Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Onderzoeksartikel

Regulerend effect van moxibustie op macrofagenpolarisatie en migratie bij RA-modelratten en de rol van TIM-3

196 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/70436

⸱

27 maart 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Acupuncture and Tuina School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

In dit artikel

Samenvatting

Deze studie onderzoekt de regulerende effecten van moxibustie op macrofagenpolarisatie en migratie in rattenmodellen van reumatoïde artritis, met een focus op de rol van T-cel immunoglobuline en mucine-domeinhoudend eiwit 3 (TIM-3), om de therapeutische mechanismen van moxibustie bij deze ziekte te verduidelijken.

Samenvatting

Deze studie had als doel de regulerende effecten van moxibustie op macrofagenpolarisatie en migratie in een rattenmodel van reumatoïde artritis te onderzoeken, evenals de rol van T-cel immunoglobuline en mucine-domeinhoudend eiwit 3 (TIM-3) in dit proces. Op dag 0 van het experiment werden Sprague–Dawley (SD) ratten verdeeld in vijf groepen. Complete Freund's adjuvans (CFA) werd in de achtervoetpads geïnjecteerd om het reumatoïde artritismodel te vestigen. Daarnaast werd lentivirus-gemedieerde Havcr2 RNA-interferentie (LV-Havcr2-RNAi) in de achtervoetpads geïnjecteerd om de expressie van TIM-3 te remmen. Vanaf dag 7 ondergingen ratten moxibustiebehandeling in cycli bestaande uit zes dagen behandeling en één rustdag, in totaal drie volledige cycli. Na voltooiing van moxibustietherapie werd de ontstekingstoestand beoordeeld door middel van histologische analyse en meting van de pootdikte. Fenotypische markers van M1- en M2-macrofagen werden beoordeeld met een enzymgebonden immunosorbentassay (ELISA) en immunofluorescentie. De expressie van TIM-3 werd gedetecteerd via kwantitatieve real-time polymerasekettingreactie (qRT-PCR) en Western blot. Bovendien werden peritoneale exsudatmacrofagen (PEM's) geïsoleerd uit extra SD-ratten, en de migratie van macrofagen werd onderzocht met een Transwell-assay. De studie vond dat ratten na CFA-injectie aanzienlijke roodheid en zwelling van hun poot vertoonden, samen met een disbalans in de expressie van het macrofagenotype. Daarnaast toonden Transwell-migratieassays aan dat door CFA geïnduceerde modelratten een verhoogde macrofagenmigratie vertoonden ten opzichte van controlemonsters. Moxibustiebehandeling verminderde deze veranderingen echter. De resultaten toonden ook aan dat moxibustie de expressie van TIM-3 verhoogde, en na lentivirale interventie waren de TIM-3-niveaus duidelijk verlaagd, wat leidde tot verergering van ontstekingsmanifestaties en een macrofagendisbalans. Deze resultaten geven aan dat TIM-3 dient als een belangrijke mediator in moxibustieregulatie van macrofagenpolarisatie en migratie.

Inleiding

Reumatoïde artritis (RA) is een veelvoorkomende systemische auto-immuunziekte die klinisch voorkomt bij symmetrische inflammatoire artritis. De ontsteking richt zich voornamelijk op het synoviale membraan, kraakbeen en bot, wat leidt tot weefselvernietiging en culmineert in onomkeerbare gewrichtsdeformiteit1. De huidige farmacologische behandeling van RA is voornamelijk afhankelijk van ziekte-modificerende antireumatische geneesmiddelen (DMARD's), die vaak levenslange toediening vereisen. Deze therapeutische middelen worden echter geassocieerd met verschillende bijwerkingen. Daarom zoeken veel patiënten veilige en effectieve complementaire therapieën om klinische symptomen te verlichten en mogelijk hun afhankelijkheid van conventionele medicijnen te verminderen. Als een belangrijk onderdeel van de traditionele Chinese geneeskunde kan moxibustie dienen als een veelbelovende aanvullende therapie voor RA. Het oefent zijn therapeutische effecten uit via systemische ontstekingsremmende en immunomodulerende mechanismen3. Bewijs wijst erop dat moxibustie symptomen kan verlichten en gewrichtsstructuren kan beschermen4. Bovendien biedt moxibustie in vergelijking met de potentiële hepatorenale toxiciteit, infectierisico's en hoge kosten die gepaard gaan met DMARD's, betere veiligheid en lagere kosten. Moxibustion is echter geen wondermiddel en kan DMARD's voor de behandeling van RA niet volledig vervangen. Moxibustie vereist doorgaans herhaalde, langdurige behandelingssessies om het effect te bereiken. Tijdens acute exacerbaties van RA biedt het mogelijk geen snelle symptomencontrole. Bovendien is het therapeutische resultaat van moxibustie sterk afhankelijk van de vaardigheid en ervaring van de beoefenaar, wat variabiliteit introduceert. Daarom moet het integreren van moxibustie met DMARD's worden overwogen om een synergetisch effect van "verhoogde effectiviteit met verminderde toxiciteit" te bereiken, waardoor het een haalbare strategie is voor het langetermijnbeheer van RA5.

