Deze studie presenteert een gelatine-gebaseerde voedingsmethode die precieze, niet-invasieve orale toediening van geneesmiddelen op basis van lichaamsmassa bij volwassen zebravissen mogelijk maakt. Het protocol toont betrouwbare voeracceptatie aan en, als bewijs van het principe, succesvolle levering van MK-801, wat resulteerde in de verwachte gedragseffecten.
Methodenartikel
Een eenvoudige en precieze voergebaseerde benadering van orale medicijnafgifte bij vissen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Typische methoden voor medicijnafgifte bij vissen (bijvoorbeeld bekerdosering, intraperitoneale injecties of orale gavage) zijn tijdrovend, onnauwkeurig en/of verspilling. Omdat deze methoden ook stressvol zijn voor de dieren, zijn ze slecht geschikt voor herhaalde of langdurige medicijntoediening en gedragsexperimenten die gevoelig zijn voor verstoringen door het hanteren, waardoor het nut van vismodellen in biomedisch onderzoek wordt beperkt. Om deze obstakels te overwinnen, werd een gelatine-gebaseerde voedingsmethode ontwikkeld die snelle, precieze medicijndosering bij vissen mogelijk maakt met minimale verstoring. De methode bestaat uit het bereiden van individueel aangepaste stukjes voer bestaande uit gelatine, pekelgarnaalextract, spirulina en het favoriete medicijn. De warmte-kneedbare eigenschappen van gelatine maken het mogelijk om één homogene bereiding vloeibaar te maken, nauwkeurig te portioneren op basis van de individuele lichaamsmassa en opnieuw te verharden tot aangepaste stukjes. Als principebewijs werd de NMDA-receptorantagonist MK-801 (4 mg kg⁻1) toegediend aan volwassen zebravissen vóór de nieuwe aquariumtest, wat resulteerde in gedragseffecten die consistent zijn met verminderd angstachtig gedrag. Deze benadering is zeer geschikt voor gedragsfarmacologie en is gemakkelijk aan te passen aan andere aquatische modelorganismen.
Inleiding
Zebravissen (Danio rerio) worden veel gebruikt in biomedisch onderzoek om ontwikkeling, fysiologie, gedrag en farmacologie te bestuderen 1,2,3. De bruikbaarheid van zebravissen voor farmacologische studies, met name bij volwassen dieren, wordt echter beperkt door de beschikbaarheid van medicijntoedieningsmethoden die zowel precies als minimaal verstorendzijn 4.
Veelgebruikte medicijntoedieningstechnieken bij zebravissen, zoals bekerdosering, intraperitoneale injectie en orale gavage, vertonen elk aanzienlijke nadelen. Blootstelling door volledige lichaamsonderdompeling via bekerdosering biedt beperkte controle over de opname van medicijnen, resulteert in aanzienlijk afval van verbindingen en introduceert variabiliteit door verschillen in absorptiesnelheid en verbindingsstabiliteit 5,6,7. Injectiegebaseerde methoden en orale gavage maken preciezere dosering mogelijk, maar vereisen anesthesie, vasthouding en herhaald hanteren, wat allemaal stressreacties kan opwekken en het risico op letsel of hypoxie verhoogt, wat gedrags- en fysiologische metingen mogelijk verstoort 8,9,10. Deze beperkingen zijn vooral problematisch voor experimenten waarbij herhaalde of langdurige medicijntoediening wordt uitgevoerd.
Om deze uitdagingen aan te pakken, is een gelatine-gebaseerde voedingsmethode ontwikkeld die snelle, precieze en niet-invasieve medicijnafgifte aan zebravissenmogelijk maakt. Deze aanpak maakt het mogelijk om farmacologische verbindingen te verwerken in kleine, individueel aangepaste voederbrokjes bestaande uit gelatine, pekelgarnaalextract en spirulina. Voedergebaseerde geneesmiddelafgifte is een niet-invasief alternatief dat aansluit bij de principes van 3R's (vervanging, vermindering en verfijning) in ethisch dieronderzoek. Hoewel eerdere studies de haalbaarheid van voedergebaseerde medicijnafgifte bij volwassen zebravissen 12,13,14 hebben aangetoond, vertrouwen huidige benaderingen op heterogene voedselmatrices of vaste voedervolumes die geen rekening houden met individuele variatie in lichaamsmassa. De hier beschreven methode pakt deze beperkingen aan door gewichtsgebaseerde dosiskalibratie mogelijk te maken.
