$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Ethische goedkeuring werd verkregen van de IATRC Review Board. Alle procedures waarbij menselijke urinemonsters betrokken zijn, voldeden aan de principes van de Verklaring van Helsinki. Schriftelijke geïnformeerde toestemming werd van alle deelnemers verkregen en alle monsters werden geanonimeerd om de vertrouwelijkheid te waarborgen.
Sensorontwerp en numerieke simulatie
De eerste stap bij het ontwerpen van een sensor is het uitvoeren van een elektromagnetische simulatie. CST Microwave Studio wordt gebruikt om de lay-out te maken, die een resonator bevat die bestaat uit een cirkelvormige spiraalspoel (CSI) in serie met een interdigitale condensator (IDC). Er is een verbindingspunt voor een LDR tussen deze onderdelen waarmee ze optischsamenwerken. Om de prestaties te verbeteren worden twee Hilbert-fractale open stubs toegevoegd aan de CSI-IDC-overgang om elektromagnetische veldfrringing en vervorming te verminderen. Er wordt ook een back-loop structuur toegevoegd aan het grondvlak om de bandafkeurfilterrespons stabieler te maken en de meetnauwkeurigheidte verbeteren. Het ontwerp werkt het beste op een standaard, goedkope FR4-substraat (εr≈ 4,3, dikte 1,6 mm) en heeft een hoofdoperationele resonantie op 1,22 GHz. We gebruikten software om een equivalent lumped-element circuitmodel te maken en te analyseren om de gesimuleerde S-parameters te controleren. Dit zorgde ervoor dat de resultaten van fullwave elektromagnetische en circuitsimulaties hetzelfdewaren. De keuze voor LDR als optisch transducerende element werd gedreven door de duidelijke voordelen in deze specifieke microgolfdetectie-architectuur. In tegenstelling tot fotodiodes of fototransistors, die complexe biasingcircuits vereisen en een niet-lineaire stroom-lichtrelatie bieden, biedt de LDR een passieve, lineaire en breedbereik-resistieve modulatie als reactie op de invallende lichtintensiteit. Deze lineaire verschuiving in weerstand moduleert direct S21 van de aangrenzende microgolfresonator zonder actieve schakelruis toe te voegen of extra signaalconditionering te vereisen. Bovendien sluiten de goedkope kosten, compacte voetafdruk en naadloze integratie van de LDR met het FR4-substraat—zonder externe biasing vereist—aan bij het algemene ontwerpdoel van een eenvoudige, goedkope en niet-invasieve point-of-care-sensor.
Om de voorgestelde sensor te plaatsen binnen het bredere landschap van ureumdetectietechnologieën, is een korte vergelijking met gevestigde methoden nodig. Biochemische assays, zoals de enzymatische urease-methode, vormen de klinische gouden standaard en bieden hoge nauwkeurigheid en gevoeligheid (detectielimieten zo laag als 1–5 mg/dL), maar vereisen gespecialiseerde laboratoriumapparatuur, getraind personeel en typische doorlooptijden van 30–60 minuten, waardoor hun nut in point-of-care omgevingen beperkt wordt. Enzymatische teststrips bieden een snel (2–5 min), goedkope, semi-kwantitatieve alternatieve optie die geschikt is voor thuisgebruik; ze vertrouwen echter op colorimetrische interpretatie, die subjectief kan zijn, en bieden beperkte gevoeligheid voor nauwkeurige concentratiemeting. Elektrochemische sensoren, waaronder amperometrische en potentiometrische ureumbiosensoren, bereiken een hoge gevoeligheid en maken realtime detectie mogelijk, maar vereisen vaak complexe elektrodefabricage en enzymimmobilisatie, en hebben stabiliteitsproblemen door enzymafbraak in de loop van de tijd. Daarentegen biedt de voorgestelde optisch gecontroleerde microgolfsensor een unieke combinatie van eigenschappen: niet-invasieve optische koppeling elimineert direct contact met sensorelementen, waardoor het risico op besmetting wordt verminderd; De meettijd is minder dan 30 seconden; fabricage op goedkope FR4-substraat minimaliseert de kosten; en de lineaire relatie tussen ureaconcentratie en insertieverlies (S21) vereenvoudigt de kalibratie. Hoewel de huidige gevoeligheid (1,42 × 10-4 per mg/mol/cm3) geschikt is voor categorische classificatie van klinisch relevante ureagebieden (150–450 mg/dL), kan verdere optimalisatie detectielimieten verbeteren die vergelijkbaar zijn met elektrochemische tegenhangers. Al met al bekleedt de sensor een aanvullende niche, waarbij eenvoud, snelheid en draagbaarheid prioriteit geven voor point-of-care-toepassingen waar laboratoriumprecisie niet essentieel is.
Sensorfabricage
Standaard fotolithografie verplaatst het uiteindelijke ontwerp naar een enkelzijdig, koperen beklede FR4-plaat. Een hoge-resolutie fotomasker wordt gebruikt om het sensorpatroon te maken op een substraat dat is gelamineerd met fotoresist. Het patroon wordt vervolgens ontwikkeld en geëtst in een oplossing van ijzerchloride (FeCl₃). Na het etsen en reinigen worden SubMiniature versie A (SMA) connectoren zorgvuldig gesoldeerd op de in- en uitgangsmicrostrippoorten zodat meetapparatuur28 kan worden aangesloten. Dit proces maakt een werkende, laagprofielsensor die klaar is voor test.