Hoewel talrijke studies de therapeutische effectiviteit van moxibustie bij RA 6,7,8 hebben bevestigd, blijven de precieze werkingsmechanismen onduidelijk. Deze studie onderzoekt de effecten van moxibustie op macrofagenpolarisatie en migratie bij RA, waarbij T-cel immunoglobuline en mucine-domeinhoudend eiwit 3 (TIM-3) als mechanistisch instappunt worden gebruikt. Deze benadering is ontworpen om een mogelijk immunomodulatorisch pad te verduidelijken waardoor moxibustie zijn antiartritische effecten uitoefent.

Als cruciale immuuncellen spelen macrofagen een centrale rol in de pathogenese en progressie van RA 9,10. Bij het begin van ontsteking geven weefselresidente macrofagen verschillende cytokines en chemokines af. Deze signaalmoleculen werken op vaatvormige endotheelcellen, bevorderen de differentiatie van circulerende monocyten tot macrofagen en hun daaropvolgende rekrutering naar ontstoken weefsel11,12. Deze infiltrerende macrofagen versterken de ontstekingsreactie verder door extra mediatoren te produceren, die op hun beurt meer macrofagen rekruteren en weefselinfiltratie verergeren, waardoor een vicieuze cirkel van ontsteking en weefselinfiltratie ontstaat.

Afhankelijk van omgevingsprikkels vertonen macrofagen aanzienlijke plasticiteit door te polariseren in verschillende functionele fenotypen, voornamelijk M1 (klassiek geactiveerd) en M2 (alternatieve geactiveerde) toestanden13. Onder fysiologische omstandigheden handhaaft macrofagenpolarisatie een dynamisch evenwicht tussen M1- en M2-fenotypen. Bij RA wordt dit evenwicht echter verstoord, gekenmerkt door een verhoogde M1-polarisatie met een verhoogde afgifte van pro-inflammatoire mediatoren, waaronder interferon (IFN)-γ en induceerbare stikstofoxidesynthase (iNOS), die ontstekingsreacties verergeren. Tegelijkertijd is de M2-polarisatie verzwakt, gepaard met een verminderde afgifte van ontstekingsremmende factoren, waaronder interleukine (IL)-4 en CD206, waardoor hun vermogen om T-celactivatie en proliferatie te remmen wordt aangetast en de ziekteprogressieverergert. Verschillende onderzoeken hebben aangetoond dat het moduleren van de M1/M2-macrofaagbalans de progressie van RA15,16 kan verminderen.

TIM-3, geïdentificeerd als een T-celoppervlakteglycoproteïne, wordt breed tot expressie gebracht op een spectrum van immuuncellen, waaronder T-cellen, macrofagen en natuurlijke killercellen, waar het bindt aan specifieke liganden om immunoregulerende functies uit te oefenen17. TIM-3 signalering oefent een duidelijke invloed uit op de expressie en polarisatie van inflammatoire cytokines in macrofagen. Opmerkelijk is dat TIM-3 sterk tot expressie komt op M2-macrofagen, waar het het M2-fenotype bevordert terwijl het het M1-fenotype onderdrukt. Omgekeerd wijst onderzoek uit dat TIM-3-remming het tegenovergestelde effect veroorzaakt, waarbij M1-polarisatie wordt aangedreven en M2-polarisatie 18,19,20 wordt verzwakt. Daarnaast wijst bewijs op TIM-3 als een belangrijke regulator van macrofagenmigratiegedrag21,22. Daarom toont therapeutische interventie gericht op TIM-3 om macrofagenpolarisatie en migratiedynamiek te beheersen veelbelovend als RA-behandelingsstrategie.

Op basis van de eerder genoemde redenering is deze studie uitgevoerd om bij te dragen aan de groeiende hoeveelheid kennis over de mechanismen waarmee moxibustie zijn therapeutische effecten uitoefent bij RA.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Ethische verklaring en veiligheidsmaatregelen
Alle dierproeven zijn goedgekeurd door de Ethische Commissie van de Chengdu Universiteit voor Traditionele Chinese Geneeskunde (2024029). Tijdens alle injectieprocedures, inclusief het toedienen van CFA en lentivirus, moeten operators persoonlijke beschermingsmiddelen (PBM) dragen, bestaande uit wegwerphandschoenen, een veiligheidsbril en laboratoriumjassen. Deze procedures moeten plaatsvinden in een bioveiligheidskast of een goed geventileerde omgeving. Alle scherpe stoffen die in contact zijn gekomen met reagentia moeten onmiddellijk worden gedeponeerd in speciale scherpe containers. Gedurende de moxibustiebehandeling hield de operator de reactie van het dier nauwlettend in de gaten. De moxaconus werd direct vervangen om thermische schade aan de huid te voorkomen. Bovendien moeten brandbare materialen uit de buurt van de brandende moxa worden gehouden om brandgevaar te elimineren.