Dit protocol biedt een gedetailleerde, stapsgewijze beschrijving van een gelatine-gebaseerd voedervoorval en toediening bij volwassen zebravissen. Hoewel de methode wordt aangetoond met behulp van een gedragstest, de nieuwe aquariumtest, is deze breed toepasbaar op andere gebieden van de zebravisbiologie en wordt verwacht dat deze aanpasbaar is voor gebruik in andere aquatische modelorganismen. Dit protocol biedt een praktische oplossing voor onderzoekers die op zoek zijn naar efficiënte, reproduceerbare en stressarme geneesmiddelafgifte bij zebravissen, met name voor studies die precieze, herhaalde en/of langdurige farmacologische manipulatie vereisen.
Protocol
Volwassen mannelijke en vrouwelijke AB- en TL-zebravissen (4–12 maanden oud) werden in deze studie gebruikt. Alle dieren werden gefokt en gehuisvest aan Wayne State University. Alle procedures zijn goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee in overeenstemming met de richtlijnen van Wayne State University. Vissen werden onder standaardomstandigheden gehouden op hoogdichte rekken (temperatuur 27,5 ± 0,5 °C, watergeleiding 500 μS ± 10 μS en pH 7,5 ± 0,2) met een licht-donkercyclus van 14 uur tot 10 uur (lichten aan om 08:00 uur). Vissen werden twee keer per dag gevoerd met droogvoer in de ochtend en vers uitgekomen pekelgarnaal in de middag. De reagentia en de gebruikte apparatuur worden vermeld in de Materiaaltabel.
1. Viswegen en berekening van het voedervolume
- Vul een glazen beker van 100 mL met ongeveer 50 mL systeemwater en plaats deze op een digitale weegschaal. Kijk op de weegschaal.
- Net voorzichtig een enkele vis uit hun thuisbak met een fijnmaas net. Raak het net kort aan een droog keukenpapier om overtollig water te verwijderen.
- Doe de vis voorzichtig over in het bekerglas, zodat er geen water op de schub wordt gemorst.
- Noteer het gewicht en gebruik dit gemeten gewicht om het benodigde voervolume te berekenen op basis van 1% volume per lichaamsgewicht (V/BW) voor elke individuele vis.
2. Bereiding van zoutwatergarnaalextract
- Suspendeer pekelgarnalenpoeder in gedestilleerd water tot een uiteindelijke concentratie van 250 mg/mL. Roer 1 uur op kamertemperatuur. Centrifugeer de suspensie op 12.500 × g gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur en behoud het supernatant.
- Herhaal de centrifugatie nog eens en verzamel opnieuw het supernatant.
- Bewaar het zoutwatergarnalenextract bij −20 °C tot 6 maanden.
3. Bereiding van gelatine-gebaseerd voer
- Ontdooi het zoutwatergarnalenextract vóór bereiding en bereken de streefmassa's van gelatine (12% w/v), spirulina (4% w/v) en, indien van toepassing, farmacologische verbindingen die nodig zijn voor het gewenste volume gelatinevoer.
- Weeg spirulina en gelatinepoeder (afkomstig van varkens; Bloom ≈ 300 g) in aparte 1,5 mL microcentrifugebuizen en registreer de werkelijke massa in elke buis. Zorg ervoor dat de gemeten massa op of boven de streefmassa ligt voor het beoogde eindvolume.
- Voeg de juiste hoeveelheden pekelgarnaalextract, medicijnverbinding en water toe aan de spirulina-bevattende buis om de uiteindelijke concentraties van 4% met spirulina en 80 mg/mL pekelgarnalenextract te bereiken.
- Vortex volledig om te homogeniseren. Breng het benodigde volume van het mengsel van de vorige stap over naar de gelatinehoudende buis om een uiteindelijke gelatineconcentratie van 12% w/v te verkrijgen.
- Plaats de buis op een voorverwarmd 45 °C verwarmingsblok gedurende 5 minuten, en laat het af en toe vortexen totdat de gelatine volledig is opgelost. Als de oplossing niet compleet is, roer dan voorzichtig met een steriele houten of metalen roerstok om homogenisatie te bevorderen.
- Aliquot het volledig gehomogeniseerde mengsel (tot 100 μL per buis) in gelabelde 1,5 mL microcentrifugebuizen.
