Methodenartikel

Vaststelling van een gestandaardiseerd protocol voor ruggenklemmanipulatie voor een ratmodel van pediatrisch astma

8 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/70623

⸱

1 oktober 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Acupuncture and Massage, Nanjing University of Chinese Medicine

In dit artikel

Samenvatting

Dit artikel presenteert een gestandaardiseerd protocol voor ruggenwervel-knijpmanipulatie (SP) in een jong ratmodel van astma. Dit protocol verminderde luchtwegontsteking, hyperresponsiviteit en remodellering in een OVA-geïnduceerd astmamodel. De studie kan de basis leggen voor mechanistisch onderzoek en klinische vertaling.

Samenvatting

Astma is de meest voorkomende chronische inflammatoire luchtwegziekte bij kinderen en wordt gekenmerkt door chronische ontsteking van de luchtwegen, hyperreactiviteit van de luchtwegen (AHR) en remodeling van de luchtwegen. In de traditionele Chinese geneeskunde (TCM) is spine-pinching manipulatie (SP) een veelgebruikte pediatrische massagetechniek voor de behandeling van astma en andere kinderziekten. Ondanks een klinische gebruiksgeschiedenis van meer dan 1.000 jaar is SP buiten China grotendeels onbekend. Bovendien zijn de mechanismen die ten grondslag liggen aan SP onvoldoende gekarakteriseerd. Dit artikel beschrijft een haalbaar en gestandaardiseerd protocol voor SP dat de essentiële procedures repliceert die in de klinische praktijk worden gebruikt. Toepassing van het protocol verbeterde de ontsteking van de luchtwegen, de AHR en de remodeling van de luchtwegen in een juveniel ratmodel voor astma. Om de reproduceerbaarheid te vergroten, werden belangrijke procedurele parameters gestandaardiseerd, waaronder vingerdruk, manipulatiefrequentie, aantal herhalingen en de duur van de interventie. Het gestandaardiseerde protocol in deze studie kan dienen als referentie voor verder onderzoek naar de standaardisatie van SP en de onderliggende mechanismen bij experimenteel pediatrisch astma.

Inleiding

Pediatrische astma wordt gekenmerkt door chronische ontsteking van de luchtwegen, hyperreactiviteit van de luchtwegen (AHR) en remodellering van de luchtwegen1,2. Het begint vaak in de vroege kindertijd en is de meest voorkomende chronische ziekte onder kinderen op schoolgaande leeftijd. Huidige conventionele behandelingen omvatten geïnhaleerde corticosteroïden, β₂-receptoragonisten, leukotriëenreceptorantagonisten en biologische therapieën3,4. Echter, wereldwijd bereikt slechts 44,1% van de kinderen en 55,4% van de adolescenten met astma een adequate ziektecontrole5. Bovendien kan herhaalde toediening van systemische of geïnhaleerde corticosteroïden bijdragen aan groeivertraging bij kinderen met slecht gecontroleerde astma6.

Als traditionele externe therapie is massage (in China ook bekend als tuina) kosteneffectief, wordt het goed verdragen en wordt het over het algemeen als veilig beschouwd voor kinderen. Massage wordt al lang gebruikt in zowel China als Westerse landen voor de preventie en behandeling van pediatrisch astma7. Systematische reviews en meta-analyses hebben gunstige resultaten gerapporteerd van massagetherapie bij het beheer van pediatrisch astma7,8. Spine-pinching manipulatie (SP) is een klassieke en veelbeoefende techniek in de traditionele Chinese pediatrische massage. Volgens de theorie van de traditionele Chinese geneeskunde (TCM) moduleert stimulatie van de Governor Vessel (GV) en Bladder (BL) meridianen langs de rug de functie van de Zang-Fu organen, waardoor de systemische homeostase wordt behouden en ziekten worden voorkomen of behandeld9,10,11. Eerdere studies hebben aangetoond dat SP niet alleen atopische symptomen en tekenen bij kinderen verbeterde, maar ook chronische luchtweginflammatie reduceerde in een jong ratmodel voor astma12,13,14. Naast het klinische gebruik wordt SP vaak toegepast als een thuisgebaseerde zorginterventie11,15. Ondanks een klinische geschiedenis van meer dan duizend jaar blijft SP relatief onbekend buiten China, en zijn de onderliggende mechanismen nog niet uitgebreid onderzocht. Daarom zijn gestandaardiseerde diermodellen essentieel voor het ontrafelen van de mechanismen van SP en ter ondersteuning van een bredere wetenschappelijke evaluatie en toepassing.

Verschillende studies hebben gestandaardiseerde massageprotocollen voor dieronderzoek vastgesteld. Een eerdere studie ontwikkelde een gestandaardiseerd protocol voor het strijken over de rug of buik bij ongeveer 20 cm/s en een druk van 100 mm H₂O om cardiovasculaire excitatoire reacties te remmen16. Recentelijk werd aangetoond dat repetitieve unidirectionele spinale tactiele stimulatie langs de GV met behulp van een mechanische stimulator synaptische remodellering bevordert in de mediale prefrontale cortex van een adolescent muismodel voor autisme. In dat protocol werd een matige druk van ongeveer 30–50 g aangebracht bij een snelheid van ongeveer 15,3 cm/s zonder ongemak of letsel te veroorzaken. De stimulatie werd unidirectioneel toegediend van de caudale regio naar de nek (occipitale regio), tweemaal daags gedurende 10 min over een periode van 21 dagen17. Handmatige manipulatie verschilt echter fundamenteel van mechanische stimulatie, en momenteel reproduceert geen enkel mechanisch apparaat de karakteristieke bewegingen van SP. Bovendien, hoewel verschillende studies de mechanismen van SP hebben onderzocht in ratmodellen voor astma en andere pediatrische aandoeningen18, is er geen gestandaardiseerd protocol vastgesteld om de stimulatiekracht en snelheid te definiëren die vereist zijn voor SP in dierstudies. De ontwikkeling van een gestandaardiseerd SP-protocol is daarom essentieel om de reproduceerbaarheid te verbeteren en mechanistische onderzoeken te faciliteren.

Allergisch astma is het meest voorkomende fenotype van pediatrisch astma19. Bijgevolg zijn sensibilisatie en uitdaging met ovalbumine (OVA) de meest gebruikte methoden voor het opzetten van een experimenteel model voor pediatrisch astma20. Ratten zijn bijzonder geschikt voor het onderzoeken van massage-gebaseerde interventies omdat hun grotere lichaamsomvang handmatige manipulatie vergemakkelijkt. Bovendien reproduceren rattenmodellen betrouwbaar belangrijke pathologische kenmerken van allergisch astma, waaronder Th2-georiënteerde ontsteking, AHR en remodellering van de luchtwegen21.