1. Vaststelling van het RA-model

Dertig mannelijke SD-ratten (gewicht: 200 ± 20 g), zes weken oud (licentienummer: SCXK 2020-030), werden willekeurig verdeeld in vijf groepen (n = 6): controlegroep, RA-modelgroep (RA-groep), RA + moxibustie behandelgroep (Mox-groep), RA + TIM-3 lentivirusinterferentiegroep (RA + TIM-3– groep), en RA + TIM-3 lentivirusinterferentie + moxibustie behandelgroep (RA + TIM-3– + Mox groep). Voor het experiment werden ratten zeven dagen geacclimatiseerd in een gecontroleerde omgeving met een temperatuur van 22–24 °C, 20% luchtvochtigheid en een natuurlijke licht/donkercyclus, met vrije toegang tot voedsel en water. Op dag 23 van het experiment werden nog eens vijf drie weken oude mannelijke SD-ratten gekocht van hetzelfde bedrijf. Deze ratten werden vijf dagen geacclimatiseerd onder identieke huisvestingsomstandigheden voordat ze werden gebruikt voor PEM-extractie. Een schematisch diagram dat de experimentele procedure samenvat en representatieve procedurele foto's zijn weergegeven in Figuur 1.

Op dag 0 van het experiment werd 0,5 mL/kg CFA geïnjecteerd in de achterpootzolen van alle ratten behalve die in de controlegroep om RA op te wekken. Dezelfde hoeveelheid zoutoplossing werd op dezelfde locatie toegediend bij ratten in de controlegroep. De pootdikte werd gebruikt als criterium om de succesvolle vestiging van het RA-model23 te evalueren.

2. Lentivirus-injectie

Ratten in de RA + TIM-3- en RA + TIM-3- + Mox-groepen kregen op dag 1 van het experiment injectie van LV-Havcr2-RNAi (94435-1) in de achterpootkussens (3,5 × 107 TU/mL; 10 μL per pad). Alle andere ratten kregen identieke injecties van normale zoutoplossing op dezelfde anatomische plek24.

3. Moxibustion

Op dag 7 van het experiment kregen ratten in de Mox- en RA + TIM-3- + Mox-groepen moxibustiebehandeling. Om de procedure te vergemakkelijken, werd haar binnen een gebied van ongeveer 1 × 1 cm rond de BL23- en ST36-acupuntenpunten afgeschoren (deze procedure werd ook uitgevoerd bij ratten in de overige groepen). Tijdens moxibustie werd elke rat voorzichtig vastgemaakt aan een houten blok dat iets groter was dan zijn lichaamsgrootte met twee elastische banden om de behandelgebieden volledig bloot te leggen (ratten in andere groepen werden op vergelijkbare wijze vastgebonden). Vervolgens werden graanvormige moxacones op beide acupunkturen aangebracht. Om consistentie in thermische stimulatie tussen individuen te waarborgen, werd elke moxakegel (diameter: 2 mm; hoogte: 5 mm; moxawolinhoud: 60%) bereid uit een gestandaardiseerde portie moxawol van 5 mg. Elke dag werden vijf kegeltjes aangebracht op de twee acupunkturen aan één kant van het lichaam, waarbij de behandeling de volgende dag afwisselend werd uitgevoerd aan de contralaterale zijde. Dit afwisselende behandelprotocol werd drie weken lang gehandhaafd, met elke zevende dag een rustperiode van één dag.

Na drie cycli moxibustiebehandeling werden de ratten verdoofd met isofluraan (4% inductie, 2% onderhoud, inademing), en werd 5 ml arterieel bloed afgenomen uit de abdominale aorta. Na centrifugatie (2.000 × g, 15 min, 4 °C) werd het supernatantserum overgebracht in microcentrifugebuizen en opgeslagen bij −20 °C. Na bloedafname werden de ratten geëuthanaseerd door een cervicale ontwrichting. De enkelgewrichten werden zorgvuldig ontleed en vastgezet met 4% paraformaldehyde. Synoviale weefsels en milten werden snel ingevroren met vloeibare stikstof en opgeslagen bij −80 °C.

4. Meting van de dikte van rattenpoot

De middenpunten van de achterpoten van de ratten waren gemarkeerd met een waterdichte stift om een consistente meetpositie te garanderen. De pootdikte werd gemeten met vernier-remklampen vóór het modelleren, na succesvolle modellering en tussen elke behandelingsronde (op dag 0, 7, 14, 21 en 28 van het experiment).