- Bewaar aliquots 's nachts bij −20 °C om volledige stolling mogelijk te maken en het hanteren tijdens het voeren te vergemakkelijken.
4. Vorming van individuele voederstukjes
- Verwarm het gealiquoteerde gelatinemengsel tot 45 °C tot het volledig vloeibaar is voordat je het voedt.
- Vortex het vloeibare gelatinemengsel grondig.
- Pipetteer het volume dat overeenkomt met 1% van de lichaamsmassa van de vis op een vel paraffinefilm om individuele stukjes te vormen (Figuur 1).
OPMERKING: Om het hanteren en opbergen te vergemakkelijken, plaats je een vel paraffinefilm in een petrischaal voordat je het volume doseert. Hierdoor blijft de paraffine plat en wordt het makkelijker om de voorbereide hapjes over te brengen tot −20 °C voor opslag. - Plaats hapjes op −20 °C gedurende minstens 20 minuten om weer te kunnen stollen.
- Houd hapjes op ijs tot je ze voedt.
5. Gelatinevoertoediening
- Breng vissen van het huisrek naar de gedragsruimte en laat ze 1 uur wennen.
- Isoleer elke vis in het aquarium tijdelijk met transparante barrières gedurende 2–5 minuten voorafgaand aan het voeren.
- Met een tang legt u het geïndividualiseerde gelatine-voederhapje dat overeenkomt met 1% van het lichaamsgewicht van de vis op het wateroppervlak voor elke geïsoleerde vis.
- Observeer elke vis om te bevestigen dat het hele voederhapje binnen 5 minuten is geconsumeerd.
- Nadat de vissen het voer hebben gegeten, verwijder je de barrières en breng je de vissen terug naar hun thuisaquaria of begin je met experimentele procedures.
OPMERKING: Een uitgewerkt voorbeeld met de bereiding van voer en de berekening van streef- en werkelijke doseringshoeveelheden is opgenomen in Aanvullend Dossier 1, met voorbeeldwaarden ook in Tabel 1.
Resultaten
Gelatinevoedingssmaak
Om de smaakbaarheid van het voer te beoordelen, kregen volwassen AB- en TL-zebravissen vijf dagen achter elkaar een gelatine-gebaseerd voer in plaats van hun ochtendvoeding (Figuur 2). Alle TL-vissen aten het voer binnen 5 minuten bij de eerste blootstelling, terwijl AB-vissen herhaalde blootstelling vereisten, waarbij 15 van de 16 individuen het voer consequent consumeerden na vier opeenvolgende dagen van acclimatie (Figuur 2A). Analyse van de tijd om het voer te consumeren met behulp van een drieweg-ANOVA (stam × geslacht × dag) toonde significante hoofdeffecten van stam (F₁,₁₂₅ = 19,4, P < 0,0001) en dag (F₄,₁₂₅ = 5,80, P < 0,001), maar geen hoofdeffect van seks (F₁,₁₂₅ = 0,24, P = 0,63). Significante interacties werden waargenomen tussen de stam en de dag (F₄,₁₂₅ = 3,35, P = 0,012) en tussen stam, dag en geslacht (F₄,₁₂₅ = 2,55, P = 0,04). TL-vissen van beide geslachten consumeerden het voer snel vanaf de eerste blootstelling (4–20 s), terwijl AB-vissen langere initiële consumptietijden vertoonden (7–144 s) die over dagen afnamen (Figuur 2B). Op dag vier en vijf hadden alle vissen behalve één AB-mannetje het voer binnen 10 seconden geconsumeerd. Ongeveer 95% van de vissen consumeert het gelatinevoer binnen 30 seconden na presentatie na 2–3 dagen acclimatisatie, zoals eerder gerapporteerd15,16.
