Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Onderzoeksartikel

Effecten van regulerende SPRY2- en miR-590-5p-expressie op autofagie in humane artrosemodel-chondrocyten

108 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/70883

⸱

31 juli 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine, 2Guangxi University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Inflammatoire stress in een IL-1β-geïnduceerd C28/I2-chondrocytenmodel verhoogde miR-590-5p en verminderde de expressie van SPRY2. Het moduleren van deze as veranderde de expressie van Beclin-1, LC3-II en Bcl-2, wat wijst op een vermoedelijke miR-590-5p/SPRY2 regulatieroute die mogelijk autofagie-geassocieerde responsen en chondrocytoverleving bij artrose beïnvloedt.

Samenvatting

Artrose (OA) is een veelvoorkomende degeneratieve gewrichtsaandoening die wordt gekenmerkt door progressieve kraakbeenvernietiging en verlies van chondrocythomeostase. Hoewel gestoorde autofagie bijdraagt aan de pathogenese van OA, blijven de moleculaire mechanismen die autofagie-geassocieerde responsen in chondrocyten aansturen onvolledig begrepen. Deze studie onderzocht de rol van de miR-590-5p/SPRY2 regulerende as in een inflammatoire OA-microomgeving met gebruik van IL-1β-geïnduceerde C28/I2 menselijke chondrocyten. Een in vitro OA-model werd ontwikkeld door C28/I2-cellen te behandelen met IL-1β. De expressie van miR-590-5p en SPRY2 werd geëvalueerd met kwantitatieve PCR en Western blotting. Gain- en -loss-of-function benaderingen werden gebruikt om de effecten van SPRY2 en miR-590-5p op de autofagie-geassocieerde markers Beclin-1 en LC3-II, evenals het overlevingsgerelateerde eiwit Bcl-2, te beoordelen. Bio-informatische analyses en reddingsexperimenten werden gebruikt om de regulatorische relatie tussen miR-590-5p en SPRY2 te onderzoeken. De behandeling met IL-1β verhoogde de expressie van miR-590-5p significant terwijl de SPRY2 mRNA- en eiwitniveaus daalden (P < 0,05). SPRY2-overexpressie verminderde de expressie van Beclin-1 en LC3-II aanzienlijk, met reducties van respectievelijk ongeveer 65% en 77% (P < 0,05). Daarentegen verhoogde de overexpressie van miR-590-5p de expressie van Beclin-1, LC3-II en Bcl-2, terwijl remming van miR-590-5p deze effecten omkeerde en de SPRY2-expressie herstelde. Functionele analyses ondersteunden SPRY2 als een verondersteld downstream reguleringsdoel van miR-590-5p. Deze bevindingen identificeren de miR-590-5p/SPRY2-as als een belangrijke regulator van autofagie-geassocieerde markerexpressie en chondrocytoverleving onder ontstekingsomstandigheden en suggereren de mogelijke relevantie ervan als therapeutisch doelwit bij OA.

Inleiding

Als de meest voorkomende vorm van artritis wereldwijd is artrose (OA) een belangrijke oorzaak van pijn, mobiliteitsbeperkingen en lichamelijke beperkingen, wat een aanzienlijke last legt op zorgsystemen en de samenleving1. Pathologisch wordt OA gekenmerkt door progressieve degeneratie van gewrichtskraakbeen, synoviale ontsteking en pathologische remodellering van subchondrale botten1. Epidemiologische schattingen geven aan dat wereldwijd ongeveer 303 miljoen mensen getroffen zijn door OA, en dit aantal zal naar verwachting toenemen met de vergrijzing van de bevolking en stijgende obesitaspercentages2. In China wordt de prevalentie van symptomatische knieartrose geschat op 8,1%, met een onevenredig hogere prevalentie onder vrouwen en plattelandsbevolkingen3. Ondanks de hoge prevalentie blijven de huidige behandelopties grotendeels beperkt tot symptoombeheer via niet-steroïde ontstekingsremmers (NSAID's) en chirurgische ingrepen bij gevorderde ziekte4. De afwezigheid van ziekte-modificerende artrosegeneesmiddelen (DMOAD's) weerspiegelt een onvolledig begrip van de moleculaire mechanismen die de homeostase en overleving van chondrocyten reguleren.