Eerdere studies hebben aangetoond dat SP luchtweginflammatie verminderde bij jonge ratten na OVA-sensibilisatie en challenge11,14. Daarom was het doel van de huidige studie om een gestandaardiseerd SP-protocol vast te stellen voor een jong ratmodel van pediatrisch astma, om toekomstig onderzoek naar de onderliggende mechanismen van SP te faciliteren. Dit gestandaardiseerde protocol biedt een reproduceerbaar experimenteel kader voor mechanistische studies en toekomstig translationeel onderzoek naar SP in diermodellen van pediatrisch astma.

Protocol

Deze studie is goedgekeurd door de commissie voor dierverzorging en -gebruik van de Nanjing University of Chinese Medicine (Nr. 202306A032). Alle procedures zijn uitgevoerd in overeenstemming met de National Institutes of Health-richtlijnen voor de verzorging en het gebruik van laboratoriumdieren en de ARRIVE 2.0-richtlijnen.

Er werden dertig 3 weken oude mannelijke specifieke pathogeen-vrije (SPF) Sprague-Dawley (SD) ratten met een gewicht van 45–55 g gebruikt. De ratten werden gehuisvest (drie per kooi) in een SPF-barrièrefaciliteit onder een licht/donkercyclus van 12 u bij 22 ± 2 °C en een relatieve vochtigheid van 30%–40%, met vrije toegang tot standaardvoer en water. Op basis van eerdere studies met jonge ratmodellen voor astma11,14, werd de steekproefgrootte bepaald om het aantal dieren te minimaliseren in overeenstemming met het reductieprincipe van de 3Rs. Na een acclimatisatieperiode van 7 dagen werd het basislichaamsgewicht geregistreerd en kreeg elke rat een uniek identificatienummer. De ratten werden gestratificeerd op basis van het basislichaamsgewicht en vervolgens binnen elk stratum toegewezen aan een van de vijf groepen met behulp van een willekeurige getallentabel, met een toewijzingsverhouding van 1:1:1:1:1 (n = 6 per groep): controle (CN), astma (AS), astma + SP (AS+SP), astma + methylprednisolon (AS+MP) en astma + SP + methylprednisolon (AS+SP+MP). De randomisatiesequentie en de groepsindeling werden gegenereerd door een onderzoeker die niet betrokken was bij de daaropvolgende interventies of de beoordelingen van de uitkomsten.

De inclusiecriteria waren gezonde mannelijke SPF SD-ratten van 3 weken oud, met een gewicht van 45–55 g bij aanvang, een normaal ademhalingspatroon en een normale fysieke activiteit. Ratten werden uitgesloten als zij tekenen van ziekte vertoonden, een afwijking in het lichaamsgewicht van >20% ten opzichte van het gemiddelde van de cohort tijdens de acclimatisatie hadden, of als zij stierven vóór de voltooiing van de interventiefase. Gedurende de gehele procedure werd passende persoonlijke beschermingsmiddelen gedragen, waaronder een laboratoriumjas, een wegwerpmasker en handschoenen. Dierlijke karkassen en weefsels werden in dubbellaagse biohazard-zakken geplaatst en bij −20 °C bewaard vóór afvoer. Besmet strooisel werd afgevoerd als biologisch gevaarlijk vast afval, en scherpe voorwerpen werden weggegooid in goedgekeurde doorsteekbestendige naaldencontainers. Voor de terminale weefselafname werd 20% urethaan (5 mL/kg, i.p.) toegediend, waarbij diepe anesthesie werd bevestigd door de afwezigheid van de pedaalreflex en corneale reflexen.

1. Vestiging van het astmamodel bij jonge ratten

OPMERKING: De volgende procedure werd gebruikt om het asthamodel bij jonge ratten vast te stellen12.

  1. Bereid de OVA/Al(OH)₃-suspensie onmiddellijk voor elke injectie voor. Los 2 mg Grade V OVA direct op in 1 mL 4% Al(OH)₃-gel en vortex tot er een homogene suspensie is verkregen.
    OPMERKING: Zorg dat de suspensie homogeen is vóór injectie. Indien er neerslag optreedt, kortstondig vortexen om het mengsel opnieuw te suspenderen. Bewaar de suspensie op ijs en gebruik deze binnen 2 u na bereiding.
  2. Injecteer 1 mL van de OVA/Al(OH)₃-suspensie intraperitoneaal op experimentele dagen 1, 8 en 15. Injecteer 1 mL steriele normale zoutoplossing (0,9% NaCl) bij de ratten in de CN-groep volgens hetzelfde schema.
  3. Daag de ratten uit met een 2% Grade II OVA-oplossing van experimentele dag 21 tot dag 42 met behulp van een ultrasone vernevelaar. Dien de laatste twee opeenvolgende uitdagingen toe met 3% OVA om exacerbatie na sensibilisatie op te wekken.
  4. Voer de verneveling om de dag uit gedurende 30 min over een periode van 3 weken. Plaats elke rat individueel in een afgesloten blootstellingskamer die is verbonden met de ultrasone vernevelaar (ultrasone frequentie: 1,7 MHz ± 10%; vernevelingssnelheid: ≥3 mL/min; particheldiameter: <5 µm).
    OPMERKING: Bevestig de succesvolle vestiging van het astmamodel door het observeren van niezen, knikken van het hoofd tijdens de ademhaling, mondademhaling, contractie van de buikspieren en piepende ademhaling.