Gedragseffect van MK-801 toegediend met behulp van gelatinevoeding
Om de effectiviteit van gelatine-gebaseerde geneesmiddelafgifte aan te tonen, werd MK-801, een N-methyl-D-aspartaat receptor (NMDAR) antagonist, toegediend met behulp van gelatinevoeding. De bodemafstand tijdens het verkennen van een nieuw aquarium werd gemeten als een gedragsmeting. MK-801 staat erom bekend voortbewegings- en angstachtig of roofdiervermijdend gedrag bij volwassen zebravissen17 te veranderen. Volwassen AB-zebravissen werden gewend aan het voederproces door twee opeenvolgende dagen gelatinefragmenten zonder het middel te ontvangen om vertrouwdheid en betrouwbare consumptie te garanderen. Op de derde dag kregen vissen die aan de behandelgroep waren toegewezen een enkele dosis MK-801 (4 mg kg⁻1) die in het gelatinevoer werd verwerkt. Controlevis kreeg een identieke gelatine-hapje dat alleen voertuig (water) bevatte. Het voer werd 30 minuten voorafgaand aan de gedragsbeoordeling toegediend in de nieuwe aquariumtest.
Angstachtig of roofdiervermijdend gedrag, gemeten als afstand tot de bodem, werd geanalyseerd met een 2 × 2 ANOVA (geslacht × drug), wat een significant hoofdeffect van MK-801 (Figuur 3) (F₁,₆₉ = 24,5, P < 0,001) aantoonde. Met drugs behandelde vissen brachten meer tijd door dicht bij de bovenkant van het aquarium, een patroon dat vaak wordt geïnterpreteerd als verminderd angstachtig of roofdiervermijdend gedrag. Er was geen hoofdeffect van geslacht (F1,69=2,52, P=0,12) of interactie tussen geneesmiddelen door geslacht (F1,69=1,0, P=0,32). Door FDR gecorrigeerde paargewijze t-tests bevestigden dat MK-801 de bodemafstand vergrootte bij zowel vrouwen (P = 0,0076) als mannen (P = 0,023).
Gezamenlijk tonen deze bevindingen aan dat gelatine-gebaseerd voer een effectieve orale afgifte van farmacologische verbindingen mogelijk maakt, wat verwachte door medicijnen veroorzaakte veranderingen in het gedrag van de bodem veroorzaakt in de nieuwe tanktest.
Figuur 1: Bereiding van gelatinevoeding. Gelatinevoeding werd in individueel afgestemde hapjes op paraffinefilm gepipetteerd die overeenkwamen met 1% van de lichaamsmassa en mocht uitharden op −20 °C. Deze figuur is aangepast van Ochocki et al.11. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: Consumptie van gelatine-gebaseerd voer door volwassen zebravissen. (A) Percentage AB- en TL-vissen van beide geslachten dat het voer binnen 5 minuten na toediening consumeerde. (B) Tijd om AB- en TL-vissen te voeden via geslacht. Vissen die het voer niet consumeerden, werden uitgesloten van de time-to-eat-analyse. De gegevens worden weergegeven als gemiddelde ± s.e.m.; n = 8 vissen per stam en geslacht. Deze figuur is aangepast van Ochocki et al.11. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3: Gedragseffecten van toediening van NMDA-receptorantagonisten. MK-801 (4 mg/kg) werd 30 minuten voor de nieuwe aquariumtest toegediend bij volwassen AB-zebravissen van beide geslachten. De afstand vanaf de bodem van het aquarium werd gebruikt als maatstaf voor angstachtig/roofdiervermijdend gedrag. De gegevens worden gepresenteerd als box-en-whisker plots die de mediaan (middenlijn), interkwartielbereik (box) en ±1,5× het interkwartielbereik (whiskers) tonen. *P < 0,05 gebaseerd op valse ontdekkingspercentage-gecorrigeerde paargewijze t-tests. Steekproefgroottes: vrouwelijk voertuig, n = 20; vrouwelijke MK-801, n = 19; mannelijk voertuig, n = 19; mannelijke MK-801, n = 15. Vijf dieren werden uitgesloten van de analyse omdat ze het gelatinevoer niet consumeerden. Deze figuur is aangepast van Ochocki et al.11. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
| Component | Voorraadconcentratie | Doelconcentratie | Streefgewicht/volume | Werkelijke massa/volume |
| Gelatine | - | 12% (w/v) | 60 mg | 62 mg |
| Spirulina | - | 4% (w/v) | 20 mg | 25 mg |
| Zoutzoutgarnalenextract | 250 mg/mL | 80 mg/mL | 160 μL | 200 μL |
| Drug | 10 mg/mL | 0,4 mg/μL (4 mg/kg bij 1% BW) | 20 μL | 25 μL |
| Water | - | - | 320 μL | 400 μL |
| Totaal volume vloeibare voeding | - | - | 500 μL | 625 μL |
| Tonvolume van de voltooide voeding | - | - | 500 μL | 516,7 μL |
Tabel 1: Voorbeeld van gelatinevoervoorbereiding. Voorraadconcentraties, doelwit en hypothetische werkelijke massa's of volumes gebruikt om een gelatine-gebaseerd voer voor 4 mg/kg geneesmiddelafgifte te bereiden, toegediend bij 1% lichaamsgewicht.