De structurele en functionele integriteit van gewrichtskraakbeen hangt af van residente chondrocyten, die de extracellulaire matrix (ECM) omzet behouden door een balans tussen anabole en katabole activiteiten6. Tijdens de progressie van OA worden chondrocyten blootgesteld aan abnormale mechanische stress en pro-inflammatoire mediatoren, met name interleukine-1β (IL-1β) en tumornecrose factor-α (TNF-α), die een verschuiving bevorderen van matrixsynthese naar matrix degradatie6. IL-1draagt β bij aan de afbraak van kraakbeen door de productie van matrixmetalloproteïnasen (MMP's) en aggrecanasen te stimuleren, terwijl het de synthese van type II collageen en proteoglycanenonderdrukt 7. Daarnaast veroorzaaktIL-1 β oxidatieve stress en mitochondriale disfunctie, wat leidt tot chondrocytapoptose en senescence8. Daarom blijft het identificeren van intracellulaire signaalroutes die de overleving van chondrozyten onder ontstekingsomstandigheden reguleren een prioriteit voor OA-onderzoek.

Autophagie is een evolutionair geconserveerde lysosomale afbraakroute die de cellulaire homeostase in stand houdt door het verwijderen en recyclen van beschadigde organellen en eiwitaggregaten9. Basale autophagie is essentieel voor het cellulaire overleven en de energiebalans; echter kan ontregelde autofagie bijdragen aan de ziekteprogressie9. Bij OA wordt autofagie over het algemeen beschouwd als een beschermende respons die chondrocyten helpt zich aan te passen aan celstress en apoptosete weerstaan 10. Eerdere studies suggereren dat autofagische activiteit afneemt tijdens de progressie van OA, vooral bij vergevorderde ziekte, wat resulteert in verminderde celkwaliteitscontrole en verhoogd chondrocytenverlies11. Verschillende eiwitten worden vaak gebruikt als indicatoren van autofagie-geassocieerde activiteit. Beclin-1 neemt deel aan de initiatie van autofagosoomen, terwijl de omzetting van microtubuli-geassocieerd eiwit 1 lichte keten 3 (LC3-I naar LC3-II) veel wordt gebruikt als marker voor de vorming van autofagosoom12. Daarentegen remt B-cel lymfoom 2 (Bcl-2) de Beclin-1-afhankelijke autofagie terwijl het ook anti-apoptotische effecten uitoefent13. Desalniettemin vereist de interpretatie van autofagie-geassocieerde markers voorzichtigheid omdat statische metingen van LC3-II en Beclin-1 niet onafhankelijk kunnen onderscheiden van versterkte autofagosoomvorming van verstoorde lysosomale degradatie. Ondanks deze beperkingen blijft modulatie van autofagie-gerelateerde routes een veelbelovende therapeutische strategie voor artrose.

MicroRNA's (miRNA's) zijn korte niet-coderende RNA's die genexpressie post-transcriptioneel reguleren door te binden aan complementaire sequenties binnen de 3′-niet-vertaalde regio's (3′-UTR's) van doel-messenger RNA's, wat resulteert in mRNA-degradatie of translationele repressie14. Abnormale miRNA-expressie is in verband gebracht met de pathogenese van OA door effecten op ontsteking, apoptose en ECM-remodellering15. Onder deze moleculen heeft miR-590-5p aandacht getrokken vanwege zijn regulerende rol in het botmetabolisme en andere pathologische processen. Eerdere studies hebben aangetoond dat miR-590-5p osteogene differentiatie bevordert en adipogenese onderdrukt in mesenchymale stamcellen16. In kankermodellen vertoont miR-590-5p contextafhankelijke functies als een oncogene of tumorsuppressieve regulator17. Bovendien zijn veranderde microRNA-expressieprofielen, waaronder leden van de miR-590-familie, betrokken bij de pathologische remodellering van gewrichtsweefsels tijdens OA18. Bewijs verkregen uit stamcel- of kankermodellen kan echter niet direct worden geëxtrapoleerd naar volwassen articulaire chondrocyten. Daarom blijft de rol van miR-590-5p bij het reguleren van chondrocytresponsen binnen de inflammatoire OA-microomgeving onvolledig begrepen.

