Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Onderzoeksartikel

Mechanisme en experimentele validatie van het totale aantal flavonoïden van rhizoma drynariae bij de behandeling van jichtartritis

111 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/70849

⸱

5 juni 2026

 ,  , 
1School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, 2Quality department, Beijing Tongrentang Kangyang Industry Development Co., Ltd, 3Engineering Research Center of Good Agricultural Practice for Chinese Crude Drugs, Ministry of Education

In dit artikel

Samenvatting

Totale flavonoïden van Rhizoma Drynariae (TFRD) verlichten jichtartritis (GA) door inflammatoire celinfiltratie te onderdrukken en TNF-α, IL-6 en IL-17A-niveaus te verlagen, voornamelijk door inhibitie van AKT-, MAPK- en NF-κB-signaalroutes, wat het ontstekingsremmende en immunomodulerende therapeutische potentieel benadrukt.

Samenvatting

Gichtartritis (GA) is een ontstekingsziekte van het gewricht veroorzaakt door de afzetting van mononatriumuraat (MSU) kristallen in de gewrichtsruimte en omliggende weefsels. In de traditionele Chinese geneeskunde wordt rhizoma drynariae (Gusuibu) al lange tijd veel gebruikt bij de klinische behandeling van GA, en worden flavonoïden beschouwd als de belangrijkste bioactieve bestanddelen. Dit onderzoek maakte gebruik van netwerkfarmacologie om een component-doelnetwerk van totale flavonoïden van Rhizoma Drynariae (TFRD) tegen GA te construeren, waarmee sleutelcomponenten, kerndoelen en gerelateerde routes werden geïdentificeerd. Rattenmodellen werden ontwikkeld door intraarticulaire injectie van een mononatriumuraatkristal-suspensie en behandeld met TFRD of de positieve controle, colchicine, met orale gavage. Na het verzamelen van monsters werden voorspellingsresultaten gebaseerd op netwerkfarmacologie vervolgens gevalideerd met behulp van rattenserummetabolomics, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) en Western blot-analyse. Netwerkfarmacologische analyse wees uit dat de anti-GA-effecten van TFRD worden gemedieerd via belangrijke doelwitten, waaronder IL6, AKT1, TNF, EGFR, JUN en PTGS2, en voornamelijk geassocieerd zijn met ontsteking-, immuun- en apoptose-gerelateerde routes, zoals de IL-17, TNF, NF-κB, MAPK, PI3K-AKT, JAK-STAT en T-cel receptor signaalroutes. Evenzo onthulde metabolomics ook de cruciale rollen van de ontstekingsreactie. Hematoxyline- en eosine (H&E)-kleuring bevestigde dat TFRD de infiltratie van ontstekingscellen verminderde. ELISA-assay bevestigde dat de TFRD-groep significant de expressie van ontstekingsfactoren TNF-α, IL-6 en IL-17A in synoviaal weefsel rebeerde. Western-blotanalyse toonde aan dat TFRD de door GA geïnduceerde hyperfosforylering van AKT, MAPK p38 en NF-κB p65 in het synoviaal weefsel van ratten remmeerde. TFRD kan de door ontsteking veroorzaakte veranderingen bij de GA-ratten effectief verzachten door direct gerelateerde ontstekingsfactoren en -routes te moduleren.

Inleiding

Gichtartritis (GA) is een ontstekingsaandoening van het gewricht die wordt veroorzaakt door de afzetting van mononatriumuraat (MSU)-kristallen binnen en rond de gewrichten, die het gewrichtsgebiedstimuleren 1,2. De pathogenese van GA omvat een complex samenspel van genetische aanleg, omgevingsinvloeden en metabole disregulatie, voornamelijk gekenmerkt door hyperuricemie als gevolg van een overmatige urinezuurproductie of onvoldoende nieruitscheiding 3,4. Dit leidt tot systemische ophoping van uraatkristallen in nierweefsels en gewrichtsruimtes, waar ze het aangeboren immuunsysteem activeren en intense ontstekingscascadesveroorzaken 5,6. In de afgelopen jaren hebben een reeks studies aangetoond dat de wereldwijde prevalentie van GA is gestegen parallel aan de toenemende incidentie van obesitas en metabool syndroom, wat leidt tot functionele beperkingen en een aanzienlijke sociaaleconomische last legt op de getroffen personen7. De behandelstrategie voor jichtartritis richt zich op het beheersen van acute lokale artritis en het beheersen van langetermijnwaardenvan urinezuur 8,9. Desalniettemin wordt het nut van bestaande farmacotherapieën vaak beperkt door hun bijwerkingprofielen en specifieke contra-indicaties. Niet-steroïde ontstekingsremmers worden bijvoorbeeld over het algemeen vermeden bij patiënten met chronische nierziekte vanwege het bijbehorende risico op het veroorzaken of verergeren van acuut nierletsel10,11. Evenzo brengt het uraatverlagende middel allopurinol een goed gedocumenteerd risico op ernstige cutane bijwerkingen met zich mee, zoals het Stevens–Johnson-syndroom, terwijl benzbromaron significante hepatotoxiciteit kan veroorzaken 11,12,13,14,15. Daarom blijft er een dringende behoefte aan de ontwikkeling van veiligere, breder toepasbare en mechanistisch gerichte therapieën voor de effectieve behandeling van GA.