Aanvullend Bestand 1: Voorbeeldbereiding van gelatine-gebaseerd voer voor meerdere vissen. Uitgewerkt voorbeeld dat de formulering van het voeder met geneesmiddelen en de berekening van individuele doseringsvolumes op basis van individueel lichaamsgewicht demonstreert. Klik hier om dit bestand te downloaden.
Discussie
De hier gelatinegebaseerde voedingsmethode overwint belangrijke beperkingen van veelgebruikte medicijntoedieningsmethoden bij zebravissen door individuele dosering op basis van lichaamsmassa mogelijk te maken met minimale behandeling. Dit verbetert de experimentele precisie en reproduceerbaarheid. De warmte-kneedbare aard van gelatine maakt het mogelijk om één homogene bereiding vloeibaar te maken, nauwkeurig te portioneren en opnieuw te verharden tot geïndividualiseerde stukjes, wat zorgt voor een uniforme distributie van geneesmiddelen terwijl rekening wordt gehouden met de variabiliteit tussen individuen in grootte. Bovendien voorkomt orale toediening via gelatinevoeding de stress en mogelijke schade die gepaard gaan met injectiemethoden, wat een belangrijke verfijning is binnen het 3R-kader4.
De voordelen van deze aanpak hangen af van nauwkeurige uitvoering. Verschillende procedurele factoren zijn cruciaal voor een succesvolle implementatie. Nauwkeurige meting van de individuele lichaamsmassa is essentieel, aangezien volwassen zebravissen aanzienlijke grootte-heterogeniteit kunnen vertonen, zelfs binnen leeftijd-, geslachts- en stamgematchte groepen, waarbij de lichaamsmassa bijna drie keer zo hoog varieert tussen individuen11, 18 en 19. Grondige homogenisatie van de verbinding binnen de gelatinematrix is even belangrijk om een consistente dosering over de voederporties te waarborgen. Ten slotte vermindert het wennen van vissen aan gelatinevoer vóór toediening van medicijnen de weidingsweigering; Visuele bevestiging van voederinname wordt aanbevolen om een nauwkeurige dosistoediening te garanderen.
Zelfs bij een juiste uitvoering zijn er echter enkele praktische uitdagingen bij de levering van medicijnen via voeder. Een mogelijk probleem is het verkeerd plaatsen van voederstukjes, wat kan leiden tot snelle desintegratie van het voer na het plaatsen in water. Dit is meestal het gevolg van onvoldoende temperatuurregeling en/of mengen tijdens de bereiding, langdurige verhitting of herhaalde vries-dooicycli van grondstoffen. Om dit te voorkomen moet volledige gelatineoplossing worden gegarandeerd door goed verhitten/mengen, en moeten bereide bouillons worden verdeeld in wegwerpdelen die slechts één keer worden ontdooid en direct worden gebruikt. Voor gevoelige preparaten wordt aanbevolen een extra voederhapje te bereiden, dat aan een beker water kan worden toegevoegd, waarbij de juiste instelling wordt bevestigd vóór het experimenteren. Voor verbindingen die de smaakbaarheid van het voer verminderen, kan de acceptatie worden verbeterd door lokkers zoals clam juice12˒13 of commerciële vislokkers20 toe te voegen. In de huidige studie werd zoutwatergarnalenextract gebruikt om de smakelijkheid te verbeteren en bleek het effectief. Alternatief kan het toedienen van meerdere kleinere doses de consumptie verbeteren en tegelijkertijd de gewenste cumulatieve blootstelling bereiken. Naast deze praktische overwegingen kent voedergebaseerde levering ook inherente farmacokinetische beperkingen. Zoals bij alle orale toedieningsmethoden kan gastro-intestinale opname de biobeschikbaarheid vertragen of verminderen ten opzichte van injectiemethoden, en kan de stabiliteit van de verbindingen binnen de voedingsmatrix variëren.