Om mogelijke downstream-mechanismen van miR-590-5p in OA te onderzoeken, werden in silico doelvoorspellingsanalyses uitgevoerd, waarbij Sprouty2 (SPRY2) werd geïdentificeerd als een vermoedelijk downstream-doel. SPRY2 behoort tot de Sprouty-familie van eiwitten, die de signaalwisseling van receptortyrosine (tyrosine sinas) negatief reguleren en de activatie van de RAS/MAPK/ERK-route19 onderdrukken. Omdat MAPK-signalering invloed heeft op de differentiatie van chondrocyten, ontstekingsreacties en autophagie, kan SPRY2 een belangrijke regulerende knoop zijn in de OA-pathofysiologie20. Eerdere studies geven aan dat SPRY2 ontstekingsreacties kan onderdrukken in reumatoïde artritis modellen21, deelneemt aan apoptose-gerelateerde regulatie in epitheelsystemen22, en geassocieerd is met autophagie-gerelateerde responsen in ischemische letselmodellen23. Hoewel deze waarnemingen suggereren dat SPRY2 deelneemt aan de regulatie van zowel apoptose als autophagie, blijft de rol ervan in articulaire chondrocyten slecht gekarakteriseerd. Er werd daarom verondersteld dat miR-590-5p en SPRY2 een regulerende as vormen die de overleving van chondrozyten onder inflammatoire stress beïnvloedt.

Op basis van deze observaties werd voorgesteld dat miR-590-5p autofagie-geassocieerde responsen in chondrocyten moduleert door de expressie van SPRY2 te reguleren. Hoewel miR-590-5p en SPRY2 elk afzonderlijk zijn bestudeerd in andere biologische contexten, is hun functionele relatie in OA-chondrocyten niet vastgesteld. In de huidige studie werd een IL-1β-geïnduceerd OA-model in C28/I2 menselijke chondrocyten gebruikt om de expressiepatronen van miR-590-5p en SPRY2 te onderzoeken en hun effecten op de expressie van Beclin-1, LC3-II en Bcl-2 te evalueren. Door het onderzoeken van de miR-590-5p/SPRY2 regulatieas biedt deze studie inzicht in epigenetische mechanismen achter de overleving van chondrozyten en identificeert het een mogelijk therapeutisch doelwit voor artrose.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Deze studie werd uitsluitend uitgevoerd met de commercieel verkrijgbare humane chondrocytencellijn C28/I2. Er waren geen menselijke deelnemers, menselijke weefselmonsters, door patiënten afgeleide materialen of levende dieren betrokken bij dit onderzoek. Daarom waren goedkeuring door de Institutional Review Board (IRB) en goedkeuring door de Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) niet vereist volgens institutionele en nationale richtlijnen. De gereedschappen, chemicaliën, kits en reagentia die in het protocol worden gebruikt, staan vermeld in de Materiaaltabel.

1. Celcultuur en OA-modelconstructie

De humane chondrocytcellijn C28/I2 (details vermeld in de Materiaalkunde) werd verkregen van een commerciële leverancier. Om experimentele reproduceerbaarheid te waarborgen, werden cellen geauthenticeerd met behulp van short tandem repeat (STR) profilering en routinematig getest om de afwezigheid van mycoplasma-contaminatie te bevestigen. Cellen tussen passages 3 en 8 werden voor alle experimenten gebruikt. Cellen werden in DMEM gehouden, aangevuld met 10% foetaal rundereserum (FBS) en 1% penicilline-streptomycine (alle kweekreagentia zijn beschreven in de Materiaaltabel) bij 37 °C in een bevochtigde atmosfeer met 5%CO2.

Om het in vitro artrose (OA) model vast te stellen, werden C28/I2-cellen gestimuleerd met recombinant humaan IL-1β. Op basis van gevestigde literatuur 6,7, voorlopige dosis-responsoptimalisatie-experimenten die bedoeld zijn om een robuuste katabole toestand te induceren zonder overmatige onmiddellijke cytotoxiciteit, werden de cellen behandeld met 20 ng/mL IL-1β gedurende 24 uur.