2. Bediening en toepassing van de software van het Finger TPS-systeem

  1. Steek de sensorstekker verticaal in de interface van de printplaat. Verbind de printplaat met de computer met behulp van een USB-C-kabel van ongeveer 40 cm om voldoende bewegingsvrijheid tijdens het gebruik te garanderen.
  2. Desinfecteer de handen en de vingerbeschermers. Steek de rechterduim en wijsvinger van de operator in de met sensoren uitgeruste vingerhulzen. Positioneer de flexibele sensoren over het midden van de vingertoppen en zorg voor nauwsluitend, rimpelvrij contact met de huid.
  3. Voer systeemkalibratie en kwaliteitscontrole voor krachtmeting uit
    1. Inspecteer de sensoren en verbindingskabels voor elke trainingssessie van de operator en verifieer of het apparaat correct is aangesloten.
    2. Selecteer “N” als meeteenheid en stel het meetbereik in op −3.5 tot 32 N.
    3. Zorg ervoor dat er geen externe kracht op de sensoren wordt uitgeoefend. Voer de “Tare”-functie uit om het systeem op nul te stellen.
    4. Registreer de onbelaste basislijn gedurende 30 s. Begin pas met de krachtmeting wanneer de variatie van de basislijn onder de 0.02 N blijft.
    5. Herhaal de nulstellingsprocedure telkens wanneer de sensorpositie of de strakheid van de huls wordt aangepast of wanneer basislijndrift wordt waargenomen.
    6. Gebruik het Finger TPS-systeem om de uitgeoefende kracht tijdens de training van de operator te bewaken. Handhaaf een kracht van 5 ± 0.6 N tijdens het back stroking en 12 ± 2 N tijdens SP, terwijl de voorgeschreven snelheid en frequentie worden aangehouden.
    7. Accepteer de krachtcurve alleen wanneer de basislijn stabiel blijft, er geen signaalonderbreking of verzadiging optreedt en de uitgeoefende kracht binnen de gespecificeerde doelbereiken blijft.
  4. Voer back-stroking manipulatie en SP uit terwijl de dynamische krachtcurve wordt bewaakt. Pas de strakheid van de vingerhulzen naar behoefte aan totdat een stabiele krachtcurve is verkregen.
  5. Oefen de manipulaties terwijl de real-time krachtcurve wordt bewaakt. Handhaaf een doelkracht van 5 ± 0.6 N en een snelheid van ongeveer 5 cm/s tijdens back stroking, en handhaaf een doelkracht van 12 ± 2 N bij een frequentie van 6–8 repetities/min tijdens SP. Beschouw de operator pas als competent nadat vijf opeenvolgende oefenpogingen voldoen aan de criteria voor manipulatietechniek, vingerkracht en SP-frequentie.
    OPMERKING: Beschouw de operator pas als gekwalificeerd na het consistent behalen van de doelkracht en bewegingsparameters. Verwijder de vingerbeschermers voordat de formele SP-procedure wordt uitgevoerd om extra tactiele stimulatie van de ratten te voorkomen. Echter, geen van de inter-operator reproduceerbaarheidstests in deze studie mogen worden meegewogen bij het adopteren van dit protocol als referentie voor de SP-studie.

3. Gedetailleerde procedure van de spine-pinching manipulatie

  1. Houd de rat voorzichtig in buikligging op één handpalm. Ondersteun de voorpoten door de voorste oksels voorzichtig te omsluiten met de duim en wijsvinger en laat de voorpoten natuurlijk hangen. Zorg ervoor dat de rat kalm blijft met een gelijkmatige ademhaling. Als er vocalisatie, strijd of defecatie optreedt, laat de rat dan los en laat deze 2–3 min acclimatiseren voordat u de positie opnieuw bepaalt (Figuur 1).
  2. Aai de rug twee keer van de schouderregio naar de staartbasis langs het Gouverneursvat (GV) met de rechterwijs-, middel- en ringvinger. Oefen een kracht van ongeveer 5 N uit om de rat te kalmeren vóór SP.
  3. Knijp in de huid bij de wortel van de staart met de rechterduim posterieur geplaatst en de wijs- en middelvinger anterieur geplaatst. Til de huid voorzichtig op, draai vervolgens en beweeg de vingers craniaal langs de wervelkolom richting Dazhui (GV14). Vermijd het veroorzaken van duidelijke tekenen van ongemak. Handhaaf een vingerdruk van ongeveer 12 N en voer de manipulatie uit met een frequentie van 6–8 herhalingen/min. Voer 15 herhalingen uit van experimentele dag 1 tot dag 21 en 25 herhalingen van dag 22 tot dag 44.
  4. Herhaal de procedure voor het aaien van de rug zoals beschreven in Stap 3.2 om de behandelsessie af te sluiten en de rat te kalmeren.
    OPMERKING: Volgens de theorie van de traditionele Chinese geneeskunde (TCM) wordt SP langs de wervelkolom uitgevoerd om de GV- en BL-meridianen te stimuleren (Figuur 2). De GV loopt langs de dorsale middellijn van de staartwortel naar Dazhui (GV14), terwijl de BL-meridiaan zich ongeveer 3–6 mm lateraal van de middellijn bevindt, afhankelijk van de lichaamsgrootte22. Dazhui (GV14) bevindt zich op het middenpunt tussen de zevende halswervel en de eerste borstwervel. Verhoog het aantal SP-herhalingen naarmate de leeftijd toeneemt om het klinische behandelregime na te bootsen. Zorg er tijdens het aaien van de rug voor dat de rat ontspannen blijft, rustig ademt en geen defensief gedrag vertoont. Tijdens SP is een lichte kromming van de rug en het spreiden van de snorharen te verwachten, zonder stress-geïnduceerde mictie, defecatie, hevig strijden, vocalisatie of ontsnappingspogingen.

4. Interventieprotocollen

  1. Wijs de ratten in de CN-groep toe om geen ziekte-specifieke interventie te ontvangen. Behandel de ratten voorzichtig gedurende dezelfde tijdsduur als de AS+SP-groep om te controleren voor handling-effecten. Dien intraperitoneel normale zoutoplossing (1 mL/kg) toe volgens hetzelfde schema als dat voor de methylprednisolon-injecties.
  2. Onderwerp de ratten in de AS-groep aan OVA-sensibilisatie en challenge. Pas dezelfde handling- en zoutoplossing-injectieprocedures toe als gebruikt voor de CN-groep.
  3. Onderwerp de ratten in de AS+SP-groep aan OVA-sensibilisatie en challenge. Pas het SP-protocol eenmaal daags toe vóór de modelinductie.
  4. Onderwerp de ratten in de AS+MP-groep aan OVA-sensibilisatie en challenge. Dien methylprednisolon (10 mg/kg; 2 mg/mL bereid in zoutoplossing) toe via een intraperitonele injectie 30 min vóór elke OVA-challenge.
  5. Onderwerp de ratten in de AS+SP+MP-groep aan dezelfde procedures als gebruikt voor de AS+MP-groep. Pas het SP-protocol eenmaal daags toe vóór de methylprednisolon-injectie.
    OPMERKING: Behalve voor de AS+SP- en AS+SP+MP-groepen, dienen dezelfde handling-procedures op alle andere groepen te worden toegepast om te controleren voor aspecifieke handling-effecten. Gebruik voor alle injecties steriele wegwerpspuiten en gooi naalden weg in lekvrije naaldencontainers. Plaats de naald voor de intraperitonele injectie lateraal ten opzichte van de abdominale middellijn om het risico op visceraal letsel te minimaliseren. Om te controleren voor tactiele stimulatie in de non-SP-groepen, dienen de ratten elke dag vier keer te worden gestreeld tijdens dezelfde interventie als bij de SP-groep. Gebruik dezelfde rugstreekprocedure als die gebruikt voor de SP-groepen.