Ondanks acclimatie kan een klein deel van de dieren het gelatinevoer niet consumeren en moeten zij worden uitgesloten van de analyse, omdat zij mogelijk niet de verwachte medicijndosis krijgen. De weigeringspercentages variëren doorgaans van 2,4% tot 6,4% en vormen daarom geen grote methodologische hindernis. De voederinname kan ook per stam variëren. Dit stameffect komt overeen met eerdere rapporten waaruit blijkt dat genetische achtergrond de latentie bij het naderen van voedsel20 kan beïnvloeden. Deze factoren moeten worden meegenomen bij het ontwerpen van experimenten. Het rapporteren van voercompliance naast stamidentiteit wordt aanbevolen om transparantie en reproduceerbaarheid te verbeteren.
Een andere belangrijke beperking van de huidige studie is dat het protocol uitsluitend is ontwikkeld en gevalideerd bij volwassen zebravissen en daarom niet direct overdraagbaar is naar het larvale stadium. Deze methode is gebaseerd op geïndividualiseerde, op lichaamsmassa gebaseerde dosering en inname van discrete gelatinefragmenten. Dit is haalbaar bij volwassen dieren, maar onpraktisch bij larven vanwege hun kleine gapinggrootte, op suspensie gebaseerde voedingsgedrag en de moeilijkheid om betrouwbare individuele lichaamsmassametingen te verkrijgen. Bijgevolg zou aanpassing voor larvale toepassingen aanzienlijke aanpassingen vereisen. Deze aanpassingen kunnen de ontwikkeling van microschaaldeeltjes en alternatieve toedieningsstrategieën omvatten.
In vergelijking met eerder beschreven voedergebaseerde methoden biedt deze aanpak een superieure doseringsnauwkeurigheid en gebruiksgemak. Commerciële gelatinevoer vereist porties van heterogeen materiaal, waarbij de dosisprecisie12 wordt beperkt, terwijl andere methoden uniforme hoeveelheden aan alle dieren toedienen en dezelfde lichaamsmassaaannemen 14,21. Door geïndividualiseerde dosering mogelijk te maken, voorkomt de hier beschreven gelatine-gebaseerde voedingsmethode onder- of overdosering en verbetert de experimentele controle; Dit brengt ook de dosering van medicijnen bij volwassen zebravissen in lijn met de beste praktijken bij knaagdieren die meestal op basis van gewicht doseren. Deze methode is ook goed geschikt voor studies die precieze, herhaalde farmacologische manipulatie vereisen, omdat het minimale stress veroorzaakt. Dit omvat toepassingen in gedragsneurowetenschappen, neurofarmacologie en verouderingsonderzoek. Het is ook voordelig voor stoffen die interageren met anesthetica of slechte stabiliteit vertonen in waterige omgevingen. Hoewel hier aangetoond bij volwassen zebravissen, is de aanpak gemakkelijk aan te passen aan andere aquatische modelorganismen. Over het algemeen verbetert deze techniek de doseringsprecisie, het dierenwelzijn en de methodologische flexibiliteit, waardoor het nut van vismodellen in biomedisch onderzoek wordt vergroot.
Openbaarmakingen
Dit protocol is gebaseerd op eerder gepubliceerd werk in het Journal of Experimental Biology, Ochocki AJ, Kenney JW, 202311. Het huidige artikel biedt een gedetailleerde en uitgebreide methodologische richtlijn voor reproduceerbaarheid.
Dankbetuigingen
Dit werk werd ondersteund door de National Institutes of Health (R35GM142566) aan J.W.K.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| (+) MK-801 hydrogen maleate powder | SIGMA-ALDRICH | M107-5MG | |
| Gelatine van porcine huid poeder | SIGMA-ALDRICH | G1890-100G | Gelsterkte ~300 g Bloom, Type A, Bioreagens |
| Mikro Fine gedroogde pekelgarnaal | Brine Shrimp Direct | https://www.brineshrimpdirect.com/mikro-fine-dried-brine-shrimp-16-ounce | Fijn < 400 micron |
| Spirulina poeder | Brine Shrimp Direct | https://www.brineshrimpdirect.com/spirulina-powder-spirulina-powder-2-oz | 99% Zuivere blauwgroene algen |
Referenties
- Grunwald, D. J., Eisen, J. S. Headwaters of the zebrafish emergence of a new model vertebrate. Nat Rev Genet. 3 (9), 717-724 (2002).
