Methodenartikel

Vaststelling van een zuur-geïnduceerd Het-1A-celmodel en functionele analyse van de miR-107/FGFRL1-as

DOI:

10.3791/70874

⸱

29 mei 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Gastroenterology, Longyan First Hospital, 2Department of Gastroenterology, The Affiliated TCM Hospital of Guangzhou Medical University, 3Department of Gastroenterology, The Affiliated TCM Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine, 4Department of Gastroenterology, Jiaozhou Central Hospital of Qingdao, 5Clinical Nutrition Department, Jiaozhou Central Hospital of Qingdao, 6Department of Gastroenterology, People's Hospital of Wenshang County

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hier presenteren we een protocol om een HCl-geïnduceerd reflux-oesofagitiscelmodel op te zetten met behulp van Het-1A-cellen en om de miR-107/FGFRL1-as te onderzoeken met moleculaire en cellulaire assays.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Reflux-oesofagitis (RE) is een spijsverteringsziekte waarbij maagzuur en maaginhoud herhaaldelijk terugvloeien in de slokdarm, wat leidt tot ontsteking, erosie of zelfs ulceratie van het slokdarmslijmvlies, waarvan de ernst samenhangt met de aard van het refluxmateriaal, de frequentie van reflux en de weerstand van het slokdarmslijmvlies 1,2. Als een zeer voorkomend type gastro-oesofageale refluxziekte (GERD) vertoont RE een gestaag stijgende incidentie en een geleidelijk groeiende wereldwijde impact3. De niet-specifieke klinische presentatie van RE leidt vaak tot verkeerde diagnose of onderdiagnose. Bovendien ontwikkelt het terugkerende verloop van de ziekte zich vaak tot ernstigere gastro-intestinale complicaties, wat aanzienlijke fysiologische en sociaaleconomische lasten oplegt voor de getroffen personen4. Standaard klinische behandeling van RE omvat doorgaans farmacotherapie (zoals protonpompremmers), minimaal invasieve endoscopische procedures of chirurgische 5,6. De therapeutische werkzaamheid wordt echter vaak beperkt door medicatiegerelateerde bijwerkingen en procedurele morbiditeit. Gezien het onvolledige begrip van de moleculaire pathogenese van RE, kan het ophelderen van de onderliggende mechanismen nieuwe therapeutische doelwitten onthullen en kan RE de ontwikkeling van effectievere, patiëntgerichte behandelstrategieën informeren. Dit protocol heeft als doel een in vitro RE-model op te zetten en de regulerende rol van de miR-107/FGFRL1-as te onderzoeken met behulp van moleculaire en cellulaire assays.

MicroRNA's (miRNA's) zijn uitgebreid gedocumenteerd als deelnemers aan de pathogenese van talrijke menselijke ziekten door hun vermogen om mRNA-translatie te reguleren via sequentie-specifieke binding7. Zo beïnvloedt miR-3682-3p de Wnt/β-catenine-route door de FHL1-expressie te reguleren, wat leidt tot het verloop van slokdarmkanker8. miR-21-5p en miR-223-3p beïnvloeden het verloop van eosinofiele oesofagitis (EOE) door de expressie van downstream doelgenen9 te bemiddelen. miR-107 is een miRNA dat op chromosoom 10 bij mensen is gecodeerd en aanzienlijke onderzoeksaandacht heeft gekregen vanwege de implicaties in verschillende tumorigenische processen 10,11,12. Huidig bewijs wijst erop dat miR-107 een hotspot-mediator is bij maagkanker en slokdarmkanker13,14, maar de pathofysiologische functies en regulerende mechanismen bij niet-neoplastische spijsverteringsziekten moeten grondig worden onderzocht. Echter, geschikte in vitro-modellen en geïntegreerde analytische benaderingen om de functie van miR-107 in RE te bestuderen blijven beperkt.