Resultaten

Het lichaamsgewicht is een belangrijke indicator voor de groei bij jonge ratten. Voorafgaand aan de experimentele behandeling werden er geen significante verschillen in lichaamsgewicht waargenomen tussen de vijf groepen. Na inductie van het astmamodel vertoonde de AS-groep een significant lager lichaamsgewicht dan de CN-groep (P = 0.000; Figuur 3A). Vergeleken met de AS-groep vertoonde de AS+SP-groep een significant hoger lichaamsgewicht (P = 0.008; Figuur 3A), terwijl de AS+MP-groep geen significant verschil vertoonde (P = 0.975; Figuur 3A). Op dezelfde manier vertoonde de AS+SP+MP-groep geen significante toename in lichaamsgewicht vergeleken met de AS-groep (P = 0.925; Figuur 3A). De resultaten suggereren dat SP gewichtstoename bevordert tijdens pediatrische astmamodellering en behandeling met methylprednisolon (MP) bij jonge ratten.

Na de OVA-challenge vertoonden ratten in de CN-groep geen tekenen van ademhalingsproblemen, zoals kortademigheid, niezen, knikken met het hoofd, open-mondademhaling, contractie van de buikspieren of piepen. In contrast hiermee vertoonden ratten in de AS-groep typische manifestaties van pediatrisch astma, waaronder kortademigheid, niezen, knikken met het hoofd en open-mondademhaling. Deze klinische tekenen werden merkbaar verlicht na behandeling met SP, MP, of de gecombineerde toepassing hiervan.

Om de ontstekingsremmende effecten van SP te evalueren in jonge ratten met experimenteel astma, werden longweefsels verzameld na diepe anesthesie met 20% urethaan (5 mL/kg, i.p.) volgens eerder beschreven procedures12. Hematoxyline en eosine (HE)-kleuring en analyse van de expressie van pro-inflammatoire genen werden uitgevoerd om chronische luchtwegontsteking te beoordelen, terwijl Masson-kleuring werd gebruikt om luchtwegremodellering te evalueren. Luchtweghyperresponsiviteit (AHR) werd beoordeeld met behulp van whole-body plethysmografie (WBP) door het meten van de versterkte pauze (Penh).

Na routine HE- en Masson-kleuringsprocedures23 werden longsecties gekleurd met hematoxyline en eosine en werden ze gescoord op peribronchiolaire ontsteking met behulp van een aangepaste schaal van 0–424. De asthamodelgroep vertoonde significant hogere ontstekingsscores dan de CN-groep (P = 0,000). In vergelijking met de AS-groep vertoonden de AS+SP-, AS+MP- en AS+SP+MP-groepen allemaal significant verlaagde ontstekingsscores (P = 0,005, P = 0,006 en P = 0,000, respectievelijk), zonder significante verschillen tussen de drie behandelingsgroepen (Figuur 4A, Tabel 1).

Remodellering van de luchtwegen werd geëvalueerd door de collageenafzetting rond de bronchioli te kwantificeren middels Masson-kleuring. De collageenafzetting werd uitgedrukt als het collageen-positieve oppervlak genormaliseerd naar de omtrek van het basaalmembraan (µm2/µm). De AS-groep vertoonde een significant grotere collageenafzetting dan de CN-groep (P = 0.000). Vergeleken met de CN-groep vertoonden de AS+SP- en AS+MP-groepen een matig hogere collageenafzetting (P = 0.050 en P = 0.051, respectievelijk), maar een significant lagere collageenafzetting dan de AS-groep (P = 0.001 voor beide vergelijkingen). De AS+SP+MP-groep vertoonde geen significant verschil met de CN-groep (P = 0.105), maar vertoonde een significant verminderde collageenafzetting vergeleken met de AS-groep (P = 0.001). Er werden geen significante verschillen waargenomen tussen de drie interventiegroepen (Figuur 4B, Tabel 1).

Representatieve krachtcurves verkregen met het Finger TPS-systeem worden weergegeven in Figuur 5. Tijdens de training van de operator bleef de krachtcurve die tijdens het 'back stroking' werd geregistreerd stabiel op ongeveer 5 N (Figuur 5A), terwijl de krachtcurve die tijdens SP werd geregistreerd herhaalde krachtpieken vertoonde die overeenkwamen met de knijpbeweging, waarbij de uitgeoefende kracht binnen het vooraf gedefinieerde doelbereik werd gehouden (Figuur 5B). Deze krachtprofielen demonstreren de gestandaardiseerde krachtkenmerken die tijdens de training van de operator werden gebruikt.

De algemene experimentele tijdlijn is samengevat in Figuur 6. Na de acclimatisatieperiode van 7 dagen werd de OVA-sensibilisering uitgevoerd volgens het opgegeven schema, gevolgd door herhaalde OVA-challenges. SP werd toegediend aan de AS+SP- en AS+SP+MP-groepen tijdens de aangewezen interventieperiode, terwijl methylprednisolon werd toegediend vóór de OVA-challenge in dedesbetreffende behandelingsgroepen. De WBP-beoordeling en weefselverzameling werden uitgevoerd na de laatste challenge (Figuur 6).

Whole-body plethysmografie wordt op grote schaal gebruikt om de Penh te beoordelen bij bewuste, onbeperkte knaagdieren zonder dat dit aanzienlijk letsel of stress veroorzaakt25. Hoewel Penh een indirecte indicator is die wordt beïnvloed door de timing van de ademhaling en omgevingsfactoren, vereist directe meting van de luchtwegweerstand anesthesie en tracheostomie, wat de fysiologie van de luchtwegen kan veranderen26. Desondanks is gerapporteerd dat Penh correleert met invasieve metingen van de longweerstand27. Vierentwintig uur na de laatste OVA-challenge werden ratten in onbeperkte kamers geplaatst en opeenvolgend blootgesteld aan verneveld PBS, gevolgd door acetylcholine (Ach) in concentraties van 3.125, 6.25, 12.5, 25 en 50 mg/mL. Elke aerosol-challenge duurde 2 min en werd gevolgd door een registratieperiode van 5 min28. De AS-groep vertoonde significant hogere Penh-waarden dan de CN-groep, terwijl behandeling met SP, MP of hun gecombineerde toepassing de Penh-waarden significant verlaagde (P = 0.005; Figuur 3B). Dit resultaat gaf aan dat SP de ademhalingsfunctie bij astmatische ratten verbeterde, een bevinding die nog verder gevalideerd moet worden in combinatie met directe metingen van de luchtwegweerstand (Raw).