5. Histologische analyse

Na fixatie in 4% paraformaldehyde werden de enkelgewrichten van ratten geplaatst in centrifugebuizen met een ruime hoeveelheid decalcificatieoplossing (10% mierenzuur). De buizen werden gemonteerd op een shaker en werden zachtjes geroerd bij kamertemperatuur gedurende 30 uur. In deze periode werd de decalcificatieoplossing op regelmatige intervallen vervangen en werd de toestand van het weefsel gecontroleerd om overmatige decalcificatie te voorkomen. Vervolgens werden de weefsels overgebracht naar een 5% natriumthiosulfaatoplossing voor neutralisatie gedurende 6 uur, gevolgd door een grondige spoeling van 4 uur onder stromend kraanwater25. De weefsels werden vervolgens gedehydrateerd en ingebed in paraffineblokken. Doorsneden werden dwars gesneden met een dikte van 5 μm. Na deparaffinisatie en hydratatie werden secties 3 minuten gekleurd met hematoxyline, afgespoeld met water, kort gedifferentieerd (5 s), opnieuw afgespoeld en 5 seconden blauw gemaakt, gevolgd door een grondige spoeling onder stromend kraanwater. Vervolgens werden secties 1 minuut gedehydrateerd in 95% ethanol en 15 seconden gekleurd met eosine. Ten slotte werden de secties gedehydrateerd, schoongemaakt en gemonteerd met een dekmantel voor observatie onder een lichtmicroscoop. Bij deze kleuring werden kernen blauw getoond, terwijl cytoplasma, collageenvezels en rode bloedcellen in verschillende tinten roze werden weergegeven; De keratiniseerde laag was meestal felrood gekleurd.

6. ELISA

Volgens het protocol van de fabrikant werd een aliquot van 100 μL van elk serummonster (vooraf verdund 1:2) toegevoegd aan de aangewezen putten. Blanco- en standaardputten werden parallel toegevoegd. Na het sealen werd de plaat 90 minuten geïncubeerd bij 37 °C. Na een wasstap werd het detectieantilichaam toegevoegd en 60 minuten geïncubeerd bij 37 °C. Na een nieuwe wash werd streptavidine–HRP-conjugaat toegevoegd. Na grondig wassen werd de substraatoplossing toegevoegd voor kleurontwikkeling, die werd gestopt door het toevoegen van stopoplossing. De absorptie werd gemeten op 450 nm (OD₄₅₀). Monsterconcentraties van IL-4 en IFN-γ werden bepaald door interpolatie van de standaardcurve, en de uiteindelijke concentraties werden berekend door te vermenigvuldigen met de respectievelijke verdunningsfactor.

7. qRT-PCR

Totaal RNA werd geëxtraheerd uit serummonsters met behulp van TRIzol-reagens volgens een aangepast protocol. Kort gezegd werd 100 μL serum gehomogeniseerd met 1 mL TRIzol-reagens door krachtig pipetteren. Vervolgens werd 100 μL chloroform toegevoegd, en het mengsel werd 15 seconden krachtig geschud, gevolgd door incubatie bij kamertemperatuur gedurende 3 minuten. Het monster werd vervolgens gecentrifugeerd op 12.000 × g gedurende 15 minuten bij 4 °C om fasescheiding te bereiken. De bovenste waterige fase werd zorgvuldig overgebracht naar een nieuwe buis, gemengd met 0,5 mL isopropanol, en 10 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd. Vervolgens werd het totale RNA gepelleteerd door centrifugatie bij 12.000 × g gedurende 10 minuten bij 4 °C. De resulterende RNA-pellet werd één keer gewassen met 1 mL 75% ethanol (centrifugatie bij 8.000 × g gedurende 5 minuten bij 4 °C) en aan de lucht gedroogd voordat het uiteindelijk werd opgelost. Het verkregen RNA onderging omgekeerde transcriptie met behulp van een cDNA-synthesekit. Genexpressie-analyse werd uitgevoerd door qRT-PCR met behulp van realtime kwantitatieve PCR-systeemsoftware. β-actine werd gebruikt als het huishoudelijke gen voor normalisatie. De relatieve expressie van TIM-3 mRNA werd berekend met de 2−ΔΔCt-methode . De details van de primers zijn toegevoegd in Tabel 1.

8. Westelijk blot

De geëxtraheerde milt werd drie keer gewassen met voorgekoelde fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), in kleine stukjes gesneden en gelyseerd door het toevoegen van een lysisbuffer in een volume dat tien keer groter was dan dat van het weefsel. Homogenisatie werd uitgevoerd met behulp van een homogenisatorbuis. Het homogenaat werd 30 minuten op ijs gelegd voor de lysise, met vijf tot zes rondes vortexing om volledige weefselverstoring te garanderen. De monsters werden gecentrifugeerd op 12.000 × g gedurende 10 minuten bij 4 °C, en het supernatant werd verzameld als het totale eiwitextract. De doeleiwitconcentraties werden gemeten met de bicinchonininezuur (BCA) assay volgens het kit-protocol.