2. Experimentele groepering en transfectie

Om de mechanistische paden te verduidelijken, werd de studie verdeeld in drie hoofdexperimentele modules, elk met minimaal drie onafhankelijke biologische replica's:

  1. SPRY2 Winst/Verlies van functie:
    Cellen werden toegewezen aan controle, OA-model, OA + lege vector (NC), OA + SPRY2 overexpressieplasmide (OE-SPRY2) en bijbehorende kleine interfererende RNA-groepen (si-NC en drie specifieke si-SPRY2-constructies: si-695, si-800, si-896) om te screenen op interferentie-efficiëntie.
  2. miR-590-5p modulatie:
    Cellen werden verdeeld in controlegroepen, OA-model, OA + nabootsing NC, OA + miR-590-5p mimic, OA + inhibitor NC, en OA + miR-590-5p inhibitorgroepen.
  3. Functionele validatie van de miR-590-5p/SPRY2 regulatorische relatie:
    Om de voorgestelde regulatorische relatie tussen miR-590-5p en SPRY2 verder te evalueren, werden cellen onderworpen aan miR-590-5p mimic- en inhibitorcondities om te bepalen of miR-590-5p-modulatie de SPRY2-expressie in het OA-model veranderde.
    Voor transfectie werden C28/I2-cellen in 6-wellplaten geplaatst bij 2 × 10 5-cellen per put. Bij het bereiken van 70%–80% confluentie werden transfeties uitgevoerd met een commerciële lipide-gebaseerde transfectiereagens volgens het protocol van de fabrikant en werden procedures vastgesteld voor de levering van kleine RNA's in chondrocyten24. Kort gezegd werden plasmiden (OE-SPRY2 en NC; 2 μg/well) en oligonucleotiden (miR-590-5p mimic/inhibitor en siRNA's; 50 nM) verdund in een gereduceerd serummedium. De lipide-DNA/RNA-complexen werden 15 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd voordat ze druppelwijs aan cellen in serumvrije DMEM werden toegevoegd. 6 uur na transfectie werd het medium vervangen door volledige DMEM met 10% FBS, en werden cellen nog eens 48 uur gekweekt voordat RNA en eiwit werden geëxtraheerd.

3. qPCR-detectie

Total RNA en miRNA werden geïsoleerd met behulp van een speciale miRNA-extractiekit volgens het protocol van de fabrikant. De zuiverheid en concentratie van RNA werden beoordeeld met een UV-Vis spectrofotometer, en monsters met A260/A280-verhoudingen van 1,8–2,0 werden gebruikt voor downstream-analyses. Commerciële reverse-transcriptie reagentia werden gebruikt om cDNA te synthetiseren. De qPCR-cyclusprocedure was als volgt: 95 °C gedurende 10 minuten; 40 cycli van 95 °C voor 10 seconden, 58 °C voor 30 seconden en 72 °C voor 30 seconden; gevolgd door smeltcurveanalyse om de specificiteit van primers en de afwezigheid van primerdimeren te verifiëren. β-actine en U6 dienden respectievelijk als interne controles voor mRNA en miRNA. Relatieve genexpressie werd berekend met behulp van de 2-ΔΔCt methode25. Alle primersequenties, inclusief die voor Col-II, SPRY2, Beclin-1, LC3, Bcl-2, miR-590-5p en referentiegenen, zijn vermeld in Tabel 1.

Naam van de primer Voorste primer (5′-3′)Achterste primer (5′-3′)
U6ATTGGAACGATACAGAGAAGATTGGAACGCTTCACGAATTTG
miR-590-5pGCGTAAGGCACGCGGGTGAGTGCAGGGTCCGAGGTATT
β-actineTGGCACCCAGCACAATGAACTAAGTCATAGTCCGCCTAGTAGAAGCA
SPRY2TAAGCCACTGAGCAAGGAAGATTGGAAGGTAACACCATAAACAAGG
Bcl-2TGGGATTCCTGCGGATTGACTCAGTCTACTTCCTCTGTGATGTTG
Beclin-1TCCCGTGGAATGGAATGAGAGTAAGGAACAAGTCGGTATCTCTG
LC3-IICATCCAACCAAAATCCCGGTGAGCTGTAAGCGCCTTCTAA

Tabel 1: Primersequenties gebruikt voor kwantitatieve PCR (qPCR) analyse. Voor- en achteruitprimersequenties gebruikt voor de amplificatie en kwantificering van doeltranscripten en interne referentiecontroles door qPCR.

Tenzij anders gespecificeerd, worden gegevens uitgedrukt als gemiddelde ± standaarddeviatie (SD). De statistische significantie werd bepaald met eenrichtings-ANOVA, gevolgd door de S-N-K post hoc test. Symbolen geven aan: *P < 0,05 vs. Controle; #P < 0,05 versus het aangegeven model of de negatieve controlegroep; &P < 0,05 vs. OA+Remmer-NC.