Interleukine-4 (IL-4) initieert Th2-gemedieerde eosinofiele ontsteking, terwijl tumornecrosefactor-α (TNF-α) bijdraagt aan AHR en remodeling van de luchtwegen; beide spelen een centrale rol in de pathogenese van pediatrisch astma29. Om de ontsteking van de luchtwegen verder te evalueren, werden de expressieniveaus van IL-4 en TNF-α in longweefsels gekwantificeerd middels quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR). Vergeleken met de CN-groep vertoonde de AS-groep een significant verhoogde expressie van IL-4 en TNF-α (P = 0,000 en P = 0,000, respectievelijk; Figuur 3C,D). De expressie van beide cytokinen was significant verminderd na behandeling met SP of MP, waarbij de combinatie van SP en MP de grootste reductie veroorzaakte (P = 0,001 en P = 0,000, respectievelijk; Figuur 3C,D).

figure-results-1
Figuur 1: Gedetailleerde procedure van ruggengraatknijpmanipulatie (SP) bij ratten. (A) Houd de rat in buikligging op de palm van de operator. (B) Knijp in de huid bij de wortel van de staart. (C) Til de geknepen huid op. (D) Draai de vingers en beweeg ze craniaal langs de ruggengraat richting Dazhui (GV14). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-2
Figuur 2: Schematische weergave van het Governor Vessel (GV), de Bladder (BL) meridiaan en Dazhui (GV14) bij ratten. Het diagram illustreert de anatomische locatie van het GV, de BL meridiaan en Dazhui (GV14), welke dienen als de doellocaties voor de spine-pinching manipulatie. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-3
Figuur 3: Effecten van spine-pinching manipulatie op het lichaamsgewicht, luchtweghyperreactiviteit en pulmonale ontstekingsfactoren bij jonge ratten. (A) Vergelijking van het lichaamsgewicht tussen de experimentele groepen. (B) Vergelijking van de enhanced pause (Penh) waarden. (C) Relatieve genexpressie van interleukine-4 (IL-4) in longweefsel. (D) Relatieve genexpressie van tumornecrosefactor-α (TNF-α) in longweefsel. Gegevens worden weergegeven als gemiddelde ± SD. *P < 0,05 en **P < 0,01 ten opzichte van de CN-groep; #P < 0,05 en ##P < 0,01 ten opzichte van de AS-groep. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-4
Figuur 4: Representatieve histopathologische veranderingen in longweefsel. (A) Hematoxyline en eosine (HE)-kleuring die peribronchiolaire ontsteking laat zien. (B) Masson-trichroomkleuring die collageendepositie en remodeling van de luchtwegen laat zien. De afbeeldingen zijn opgenomen bij een 200× vergroting. Schaalbalken = 100 µm. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-5
Figuur 5: Representatieve krachtcurves geregistreerd tijdens manipulatie door het knijpen van de wervelkolom met behulp van het Finger TPS-systeem. (A) Krachtcurve geregistreerd tijdens manipulatie door het strelen van de rug. (B) Krachtcurve geregistreerd tijdens manipulatie door het knijpen van de wervelkolom (SP). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-6
Figuur 6: Experimenteel tijdspad. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

GroepHE-ontsteking scoreCollagenoppervlak/Omtrek van het basaalmembraan (μm²/μm)
CN1.10 ± 0.252.50 ± 0.43
AS2.32 ± 0.50**4.23 ± 0.53**
AS+SP1.66 ± 0.27##3.12 ± 0.56*##
AS+MP1.67 ± 0.31##3.12 ± 0.50*##
AS+SP+MP1.34 ± 0.27##3.01 ± 0.33##

Tabel 1: Longhistopathologische scores. Peribronchiolaire ontsteking werd geëvalueerd met behulp van HE-kleuring, en airway remodeling werd gekwantificeerd als het collageen-positieve areaal genormaliseerd naar de omtrek van het basaalmembraan (µm2/µm). Gegevens zijn weergegeven als gemiddelde ± SD (n = 5 per groep). *P < 0,05 en **P < 0,01 ten opzichte van de CN-groep; #P < 0,05 en ##P < 0,01 ten opzichte van de AS-groep.

Discussie

Sensibilisatie en uitdaging met ovalbumine (OVA) is een van de meest gebruikte experimentele modellen voor het bestuderen van pediatrisch astma30,31. De huidige studie heeft aangetoond dat het gestandaardiseerde protocol voor spine-pinching manipulatie (SP) chronische luchtweginflammatie, luchtweghyperreactiviteit (AHR) en luchtwegremodellering verlichtte. Eerdere klinische studies hebben aangetoond dat traditionele pediatrische massage, waaronder SP, astma en andere allergische aandoeningen bij kinderen verbetert11,13,32. Daarnaast hebben eerdere dierstudies aangetoond dat SP luchtweginflammatie verminderde in jonge ratmodellen voor astma door de darmmicrobiota te moduleren12,15. De huidige studie toonde verder aan dat de toepassing van een gestandaardiseerd SP-protocol de chronische luchtweginflammatie, AHR en luchtwegremodellering verbeterde in een jong ratmodel voor astma. Bovendien versterkte SP de therapeutische effecten van methylprednisolon (MP), terwijl de groeiremmende bijwerkingen ervan werden verminderd.

SP wordt al meer dan 1.000 jaar in China beoefend en blijft een van de meest gebruikte pediatrische massagetechnieken voor de preventie en behandeling van astma en andere kinderziekten12,15,33,34,35. Ondanks de lange geschiedenis van klinische toepassing is SP buiten China nog relatief onbekend. Volgens de theorie van de traditionele Chinese geneeskunde lopen de GV- en BL-meridianen langs of nabij de wervelkolom en communiceren zij met de interne organen. Bijgevolg wordt aangenomen dat stimulatie van de GV- en BL-meridianen de viscerale functie reguleert, de immuunactiviteit moduleert en de ziekteresistentie verhoogt. SP bestaat uit het knijpen, optillen, draaien en verschuiven van de huid langs de wervelkolom, waardoor zowel de GV- als de BL-meridianen worden gestimuleerd. Deze manipulatie oefent gelijktijdig compressie- en trekkrachten uit op de huid en de onderliggende fascia, wat resulteert in een matige mechanische stimulatie. In de klinische praktijk wordt routinematig een zachte strijkmanipulatie van de rug uitgevoerd vóór en na SP om de stimulatie te verminderen en het comfort van de patiënt te verbeteren. Rugstriking bestaat uit zachte neerwaartse strikembewegingen over de rug en wordt veelvuldig gebruikt bij pediatrische massage. Daarom is, op basis van de principes van klinische relevantie, haalbaarheid, eenvoud en reproduceerbaarheid, het gestandaardiseerde protocol inclusief zowel SP als de rugstrijkmanipulatie.