Gastrische zuurreflux wordt algemeen erkend als de primaire pathogene factor die verantwoordelijk is voor slokdarmslijmvliesbeschadiging bij RE15. Recente studies suggereren dat het pathogene mechanisme van RE niet direct slijmvliesbeschadiging door maagsappen betreft, maar juist hun stimulatie van chemokineafgifte uit slokdarmepitheelcellen, wat een cascade van inflammatoire weefselschade veroorzaakt16. Om de moleculaire mechanismen achter dit proces te onderzoeken, behandelden we Het-1A-cellen met zoutzuur om een in vitro zuurschademodel op te stellen dat de belangrijkste pathologische kenmerken van epitheelschade veroorzaakt door brandend maagzuur repliceerd. Deze aanpak biedt een gecontroleerd en reproduceerbaar systeem om zuur-geïnduceerde epitheliale schade in vitro na te bootsen. We onderzochten systematisch de regulerende rol van miR-107 bij RE-geassocieerde ontsteking en apoptose, evenals het diagnostische potentieel ervan. Dit protocol maakt het mogelijk om miRNA-gemedieerde regulatie van ontstekings- en apoptotische routes in slokdarmepitheelcellen te onderzoeken. In vergelijking met traditionele in vivo diermodellen en primaire celculturen biedt het HCl-geïnduceerde Het-1A-model gecombineerd met miR-107 functionele assays uitzonderlijke stabiliteit, controleerbaarheid en reproduceerbaarheid, waardoor het bijzonder geschikt is voor het bestuderen van zuur-geïnduceerde epitheelschade, miRNA-gemedieerde post-transcriptionele regulatie en ontstekingsreacties in slokdarmcellen17. Deze methode is bijzonder geschikt voor studies die moleculaire mechanismen van zuur-geïnduceerde epitheliale schade en miRNA-gemedieerde regulatie onderzoeken. In combinatie met klinische analyses van patiënten kan deze aanpak worden gecombineerd met klinische gegevens ter ondersteuning van mechanistische studies in RE.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Patiëntenwerving

  1. Voer de studie uit in overeenstemming met de Verklaring van Helsinki.
  2. Goedkeuring voor het onderzoeksprotocol verkrijgen van de Ethische Commissie van het Jiaozhou Centraal Ziekenhuis van Qingdao (Goedkeuringsnummer: 2023033-01).
  3. Zorg ervoor dat alle deelnemers ondertekende geïnformeerde toestemming geven vóór de start van het onderzoek.
  4. Identificeer en schrijf 94 patiënten met reflux-oesofagitis (RE) in vanuit het Jiaozhou Central Hospital van Qingdao.
  5. Neem 94 gezonde vrijwilligers mee als controlegroep.
  6. Stel alle fertiliteitspatiënten vast via gastroscopie om slokdarmslijmvlieslaesies en erosie te bevestigen. Groepeer de patiënten volgens de classificatiecriteria18 van Los Angeles.
  7. Omvatte fertiliteitspatiënten met last van meer dan 3 maanden last van het spijsverteringssysteem, geen voorgeschiedenis van bovenste gastro-intestinale chirurgie, en gaf ondertekende geïnformeerde toestemming voor deze studie.
  8. Sluit patiënten met Barrett-slokdarm, slokdarmvarices, oesofageale stenose, diepe zweren of kwaadaardige tumorlaesies uit via gastroscopie.

2. Verzameling van serummonsters

  1. Verzamel 5 ml nuchter veneus bloed van elke deelnemer tussen 8:00 en 10:00 uur na een nachtvast van minstens 8 uur.
  2. Centrifugeer het verzamelde bloed bij 4 °C 3000 × g gedurende 15 minuten.
  3. Verzamel het supernatant zorgvuldig na centrifugatie.
  4. Bewaar het gescheiden serum bij -80 °C in een vriezer tot de volgende meting.
    OPMERKING: Monsters kunnen worden opgeslagen bij −80 °C voor langdurige opslag en later worden verwerkt

3. Celcultuur

  1. Koop menselijke slokdarmplaveisellijnen Het-1A bij een commerciële celbank. Ontdooi de cellen snel in een waterbad van 37 °C binnen 1–2 minuten.
  2. Reanimeer Het-1A-cellen en kweek ze in RPMI-1640 medium, aangevuld met 10% foetaal rundserum en 1% penicilline/streptomycine.
  3. Stel de incubatorparameters in op 37°C en 5% CO₂ voor celkweekonderhoud.
  4. Vervang medium elke 2 dagen en laat cellen passeren bij 80–90% confluentie met 0,25% trypsine-EDTA.