In de traditionele Chinese geneeskunde (TCM) valt GA onder diagnostische categorieën zoals "Lijie-ziekte" (gewrichtspijn), "Jijcht bi" (jichtbelemmering) en "Yu Zhuo bi" (stasis-troebelheidsbelemmering). TCM-interventies voor GA bieden synergetische effecten door ontstekingsremmende en pijnstillende werkingen, het moduleren van het urinezuurmetabolisme, verbetering van de microcirculatie en het behoud van de gewrichtsfunctie, waardoor het een prominent onderzoeksgebied is 16,17,18,19. Rhizoma Drynariae (Gusuibu), afgeleid van de gedroogde rhizoom van Drynaria fortunei (Kunze) J.Sm., een vaste varen uit de Polypodiaceae-familie, wordt veel gebruikt in de klinische praktijk om GA te behandelen. De bioactieve verbindingen van Rhizoma Drynariae bevatten voornamelijk flavonoïden, fenylpropanoïden, triterpenoïden, fenolzuur en hun glycosiden20,21. Hiervan vormen flavonoïden de meest uitgebreid bestudeerde klasse verbindingen in de afgelopen jaren 22,23,24. Eerdere studies hebben aangetoond dat flavonoïden opmerkelijke ontstekingsremmende en antioxidante eigenschappen hebben25.

Voorlopig onderzoek heeft aangetoond dat het totale aantal flavonoïden van Rhizoma Drynariae (TFRD) ontstekingsreacties bij artrose, reumatoïde artritis en andere ontstekingsgewrichtsaandoeningen effectief kan onderdrukken 26,27,28. De onderliggende mechanismen van TFRD tegen GA zijn echter nog niet grondig onderzocht. Daarom streeft deze studie ernaar een geïntegreerde aanpak toe te passen die netwerkfarmacologie, metabolomics en moleculaire biologie-experimenten combineert om de specifieke mechanismen en therapeutische effectiviteit van TFRD bij de behandeling van GA te onderzoeken en te valideren. Een systematisch onderzoek naar multicomponent-, multi-target en multipathway-mechanismen die ten grondslag liggen aan TFRD-behandeling tegen GA zal naar verwachting de geneesmiddelenontdekking bevorderen en innovatieve opties en praktische oplossingen bieden voor het klinisch beheer van GA.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Deze studie werd beoordeeld en goedgekeurd door de Animal Ethics Committee van het China-Japan Friendship Hospital (goedkeuringsnummer: zryhyy21-22-08-10) en uitgevoerd volgens institutionele richtlijnen voor ethische zorg en gebruik van proefdieren.

Voorspelling en screening van TFRD- en GA-gerelateerde doelen
De chemische bestanddelen van Rhizoma Drynariae werden opgehaald uit de Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform (TCMSP) met "Rhizoma Drynariae" als zoekterm29. Screening op mogelijk bioactieve bestanddelen werd uitgevoerd op basis van de criteria van orale biobeschikbaarheid (OB) ≥ 30% en geneesmiddelgelijkheid (DL) ≥ 0,18 30,31,32. Uit de resulterende pool verbindingen werden flavonoïdecomponenten vervolgens geïdentificeerd en geselecteerd op basis van hun chemische structuren. Deze flavonoïdecomponenten, hierna aangeduid als de totale flavonoïden van Rhizoma Drynariae (TFRD), werden opgenomen in de downstream-analyse. Na het ophalen van de doelgenen die aan TFRD zijn gekoppeld uit de TCMSP-database, werden hun bijbehorende gestandaardiseerde gensymbolen geannoteerd met behulp van de UniProt-database33. Met "jicht" als zoekterm werden ziektegerelateerde doelen uit de GeneCards-database gehaald om een set kandidaatgenen34 vast te stellen.

Vestiging van een samengestelde doelgroep netwerk
De kruising tussen TFRD-geassocieerde doelen en GA-gerelateerde doelen werd geïdentificeerd en gedefinieerd als de belangrijkste therapeutische doelen die de anti-GA-effecten van TFRD bemiddelen, en de overlappende set werd gevisualiseerd met behulp van een Venn-diagram. Daarnaast werd een regelgevend netwerk van "TFRD - targets - GA" opgebouwd en geanalyseerd met behulp van Cytoscape-software35.

