderhouden om de ontwikkeling van gevestigde chronische nierziekte mogelijk te maken. Daarnaast onderzochten we de pathogenese van linker atrium endotheeldisfunctie onder deze pathologische omstandigheden, waarbij we de hypothese testten dat de combinatie van chronische matige RI en AF synergetisch de linker atrium endotheelfunctie zou aantasten door verhoogde ontsteking en RAAS-activatie, waardoor het risico op trombose verder zou stijgen dan alleen een van beide aandoeningen. Deze bevindingen kunnen een beter begrip bieden van chronische RI in combinatie met AF en de basis vormen voor verder onderzoek naar de voordelen van anticoagulantiatherapie bij patiënten met AF en RI.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Deze studie werd uitgevoerd in strikte overeenstemming met de aanbevelingen in de Gids voor de Zorg en het Gebruik van Proefdieren van de National Institutes of Health (Publicatie nr. 85-23, herzien 1996). Het studieprotocol werd goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee van het Beijing Anzhen Ziekenhuis (Goedkeuringsnummer 81700293). Het studieprotocol werd beoordeeld en goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee van onze instelling. Alle inspanningen werden geleverd om dierenleed te minimaliseren en het aantal dieren dat in de studie werd gebruikt te verminderen. De reagentia en de gebruikte apparatuur worden vermeld in de Materiaaltabel.
1. Diermodel en experimenteel ontwerp
2. Nierarterie-embolisatie voor de inductie van chronische matige RI
Een 5F-multifunctionele katheter werd via de arteriële omhulsel ingebracht en onder C-arm fluoroscopische begeleiding naar de abdominale aorta gebracht. Selectieve linker nierarterie culatie werd uitgevoerd en de basislijn nierarterie-angiografie werd uitgevoerd door 5–8 mL niet-ionisch jodinerend contrastmedium te injecteren met een snelheid van 3 mL/s om de volledige nierarteriële boom te visualiseren. De succesvolle positie van de katheter werd bevestigd door demonstratie van de gehele linker nierslagader en haar takken op de angiografische beelden.
Daarna werd RI geïnduceerd door transkatheter-embolisatie van de hoofdtak van de linker nierslagader met behulp van absorberbare gelatinesponskorrels (50 mg diameter). De gelatinesponskorrels werden als slurry bereid door ongeveer 50 mg korrels te mengen met een 1:1 mengsel van contrastmiddel en normale zoutoplossing tot een totaal volume van ongeveer 2–3 mL. De embolisatieslurry werd langzaam geïnjecteerd door handmatige injectie via de katheter gedurende ongeveer 2–3 minuten onder continue fluoroscopische monitoring. Succesvolle embolisatie werd bevestigd door herhaalde angiografie van de linker nierslagader, die de afwezigheid van distale arteriële opacificatie in de geemboliede takken aantoonde. Na angiografische bevestiging werden de katheter en de schede verwijderd en werd de femurslagader hersteld met een 6-0 polypropyleenhechting. De operatiewond werd in lagen gesloten en de dieren mochten herstellen onder nauwlettend toezicht.
Voor de controlegroep en AF-groep (schijnprocedure) werd hetzelfde katheterisatieproces uitgevoerd, waarbij een gelijk volume (2–3 mL) normale zoutoplossing werd via de multifunctionele katheter in de linker nierslagader geïnjecteerd na de nierarterie-angiografie.