4. Celinductie

  1. Inoculeer Het-1A-cellen in 6-wellplaten en pas de celdichtheid aan naar 2×105cellen·well-1 in een volledig medium van 2 mL.
  2. Verdun geconcentreerd zoutzuur (HCl) met fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) en stel de pH aan naar 4,0.
    VOORZICHTIG: zoutzuur is bijtend en irriterend. Behandel zoutzuur met de juiste persoonlijke beschermingsmiddelen (waaronder veiligheidsbril, handschoenen en een labjas) en werk in een chemische afzuigkap
  3. Voeg 2 ml van de voorbereide HCl-oplossing toe aan elke put om de cellen te induceren.
  4. Gooi HCl-oplossing weg en was cellen twee keer met voorverwarmde PBS vóór de assays op elk tijdstip.
  5. Meet de levensvatbaarheid van cellen met een MTT-assay op 0, 10, 20 en 30 minuten.

5. Real-time kwantitatieve polymerasekettingreactie (RT-qPCR)

  1. Extractie van het totale RNA uit Het-1A-cellen met behulp van een fenol-chloroform-reagens.
  2. Beoordeel de zuiverheid en concentratie van RNA met een NanoDrop-spectrofotometer, waarbij een A260/A280-verhouding tussen 1,8 en 2,0 wordt bevestigd.
  3. Configureer het reverse transcriptie-versterkingssysteem met behulp van de reverse transcription kit.
  4. Voer reverse transcriptie uit in een PCR-machine bij 37°C gedurende 15 minuten, 85°C gedurende 5 seconden, en houd dan vast op 4°C.
  5. Genereer circulair DNA (cDNA) via omgekeerde transcriptie.
  6. Voer RT-qPCR-reacties uit in een reactievolume van 20 μL met behulp van de SYBR Green PCR mastermix.
  7. Stel de PCR-cyclische condities als volgt in: initiële denaturatie op 95 °C gedurende 10 minuten, gevolgd door 40 cycli van 95 °C gedurende 15 seconden en 60 °C gedurende 1 minuut.
  8. Gebruik glyceraldehyde-3-fosfaatdehydrogenase (GAPDH) en klein nucleair RNA (U6) als interne controles voor miR-107 en FGFRL1.
  9. Bereken gegevens met de 2-ΔΔCt-methode.
  10. Kwantificeer het mRNA-gehalte van ontstekingsfactoren (IL-6, IL-8) en apoptose-gerelateerde regulerende moleculen (Fas, p53) met RT-qPCR.

6. Celtransfectie

  1. Kweek Het-1A-cellen statisch in 6-wellplaten met een dichtheid van 2×105-cellen ·well-1 totdat ze de logaritmische groeifase bereiken.
  2. Verkrijg synthetische oligonucleotiden (miR-107 mimic/ov-FGFRL1; 50 nM), downgereguleerde plasmiden (miR-107-remmer; 100 nM) en hun bijbehorende negatieve controlefragmenten van een commerciële leverancier.
  3. Transfecteer de bovengenoemde fragmenten in cellen met lipofectamine-reagens gedurende 48 uur.

7. Cellevensvatbaarheid

  1. Zaad Het-1A-cellen in 96-wellplaten met een dichtheid van 5×103 cellen·well-1 in 100 μL medium per put en kweek ze 's nachts.
  2. Voeg methylthiazolyltetrazolium (MTT) oplossing (20 μL, 5 mg·mL-1, eindconcentratie 0,5 mg·mL-1) toe aan de Het-1A-cellen en incubeer 4 uur bij 37 °C.
  3. Voeg dimethylsulfoxide toe (DMSO, 150 μL) en laat het mengsel 10 minuten vortexen.
  4. Meet de absorptiewaarde (490 nm) van elke put met een microplaatlezer.
  5. Stel 3 replicatieputten per groep in en herhaal dit 3 onafhankelijke keren.