Eiwit-eiwit interactienetwerk
De belangrijkste therapeutische doelen van TFRD tegen GA werden geïmporteerd in een online database om een eiwit-eiwitinteractie (PPI) netwerk te genereren, waarbij de minimaal vereiste interactiescore werd gezet op "high confidence (0,700)"36. Het PPI-netwerk werd geoptimaliseerd met behulp van Cytoscape-software, en de top 30 kerndoelen, gerangschikt op graadcentraliteit, werden geselecteerd om een staafgrafiek37,38 te genereren.

KEGG-routeverrijkingsanalyse
KEGG-padverrijkingsanalyse werd uitgevoerd op deze kerndoelen met R-software en de Bioconductor-database 38,39. Paden met een p-waarde < 0,05 werden als statistisch significant beschouwd. Na het uitsluiten van ziekte- en metabolisme-gerelateerde routes werd een interactienetwerk tussen paden en doelpunten in Cytoscape gevisualiseerd. Onder deze paden werden de top 20 paden gerangschikt op stijgende P-waarde weergegeven in een balkgrafiek.

Medicijnbereiding
Voor de bereiding van een mononatriumuraat (MSU) kristalsuspension werden 500 mg MSU-kristallen gewogen met een analytische weegschaal, verdeeld in 10 mL normale zoutoplossing en 2 mL Tween 80, en verwarmd terwijl het magnetisch roerde. Het mengsel werd vervolgens aangepast tot een eindvolume van 20 mL met normale zoutoplossing om een suspensie van 25 mg/mL te verkrijgen. Na autoclaven werd de ophanging opgeslagen op 4 °C tot gebruik. De gebruikelijke klinische dosering voor TFRD is 750 mg per dag voor een volwassene van 70 kg, wat overeenkomt met een ratdosis van 67,5 mg/kg lichaamsgewicht per dag. TFRD werd opgelost in gedestilleerd water tot een concentratie van 6,75 mg/mL en opgeslagen op 4 °C voor later gebruik. Volgens de methode van normalisatie van lichaamsoppervlakte is de equivalente orale dosis colchicine (het positieve medicijn) bij ratten die zijn omgezet van de klinische menselijke dosis (0,6 mg/60 kg) 0,062 mg/kg. Een colchicineoplossing werd bereid in gedestilleerd water bij een concentratie van 0,0062 mg/mL en opgeslagen bij 4 °C voor later gebruik.

Dieren
In totaal werden 36 zes weken oude mannelijke Sprague–Dawley (SD) ratten (220 ± 10 g) gebruikt in deze studie (diervergunning nr. SCXK [Jing] 2025-0008). De dieren werden gehuisvest in het Laboratoriumdierencentrum van het China-Japan Vriendschapsziekenhuis onder standaard dieetomstandigheden bij een temperatuur van 22–24 °C en een luchtvochtigheid van 50–70%.

Modeloprichting en interventie
Na een week van acclimatie werden ratten willekeurig verdeeld in vier groepen (n = 9 elk): controlegroep, model, TFRD en positief geneesmiddel. Randomisatie werd uitgevoerd met behulp van een willekeurige nummertabel. Gegevensverzameling en analyse werden uitgevoerd onder blinde omstandigheden. Alle behandelingen werden eenmaal per dag toegediend via orale gavage. Alle interventies werden eenmaal per dag toegediend via orale gavage om 08:00 uur gedurende zeven opeenvolgende dagen. De blanke controle- en modelgroepen kregen normale zoutoplossing (10 mL/kg), terwijl de TFRD- en positieve geneesmiddelgroepen hun respectievelijke medicijnsuspensies kregen met een gelijkwaardig volume (10 mL/kg). Op de vierde dag van de interventies kreeg de blanke controlegroep een intra-articulaire injectie van steriele normale zoutoplossing, terwijl ratten in het model, TFRD en de positieve geneesmiddelgroepen werden geïnjecteerd met een MSU-kristalsuspension om acute jichtartritis te induceren. Voorafgaand aan de injectie werden ratten verdoofd met een isoflurane-anesthesiesysteem. Elke rat in het model, TFRD en de positieve geneesmiddelgroepen ontving 200 μL van de MSU-suspension in de linker enkelgewrichtsholte. Na het terugtrekken van de naald werd er zachte druk uitgeoefend op de injectieplaats met een steriel wattenstaafje gedurende enkele seconden om lekkage te voorkomen.