Eerdere studies hebben aangetoond dat SP ontstekingen in zowel de longen als de hippocampus vermindert via immunomodulerende mechanismen12,36. Pediatrisch astma wordt gekenmerkt door Th2-gepolariseerde ontsteking die nauw verbonden is met immuundyregulatie37. Eerdere experimentele studies meldden dat het strelen met de hand of een borstel immuunresponsen bij muizen reguleerde wanneer dit werd uitgevoerd bij een druk van 100–150 mmH₂O (7–11 mmHg) en een snelheid van ongeveer 3 cm/s38. Daarnaast meldde een klinische studie dat strelen bij een snelheid van ongeveer 1–10 cm/s als aangenaam werd ervaren39. Op basis van deze bevindingen hanteerde het gestandaardiseerde protocol een kracht voor rugstreling van 5 ± 0.6 N en een snelheid van 5 cm/s om een passend kalmerend effect te bereiken. De druk, frequentie en het aantal herhalingen van SP werden bepaald op basis van eerdere studies12,15 en gerelateerde onderzoeken door andere onderzoeksgroepen40,41. Hoewel eerdere studies ofwel handmatige rugstreling (20 cm/s; ongeveer 100 mmH₂O) of mechanische GV-stimulatie (30–50 g; ongeveer 15.3 cm/s) hebben gestandaardiseerd om cardiovasculaire inhibitie te bereiken of synaptische remodellering bij knaagdieren te bevorderen, vormt handmatige SP een aparte biomechanische interventie die steunt op tactiele en proprioceptieve feedback en daarom niet volledig kan worden gereproduceerd door bestaande mechanische apparaten. Dit onderscheid benadrukt het belang van door de beoefenaar gestandaardiseerde protocollen voor toekomstig translationeel onderzoek naar tactiele interventies bij allergisch astma.

Talrijke in het Chinees gepubliceerde studies hebben aangetoond dat SP de immuunfunctie moduleert en ontsteking onderdrukt42,43,44. Voor zover bekend is er echter geen eerdere studie buiten de onderzoeksgroep van de auteur die de druk en snelheid van SP heeft gestandaardiseerd voor het onderzoeken van een specifieke ziekte in diermodellen voor pediatrisch astma. Eerdere studies hebben de mechanismen onderliggend aan SP in jonge ratmodellen voor astma onderzocht, waaronder modulatie van het darmmicrobioom, verhoogde productie van kortketenige vetzuren, verbeterde functie van de ademhalingsspieren (bijv. diafragmastrengte) en attenuatie van luchtwegontsteking en pulmonale dysfunctie11. De huidige studie richtte zich primair op het vaststellen van een gestandaardiseerd protocol in plaats van het volledig ontrafelen van de onderliggende werkingsmechanismen. Een precisiesysteem voor het meten en registreren van tactiele druk werd gebruikt om de kracht te standaardiseren die tijdens zowel het ruggenen als SP werd uitgeoefend, terwijl de snelheid en frequentie van de manipulaties werden gestandaardiseerd op basis van eerdere studies. Ratten werden geselecteerd omdat hun lichaamsomvang een stabiele hantering en handmatige toepassing van SP faciliteert, terwijl dit nauw aansluit bij de klinische procedure. Het ruggenen werd uitgevoerd met de vingers van één hand, zoals in de pediatrische klinische praktijk. Vanwege de kleinere lichaamsomvang van ratten werd SP uitgevoerd met drie vingers van één hand in plaats van beide, waarbij de essentiële biomechanische kenmerken van de klinische techniek werden behouden. Deze aanpassing reproduceert nauwkeurig de stimulatie van de GV- en BL-meridianen in het ratmodel. Omdat meetparameters kunnen verschillen tussen tactiele drukmetsystemen, kan het standaardiseren van handmatige manipulatie op basis van de gedragsreacties van ratten tijdens het ruggenen en SP een grotere reproduceerbaarheid opleveren dan het uitsluitend vertrouwen op apparaatspecifieke krachtmetingen. Eerdere studies hebben ook aangetoond dat ruggenen antidepressieve effecten uitoefent bij jonge ratten met CUMS9, hoewel SP significant grotere therapeutische effecten produceerde. Bijgevolg kunnen de gunstige effecten die in de huidige studie zijn waargenomen, gedeeltelijk de bijdrage van de ruggene-manipulatie weerspiegelen in aanvulling op de primaire effecten van SP.