8. ELISA-toets

  1. Detecteer IL-6 en IL-8 in de cellen met behulp van een ELISA-kit volgens de standaardprocedure van de fabrikant.
  2. Herhaal de procedure drie keer onafhankelijk.

9. Doelvoorspelling en luciferase-activiteitstest

  1. Voorspel potentiële doelen van miR-107 met behulp van miRDB- en ENCORI-databases. Identificeer overlappende doelen en verifieer complementaire bindingsplaatsen.
  2. Identificeer complementaire bindingsplaatsen tussen miR-107 en FGFRL1.
  3. Klonen en verkrijgen de wild-type FGFRL1 3'UTR met miR-107 bindingsplaatsen (wt-FGFRL1). Genereer specifieke mutanten op de bindingsplaats (mut-FGFRL1).
  4. Co-transfect Het-1A-cellen met wt/mut-FGFRL1 en miR-107 mimic/inhibitor (of NC-controles).
  5. Meet luciferase-activiteit met behulp van een dual-luciferase reporter assay-systeem.

10. Statistische analyse

  1. Voer ROC-analyse uit met GraphPad Prism door de expressiegegevens in te voeren, de ROC-curvefunctie te selecteren en de resultaten te exporteren.
  2. Beoordeel intergroepverschillen met de t-test van de student (voor twee groepen) of eenrichtingsvariantieanalyse (ANOVA; voor meerdere groepen) gevolgd door Tukey's post hoc test.
  3. Beschouw p < 0,05 als statistisch significant.
  4. De gedetailleerde informatie van de oorspronkelijke gegevens werd samengevat in aanvullende Tabel 1.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Patiëntenwerving en basiskenmerken Deze resultaten beschrijven de expressie en diagnostische prestaties van miR-107 bij fertiliteitspatiënten. Tabel 1 geeft de algemene kenmerken van gezonde controles en fertiliteitspatiënten weer weer. De resultaten tonen geen statistisch significante verschillen tussen de twee groepen op het gebied van geslacht, leeftijd en onderliggende medische geschiedenis (p > 0,05), wat op vergelijkbaarheid wijst.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

RE is een ontstekingsziekte van het slokdarmslijmvlies veroorzaakt door gastro-oesofageale reflux met een breed scala aan symptomen die de kwaliteit van leven kunnen beïnvloeden en het risico op ernstige complicaties met zich mee kunnen brengen19. Onder normale fysiologische omstandigheden blijft de maag beschermd tegen maagzuur en gal dankzij de inherente verdedigingsmechanismen. Daarentegen is de slokdarm, die geen robuuste slijmbarrière heeft, vatbaarder voor s...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende belangen hebben.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Guangzhou Traditionele Chinese Geneeskunde en Geïntegreerd Traditioneel Chinees en Westerse Geneeskunde Technologieproject (subsidienummer: 20242A011007). Wetenschappelijk Onderzoeksproject van de Guangdong Provinciale Administratie voor Traditionele Chinese Geneeskunde (subsidienummer: 20262041).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
American Type Culture Collection Manassas, USAcommercieel cellenbank
Dimethyl sulfoxide Sigma, DuitslandD4540
Dual-luciferase reporter assay kitPromega, USAE1910dual-luciferase reporter assay systeem
FastStart Universal SYBR Green Master KitRoche, Duitsland4913850SYBR Green PCR master mix
Fetaal bovien serumGibco, NY, USA10100147C
GenePharma CompanyShanghai, China
Hydrogen chlorideSigma-Aldrich, MO, USA1099730001
IL-6 ELISA KitR&D Systems, USAD6050ELISA kit
IL-8 ELISA KitR&D Systems, USAD8000CELISA kit
IncubatorForma Scientific, MA, USA311 S/N29035
Lipofectamine 3000Invitrogen, USAL3000015lipofectamine reagens
Methyl thiazolyl tetrazoliumSigma, DuitslandM5655
Microplate readerBioTek, VT, USAELx808
NanoDrop spectrofotometerThermo, MA, USAND-1000
Penicillin/streptomycinGibco, NY, USA15070063
PrimeScript RT kitTakara, JapanDRR047Areverse transcriptie kit
TRIzol Thermo, MA, USA10296010fenol-chloroform reagens
Ultra-low-temperature vriezer Haier, Qingdao, ChinaDW-86W100