Na scheiding door 10% natriumdodecylsulfaat–polyacrylamide gelelektroforese (SDS–PAGE), werden de geëxtraheerde eiwitmonsters overgebracht naar een polyvinylidiendifluoride (PVDF) membraan. Het membraan werd 1 uur bij kamertemperatuur geblokkeerd met Tris-buffered zoutoplossing met Tween 20 (TBST), aangevuld met 5% magere melk, gevolgd door een nachtelijke incubatie bij 4 °C met primaire antilichamen. Na grondige wasbeurt werd het membraan geïncubeerd met mierikswortelperoxidase (HRP)–geconjugeerde secundaire antilichamen bij 37 °C gedurende 2 uur. Ten slotte werden beelden vastgelegd met een chemiluminescentiebeeldvormingssysteem en geanalyseerd op grijswaardenintensiteit met behulp van ChemiScope-analysesoftware. Details van de primaire en secundaire antilichamen zijn opgenomen in Tabel 1.

9. Detectie van immunofluorescentie

Het geëxtraheerde synoviale weefsel werd ondergedompeld in 4% paraformaldehyde, gedehydrateerd en ingesloten in paraffine voordat het in plakjes van 5 μm dik werd gesneden. De secties werden achtereenvolgens gedewaxed in xyleen I, xyleen II en xyleen III (elk 10 min), gevolgd door drie wasbeurten in absolute ethanol (elk 5 min) en een laatste spoeling met gedestilleerd water.

Na antigeenwinning in ethyleendiamintetraazijnzuur (EDTA) werden de glaasjes drie keer gewassen in fosfaatgeborste zoutoplossing (PBS) (5 minuten elk) met zachte roering. De secties werden vervolgens geblokkeerd door incubatie met 3% rundereserumalbumine (BSA) gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur. Na blokkering werden primaire antilichamen, waaronder anti-induceerbare stikstofoxidesynthase (iNOS) (1:500) en anti-CD206 (1:400), toegepast en geïncubeerd bij 4 °C gedurende 24 uur.

Na drie PBS-wasbeurten van 5 minuten werden de secties 50 minuten geïncubeerd bij 37 °C in het donker met een secundair antilichaam (Cy3-geconjugeerde geitenanti-konijn IgG, 1:300). Nucleaire kleuring werd uitgevoerd door de glaasjes drie keer te wassen met PBS (5 minuten per was), gevolgd door behandeling met 4′,6-diamidino-2-fenylindool (DAPI) kleuroplossing en 10 minuten incubatie bij kamertemperatuur in het donker. De beelden werden onderzocht onder een fluorescentiemicroscoop.

10. PEM-isolatie

Na euthanasie door een cervicale ontwrichting werden ratten 10 minuten gedesinfecteerd in 75% ethanol en vervolgens overgebracht naar een steriele bioveiligheidskast. De buikhuid werd ingesneden met een steriele schaar, gevolgd door intraperitoneale injectie van 15 ml fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) met een spuit. De buik werd voorzichtig gemasseerd voordat de buikvocht weer in de spuit werd geïmpathiseerd en in centrifugebuizen werd overgebracht om macrofagen-suspenties te verkrijgen.

De celsuspensie werd drie keer gewassen met PBS voordat deze werd gezaaid in Dulbecco's aangepaste Eagle medium (DMEM) met 10% foetaal rundvleesserum (FBS). Cellen werden 24 uur gekweekt in een bevochtigde atmosfeer van 5% CO₂ bij 37 °C. De hechtende cellen die na deze incubatieperiode werden verkregen, werden geïdentificeerd als macrofagen.

11. Transwell

De migratietest werd uitgevoerd met behulp van 24-wellplaten. Na 24 uur serumuithongering werden 4 × 10 macrofagen in 300 μL DMEM toegevoegd, aangevuld met 1% foetaal rundserum (FBS) en 1% antibiotica (50 U/mL penicilline, 50 μg/mL streptomycine), terwijl 700 μL DMEM met 10% FBS en 1% antibiotica in de onderste kamer werd ingebracht. De cellen werden voorbehandeld met serum van verschillende rattengroepen gedurende 24 uur. Daarna werden de platen 24 uur geïncubeerd bij 37 °C in een omgeving van 5% CO₂. Na kristalvioletkleuring werd de bovenste kamer geswab om niet-migrerende cellen te verwijderen. Migrerende cellen werden gekwantificeerd door handmatig te tellen over vier willekeurig geselecteerde gezichtsvelden onder een optische microscoop.