Experimentele opstelling en kalibratie
Met behulp van hoogwaardige coaxkabels wordt de gefabriceerde sensor aangesloten op een vectornetwerkanalyzer (VNA), vergelijkbaar met een Agilent PNA-serie. Met behulp van een mechanische kalibratiekit wordt aan de uiteinden van de kabel een volledige tweepoorts kalibratie (Open, Kort, Belast, Door) uitgevoerd om systematische meetfouten te voorkomen. Om de S-parameters van de sensor te meten, is de VNA ingesteld om te sweepen van 0,1 GHz naar 4 GHz met een uitgangsvermogen van -10 dBm29.
Urinemonstervoorbereiding en meetprocedure
Deelnemers die ermee instemmen hun urinemonsters af te geven, worden gevraagd dit te doen. Er wordt een vast testplatform opgezet voor meting: een LDR wordt direct onder een schoon glazen schuifstuk geplaatst dat gecentreerd is over het actieve gebied van de sensor. Eerst wordt een baseline S21-meting uitgevoerd waarbij de LDR wordt verlicht door een lichtbron met constante intensiteit en zonder monster. Vervolgens wordt een 0,01 mL druppel urine op het midden van de glazen glaasje gepipeteerd. HetS21-spectrum wordt opnieuw opgenomen met dezelfde hoeveelheid licht. De optische eigenschappen van het monster die afhankelijk zijn van ureum veranderen de weerstand van de LDR, wat een meetbare verandering veroorzaakt in de | van de sensorS21| op 1,22 GHz30. Om kruisbesmetting te voorkomen, wordt de glazen glaasje tussen elke monstermeting schoongemaakt met gedestilleerd water en ethanol. Verse urinemonsters werden verzameld van tien gezonde vrijwilligers (vijf mannen, vijf vrouwen; leeftijd 25–45 jaar). De basisconcentraties ureum, gemeten met een klinische chemie-analyzer, varieerden van 150 tot 450 mg/dL. Om een gecontroleerd testbereik vast te stellen, werden monsters gecategoriseerd in drie concentratiegroepen: laag (150–250 mg/dL), gemiddeld (251–350 mg/dL) en hoog (351–450 mg/dL), met tien monsters per categorie. Alle monsters werden binnen 2 uur na de verzameling geanalyseerd, opgeslagen op 4 °C wanneer ze niet in gebruik waren, en in evenwicht gebracht tot kamertemperatuur vóór de meting. Een 0,01 mL aliquot werd aangebracht op een schoon glazen glaasglaasje voor elke test, waarbij de glaasjes tussen de metingen werden gereinigd met 70% ethanol en gedestilleerd water om kruisbesmettingte voorkomen.
Data-acquisitie en analyse
Het belangrijkste stukje informatie dat uit elke meting wordt gehaald, is de grootte van S21 (in dB) bij de resonantie van 1,22 GHz. Deze dataset wordt gebruikt om een K-Nearest Neighbors (KNN) algoritme te onderwijzen dat draait in een programma zoals MATLAB. Het model gebruikt de magnitude S21 om ureumniveaus in groepen te plaatsen zoals "laag", "tussen" en "hoog" 31. Ook kan de concentratiegevoeligheid van de sensor worden gemeten door de verandering in | te plottenS21| (Δ|S21|) tegen de verandering in ureumconcentratie (ΔC). De helling van deze lineaire relatie, C = ΔS / ΔC, toont de gevoeligheid. Om de robuustheid en betrouwbaarheid van de sensoren te evalueren, werd een herhaalbaarheidsstudie uitgevoerd met 45 metingen per ureumconcentratiecategorie (laag: 150–250 mg/dL, intermediair: 251–350 mg/dL, hoog: 351–450 mg/dL) over drie onafhankelijke dagen, in totaal 135 metingen. De variatiecoëfficiënt varieerde van 0,67% tot 1,07% in alle categorieën, wat wijst op uitstekende meetherhaalbaarheid. Meetonzekerheid werd gekwantificeerd volgens het Guide to the Expression of Uncertainty in Measurement (GUM)-kader, waarbij Type A-onzekerheid (statistische variatie uit herhaalde metingen) werd gecombineerd met Type B-bijdragen van VNA-kalibratie (±0,05 dB), temperatuurfluctuaties (±0,01 dB/°C) en variaties in de plaatsing van monsters (±0,02 dB). De uitgebreide onzekerheid (k=2, 95% betrouwbaarheidsinterval) varieerde van ±0,38 dB tot ±0,56 dB, afhankelijk van de concentratiecategorie. De concentratiegevoeligheid, afgeleid van lineaire regressie van Δ|S21| versus ΔC, werd berekend als 1,42 × 10-4 per (mg/mol/cm3), met een 95% betrouwbaarheidsinterval van 1,35 × 10-4 tot 1,49 × 10-4 per (mg/mol/cm3) en een determinatiecoëfficiënt (R2) van 0,94. De relatieve verhoogde gevoeligheidsonzekerheid was ±6,2% (k = 2), wat bevestigt dat de gerapporteerde gevoeligheid statistisch robuust is en de sensor reproduceerbare prestaties vertoont die geschikt is voor point-of-care toepassingen.