Dit protocol beschrijft een benadering om biologisch bloedplaatjerijk fibrine te verfijnen door verrijking met cobalamine en alfa-tocopherol vóór centrifugatie, waardoor gecontroleerde modulatie van groeifactor- en cytokineafgifte onder in vitro omstandigheden mogelijk is.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Onderzoeksartikel
Verrijking van bloedplaatrijk fibrine met cobalamine en alfa-tocopferol om de afgifte van groeifactoren te moduleren
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Bloedplaatje-rijk fibrine (PRF) is een autologe biomateriaal dat veel wordt gebruikt in regeneratieve tandheelkunde vanwege de biocompatibiliteit en de aanhoudende afgifte van groeifactoren. Recent onderzoek is verschoven naar biologisch moduleren van PRF om de regeneratieve prestaties te verbeteren zonder de fundamentele voorbereidingsprincipes te veranderen. Deze studie presenteert een protocol voor biologisch fijne afstemming van PRF door verrijking met cobalamine en alfa-tocopherol voorafgaand aan centrifugatie en evalueert hun effecten op groeifactor en pro-inflammatoire cytokineafgifte onder in vitro omstandigheden. Perifere bloedmonsters afkomstig van gezonde vrijwilligers werden verwerkt met een vast centrifugatieprotocol. Cobalamine of alfa-tocopherol werd aan volbloed toegevoegd vóór centrifugatie om bioactief gemodificeerde PRF-matrices te verkrijgen. De releaseprofielen van platelet-derived growth factor (PDGF), transforming growth factor-β1 (TGF-β1), vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF), insuline-achtige groeifactor-1 (IGF-1), fibroblast growth factor-2 (FGF-2), interleukine-1β (IL-1β) en tumornecrose factor-α (TNF-α) werden gekwantificeerd na 24 uur en 72 uur met behulp van een enzym-gekoppelde immunosorbentassay. Cobalamine-verrijkte PRF was geassocieerd met significante intergroepverschillen in TGF-β1-niveaus en een verminderde afgifte van pro-inflammatoire cytokines, wat wijst op een verschuiving naar een gunstigere regeneratieve microomgeving. Daarentegen waren de waargenomen verhogingen in FGF-2 en IGF-1 tijdsafhankelijk en werden ze in alle groepen gedetecteerd, zonder een cobalamin-specifiek effect aan te tonen. Alpha-tocopherolverrijkte PRF vertoonde een selectieve toename in VEGF-afgifte, wat wijst op een mogelijke proangiogene invloed. Deze bevindingen tonen aan dat gerichte vitamineverrijking gecontroleerde modulatie van de bioactiviteit van PRF mogelijk maakt, terwijl de autologe en anticoagulantia-vrije aard behouden blijft. Dit protocol biedt een praktisch kader voor biologisch fijn afstemming van PRF en ondersteunt het gebruik ervan als een stembaar regeneratief platform voor toekomstige translationele en klinische toepassingen.
Inleiding
Bloedplaatjerijk fibrine (PRF) is een autoloog bloedplaatjesconcentraat van de tweede generatie dat breed is toegepast in de parodontologie, implantaattandheelkunde en mondchirurgie vanwege de biocompatibiliteit, het gemak van bereiding en de capaciteit voor langdurige afgifte van groeifactoren 1,2. PRF wordt verkregen door centrifugatie van volbloed zonder gebruik van antistollingsmiddelen of exogene activatoren, wat resulteert in een driedimensionale fibrinematrix die bloedplaatjes en leukocyten opsluit. Deze cellulaire componenten dienen als endogene reservoirs van groeifactoren, waaronder de bloedplaatje-afgeleide groeifactor (PDGF), transformerende groeifactor-β1 (TGF-β1), vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF), insuline-achtige groeifactor-1 (IGF-1) en fibroblastgroeifactor-2 (FGF-2), die gezamenlijk angiogenese, celmigratie, proliferatie en extracellulaire matrixremodellering tijdens weefselregeneratie 3,4 reguleren.