Monsterverzameling en verwerking
72 uur na de inductie van het model werden ratten verdoofd en op rug geplaatst. Na de abdominale desinfectie werd de peritoneale holte geopend en werden de darmen voorzichtig teruggetrokken om de buikaorta bloot te leggen. Een bloedafzuignaald werd parallel aan het vat ingebracht om abdominale aortabloed af te nemen, dat onmiddellijk werd overgebracht in hepariniseerde buizen die voorgekoeld waren in een ijswaterbad. Monsters werden gecentrifugeerd op 3000 × g gedurende 10 minuten bij 4 °C om serum te verkrijgen, dat werd gealiquoteerd en opgeslagen bij -80 °C voor latere metabolomische profilering. Dieren werden vervolgens geëuthanaseerd via CO₂-verstikking. De vacht rond het linker enkelgewricht werd geschoren en de omliggende huid en spieren werden zorgvuldig verwijderd om de intacte gewrichtsstructuur bloot te leggen. Het synoviaale weefsel, dat als een dun witachtig membraan de gewrichtscapsule bekleedt, werd voorzichtig geïsoleerd van de aangrenzende fascia met fijne pincetten. De verzamelde gewrichtsmonsters werden vastgesteld in 4% paraformaldehyde bij 4 °C gedurende 72 uur. Daarna werd een deel van het gewrichtsweefsel ontkalkt in een EDTA-ontkalkingsoplossing, waarbij de oplossing wekelijks 8 weken werd ververst. Volledige ontkalking werd bevestigd door naaldpriktesten: als weerstand werd ondervonden, werd ontkalking voortgezet totdat het weefsel volledig doordringbaar was.

Na ontkalking werden enkelgewrichten sagitaal doorgesneden, in verwerkingscassettes geplaatst en onderworpen aan gradiënt ethanoldehydratie. Weefsels werden vrijgemaakt met xyleen, geïnfiltreerd met paraffine en ingebed in paraffineblokken. Secties van 6 μm dikte werden gesneden met een geautomatiseerd microtoom, op een 40 °C waterbad laten drijven en op lijmglaasjes gemonteerd. Na 30 minuten droog te hebben bij 60 °C werden secties gedeparaffiniseerd, gekleurd met hematoxyline en eosine (H&E) volgens standaardprotocollen, en uiteindelijk bedekt met neutrale balsem. Volledige diabeelden werden gemaakt met een digitale dia-scanner.

Serummetabolomics-analyse
Serummonsters uit de model- en TFRD-groepen werden ontdooid bij 4 °C voorafgaand aan de verwerking. Voor elk monster werd 100 μL serum in een microcentrifugebuis overgebracht en gecombineerd met 400 μL voorgekoeld extractie-oplosmiddel (methanol: acetonitril, 1:1, v/v) met interne standaarden. Het mengsel werd 1 minuut in vortex gelaten, gevolgd door sonicatie in een ijswaterbad gedurende 10 minuten. Daarna werd het 1 uur geïncubeerd bij -40 °C om de eiwitprecipitatie te vergemakkelijken en vervolgens 15 minuten gecentrifugeerd bij 12.000 × g bij 4 °C. Het supernatant dat na centrifugatie werd verkregen, werd zorgvuldig verzameld en overgebracht in autosampler-buisjes voor UHPLC–MS-analyse. Daarnaast werden gelijke hoeveelheden supernatant uit elk monster binnen dezelfde groep samengevoegd om kwaliteitscontrolemonsters (QC) te genereren.

Na metabolietdetectie in serummonsters van de twee groepen werden de ruwe massaspectrometriegegevens verwerkt door speciale software voor geautomatiseerde piekdetectie, extractie, uitlijning en integratie, wat resulteerde in een gestructureerde datamatrix van ionenspectrale kenmerken. De gedetecteerde spectrale kenmerken werden vergeleken met gevestigde metabolomische spectrale bibliotheken om metabolieten te identificeren die afkomstig zijn van TFRD en in systemische circulatie waren gekomen. Niet-geïdentificeerde kenmerken en kenmerken met te veel ontbrekende waarden werden uit de dataset verwijderd. De gecureerde dataset werd opnieuw geïndexeerd en gestructureerd in een gestandaardiseerdformaat 40.

De differentiële expressie van metabolieten tussen de twee groepen werd geëvalueerd door zowel de vouwverandering (FC, uitgedrukt als de intergroepverhouding) als de statistische significantie (p-waarde) te berekenen. Metabolieten die de drempel van |log₂FC| bereiken ≥ 1 en P < 0,05 werden gedefinieerd als differentieel expressieve metabolieten (DEM's). De screeningsresultaten werden visueel samengevat met methoden zoals vulkaangrafieken. De gescreende differentiële metabolieten werden vervolgens geïmporteerd in de PubChem-database om hun canonieke identificaties (CID's) te verkrijgen. De bijbehorende KEGG ID's werden vervolgens verkregen op basis van de CID's. Ten slotte werden de KEGG-ID's geïmporteerd in een metabolomics-analyseplatform om metabole padverrijkingsanalyse uit te voeren en de signaalroutes te identificeren die significant geassocieerd zijn met de DEM's.