3. AF-inductie door snelle atriumpacing
Drie maanden na de RI-procedure (of schijnprocedure) werd AF geïnduceerd in de AF-groep en de RI+AF-groep. AF werd opgewekt bij in totaal 12 beagles (n = 6 in de AF-groep en n = 6 in de RI+AF-groep). Na de herverdoving en vasculaire toegang zoals hierboven beschreven, werd de rechter femurader genaduceerd voor katheterplaatsing. Een 6F quadripolaire elektrodekatheter (zie Materiaaltabel) werd onder fluoroscopische leiding naar voren gebracht en geplaatst op de laterale wand van het rechteratrium. De juiste positie van katheter werd bevestigd door het opnemen van karakteristieke atriale elektrogrammen op het intracardiale kanaal, met duidelijke, scherpe atriale afbuigingen. De diastolische pacingdrempel werd bepaald door de uitgangsspanning van de stimulator geleidelijk te verlagen in 0,1 V, afnames van 5 V totdat verlies van atriumvang werd waargenomen; De laagste spanning, die consistente 1:1 atriumvang bereikte, werd geregistreerd als de diastolische pacingdrempel. Snelle atriale pacing (basiscycluslengte, 60 ms, overeenkomend met een pacingsnelheid van 1000 slagen per minuut; outputpulsbreedte, 2 ms; spanning, 4 keer de diastolische pacingdrempel, meestal overeenkomend met 2–4 V) werd continu toegediend gedurende 180 minuten met behulp van een Cardiac Stimulator om AF te induceren, zoals eerder beschreven9. Succesvolle AF-inductie werd bevestigd door het verschijnen van aanhoudend onregelmatige R-R-intervallen op het oppervlakte-ECG en snelle, ongeorganiseerde atriale potentialen op het intracardiale elektrogram die minstens 1 minuut aanhielden na een korte stopzetting van pacing. Alle 12 beagles (100%) bereikten aanhoudende AF na voltooiing van het pacingprotocol. De gemiddelde duur van aanhoudende AF na het stoppen van het pacing varieerde van 3–8 minuten voor spontane cardioversie tot sinusritme.
Het is belangrijk op te merken dat, in tegenstelling tot burst pacing-protocollen (meestal 3–10 seconden bursts) die worden gebruikt om AF-gevoeligheid te beoordelen, de continue 180-minuten snelle atriale pacing-methode in deze studie specifiek is ontworpen om aanhoudende AF te modelleren en vroege moleculaire remodellering te stimuleren. Dit protocol is goed gevestigd en uitgebreid gevalideerd in onderzoek naar autografische autopilotenbij honden 9,10.
4. Experimenteel ontwerp en groepsopdracht
Proefdieren werden willekeurig toegewezen aan vier groepen (n = 6 per groep): controlegroep, RI-groep, AF-groep en RI gecombineerd met AF (RI+AF) groep. Beagles in de RI-groep en de RI+AF-groep ondergingen de RI-embolisatieprocedure bij de basislijn, en beagles in de controlegroep en AF-groep kregen de schijninjectie van normale zoutoplossing in de nierslagader. Drie maanden later werd AF geïnduceerd in de AF en RI+AF-groepen zoals hierboven beschreven. Een schematisch overzicht van het volledige experimentele ontwerp en de tijdlijn wordt weergegeven in Figuur 1.
5. Bepaling van creatininevrijgave
Creatinineklaring (CCr) werd bepaald met de 30-minuten endogene creatinineklaringsmethode11. Kort na de narcose werd een Foley-katheter onder aseptische omstandigheden in de urineblaas geplaatst en werd de blaas volledig geleegd. Vervolgens werd de urineverzamelperiode van 30 minuten gestart, waarbij alle urine-output via de katheter werd opgenomen in een gekalibreerd verzamelvat. Aan het einde van de 30 minuten tellende verzamelperiode werd de blaas opnieuw geleegd om volledige urineherstel te waarborgen. Tegelijkertijd werd een bloedmonster uit het middenpunt genomen van de halsvena voor plasma-creatininebepaling. CCr werd berekend met de standaardformule: CCr (mL/min/kg) = (urinecreatinineconcentratie × urinevolume) / (plasmacreatinineconcentratie × verzameltijd), genormaliseerd op het lichaamsgewicht.
6. Weefsel- en bloedmonsterafname
Bloedmonsters werden afgenomen van de halsvena bij de basislijn en vóór het offeren in EDTA-anticoaguleerde en gewone serumseparatorbuizen11. Uiteindelijk werden alle beagles geëuthanaseerd met een intraveneuze injectie van een dodelijke dosis natriumpentobarbital in een dosering van 150 mg/kg voordat ze herstelden van de narcose. Nieren werden geoogst voor histologisch onderzoek. Harten werden geoogst, en het linker boezemaanhangsel (LAA) werd zorgvuldig ontleed, binnen 5 minuten na excisie in vloeibare stikstof ingevroren en opgeslagen bij −80 °C tot moleculaire analyse. De LAA werd geselecteerd voor weefselanalyse omdat het de meest voorkomende plaats is van trombusvorming bij patiënten met AF en daarom de meest klinisch relevante anatomische locatie is voor het beoordelen van endotheelfunctie en het risico op trombose.