12. Statistische analyse

Statistische analyses werden uitgevoerd met SPSS versie 25.0. Datasets werden eerst getest op normaliteit en homogeniteit van varianties. Wanneer aan deze parametrische aannames werd voldaan, werden intergroepvergelijkingen uitgevoerd met eenrichtingsvariantieanalyse (ANOVA) gevolgd door least significant difference (LSD) post hoc-analyse. Voor gegevens die deze aannames schonden, werd de niet-parametrische Kruskal–Wallis-test toegepast, gevolgd door Mann–Whitney U-tests met passende correctie voor meervoudige vergelijkingen. Alle waarden werden uitgedrukt als gemiddelde ± standaarddeviatie, en P < 0,05 werd als statistisch significant beschouwd.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Databeschikbaarheid
De ruwe gegevens die tijdens de huidige studie zijn gegenereerd, zijn beschikbaar in de Figshare-repository (https://doi.org/10.6084/m9.figshare.31550197)

Articulaire pathologie en pootdikte bij ratten na moxibustiebehandeling
Ratten die met CFA werden geïnjecteerd ontwikkelden duidelijke zwelling en roodheid van de poot. Hematoxyline- en eosine kleuri...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Het huidige beheer van RA is voornamelijk afhankelijk van DMARD's. Deze farmacologische middelen zijn echter vaak kostbaar en gaan gepaard met niet verwaarloosbare bijwerkingen, waaronder hepatorenale inkorting en ernstigeinfecties, wat een aanzienlijke last legt voor individuen en zorgsystemen. Daarentegen vertoont moxibustie als externe behandeling een gunstig veiligheidsprofiel met minimaal gerapporteerd risico op systemische toxiciteit. De techniek is relatief...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (Subsidie nr. 82374587) en de Natural Science Foundation van de provincie Sichuan (Subsidie nr. 2024NSFSC2113). Wij danken de Chengdu University of Traditional Chinese Medicine voor het bieden van laboratoriumfaciliteiten en technische ondersteuning. Bijzondere dank aan de Acupunctuur en Tuina School voor hun begeleiding bij moxibustieprotocollen. We erkennen ook het dierenverzorgingsteam voor hun hulp bij het onderhouden van de rattenmodellen. Tot slot spreken we onze waardering uit aan alle collega's die hebben bijgedragen aan de histologische en moleculaire analyses.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Complete Freund’s Adjuvant (CFA)Sigma-AldrichF5881Gebruikt voor het induceren van reumatoïde artritis (RA) model bij ratten
Lentivirus (TIM-3 RNAi)GenChem Biotechnology, Shanghai3,5×107 TU/mLGebruikt om TIM-3 genexpressie te onderdrukken
Moxa Kegels (tarwe-grootte)Leverancier van traditionele Chinese geneeskundeN/AGebruikt voor moxibustie op BL23 en ST36 acupunctuurpunten