ELISA
Monsters van synoviaal weefsel werden snel ingevroren in vloeibare stikstof en vermalen tot fijn poeder. Ongeveer 100 mg van het poeder werd gewogen met een elektronische precisiebalans, gemengd met 1 ml ijskoude PBS, en gehomogeniseerd op ijs met een glashomogeniseerder. Het homogenaat werd gecentrifugeerd bij 10.000 × g gedurende 5 minuten bij 4 °C, en het supernatant werd verzameld voor latere ELISA-detectie. Voorafgaand aan de analyse mocht de ELISA-kit 30 minuten in evenwicht komen tot kamertemperatuur. Alle reagentia, waaronder seriël verdunde standaarden, washbuffer, biotine-gelabelde antistofwerkoplossing en enzymconjugaatoplossing, werden bereid volgens de instructies van de fabrikant. Vervolgens werden 100 μL standaarden bij verschillende concentraties en monsters toegevoegd aan de aangewezen putten van de voorgecoate microplaat. De plaat werd verzegeld en geïncubeerd bij 37 °C gedurende 90 minuten. Na de incubatie werd de inhoud weggegooid en werden de putten vier keer gewassen. Vervolgens werd 100 μL biotinyleerde antilichaamwerkoplossing aan elke put toegevoegd, gevolgd door incubatie bij 37 °C gedurende 60 minuten en nog een wasstap. Vervolgens werd 100 μL enzymgeconjugeerde werkoplossing toegevoegd, en de plaat werd 30 minuten geïncubeerd bij 37 °C, gevolgd door extra was. Daarna werd een chromogeen substraat toegevoegd en de plaat werd 10 minuten in het donker geïncubeerd bij 37 °C. De reactie werd beëindigd door 100 μL stopoplossing toe te voegen, en de absorptie werd gemeten op 450 nm met een microplaatlezer. Een standaardcurve werd geconstrueerd door de optische dichtheid (OD) waarden van de standaarden af te stemmen op hun overeenkomstige concentraties, en de monsters werden dienovereenkomstig berekend.

Westelijk vlek
Synoviale weefsels werden snel bevroren en mechanisch tot fijn poeder gemalen. Een afgemeten deel van het poeder werd gelyseerd in een passend volume ijskoude RIPA-buffer, aangevuld met protease- en fosfataseremmers (1:100, v/v), gevolgd door 30 minuten incubatie op ijs. De lysaten werden vervolgens gecentrifugeerd op 10.000 × g gedurende 5 minuten bij 4 °C, en de supernatanten werden zorgvuldig verzameld. Eiwitconcentraties werden gekwantificeerd met een BCA-assay en alle monsters werden aangepast naar gelijke concentraties met de RIPA-buffer. Eiwitten werden gescheiden via SDS-PAGE en overgebracht op PVDF-membranen. De membranen werden geblokkeerd en vervolgens geïncubeerd met primaire antilichamen (1:1000 verdunning), gevolgd door secundaire antilichamen (1:5000 verdunning). Eiwitsignalen werden gevisualiseerd met een ECL-detectiesysteem en bandintensiteiten werden gekwantificeerd met Image Lab-software (Versie 5.2.1). De relatieve expressieniveaus werden genormaliseerd tegen β-actine.

Statistische analyse
Statistische analyses werden uitgevoerd met SPSS-software (versie 20.0). De gegevens worden gepresenteerd als gemiddelde ± standaarddeviatie (SD). Voor vergelijkingen tussen meerdere groepen werd eenrichtingsvariantieanalyse (ANOVA) gebruikt wanneer aan de aanname van homogeniteit van variantie voldaan was, gevolgd door de LSD-test voor post hoc paargewijze vergelijkingen. Als aan variantiehomogeniteit niet werd voldaan, werd Welch's ANOVA uitgevoerd, gevolgd door Dunnett's T3-test voor meervoudige vergelijkingen. Een p-waarde < 0,05 werd als statistisch significant beschouwd.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Belangrijke onderdelen van TFRD
Potentiële bioactieve ingrediënten van Rhizoma Drynariae werden uit de TCMSP-database gehaald, wat 71 kandidaten opleverde. Deze 71 actieve bestanddelen werden vervolgens onderworpen aan een screeningsproces op basis van orale biobeschikbaarheid (OB ≥ 30%) en geneesmiddellijkheid (DL ≥ 0,18), wat resulteerde in de identificatie van 18 verbindingen. Verdere verfijning van deze lijst toonde aan dat 10 van deze actieve verbindinge...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