4. Western blotdetectie

Cellen werden geoogst en gelyseerd met behulp van een RIPA-buffer aangevuld met protease- en fosfataseremmercocktails, na vastgestelde eiwitextractie- en immunoblottingprocedures. Na centrifugatie bij 14.000 × g gedurende 15 minuten bij 4 °C om cellulair afval te verwijderen, werd het supernatant verzameld en werden eiwitconcentraties gekwantificeerd met behulp van een BCA-eiwitassaykit. Gelijke hoeveelheden eiwitlysaat (30 μg) werden gedenatureerd, 1,5 uur door SDS-PAGE opgelost en 1,5 uur26 uur overgebracht op PVDF-membranen bij 300 mA. De membranen werden geblokkeerd met 5% magere droge melk in Tris-gebufferde zoutoplossing met 0,1% Tween 20 (TBST) gedurende 1 uur bij kamertemperatuur, gevolgd door incubatie bij 4 °C gedurende 16 uur met specifieke primaire antilichamen (bijv. anti-SPRY2, 1:1000 verdunning). Na drie washes in TBST werden membranen geïncubeerd met geschikte HRP-geconjugeerde secundaire antilichamen bij kamertemperatuur gedurende 2 uur. Eiwitbanden werden gevisualiseerd met een ECL-detectiesysteem en gekwantificeerd met ImageJ-software.

5. Statistische analyse

De gegevens werden geanalyseerd met behulp van statistische analysesoftware. Alle experimenten werden uitgevoerd met ten minste drie onafhankelijke biologische replicaten (n ≥ 3), en kwantitatieve gegevens worden gepresenteerd als het gemiddelde ± standaarddeviatie (SD). Voor parametrisch testen werd de normaliteit van de data beoordeeld met de Shapiro-Wilk-test en werd de homogeniteit van variantie beoordeeld. De statistische significantie tussen meerdere groepen werd geëvalueerd met behulp van eenrichtingsvariantieanalyse (ANOVA), gevolgd door de Student-Newman-Keuls (S-N-K) post hoc-test voor meervoudige vergelijkingen. P < 0,05 werd als statistisch significant beschouwd.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Vaststelling van het in vitro chondrocyt-inflammatoire model

Om de moleculaire mechanismen achter de pathologie van artrose te onderzoeken, werd een in vitro ontstekingsmodel ontwikkeld met C28/I2 menselijke chondrocyten gestimuleerd met IL-1β. De validiteit van dit model werd bevestigd door het beoordelen van de expressie van collageen type II alfa 1-keten (Col-II), een primaire component van de extracellulaire matrix van het hyalien...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Eerdere studies hebben aangetoond dat miRNA's autofagie in meerdere stadia reguleren, waaronder initiatie, blaasverlenging en rijping27. De betrokkenheid van miRNA bij de pathogenese van OA is steeds vaker gedocumenteerd, met name door effecten op ontsteking, apoptose, extracellulaire matrixremodellering en autophagie-gerelateerde routes. miR-590-5p is in verband gebracht met cellulaire homeostase en kankergerelateerde processen 28,29,30.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren geen concurrerende belangen.