Referenties

  1. Gravallese, E. M., Firestein, G. S. Rheumatoid Arthritis - Common Origins, Divergent Mechanisms. N Engl J Med. 388 (6), 529-542 (2023).
  2. Di Matteo, A., Bathon, J. M., Emery, P. Rheumatoid arthritis. Lancet. 402 (10416), 2019-2033 (2023).
  3. Hao, F., et al. Effect of moxibustion on autophagy and the inflammatory response of synovial cells in rheumatoid arthritis model rat. J Tradit Chin Med. 42 (1), 73-82 (2022).
  4. Chen, Y., et al. Moxibustion of Zusanli (ST36) and Shenshu (BL23) Alleviates Cartilage Degradation through RANKL/OPG Signaling in a Rabbit Model of Rheumatoid Arthritis. Evid Based Complement Alternat Med. 2019, 6436420(2019).
  5. Shang, J., et al. The efficacy and safety of warming acupuncture and moxibustion on rheumatoid arthritis: A protocol for a systematic review and meta-analysis. Medicine (Baltimore). 99 (34), e21857(2020).
  6. Gong, Y., et al. Effect of Moxibustion on HIF-1α and VEGF Levels in Patients with Rheumatoid Arthritis. Pain Res Manag. 2019, 4705247(2019).
  7. Liao, C., et al. The Effects and Potential Mechanisms of Moxibustion for Rheumatoid Arthritis-Related Pain A Randomized, Controlled Trial. J Pain Res. 16, 1739-1749 (2023).
  8. Tao, S., et al. The Efficacy of Moxibustion on the Serum Levels of CXCL1 and β-EP in Patients with Rheumatoid Arthritis. Pain Res Manag. 2021, 7466313(2021).
  9. Zheng, Y., et al. Macrophage polarization in rheumatoid arthritis: signaling pathways, metabolic reprogramming, and crosstalk with synovial fibroblasts. Front Immunol. 15, 1394108(2024).
  10. Kurowska-Stolarska, M., Alivernini, S. Synovial tissue macrophages in joint homeostasis, rheumatoid arthritis and disease remission. Nat Rev Rheumatol. 18 (7), 384-397 (2022).
  11. Kemble, S., Croft, A. P. Critical Role of Synovial Tissue-Resident Macrophage and Fibroblast Subsets in the Persistence of Joint Inflammation. Front Immunol. 12, 715894(2021).
  12. Huang, Q. Q., et al. Critical role of synovial tissue-resident macrophage niche in joint homeostasis and suppression of chronic inflammation. Sci Adv. 7 (2), eabd0515(2021).
  13. Mosser, D. M., Hamidzadeh, K., Goncalves, R. Macrophages and the maintenance of homeostasis. Cell Mol Immunol. 18 (3), 579-587 (2021).
  14. Tardito, S., et al. Macrophage M1/M2 polarization and rheumatoid arthritis: A systematic review. Autoimmun Rev. 18 (11), 102397(2019).
  15. Liu, X., et al. KLF11 alleviates rheumatoid arthritis by regulating M1 macrophage polarization via downregulation of YAP1 expression. Arthritis Res Ther. 27 (1), 171(2025).
  16. Wen, Y., et al. Wuwei Ganlu and Myricetin alleviate rheumatoid arthritis by inhibiting M1 macrophage polarization through modulation of SHBG/SREBP1-mediated lipid metabolism. Phytomedicine. 146, 157167(2025).
  17. Zhao, L., Cheng, S., Fan, L., Zhang, B., Xu, S. TIM-3: An update on immunotherapy. Int Immunopharmacol. 99, 107933(2021).
  18. Du, X., et al. Increased Tim-3 expression alleviates liver injury by regulating macrophage activation in MCD-induced NASH mice. Cell Mol Immunol. 16 (11), 878-886 (2019).
  19. Ni, X., et al. Interrogating glioma-M2 macrophage interactions identifies Gal-9/Tim-3 as a viable target against PTEN-null glioblastoma. Sci Adv. 8 (27), eabl5165(2022).
  20. Yang, H., et al. Tim-3 aggravates podocyte injury in diabetic nephropathy by promoting macrophage activation via the NF-κB/TNF-α pathway. Mol Metab. 23, 24-36 (2019).
  21. Guo, Q., et al. Cancer cell intrinsic TIM-3 induces glioblastoma progression. iScience. 25 (11), 105329(2022).
  22. Li, G., et al. Peripheral Injection of Tim-3 Antibody Attenuates VSV Encephalitis by Enhancing MHC-I Presentation. Front Immunol. 12, 667478(2021).
  23. Haiyan, Z., et al. Efficacy of Moxa-burning heat stimulating Zusanli (ST36) and Shenshu (BL23) on expressions of macrophage migration inhibitory factor and macrophage apoptosis in rabbits with adjuvant-induced arthritis. J Tradit Chin Med. 42 (6), 980-987 (2022).
  24. Tang, Q., et al. RNAi Silencing of IL-1β and TNF-α in the Treatment of Post-traumatic Arthritis in Rabbits. Chem Biol Drug Des. 86 (6), 1466-1470 (2015).
  25. Glasson, S. S., Chambers, M. G., Van Den Berg, W. B., Little, C. B. The OARSI histopathology initiative - recommendations for histological assessments of osteoarthritis in the mouse. Osteoarthritis Cartilage. 18 (Suppl 3), S17-S23 (2010).
  26. Miao, W., Yan, Z., Hui, Z., Hongfang, Z. Moxibustion enables protective effects on rheumatoid arthritis-induced myocardial injury transforming growth factor beta1 signaling and metabolic reprogramming. J Tradit Chin Med. 43 (6), 1190-1199 (2023).