GA is een veelvoorkomende vorm van inflammatoire artritis. Momenteel is de klinische behandeling voornamelijk gebaseerd op niet-steroïde ontstekingsremmers (NSAID's), corticosteroïden en uraatverlagende middelen42. De gecombineerde toediening van deze medicijnen veroorzaakt echter een reeks bijwerkingen bij patiënten en legt een aanzienlijke metabole last op de lever en nieren43. Dit is vooral nadelig voor patiënten met bestaande lever- of ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs melden dat er geen belangenconflicten zijn in dit werk.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
4% ParaformaldehydeSolarbioP1110
5X Protein Loading BufferSolarbioP1040
AKT AntibodyCell Signaling Technology4691S
Antibody Diluent SolutionBeyotime BiotechnologyP0268
Bioconductor database https://www.bioconductor.org/
colchicineShanghai Yuanye Co., Ltd
GeneCards database https://www.genecards.org/
Hematoxylin and Eosin (H&E) Staining KitSolarbioG1120
MetaboAnalyst 6.0 online platform https://www.metaboanalyst.ca/
Mouse IL-17A ELISA Kit4a Biotech Co LtdCME0041
Mouse IL-6 ELISA Kit4a Biotech Co LtdCME0006
Mouse TNF-α ELISA Kit4a Biotech Co LtdCME0004
NF-κB p65 AntibodyCell Signaling Technology8242T
Non-fat Dry MilkSolarbioD8340
p38 MAPK AntibodyAbclonalA14401
Phosphatase Inhibitor CocktailBeyotime BiotechnologyP1081
Phospho-AKT (Ser473) AntibodyCell Signaling Technology4060S
Phospho-NF-κB p65 AntibodyCell Signaling Technology3031S
Phospho-p38 MAPK AntibodyAbclonalAP0526
Phenylmethylsulfonyl Fluoride (PMSF)SolarbioR0010
Polyvinylidene Fluoride (PVDF) MembraneMilliporeIPVH00010
PubChem databashttps://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/
R software www.r project.org/
RIPA Lysis BufferSolarbioR0010
RNase-free waterAmbionAM9937
SD ratsBeijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. 
SDS-PAGE Electrophoresis BufferServicebioG2144
STRING Databasehttps://string-db.org/
TBST Buffer (10X)SolarbioT1085
TCMSPhttps://old.tcmsp-e.com
Tris-Glycine Transfer BufferServicebioG2017
TFRDBeijing Qihuang Pharmaceutical Co., Ltd.
UniProt database https://www.uniprot.org/
β-Actin AntibodyZhongshan Jingqiao BiotechnologyTA-09