7. Histologische observatie
De nierweefsels werden 24 uur gefixeerd in 10% neutraal gebuffreerd paraformaldehyde, gedehydrateerd via een gegradueerde ethanolreeks (70%, 80%, 90%, 95% en 100% ethanol, elk 1 uur), gezuiverd met xyleen (twee wisselingen, elk 30 minuten), ingebed in paraffine en in plakjes van 5 μm dikte gesneden met een roterend microtoom. Daarna werden de plakjes gekleurd met HE om histopathologische veranderingen te observeren. Specifiek werden secties gedeparaffiniseerd in xyleen (twee wisselingen, elk 10 minuten), gerehydrateerd via een dalende ethanolreeks, 5 minuten gekleurd met hematoxyline-oplossing, 30 seconden gedifferentieerd in 1% zoutzuur–ethanol, 10 minuten afgespoeld in stromend kraanwater, 2 minuten gekleurd met eosine-oplossing, gedehydrateerd, schoongemaakt en gemonteerd met neutrale balsem. Secties werden onderzocht onder een lichtmicroscoop met vergrotingen van 100× en 400×.
8. Enzym-gekoppelde immunosorbentassay (ELISA)
De bloedmonsters werden 20 minuten gecentrifugeerd op 3000 × g bij 4 °C, waarna het supernatant (plasma) werd verzameld en opgeslagen bij −80 °C tot analyse. De plasmaniveaus van creatinine, ureumstikstof, Von Willebrand-factor (vWF), trombomoduline (TM), asymmetrische dimethylarginine (ADMA), stikstofoxide (NO), plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1), weefselplasmigeen activator (t-PA), tumor necrose factor-α (TNF-α), hooggevoelig C-reactief eiwit (hs-CRP), interleukine-6 (IL-6), renine en aldosteron (ALD) werden onderzocht met commerciële ELISA-kits volgens de instructies van de fabrikant. Kort gezegd werd 100 μL plasmamonster of standaard toegevoegd aan antilichaam-gecoate 96-well microplaten, geïncubeerd bij 37 °C gedurende 2 uur, vier keer gewassen met wash buffer, geïncubeerd met biotinylated detectieantilichaam gedurende 1 uur bij 37 °C, opnieuw gewassen, geïncubeerd met streptavidine-HRP-conjugaat gedurende 30 minuten bij 37 °C, gevolgd door TMB-substraatontwikkeling gedurende 15–20 minuten in het donker. De reactie werd gestopt met 50 μL stopoplossing, en de absorptie werd gemeten bij 450 nm met een microplaatlezer. Alle monsters zijn dubbel getest.
9. Kwantitatieve Real-Time PCR (qRT-PCR)
Extractie van totaal RNA uit de LAA-weefsels werd uitgevoerd met behulp van TRIzol-reagens, gevolgd door detectie van RNA-zuiverheid en concentratie met een spectrofotometer bij absorptieverhoudingen van 260/280 nm (acceptabel bereik 1,8–2,0). In totaal werd 1 μg RNA omgekeerd getranscrcreerd in complementair DNA (cDNA) met behulp van een PrimeScript RT-reagenskit. De omgekeerde transcriptiereactie werd uitgevoerd bij 37 °C gedurende 15 minuten, gevolgd door inactivatie bij 85 °C gedurende 5 seconden. Kwantitatieve real-time PCR werd vervolgens uitgevoerd op het PCR-systeem met behulp van SYBR Green Master Mix. Het thermische cyclusprogramma bestond uit initiële denaturatie bij 95 °C gedurende 5 minuten, gevolgd door 40 denaturatiecycli bij 95 °C gedurende 10 seconden en annealing/extensie bij 60 °C gedurende 30 seconden. Het fluorescentiesignaal werd aan het einde van elke extensiestap gedetecteerd met behulp van het SYBR Green-kanaal. De drempelcyclus (Ct) waarden werden automatisch bepaald door de instrumentsoftware. De vouwveranderingen van mRNA-niveaus werden bepaald met de 2−ΔΔCt-methode . β-actin diende als interne controle. Alle monsters werden in drievoud uitgevoerd.