Dankbetuigingen

De auteurs bedanken de afdeling Geriatrie van het Ruikang Ziekenhuis, Guangxi Universiteit voor Chinese Geneeskunde, voor het bieden van experimentele faciliteiten en technische ondersteuning voor deze studie. De auteurs bedanken ook het laboratoriumpersoneel en collega's voor hun hulp bij het verzamelen en analyseren van gegevens. Dit werk werd ondersteund door het Natural Science Research Project van de Guangxi University of Chinese Medicine (Subsidienummer 2022MS039; LncRNA-GAS5 mediaert SPRY2-expressie om autofagie te remmen in muisknie-argitroschondrocyten: Mechanismestudie en vroegtijdig interventie-effect van Huayu Qushi-voorschrift) en de National Natural Science Foundation of China (Regionale Stichting) (Subsidie nr. 82160912; Mechanismebespreking over Skp2-ubiquitinatie, degradatie van FoxO1, remming van knie-OA, chondrocytautofagie en vroege interventie-effect van Huayu Qushi-recept.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Anti-β-actin antilichaamProteintech66009-1-Ig ; RRID: AB_2687938Interne laadcontrole voor Western blot-analyse
Anti-SPRY2 antilichaamProteintech11383-1-AP ; RRID: AB_2196324Detectie van SPRY2-eiwitexpressie
BCA-eiwitanalysekitThermo Fisher Scientific23225Bepaling van de totale eiwitconcentratie
C28/I2 menselijke chondrocytcellijnPunocelCP-H107In vitro chondrocytmodel voor osteoartritisstudies
Complete DMEMKeyGen BiotecKGM12800SBasismedium voor routinecellencultuur
CWBIO Ultrapure miRNA-extractiekitCWBIOCW0627SIsolatie van totaal RNA en miRNA
ECL-detectiesysteemThermo Fisher Scientific32106Chemiluminescentievisualisatie van eiwitbanden
Foetaal runder serum (FBS)Gibco1891605Celcultuur groeisuplement
GraphPad Prism versie 9.0GraphPad SoftwareN/AStatistische analyse en grafiekgeneratie
HiScript II Q RT SuperMixVazymeR223-01Omgekeerde transcriptie van mRNA naar cDNA
ImageJ softwareNational Institutes of HealthN/AKwantificering van Western blot bandintensiteit
Lipofectamine 3000InvitrogenL3000015Transfectie van plasmiden en oligonucleotiden
miR-590-5p nabootser, remmer en NC'sRiboBioOp bestelling gesynthetiseerdModulatie van miR-590-5p expressie
miRNA 1st Strand cDNA SynthesekitVazymeMR101-02Omgekeerde transcriptie van miRNA naar cDNA
Opti-MEM mediumGibco31985-062Bereiding van transfectiecomplexen
Penicilline-streptomycineGibco15140122Voorkomen van bacteriële besmetting in cellencultuur
Protease- en fosfataseremmercocktailsMedChemExpressHY-K0010Bescherming van eiwitten tijdens extractie
PVDF-membranenMillipore SigmaISEQ00010Eiwittransfermembraan voor immunoblotting
Recombinant humaan IL-1βMedChemExpressHY-P78459Inductie van OA-achtige inflammatoire omstandigheden
RIPA-bufferBeyotimeP0013BCellyse en eiwitextractie
si-SPRY2 constructies en si-NCGenePharmaOp bestelling gesynthetiseerdKnockdown van SPRY2 expressie
SPRY2 overexpressieplasmide (OE) en lege vector (NC)GeneChemOp bestelling geconstrueerdEvaluatie van SPRY2 overexpressie effecten
UV-VIS spectrofotometer (NanoDrop 2000)Thermo Fisher ScientificND-2000Meting van RNA-concentratie en zuiverheid