Referenties

  1. Keller, S. F., Mandell, B. F. Management and cure of gouty arthritis. Rheum Dis Clin North Am. 48 (2), 479-492 (2022).
  2. Ma, C., et al. Metabolic reprogramming of macrophages by biomimetic melatonin-loaded liposomes effectively attenuates acute gouty arthritis in a mouse model. Adv Sci (Weinh). , e2410107 (2024).
  3. Li, C., et al. Targeting neutrophil extracellular traps in gouty arthritis: insights into pathogenesis and therapeutic potential. J Inflamm Res. 17, 1735-1763 (2024).
  4. Zhang, Y., Chen, S., Yuan, M., Xu, Y., Xu, H. Gout and diet: a comprehensive review of mechanisms and management. Nutrients. 14 (17), 3525 (2022).
  5. Wang, R., et al. Sulforaphane-driven reprogramming of gut microbiome and metabolome ameliorates the progression of hyperuricemia. J Adv Res. 52, 19-28 (2023).
  6. Zhang, S., et al. Mechanism of reactive oxygen species-guided immune responses in gouty arthritis and potential therapeutic targets. Biomolecules. 14 (8), 978 (2024).
  7. GBD 2021 Gout Collaborators. Global, regional, and national burden of gout, 1990-2020, and projections to 2050: a systematic analysis of the Global Burden of Disease Study 2021. Lancet Rheumatol. 6 (8), e507-e517 (2024).
  8. Towiwat, P., Li, Z. Long-term remission in gout: challenges and future opportunities. Rheumatol Autoimmun. 6, 7-15 (2026).
  9. Chen, S., Li, Z., Deng, X., Gao, L. Advances in understanding the mechanisms of treatment for gouty arthritis: a comprehensive review. Physiol Res. 74 (5), 693-710 (2025).
  10. LaForge, J. M., et al. Non-steroidal anti-inflammatory drugs: clinical implications, renal impairment risks, and AKI. Adv Ther. 40 (5), 2082-2096 (2023).
  11. Klomjit, N., Ungprasert, P. Acute kidney injury associated with non-steroidal anti-inflammatory drugs. Eur J Intern Med. 101, 21-28 (2022).
  12. Anis, T. R., Meher, J. Allopurinol-induced Stevens-Johnson syndrome (SJS). Clin Pharmacol. 15, 99-105 (2023).
  13. Hasegawa, A., Abe, R. Stevens-Johnson syndrome and toxic epidermal necrolysis: updates in pathophysiology and management. Chin Med J (Engl). 137 (19), 2294-2307 (2024).
  14. Gupta, S. S., Sabharwal, N., Patti, R., Kupfer, Y. Allopurinol-induced Stevens-Johnson syndrome. Am J Med Sci. 357 (4), 348-351 (2019).
  15. Sun, W., et al. Risk of hepatotoxicity in patients with gout treated with febuxostat or benzbromarone: a propensity score-matched cohort study. Arthritis Care Res (Hoboken). 77 (9), 1149-1156 (2025).
  16. Guo, J. W., et al. Therapeutic potential and pharmacological mechanisms of traditional Chinese medicine in gout treatment. Acta Pharmacol Sin. 46 (5), 1156-1176 (2025).
  17. Jiang, Z., et al. The correlation between traditional Chinese medicine constitution and hyperuricemia and gout: a systematic review and meta-analysis. Evid Based Complement Alternat Med. 2023, 5097490 (2023).
  18. Wang, S., et al. Traditional herbal medicine: therapeutic potential in acute gouty arthritis. J Ethnopharmacol. 330, 118182 (2024).
  19. Wang, Y. B., Jin, C. Z. Roles of traditional Chinese medicine extracts in hyperuricemia and gout treatment: mechanisms and clinical applications. World J Gastroenterol. 30 (47), 5076-5080 (2024).
  20. Jingying, G., et al. A comprehensive review of Drynariae Rhizoma: botany, traditional applications, and active flavonoid components. J Pharm Pharmacol. 77 (10), 1319-1337 (2025).
  21. Chen, G. Y., et al. Prediction of Rhizoma Drynariae targets in the treatment of osteoarthritis based on network pharmacology and experimental verification. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5233462 (2021).
  22. Zhang, Y., et al. Total flavonoids from Rhizoma Drynariae (Gusuibu) for treating osteoporotic fractures: implication in clinical practice. Drug Des Devel Ther. 11, 1881-1890 (2017).
  23. Yu, X. B., et al. Chondroprotective effects of Gubitong Recipe via inhibiting excessive mitophagy of chondrocytes. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 8922021 (2022).
  24. Zhang, F., et al. Total flavonoids of Drynariae Rhizoma improve glucocorticoid-induced osteoporosis of rats: UHPLC-MS-based qualitative analysis, network pharmacology strategy and pharmacodynamic validation. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 920931 (2022).
  25. Liu, F., et al. Mechanism of flavonoids in the treatment of gouty arthritis (review). Mol Med Rep. 30 (2), 132 (2024).
  26. Chen, G. Y., et al. Network pharmacology analysis and experimental validation to investigate the mechanism of total flavonoids of Rhizoma Drynariae in treating rheumatoid arthritis. Drug Des Devel Ther. 16, 1743-1766 (2022).
  27. Chen, G. Y., et al. Total flavonoids of Rhizoma Drynariae restore the MMP/TIMP balance in models of osteoarthritis by inhibiting the activation of the NF-λB and PI3K/AKT pathways. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 6634837 (2021).
  28. Chen, G. Y., et al. Total flavonoids of Rhizoma Drynariae treat osteoarthritis by inhibiting arachidonic acid metabolites through AMPK/NFλB pathway. J Inflamm Res. 16, 4123-4140 (2023).
  29. Ru, J., et al. TCMSP: a database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines. J Cheminform. 6, 13 (2014).
  30. Chen, G. Y., et al. Mechanisms of total glucosides of paeony in alleviating methotrexate-induced liver injury. Drug Des Devel Ther. 19, 3407-3423 (2025).