10. Westelijke blotting
Het totale eiwit werd uit de LAA-weefsels geëxtraheerd met behulp van een radioimmunoprecipitatietest (RIPA) lysebuffer (bestaande uit 50 mM Tris-HCl, pH 7,4, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0,5% natriumdeoxycholaat, 0,1% SDS, aangevuld met protease- en fosfataseremmercocktail; zie Materiaaltabel). Weefsels werden op ijs gehomogeniseerd en 15 minuten gecentrifugeerd bij 12.000 × g bij 4 °C, waarna het supernatant werd opgevangen. De eiwitconcentratie werd gekwantificeerd met behulp van een BCA Protein Assay kit. Vervolgens werden gelijke hoeveelheden eiwit (30 μg per baan) onderworpen aan 12% SDS-PAGE voor scheiding bij 80 V gedurende 30 minuten (stapelgel), gevolgd door 120 V voor ongeveer 60 minuten (oplossende gel) en vervolgens overgebracht op polyvinylidienfluoride (PVDF) membranen bij 300 mA gedurende 90 minuten in transferbuffer (25 mM Tris, 192 mM glycine, 20% methanol). Membranen werden geblokkeerd met 5% magere melk opgelost in TBST (Tris-buffered salline met 0,1% Tween-20) bij kamertemperatuur gedurende 2 uur, en vervolgens 's nachts bij 4 °C onderzocht met primaire antilichamen (zie Materiaaltabel voor antistofbronnen, catalogusnummers en verdunningen). De volgende dag werden membranen drie keer gewassen met TBST (elk 10 minuten) en 2 uur op kamertemperatuur geïncubeerd met het bijbehorende HRP-geconjugeerde secundaire antilichaam (zie Materiaaltabel). Na drie extra TBST-wasbeurten (elk 10 minuten) werden vlekken gevisualiseerd met een enhanced chemiluminescence (ECL) kit met behulp van een chemiluminescence imaging systeem. Glyceraldehyde-3-fosfaatdehydrogenase (GAPDH) diende als interne controle. Densitometrische analyse werd uitgevoerd met behulp van de ImageJ-software, en de relatieve eiwitexpressieniveaus werden genormaliseerd naar GAPDH. De geschatte molecuulgewichten van de gedetecteerde eiwitten waren als volgt: vWF (~260 kDa), TM (~60 kDa), endotheliale stikstofoxidesynthase (eNOS, ~130 kDa), induceerbare stikstofoxidesynthase (iNOS, ~130 kDa), PAI-1 (~45 kDa), t-PA (~70 kDa) en GAPDH (~36 kDa). Volledige lengte, niet-bijgesneden Western blot-afbeeldingen zijn te vinden in Aanvullende Figuur 1 en Aanvullende Figuur 2.