Referenties

  1. Hunter DJ, Bierma-Zeinstra S. Osteoarthritis. Lancet. 2019;393:1745-59.
  2. GBD 2019 Diseases and Injuries Collaborators. Global burden of 369 diseases and injuries in 204 countries and territories, 1990-2019: A systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2019. Lancet. 2020;396:1204-22.
  3. Tang X, et al. The prevalence of symptomatic knee osteoarthritis in China: Results from the China Health and Retirement Longitudinal Study. Arthritis Rheumatol. 2016;68:648-53.
  4. Latourte A, Kloppenburg M, Richette P. Emerging pharmaceutical therapies for osteoarthritis. Nat Rev Rheumatol. 2020;16:673-88.
  5. Glyn-Jones S, et al. Osteoarthritis. Lancet. 2015;386:376-87.
  6. Kapoor M, et al. Role of proinflammatory cytokines in the pathophysiology of osteoarthritis. Nat Rev Rheumatol. 2011;7:33-42.
  7. Goldring MB, Otero M. Inflammation in osteoarthritis. Curr Opin Rheumatol. 2011;23:471-8.
  8. Lepetsos P, Papavassiliou AG. ROS/oxidative stress signaling in osteoarthritis. Biochim Biophys Acta. 2016;1862:576-91.
  9. Mizushima N, Komatsu M. Autophagy: Renovation of cells and tissues. Cell. 2011;147:728-41.
  10. Caramés B, Olmer M, Kiosses WB, Lotz MK. The relationship of autophagy defects to cartilage damage during joint aging in a mouse model. Arthritis Rheumatol. 2015;67:1568-76.
  11. Lotz MK, Caramés B. Autophagy and cartilage homeostasis mechanisms in joint health, aging and OA. Nat Rev Rheumatol. 2011;7:579-87.
  12. Kabeya Y, et al. LC3, a mammalian homologue of yeast Apg8p, is localized in autophagosome membranes after processing. EMBO J. 2000;19:5720-8.
  13. Pattingre S, et al. Bcl-2 antiapoptotic proteins inhibit Beclin 1-dependent autophagy. Cell. 2005;122:927-39.
  14. Bartel DP. MicroRNAs: Genomics, biogenesis, mechanism, and function. Cell. 2004;116:281-97.
  15. Miyaki S, Asahara H. Macro view of microRNA function in osteoarthritis. Nat Rev Rheumatol. 2012;8:543-52.
  16. Wu Z, Lin Y, Zhang Z, Pan Y. Melatonin-mediated miR-526b-3p and miR-590-5p upregulation promotes chondrogenic differentiation of human mesenchymal stem cells. J Pineal Res. 2018;65:e12483.
  17. Chen M, Wang S, Chen Y. miR-590-5p suppresses hepatocellular carcinoma chemoresistance by targeting YAP1 expression. EBioMedicine. 2018;35:142-54.
  18. Endisha H, Rockel J, Jurisica I, Kapoor M. The complex landscape of microRNAs in articular cartilage: biology, pathology, and therapeutic targets. JCI Insight. 2018;3:e98630.
  19. Guy GR, Jackson RA, Yusoff P, Chow SY. Sprouty proteins: Modified modulators, matchmakers or missing links? J Endocrinol. 2009;203:191-202.
  20. Loeser RF. Integrins and chondrocyte-matrix interactions in articular cartilage. Matrix Biol. 2014;39:11-6.
  21. Zhang W, Chen L, Xiong Y. Intraarticular gene transfer of SPRY2 suppresses adjuvant-induced arthritis in rats. Appl Microbiol Biotechnol. 2015;99:6727-35.
  22. Liu Y, et al. MicroRNA-124 facilitates lens epithelial cell apoptosis by inhibiting SPRY2 and MMP-2. Mol Med Rep. 2021;23:381.
  23. Wu Y, Gao Z, Zhang J. Transcription factor E2F1 aggravates neurological injury in ischemic stroke via microRNA-122-targeted Sprouty2. Neuropsychiatr Dis Treat. 2020;16:2633-47.
  24. Jiang P, Zheng Z, Tang Y. miR-590-5p affects chondrocyte proliferation, apoptosis, and inflammation by targeting FGF18 in osteoarthritis. Am J Transl Res. 2021;13:8728-41.
  25. Livak KJ, Schmittgen TD. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) method. Methods. 2001;25:402-8.
  26. Towbin H, Staehelin T, Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: Procedure and some applications. Proc Natl Acad Sci U S A. 1979;76:4350-4.
  27. Panagopoulos PK, Lambrou GI. The involvement of microRNAs in osteoarthritis and recent developments: A narrative review. Mediterr J Rheumatol. 2018;29:67-79.
  28. Barwal TS, Sharma P. miR-590-5p: A double-edged sword in the oncogenesis process. Cancer Treat Res Commun. 2022;32:100593.
  29. Mou K, Chen M. miR-590-5p inhibits tumor growth in malignant melanoma by suppressing YAP1 expression. Oncol Rep. 2018;40:2056-66.
  30. D'Adamo S, et al. Autophagy in osteoarthritis: a target for new therapies. Curr Rheumatol Rep. 2020;22:37.
  31. Agarwal V, Bell GW, Nam JW, Bartel DP. Predicting effective microRNA target sites in mammalian mRNAs. eLife. 2015;4:e05005.
  32. Friedman RC, Farh KK, Burge CB, Bartel DP. Most mammalian mRNAs are conserved targets of microRNAs. Genome Res. 2009;19:92-105.
  33. Lee CC, et al. Overexpression of sprouty 2 inhibits HGF/SF-mediated cell growth, invasion, migration, and cytokinesis. Oncogene. 2004;23:5193-202.
  34. Frank MJ, et al. Expression of sprouty2 inhibits B-cell proliferation and is epigenetically silenced in mouse and human B-cell lymphomas. Blood. 2009;113:2478-87.
  35. Cui S, et al. Hsa-miR-22-3p inhibits liver cancer cell EMT and cell migration/invasion by indirectly regulating SPRY2. PLoS One. 2023;18:e0281536.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

GeneeskundeEditie 233Editie 233Lege waardeEditieC28/I2-cellenhumaan artrosemodel (OA)miRNA-590-5pBeclin-1LC3IIBcl-2
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.