- Norton, W., Bally-Cuif, L. Adult zebrafish as a model organism for behavioural genetics. BMC Neurosci. 11 (1), 90 (2010).
- Gerlai, R. Evolutionary conservation translational relevance and cognitive function the future of zebrafish in behavioral neuroscience. Neurosci Biobehav Rev. 116, 426-435 (2020).
- Sneddon, L. U., Halsey, L. G., Bury, N. R. Considering aspects of the 3Rs principles within experimental animal biology. J Exp Biol. 220 (17), 3007-3016 (2017).
- Levin, E. D., Limpuangthip, J., Rachakonda, T., Peterson, M. Timing of nicotine effects on learning in zebrafish. Psychopharmacology (Berl). 184 (3-4), 547-552 (2006).
- Montgomery, J. E., Parsons, M. J., Hyde, D. R. A novel model of retinal ablation demonstrates that the extent of rod cell death regulates the origin of the regenerated zebrafish rod photoreceptors. J Comp Neurol. 518 (6), 800-814 (2010).
- Sison, M., Gerlai, R. Behavioral performance altering effects of MK-801 in zebrafish (Danio rerio). Behav Brain Res. 220 (2), 331-337 (2011).
- Neely, M. N., Pfeifer, J. D., Caparon, M. Streptococcus zebrafish model of bacterial pathogenesis. Infect Immun. 70 (7), 3904-3914 (2002).
- Kinkel, M. D., Eames, S. C., Philipson, L. H., Prince, V. E. Intraperitoneal injection into adult zebrafish. J Vis Exp. (42), e2126 (2010).
- Collymore, C., Rasmussen, S., Tolwani, R. J. Gavaging adult zebrafish. J Vis Exp. (78), e50691 (2013).
- Ochocki, A. J., Kenney, J. W. A gelatin-based feed for precise and non-invasive drug delivery to adult zebrafish. J Exp Biol. 226 (2), jeb245186 (2023).
- Sciarra, J. B., Tyler, A., Kolb, A. A gelatin-based diet for oral dosing juvenile to adult zebrafish. Lab Anim Sci Prof. 32, 35 (2014).
- Chang, C. T., Doerr, K. M., Whipps, C. M. Antibiotic treatment of zebrafish mycobacteriosis tolerance and efficacy of treatments with tigecycline and clarithromycin. J Fish Dis. 40 (10), 1473-1485 (2017).
- Zang, L., Morikane, D., Shimada, Y., Tanaka, T., Nishimura, N. A novel protocol for the oral administration of test chemicals to adult zebrafish. Zebrafish. 8 (4), 203-210 (2011).
- Atiratana, T., Goldson, A. R., Samosorn, S., Rajput, N., Praphairaksit, N., et al. The effects of Arabian jasmine on zebrafish behavior depends on strain sex and personality. PLoS One. 20 (9), e0332642 (2025).
- Beigloo, F., Davidson, C. J., Gjonaj, J., Perrine, S. A., Kenney, J. W. Individual differences in the boldness of female zebrafish are associated with alterations in serotonin function. bioRxiv. , (2024).
- Benvenutti, R., Gallas-Lopes, M., Marcon, M., Reschke, C. R., Herrmann, A. P., et al. Glutamate NMDA receptor antagonists with relevance to schizophrenia a review of zebrafish behavioral studies. Curr Neuropharmacol. 20 (3), 494-509 (2022).
- Fowler, L. A., Williams, M. B., Dennis-Cornelius, L. N., Farmer, S., Barry, R. J., et al. Influence of commercial and laboratory diets on growth body composition and reproduction in the zebrafish Danio rerio. Zebrafish. 16 (6), 508-521 (2019).
- Siccardi, A. J., Garris, H. W., Jones, W. T., Moseley, D. B., D’Abramo, L. R., et al. Growth and survival of zebrafish Danio rerio fed different commercial and laboratory diets. Zebrafish. 6 (3), 275-280 (2009).
- Oswald, M., Robison, B. D. Strain-specific alteration of zebrafish feeding behavior in response to aversive stimuli. Can J Zool. 86 (10), 1085-1094 (2008).
- Lu, Y., Patton, E. E. Long-term non-invasive drug treatments in adult zebrafish that lead to melanoma drug resistance. Dis Model Mech. 15 (5), dmm049401 (2022).
Herprints en machtigingen