11. Statistische analyse
Alle waarden zijn geanalyseerd met behulp van statistische en grafische software en worden gepresenteerd als gemiddelde ± standaarddeviatie (SD). De normaliteit van de gegevensverdeling werd beoordeeld met de Shapiro-Wilk-test voorafgaand aan parametrische analyse. De homogeniteit van variantie werd geëvalueerd met behulp van de Levene-test. Voor gegevens die voldoen aan de aannames van normaliteit en homogeniteit van variantie werd een verschilvergelijking uitgevoerd met eenrichtings-ANOVA, gevolgd door Dunnetts post hoc-test voor meervoudige vergelijkingen met de controlegroep. Voor gegevens die niet aan de normaliteitsaanname voldeden, werd de niet-parametrische Kruskal-Wallis-test gevolgd door Dunns post hoc-test toegepast. In deze studie voldeden alle variabelen aan de normaliteits- en gelijke variantie-aannames; daarom werden parametrische analyses overal toegepast. In de analysesoftware werden gegevens ingevoerd in gegroepeerde datatabellen, werd eenrichtings-ANOVA geselecteerd vanuit het menu Column Analyses, werd Dunnett's test gekozen voor post hoc-vergelijkingen, en werd de significantiedrempel ingesteld op p < 0,05.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Diermodel van chronisch matige RI en AF
Een schematisch overzicht van het experimentele ontwerp en de tijdlijn wordt weergegeven in Figuur 1. De representatieve beelden van de angiografie van de linker nierarterie vóór en na transkatheterembolisatie, getoond in Figuur 2A,B, toonden aan dat de kleine nierarterietakken succesvol werden afgesloten na transkatheterembolis...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De huidige studie stelde een in vivo diermodel vast van matige RI gecombineerd met AF en onderzocht de pathogenese van linker atrium endotheeldisfunctie onder deze pathologische omstandigheden. De belangrijkste bevindingen van deze studie zijn als volgt: ten eerste heeft de embolisatie van de linker hoofdnierslagader gedurende 3 maanden bij beagles met succes matige RI geïnduceerd. Ten tweede werd er effectief een AF-model vastgesteld bij beagles. Ten derde was de linker atrium ...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs verklaren geen concurrerende belangen.
Dit werk werd ondersteund door het Noncommunicable Chronic Disease-National Science and Technology Major Project (nr. 2024ZD052500, Nr. 2024ZD0521504), de National Natural Science Foundation of China (subsidie nr. 81700293 en nr. 81970272) en de Beijing Anzhen Hospital High Level Research Funding (Funding Project nr. 2025AZB5005).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 6-0 Polypropylene suture | Ethicon (Johnson & Johnson) | 8706H | Voor femorale arteriële reparatie |
| 5F Multipurpose catheter | Cordis (Cardinal Health) | 521-550S | Voor renale arteriële canulerings- en embolisatie |
| 6F Quadripolar electrode catheter | St. Jude Medical | 401443 | Voor rechter atrium pacing |
| 6F Vascular introducer sheath | Terumo | RS*A60K10SQ | Voor femorale arteriële toegang |
| ABI 7500 Real-Time PCR System | Applied Biosystems (Thermo Fisher Scientific) | 4351105 | Voor qRT-PCR thermische cyclus en fluorescentiedetectie |
| Absorbable gelatin sponge granules (50 mg diameter) | Jinling Pharmaceutical | — | Voor transcateter renale arteriële embolisatie; bereid als slurry met contrastmiddel en zoutoplossing (1:1) |
| ADMA ELISA Kit (canine) | Cusabio | CSB-E09297c | Voor plasma asymmetrische dimethylarginine meting |
| Aldosterone ELISA Kit (canine) | Cusabio | CSB-E08014c | Voor plasma aldosterone meting |
| BCA Protein Assay Kit | Thermo Fisher Scientific | 23225 | Voor eiwitconcentratie kwantificering |
| Beagles (male, 4–5 years, 10–12 kg) | Shanghai Jiao Tong University Agricultural Experimental Animal Farm Co., Ltd. | — | Gezonde mannelijke beagles; individueel gehuisvest onder standaard omstandigheden |