Er moet rekening worden gehouden met enkele beperkingen. Ten eerste was de steekproefomvang relatief klein, wat de robuustheid en generaliseerbaarheid van de bevindingen kan beperken. Ten tweede was deze studie primair gericht op het vaststellen en valideren van een gestandaardiseerd SP-protocol; daarom is er slechts een beperkte set mechanistische uitkomsten onderzocht in plaats van een volledige beschrijving van de onderliggende biologische mechanismen. Bijgevolg is er geen mechanistische validatie uitgevoerd, waaronder tellingen van inflammatoire cellen in BALF, OVA-specifieke IgE-spiegels, Th2-cytokineprofilering (bijv. IL-5, IL-13) en analyse van intracellulaire signaleringspaden. Dit resultaat gaf aan dat SP de respiratoire functie bij astmatische ratten verbeterde, een bevinding die nog verder gevalideerd moet worden in combinatie met directe metingen van de luchtwegweerstand (Raw). Ten derde werden alle handelingen uitgevoerd door één enkele getrainde operator, en de reproduceerbaarheid tussen verschillende getrainde operators is niet geëvalueerd. Ten slotte is er geen interventiegroep met uitsluitend ruggenwrijven opgenomen om de onafhankelijke effecten van ruggenwrijven te onderscheiden van die van SP. Toekomstige studies zouden grotere steekproeven moeten bevatten, de reproduceerbaarheid tussen operators moeten evalueren, aanvullende controlegroepen moeten opnemen en de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan de therapeutische effecten van SP verder moeten onderzoeken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren dat zij niets te melden hebben. Tijdens het proces van manuscriptvoorbereiding zijn geen kunstmatige intelligentietools gebruikt bij de opstelling van dit manuscript. De auteurs dragen de volledige verantwoordelijkheid voor de volledigheid en nauwkeurigheid van het definitieve manuscript.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (projectleider Xiong Ying, nr. 81973970, via de Nanjing University of Chinese Medicine). De auteurs danken het Institute of Pediatrics, het Jiangsu Key Laboratory of Children's Health and Chinese Medicine en het Key Laboratory of Acupuncture and Medicine Research van het Ministerie van Onderwijs voor het ter beschikking stellen van locaties, instrumenten en apparatuur.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
4%Al(OH)3 gelShanxi ZHHC Biomedical Technology Co., LTD, ChinaBS010N/A
Ach(acetylcholine)Sigma, USAA2251N/A
Adhesie-objectglazenCitotest, Jiangsu, ChinaREF.188105
P/N.80312-3161		N/A
Biohazard-afvalzakkenNanjing Xinyuan plastic Co., Ltd.HJ421-2008N/A
Apparaat voor het drogen van biologisch weefselKedee, Zhejiang, ChinaKD-HIIN/A
Apparaat voor het insluiten van biologisch weefselKedee, Zhejiang, ChinaKD-BMN/A
Apparaat voor het uitspreiden van biologisch weefselKedee, Zhejiang, ChinaKD-PIN/A
Buxco Research SystemsDSI Buxco,Wilmington, NC,USAPFTN/A
Instelbare mengmachine(MX-S)DLAB, Beijing, China8031102000N/A
Centrifuge voor microplatenScilogex, USASCI-CF2800M E050S11B000798N/A
Clean bench Sanfa, Shanghai, ChinaSF-CJ-1AN/A
Conventionele centrifugeDLAB, Beijing, ChinaD100BE: 9031001011N/A
Wegwerphandjes (steriel)Shanghai Kebang Medical Latex Equipment Co., Ltd.22010739https://www.sh-kebang.com/products_detail/6.html
Elektronische balansJinghai, ShanghaiYP3001NN/A
Elektronische balansJinghai,  Shanghai, ChinaYP3001NN/A
Finger TPS-systeemPressure Profile System, Inc, USAToepasbare softwareversie: Chameleon 2018https://pressureprofile.com/body-pressure-mapping/finger-tps
 Fluorescentie-optische microscoopOlympus, Tokyo, JapanDP70N/A
HogedrukstoomsterilisatorTomy, JapanSX-500N/A
Snelvriezende centrifugeEppendorf5418RN/A
Masson-trichroomkleuringskitSolarbio, Shanghai, ChinaG1340N/A
Micropipetten en steriele tipseppendorfJ48931Lhttps://www.eppendorf.com/hk-en/Products/Liquid-Handling/All-Pipettes-Dispensers-Automated-Liquid-Handlers/Eppendorf-Reference2-p-PF-222171
MicrotomenLeica, DuitslandRM2145N/A
MP(methylprednisolonnatriumsuccinaat)Shyndec, Shanghai, ChinaH20070007N/A
NanoDrop Lite-spectrofotometerThermo Fisher Scientific, USAnd-ndl-pr-2yrw-cccN/A
 NebulisatiecontrollerEmka, FrankrijkVENT4:14554N/A
Ondoorzichtige verzegelde enveloppenNanjing Kongdu printing Co., Ltd201701N/A
OVA (Graad II)Sigma, USAA5253N/A
OVA (Graad V)Sigma, USAA5503N/A
PCR-kitYeasen, Shanghai, China11201ES08N/A
Doorboringsbestendige container voor scherpe voorwerpenNanjing Xinyuan plastic Co., Ltd.KMT-15YN/A
Reverse transcriptie-kitBio.vazyme, Nanjing, ChinaR323N/A
Kleine centrifugesHettich, DuitslandMIKRO 220R D-78532N/A
Steriele droge wattenbolletjesZHENDE, Zhejiang, China202203121Bhttps://www.zhende.com/index.php?g=product&m=index&a=info&id=13
TrizolBio.vazyme, Nanjing, ChinaR771N/A
Ultra-laagdruk vrieskastThermo Fisher Scientific, USA950GP-ULTSN/A
Ultrasone vernevelaarJiangsu Yuwell Medical Instruments Co., Ltd., China402AIN/A
ViiATM7 Real-Time PCR-systeemLife TechnologiesTM , Singapore278882021N/A
Whole body plethysmograafScrieq, Canada1185162,1184031,1185898FV-FXM1-01,FX1 expiratoire cartridge :FV-FXM1 ET,FX1 inspiratoire cartridge :FV-FXM1-IA