  31. Zhang, P., et al. Network pharmacology: towards the artificial intelligence-based precision traditional Chinese medicine. Brief Bioinform. 25 (1), bbad518 (2023).
  32. Luo, W., et al. Integration of molecular docking, molecular dynamics, and network pharmacology to explore the multi-target pharmacology of fenugreek against diabetes. J Cell Mol Med. 27 (14), 1959-1974 (2023).
  33. UniProt Consortium. UniProt: the universal protein knowledgebase in 2023. Nucleic Acids Res. 51 (D1), D523-D531 (2023).
  34. Stelzer, G., et al. The GeneCards suite: from gene data mining to disease genome sequence analyses. Curr Protoc Bioinformatics. 54, 1.30.1-1.30.33 (2016).
  35. Chen, G. Y., et al. Integrating network pharmacology and experimental validation to explore the key mechanism of Gubitong Recipe in the treatment of osteoarthritis. Comput Math Methods Med. 2022, 7858925 (2022).
  36. Szklarczyk, D., et al. The STRING database in 2023: protein-protein association networks and functional enrichment analyses for any sequenced genome of interest. Nucleic Acids Res. 51 (D1), D638-D646 (2023).
  37. Chen, G. Y., et al. Network pharmacology-based strategy to investigate the mechanisms of Cibotium barometz in treating osteoarthritis. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 1826299 (2022).
  38. Robinson, M. D., McCarthy, D. J., Smyth, G. K. edgeR: a Bioconductor package for differential expression analysis of digital gene expression data. Bioinformatics. 26 (1), 139-140 (2010).
  39. Jin, Q., et al. Network and experimental pharmacology to decode the action of Wendan Decoction against generalized anxiety disorder. Drug Des Devel Ther. 16, 3297-3314 (2022).
  40. Pang, Z., et al. MetaboAnalyst 6.0: towards a unified platform for metabolomics data processing, analysis, and interpretation. Nucleic Acids Res. 52 (W1), W398-W406 (2024).
  41. Kim, S., et al. PubChem in 2021: new data content and improved web interfaces. Nucleic Acids Res. 49 (D1), D1388-D1395 (2021).
  42. Pillinger, M. H., Mandell, B. F. Therapeutic approaches in the treatment of gout. Semin Arthritis Rheum. 50 (3S), S24-S30 (2020).
  43. Yao, T. K., et al. Advances in gouty arthritis management: integration of established therapies, emerging treatments, and lifestyle interventions. Int J Mol Sci. 25 (19), 10853 (2024).
  44. Li, W., et al. Effects of total flavonoids of Rhizoma Drynariae on biochemical indicators of bone metabolism: a systematic review and meta-analysis. Front Pharmacol. 15, 1443235 (2024).
  45. Mohammed, H. S., et al. Investating the involvement of the NLRP3/ASC/caspase-1 and NF-λB/MAPK pathways in the pathogenesis of gouty arthritis: insights from irradiated and non-irradiated Trifolium alexandrium L. extracts and some metabolites. J Ethnopharmacol. 334, 118566 (2024).
  46. Shi, M. F., et al. Study on the effect and mechanism of Zexie Decoction in treating MSU-induced acute gouty arthritis model through PI3K-AKT-mTOR signaling pathway. Int Immunopharmacol. 150, 114214 (2025).
  47. Cui, L., et al. Selenium suppressed the LPS-induced inflammation of bovine endometrial epithelial cells through NF-λB and MAPK pathways under high cortisol background. J Cell Mol Med. 27 (10), 1373-1383 (2023).
  48. Balakin, E., et al. Regulation of stress-induced immunosuppression in the context of neuroendocrine, cytokine, and cellular processes. Biology (Basel). 14 (1), 76 (2025).
  49. Chen, L., et al. AMPK signaling in osteoarthritis: from mechanisms to targeted therapeutics. Front Pharmacol. 16, 1681610 (2025).
  50. FitzGerald, J. D., et al. 2020 American College of Rheumatology guideline for the management of gout. Arthritis Care Res (Hoboken). 72 (6), 744-760 (2020).
  51. Limbachia, V., et al. The effect of different types of oral or intravenous corticosteroids on capillary blood glucose levels in hospitalized inpatients with and without diabetes. Clin Ther. 46 (2), e59-e63 (2024).
  52. Xue, Y., et al. Association of serum glucocorticoids with various blood pressure indices in patients with dysglycemia and hypertension: the Henan Rural Cohort Study. Biomed Environ Sci. 34 (12), 952-962 (2021).
  53. Uson, J., et al. EULAR recommendations for intra-articular therapies. Ann Rheum Dis. 80 (10), 1299-1305 (2021).
  54. Lucenti, L., et al. Do preoperative corticosteroid injections increase the risk of infection after shoulder arthroscopy or shoulder arthroplasty? A systematic review. Healthcare (Basel). 12 (5), 543 (2024).
  55. Feng, W., Cui, D., Yang, T. Interpretation of key points of Chinese guidelines for diagnosis and management of hyperuricemia and gout (2019). J Clin Intern Med. 37 (07), 528-531 (2020).
  56. Lin, Y., et al. Luteolin-4'-O-glucoside and its aglycone, two major flavones of Gnaphalium affine D. Don, resist hyperuricemia and acute gouty arthritis activity in animal models. Phytomedicine. 41, 54-61 (2018).
  57. Wang, Y., et al. A luteolin-loaded electrospun fibrous implantable device for potential therapy of gout attacks. Macromol Biosci. 16 (11), 1598-1609 (2016).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Netwerkfarmacologieratmodelserummetabolomicsenzyme linked immunosorbent assayWestern blotinflammatoire pathwayssynoviaal weefsel
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.