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Guo, Z., et al. Integrated transcriptomic and metabolomic analyses reveal the mechanism by which quercetin inhibits reflux esophagitis in rats. PLoS One. 20 (5), e0321959(2025).
  2. Maev, I. V., Livzan, M. A., Mozgovoi, S. I., Gaus, O. V., Bordin, D. S. Esophageal Mucosal Resistance in Reflux Esophagitis: What We Have Learned So Far and What Remains to Be Learned. Diagnostics (Basel). 13 (16), 2664(2023).
  3. Quach, D. T., et al. Clinical characteristics and risk factors of gastroesophageal reflux disease in Vietnamese patients with upper gastrointestinal symptoms undergoing esophagogastroduodenoscopy. JGH Open. 5 (5), 580-584 (2021).
  4. Han, Y. M., et al. Inverse correlation between gastroesophageal reflux disease and atrophic gastritis assessed by endoscopy and serology. World J Gastroenterol. 28 (8), 853-867 (2022).
  5. Tanvir, F., et al. Gastroesophageal Reflux Disease: New Insights and Treatment Approaches. Cureus. 16 (8), e67654(2024).
  6. Bortolotti, M. Is patient satisfaction sufficient to validate endoscopic anti-reflux treatments? World J Gastroenterol. 28 (28), 3743-3746 (2022).
  7. Fabian, M. R., Sonenberg, N., Filipowicz, W. Regulation of mRNA translation and stability by microRNAs. Annu Rev Biochem. 79, 351-379 (2010).
  8. Cai, Y., et al. MiR-3682-3p promotes esophageal cancer progression by targeting FHL1 and activating the Wnt/β-catenin signaling pathway. Cell Signal. 119, 111155(2024).
  9. Tarallo, A., et al. MiR-21-5p and miR-223-3p as Treatment Response Biomarkers in Pediatric Eosinophilic Esophagitis. Int J Mol Sci. 26 (7), 3111(2025).
  10. Liu, X., et al. Decreased PANK1 expression in kidney renal clear cell carcinoma: impact on cell apoptosis, invasion, migration, and epithelial-mesenchymal transition. Discov Oncol. 15 (1), 380(2024).
  11. Huang, F., Tang, W., Lei, Y. MicroRNA-107 promotes apoptosis of acute myelocytic leukemia cells by targeting RAD51. Arch Med Sci. 17 (4), 1044-1055 (2021).
  12. Zheng, J., et al. Applications of Exosomal miRNAs from Mesenchymal Stem Cells as Skin Boosters. Biomolecules. 14 (4), 459(2024).
  13. Wang, P., et al. miR-107 reverses the multidrug resistance of gastric cancer by targeting the CGA/EGFR/GATA2 positive feedback circuit. J Biol Chem. 300 (8), 107522(2024).
  14. Zhang, P., et al. MiR-107 inhibits the malignant biological behavior of esophageal squamous cell carcinoma by targeting TPM3. J Gastrointest Oncol. 13 (4), 1541-1555 (2022).
  15. Lee, H. W., et al. A Pharmacokinetic/Pharmacodynamic Study of Esomeprazole Comparing a Dual Delayed-Release Formulation (YYD601) to a Conventional Formulation Following Multiple Administrations in Healthy Adult Subjects. Drug Des Devel Ther. 19, 97-110 (2025).
  16. Wasielica-Berger, J., et al. Expression of VEGF, EGF, and Their Receptors in Squamous Esophageal Mucosa, with Correlations to Histological Findings and Endoscopic Minimal Changes, in Patients with Different GERD Phenotypes. Int J Environ Res Public Health. 19 (9), 5298(2022).