Referenties

  1. Bateman ED, et al. Global strategy for asthma management and prevention: GINA executive summary. Eur Respir J. 2008;31(1):143-178.
  2. Lizano-Barrantes C, et al. Impact of treatment adherence and inhalation technique on asthma outcomes of pediatric patients: A longitudinal study. Front Pharmacol. 2024;15:1340255.
  3. Vähätalo I, et al. Long-term adherence to inhaled corticosteroids and asthma control in adult-onset asthma. ERJ Open Res. 2021;7(1).
  4. Yılmaz İ, et al. Biological therapy management from the initial selection of biologics to switching between biologics in severe asthma. Tuberk Toraks. 2023;71(1):75-93.
  5. García-Marcos L, et al. Asthma management and control in children, adolescents, and adults in 25 countries: A Global Asthma Network phase I cross-sectional study. Lancet Glob Health. 2023;11(2):e218-e228.
  6. Kelly HW, et al. Effect of inhaled glucocorticoids in childhood on adult height. N Engl J Med. 2012;367(10):904-912.
  7. Wu J, Yang XW, Zhang M. Massage therapy in children with asthma: A systematic review and meta-analysis. Evid Based Complement Alternat Med. 2017:5620568.
  8. Yue QJ, et al. Effect of pediatric massage in the treatment of chronic persistent asthma in children: A systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. J Hainan Med Univ. 2019;25:1260-1266.
  9. Wu R, et al. Traditional pediatric massage enhanced hippocampal GR, BDNF, and IGF-1 expressions and exerted an antidepressant effect in an adolescent rat model of CUMS-induced depression. Neuroscience. 2024;542:47-58.
  10. Lin L, Yu L, Zhang S, Liu J. The positive effect of mother-performed infant massage on infantile eczema and maternal mental state: A randomized controlled trial. Front Public Health. 2022;10:1068043.
  11. Lin L, et al. Traditional pediatric massage enhanced skeletal muscle mass in OVA-exposed adolescent rats via regulating the SCFAs-FFAR2-IGF-1/AKT pathway. Front Microbiol. 2024;15:1492783.
  12. Xiong Y, Noraas AU, Yang X. The effect of chiropractic manipulation on atopic symptoms and gut microbiota in children with atopy. J Li Shizhen Tradit Chin Med. 2017;28:2440-2442.
  13. Liu Y, Gu Y, Xiong Y. Wrist-ankle acupuncture combined with spine-pinching manipulation for allergic rhinitis in children: A randomized controlled trial. World J Acupunct Moxibustion. 2019;29:259-263.
  14. Zhu Y, et al. Chiropractic therapy modulated gut microbiota and attenuated allergic airway inflammation in an immature rat model. Med Sci Monit. 2020;26:e926039.
  15. Lu W, Fang M, Yang X. Observation on the influence of parent-child massage on children's psychological and behavioral problems. Chin Med Mod Distance Educ China. 2025;23(4):75-78.
  16. Lund I, Lundeberg T, Kurosawa M, Uvnäs-Moberg K. Sensory stimulation (massage) reduces blood pressure in unanesthetized rats. J Auton Nerv Syst. 1999;78(1):30-37.
  17. Chen YN, et al. Repetitive unidirectional spinal tactile stimulation engages microglial BMAL1 pathways to promote synaptic remodeling in the medial prefrontal cortex of adolescent VPA-exposed mice. J Neuroinflammation. 2025;23(1):23.
  18. Gorrell LM, et al. Spinal manipulation characteristics: A scoping literature review of force-time characteristics. Chiropr Man Therap. 2023;31(1):36.
  19. Papadopoulos NG, Miligkos M, Xepapadaki P. A current perspective of allergic asthma: From mechanisms to management. Handb Exp Pharmacol. 2022;268:69-93.
  20. Nials AT, Uddin S. Mouse models of allergic asthma: Acute and chronic allergen challenge. Dis Model Mech. 2008;1(4-5):213-220.
  21. Martin JG, Tamaoka M. Rat models of asthma and chronic obstructive lung disease. Pulm Pharmacol Ther. 2006;19(6):377-385.
  22. QDV, et al. Construction of an acupoint atlas for experimental rats. Acupunct Res. 2025;50(11):1339-1351.
  23. Dong L, et al. Hypoxic hUCMSC-derived extracellular vesicles attenuate allergic airway inflammation and airway remodeling in chronic asthma mice. Stem Cell Res Ther. 2021;12(1):4.
  24. Muhamad SA, et al. Intranasal administration of Lignosus rhinocerotis (Cooke) Ryvarden (Tiger Milk Mushroom) extract attenuates airway inflammation in a murine model of allergic asthma. Exp Ther Med. 2019;17(5):3867-3876.
  25. Vaickus LJ, Bouchard J, Kim J, Natarajan S. Assessing pulmonary pathology by detailed examination of respiratory function. Am J Pathol. 2010;177(4):1861-1869.
  26. Glaab T, Taube C, Braun A, Mitzner W. Invasive and noninvasive methods for studying pulmonary function in mice. Respir Res. 2007;8(1):63.
  27. Lomask M. Further exploration of the Penh parameter. Exp Toxicol Pathol. 2006;57(Suppl 2):13-20.
  28. Leung SY, et al. Effect of transforming growth factor-beta receptor I kinase inhibitor 2,4-disubstituted pteridine (SD-208) in chronic allergic airway inflammation and remodeling. J Pharmacol Exp Ther. 2006;319(2):586-594.
  29. Ogulur I, et al. Type 2 immunity in allergic diseases. Cell Mol Immunol. 2025;22(3):211-242.
  30. Lee JH, Son SH, Kim NJ, Im DS. NJK14047 suppression of the p38 MAPK pathway ameliorates OVA-induced allergic asthma during sensitization and challenge periods. Biomol Ther (Seoul). 2023;31(2):183-192.
  31. Li J, et al. Establishment of a juvenile mouse asthma model induced by postnatal hyperoxia exposure combined with early OVA sensitization. Heliyon. 2024;10(1):e23291.
  32. Wei J, Yang X. Efficacy of pediatric tuina on spleen deficiency syndrome and allergic constitution in children with bronchial asthma during the remission period: A study of 29 cases. J Pediatr Tradit Chin Med. 2023;19(3):86-89.
  33. Gao J, He J. Fifty-eight cases of allergic rhinitis treated with spine-pinching manipulation and acupuncture in Switzerland. World J Acupunct Moxibustion. 2010;20(3).
  34. Hu Y, et al. Clinical study of Yupingfeng Powder combined with spine-pinching manipulation for cough variant asthma in children. Heilongjiang J Tradit Chin Med. 2024;53(2):369-371.
  35. Yao D, Zhang Y, Deng L. Effect of spine-pinching manipulation on asthma control in children. Heilongjiang J Tradit Chin Med. 2020;49(2):157-158.
  36. Zhang X, et al. Traditional pediatric massage exerted an antidepressant effect and activated the IGF-1/NRF2 pathway in CUMS-exposed adolescent rats. J Neuroimmunol. 2025;400:578554.
  37. Lan J, McCray A, Brown E, Eddens T. Early-life viral infections and asthma: New cells and ideas. Curr Opin Pediatr. 2025;37(6):597-605.
  38. Major B, et al. Massage-like stroking boosts the immune system in mice. Sci Rep. 2015;5:10913.
  39. Ackerley R, Carlsson I, Wester H, Olausson H, Backlund Wasling H. Touch perceptions across skin sites: Differences between sensitivity, direction discrimination, and pleasantness. Front Behav Neurosci. 2014;8:54.
  40. Li Q, et al. Experimental study on the effects of different durations of spine-pinching manipulation on immune function in rats with Wei Qi deficiency. Jiangsu J Tradit Chin Med. 2017;49(9):75-77.
  41. Tang Q, Shen L, Lin L. Effects of spine-pinching manipulation with different stimulation intensities on hippocampal inflammation-related factors and behavioral disorders in autistic rats. J Hunan Univ Chin Med. 2025;45(7):1264-1270.
  42. Li Z, et al. Effects of spine-pinching therapy on thoracic duct lymph flow and mesenteric lymphatic microcirculation in rats with spleen deficiency. China J Tradit Chin Med Pharm. 2025;40(8):4246-4250.
  43. Ma W, et al. Effects of spine-pinching intervention on anorexia in young rats based on the 2-AG/CB1/AMPK1 pathway. Shaanxi J Tradit Chin Med. 2025;46(2):159-164.
  44. Tang Q, et al. Effects of spine-pinching manipulation on BDNF and CREB protein expression in different brain regions of rats with autism spectrum disorder. J Hunan Univ Chin Med. 2025;45(2):259-266.

Herprints en machtigingen

Tags

Astmamodel bij rattenluchtweginflammatieluchtweghyperreactiviteitluchtwegremodelleringpediatrische massagetraditionele Chinese geneeskundestandaardisatie van protocollenexperimenteel astma

Dit artikel is gepubliceerd

Video binnenkort beschikbaar

Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.