  27. Tao, S. Y., et al. Moxibustion as an adjunctive treatment for rheumatoid arthritis and its effects on the serum levels of SOST and β-catenin. Zhongguo Zhen Jiu. 43 (12), 1384-1389 (2023).
  28. Hao, F., et al. [Effect of moxibustion on PI3K/Akt/mTOR signaling pathway in foot-pad synovium in rats with rheumatoid arthritis]. Zhongguo Zhen Jiu. 40 (11), 1211-1216 (2020).
  29. Zhong, Y. M., Zhang, L. L., Lu, W. T., Shang, Y. N., Zhou, H. Y. Moxibustion regulates the polarization of macrophages through the IL-4/STAT6 pathway in rheumatoid arthritis. Cytokine. 152, 155835(2022).
  30. Linlin, Z., et al. Moxibustion of Zusanli (ST36) and Shenshu (BL23) alleviates the inflammation of rheumatoid arthritis in rats through regulating macrophage migration inhibitory factor/glucocorticoids signaling. J Tradit Chin Med. 44 (2), 353-361 (2024).
  31. Zhu, L., et al. Effect of moxibustion at "Xinshu" (BL15) and "Feishu" (BL13) on expression of TRPV1 and CGRP in the myocardial tissue of chronic heart failure rats. Zhen Ci Yan Jiu. 49 (6), 551-557 (2024).
  32. Zhang, X. N., et al. Electroacupuncture and moxibustion-like stimulation activate the cutaneous and systemic hypothalamic-pituitary-adrenal axes in the rat. Acupunct Med. 40 (3), 232-240 (2022).
  33. Zhu, Y., et al. [Effect of moxibustion at "Zusanli"(ST36) and "Shenshu"(BL23) on miR-155-mediated TLR4/NF-κB signaling involving amelioration of synovitis in rheumatoid arthritis rats]. Zhen Ci Yan Jiu. 46 (3), 194-200 (2021).
  34. Wu, R., et al. Effects of Tim-3 silencing on the viability of fibroblast-like synoviocytes and lipopolysaccharide-induced inflammatory reactions. Exp Ther Med. 14 (3), 2721-2727 (2017).
  35. Nozaki, Y., et al. Inhibition of the TIM-1 and -3 signaling pathway ameliorates disease in a murine model of rheumatoid arthritis. Clin Exp Immunol. 218 (1), 55-64 (2024).
  36. Li, X., Zhao, Y. Q., Li, C. W., Yuan, F. L. T cell immunoglobulin-3 as a new therapeutic target for rheumatoid arthritis. Expert Opin Ther Targets. 16 (12), 1145-1149 (2012).
  37. Skejoe, C., et al. T-cell immunoglobulin and mucin domain 3 is upregulated in rheumatoid arthritis, but insufficient in controlling inflammation. Am J Clin Exp Immunol. 11 (3), 34-44 (2022).
  38. Zhang, Y., et al. Tim-3 negatively regulates IL-12 expression by monocytes in HCV infection. PLoS One. 6 (5), e19664(2011).
  39. Kun, L., et al. Moxibustion inhibits the macrophage M1 polarization toll-like receptor 4/myeloid differentiation factor 88/nuclear factor kappa B signaling pathway by regulating T-cell immunoglobulin and mucin-containing protein-3 in rheumatoid arthritis. J Tradit Chin Med. 44 (6), 1227-1235 (2024).
  40. Liu, X., et al. Tim-3 Regulates Tregs' Ability to Resolve the Inflammation and Proliferation of Acute Lung Injury by Modulating Macrophages Polarization. Shock. 50 (4), 455-464 (2018).
  41. Wang, F., et al. Overexpression of Tim-3 reduces Helicobacter pylori-associated inflammation through TLR4/NFκB signaling in vitro. Mol Med Rep. 15 (5), 3252-3258 (2017).
  42. Dixon, K. O., Lahore, G. F., Kuchroo, V. K. Beyond T cell exhaustion: TIM-3 regulation of myeloid cells. Sci Immunol. 9 (93), eadf2223(2024).
  43. Paul, S., Chhatar, S., Mishra, A., Lal, G. Natural killer T cell activation increases iNOS(+)CD206(-) M1 macrophage and controls the growth of solid tumor. J Immunother Cancer. 7 (1), 208(2019).
  44. Luo, M., Zhao, F., Cheng, H., Su, M., Wang, Y. Macrophage polarization: an important role in inflammatory diseases. Front Immunol. 15, 1352946(2024).
  45. Peng, Y., et al. Regulatory Mechanism of M1/M2 Macrophage Polarization in the Development of Autoimmune Diseases. Mediators Inflamm. 2023, 8821610(2023).
  46. Lazarov, T., Juarez-Carreño, S., Cox, N., Geissmann, F. Physiology and diseases of tissue-resident macrophages. Nature. 618 (7966), 698-707 (2023).
  47. Gomez Perdiguero, E., et al. Tissue-resident macrophages originate from yolk-sac-derived erythro-myeloid progenitors. Nature. 518 (7540), 547-551 (2015).
  48. Chang, J. W., et al. Nesfatin-1 Stimulates CCL2-dependent Monocyte Migration And M1 Macrophage Polarization: Implications For Rheumatoid Arthritis Therapy. Int J Biol Sci. 19 (1), 281-293 (2023).
  49. Takayanagi, H. Osteoimmunology: shared mechanisms and crosstalk between the immune and bone systems. Nat Rev Immunol. 7 (4), 292-304 (2007).
  50. Harada, S., Rodan, G. A. Control of osteoblast function and regulation of bone mass. Nature. 423 (6937), 349-355 (2003).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Moxibustietherapiemacrofaagmigratieratten met reumato de artritisTIM 3 expressielentivirale RNA interferentieTranswell assayELISA analyseimmunofluorescentiekleuringWestern blot
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.