  17. Zou, Z., Fu, L., Liu, J., Huang, B. Establishment and Evaluation of Cell Models for Bronchopulmonary Dysplasia: Challenges and Prospects. Clin Respir J. 19 (8), e70118(2025).
  18. Lundell, L. R., et al. Endoscopic assessment of oesophagitis: clinical and functional correlates and further validation of the Los Angeles classification. Gut. 45 (2), 172-180 (1999).
  19. Wu, Y., Hussain, S. A., Luo, M. Columbianadin ameliorates experimental acute reflux esophagitis in rats via suppression of NF-κB pathway. Acta Cir Bras. 39, e391824(2024).
  20. Yao, P., Liao, X., Huang, J., Dang, Y., Jiang, H. Identifying causal relationships between gastroesophageal reflux and extraesophageal diseases: A Mendelian randomization study. Medicine (Baltimore). 103 (7), e37054(2024).
  21. Webb, J., et al. The microRNA Pathway of Macroalgae: Its Similarities and Differences to the Plant and Animal microRNA Pathways. Genes (Basel). 16 (4), 442(2025).
  22. Wu, Z., Yan, Y., Li, W., Li, Y., Yang, H. Expression Profile of miR-199a and Its Role in the Regulation of Intestinal Inflammation. Animals (Basel). 13 (12), 1979(2023).
  23. Wang, J., Liu, L. MiR-149-3p promotes the cisplatin resistance and EMT in ovarian cancer through downregulating TIMP2 and CDKN1A. J Ovarian Res. 14 (1), 165(2021).
  24. Wu, L., et al. Increased miR-214 expression suppresses cell migration and proliferation in Hirschsprung disease by interacting with PLAGL2. Pediatr Res. 86 (4), 460-470 (2019).
  25. Kim, S. Y., et al. Fexuprazan safeguards the esophagus from hydrochloric acid-induced damage by suppressing NLRP1/Caspase-1/GSDMD pyroptotic pathway. Front Immunol. 15, 1410904(2024).
  26. Liu, C., Gui, Y., Zeng, M., Zhou, Z. Effects of dexmedetomidine combined with intravenous general anesthesia on hemodynamics and inflammatory factors in patients undergoing laparoscopic colorectal cancer surgery. Wideochir Inne Tech Maloinwazyjne. 19 (3), 391-398 (2024).
  27. Rjiba, K., et al. Disorders of sex development in Wolf-Hirschhorn syndrome: a genotype-phenotype correlation and MSX1 as candidate gene. Mol Cytogenet. 14 (1), 12(2021).
  28. Zhao, X., et al. Exploration of Potential Integrated Models of N6-Methyladenosine Immunity in Systemic Lupus Erythematosus by Bioinformatic Analyses. Front Immunol. 12, 752736(2021).
  29. Sharma, P., Kaushik, V., Saraya, A., Sharma, R. Aberrant Expression of FGFRL1 in Esophageal Cancer and Its Regulation by miR-107. Asian Pac J Cancer Prev. 24 (4), 1331-1341 (2023).
  30. Guo, Y., et al. Pancreatic cancer stem cell-derived exosomal miR-210 mediates macrophage M2 polarization and promotes gemcitabine resistance by targeting FGFRL1. Int Immunopharmacol. 127, 111407(2024).
  31. Jia, X., Zhao, Y., Li, H., Fan, S., Hu, H. Downregulation of MUC6 improves esophageal epithelial barrier dysfunction and inhibits epithelial-mesenchymal transition in reflux esophagitis. BMC Gastroenterol. 26 (1), 53(2026).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Zuur ge nduceerd celmodelHet 1A cellenmiR 107 asreflux oesofagitiscellevensvatbaarheidsassayRT qPCRdual luciferase assayontstekingmarkersmoleculaire mechanismen

Gerelateerde artikelen