| C-arm Fluoroscopy System | GE Healthcare | OEC 9900 Elite | Voor fluoroscopische begeleiding tijdens catheterisatie en angiografie |
| Chemiluminescence Imaging System | Bio-Rad | ChemiDoc XRS+ | Voor Western blot band visualisatie |
| Creatinine ELISA Kit (canine) | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | C011-2-1 | Voor plasma creatinine meting |
| Cuffed endotracheal tube (ID 7.0–8.0 mm) | Covidien (Medtronic) | 86449 | Voor endotracheale intubatie en mechanische ventilatie |
| DF-5A Cardiac Stimulator | Suzhou Dongfang Electronic Technology Research Institute | DF-5A | Voor snelle atrium pacing; instellingen: BCL 60 ms, pulse width 2 ms, voltage 4× drempel |
| ECL Western Blotting Substrate | Thermo Fisher Scientific | 32106 | Versterkte chemiluminescentie kit voor blot visualisatie |
| EDTA Anticoagulant Tubes | BD Vacutainer | 367835 | Voor bloedafname (plasma scheiding) |
| eNOS Primary Antibody (rabbit) | Cell Signaling Technology | 32027 | Verdunning 1:1000; voor Western blotting (~130 kDa) |
| Eosin Y Solution (aqueous) | Solarbio | G1100 | Voor H&E tegendye (2 min) |
| Foley Urinary Catheter (8 Fr) | C.R. Bard | 0165SI08 | Voor getimede urineverzameling tijdens CCr bepaling |
| GAPDH Primary Antibody (rabbit) | Cell Signaling Technology | 5174 | Verdunning 1:1000; interne controle voor Western blotting (~36 kDa) |
| GraphPad Prism (version 8.0) | GraphPad Software | — | https://www.graphpad.com; voor statistische analyse (one-way ANOVA, Dunnett's test) |
| Hematoxylin Solution (Harris) | Solarbio | G1140 | Voor H&E nucleaire kleuring (5 min) |
| Heparin Sodium Injection (unfractionated) | Changzhou Qianhong Biopharma | H32022088 | 4000 IE verdund in 10 mL zoutoplossing; voor anticoagulatie tijdens catheterisatie |
| HRP-conjugated Goat Anti-Mouse IgG Secondary Antibody | Cell Signaling Technology | 7076 | Verdunning 1:5000; voor Western blotting |
| HRP-conjugated Goat Anti-Rabbit IgG Secondary Antibody | Cell Signaling Technology | 7074 | Verdunning 1:5000; voor Western blotting |
| hs-CRP ELISA Kit (canine) | Cusabio | CSB-E08557c | Voor plasma hoge gevoeligheid C-reactieve proteïne meting |
| IL-6 ELISA Kit (canine) | R&D Systems | CA6000 | Voor plasma interleukine-6 meting |
| ImageJ Software (version 1.53) | National Institutes of Health | — | https://imagej.nih.gov/ij/; voor Western blot densitometrische analyse |
| iNOS Primary Antibody (rabbit) | Abcam | ab178945 | Verdunning 1:1000; voor Western blotting (~130 kDa) |
| Lactated Ringer's Solution | Baxter | 2B2324 | Intraveneuze vloeistof; toegediend bij 5–10 mL/kg/h tijdens procedures |
| Light Microscope | Olympus | BX53 | Voor histologische onderzoek van HE-gekleurde niersecties |
| Mechanical Ventilator (veterinary) | Midmark | Matrx Model 3000 | Tidevoluim 15 mL/kg; ademhalingssnelheid 12–15 ademhalingen/min |
| Microplate Reader | BioTek | Synergy HTX | Voor ELISA absorptiemeting bij 450 nm |
| Neutral Buffered Paraformaldehyde (10%) | Solarbio | P1110 | Voor nierweefsel fixatie (24 h) |
| NO ELISA Kit (canine) | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A012-1-2 | Voor plasma stikstofmonoxide meting |
| Non-ionic Iodinated Contrast Medium (Iohexol) | GE Healthcare | Omnipaque 350 | 5–8 mL per injectie bij 3 mL/s voor renale arteriële angiografie |
| PAI-1 ELISA Kit (canine) | Cusabio | CSB-E13043c | Voor plasma plasminogeenactivatorremmer-1 meting |
| PAI-1 Primary Antibody (rabbit) | Abcam | ab66705 | Verdunning 1:1000; voor Western blotting (~45 kDa) |
| Paraffin Wax | Leica Biosystems | 39601006 | Voor weefsel inbedding |
| PrimeScript RT Reagent Kit | Takara Bio | RR037A | Voor reverse transcriptie van RNA naar cDNA |
| Protease and Phosphatase Inhibitor Cocktail | Thermo Fisher Scientific | 78440 | Toegevoegd aan RIPA buffer voor eiwitextractie |
| Pulse Oximeter (veterinary) | Nonin Medical | 9847V | Voor continue SpO2 monitoring tijdens procedures |
| PVDF Membranes (0.45 μm) | Millipore | IP |