Naast de biologische samenstelling wordt de regeneratieve prestaties van PRF sterk beïnvloed door de architectuur van het fibrinenetwerk en de biologische activiteit van de cellulaire bestanddelen. Om deze reden zijn recente onderzoeken verder gegaan dan conventionele voorbereidingsprotocollen en zijn ze begonnen PRF te conceptualiseren als een biologisch instelbaar draagsysteem in plaats van een passieve steiger 5,6. Structurele modificatiestrategieën, zoals de opname van biomaterialen zoals hyaluronzuur en collageen, hebben aangetoond dat de fysieke en mechanische eigenschappen van PRF kunnen worden veranderd, wat leidt tot veranderingen in fibrineorganisatie, mechanische stabiliteit en groeifactor-afgiftekinetiek7. Deze bevindingen hebben bijgedragen aan een groeiende hoeveelheid bewijs die de aanpassingsvermogen van PRF ondersteunt aan specifieke regeneratieve behoeften.
Parallel aan biomateriaalgebaseerde benaderingen is vitamine-gebaseerde verrijking ontstaan als een biologisch relevante strategie om de bioactiviteit van PRF te moduleren. Vitaminen staan erom bekend fundamentele cellulaire processen te reguleren, zoals metabolisme, redoxbalans, collageensynthese, angiogenese en ontstekingssignalering. In het bijzonder is aangetoond dat vitaminen zoals ascorbinezuur, cholecalciferol, cobalamine en alfa-tocopherol het cellulaire gedrag en weefselgenezing via verschillende moleculaire routesbeïnvloeden. Eerdere in vitro studies hebben aangetoond dat vitamine-verrijkte PRF-formuleringen groeifactor-releaseprofielen, ontstekingscytokinenexpressie en biomechanische eigenschappen van de fibrinematrix kunnen moduleren, wat aangeeft dat vitaminesuppletie een effectieve manier is om PRF biologisch te modificeren zonder de autoloog aard ervante veranderen 9.
Cobalamine (vitamine B12) en alfa-tocopherol (vitamine E) zijn essentiële micronutriënten die betrokken zijn bij belangrijke biologische processen die relevant zijn voor weefselhomeostase en -herstel. Vitamine B12 speelt een cruciale rol in de synthese van nucleïnezuren, het cellulaire metabolisme en erytropoëse, en het tekort ervan is in verband gebracht met orale mucosale veranderingen en afbraak van parodontale weefsel10,11. Vitamine E functioneert als een krachtige antioxidant die lipideperoxidatie beperkt, oxidatieve stress vermindert en bijdraagt aan collageenstabilisatie en modulatie van ontstekingsreacties12,13. Belangrijk is dat, hoewel het huidige werk voortbouwt op eerdere onderzoeken naar verschillende biologische en fysiologische modulatoren van PRF, de huidige studie een specifiek protocol introduceert voor verrijking met cobalamine en alfa-tocopherol voorafgaand aan centrifugatie. Het doel van deze studie is daarom om een reproduceerbaar protocol te beschrijven voor de bereiding van cobalamine- en alfa-tocopherolverrijkte PRF en om de effecten van deze bioactieve fine-tuning benadering op groeifactor- en pro-inflammatoire cytokineafgifte onder in vitro omstandigheden te evalueren.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Deze experimentele studie werd uitgevoerd in overeenstemming met de ethische principes zoals uiteengezet in de Verklaring van Helsinki en kreeg goedkeuring van de Commissie voor Ethiek Klinisch Onderzoek van de Universiteit van Çukurova (Goedkeuringsnr: 139/25; Datum: 8 december 2023). Voorafgaand aan deelname werden alle deelnemers geïnformeerd over de studieprocedures en werd schriftelijke geïnformeerde toestemming van elke deelnemer verkregen. Alle procedures met menselijke bloedmonsters werden uitgevoerd in overeenstemming met institutionele bioveiligheidsvoorschriften. Geschikte persoonlijke beschermingsmiddelen (PBM), waaronder handschoenen, maskers en laboratoriumjassen, werden gedurende het hele experimentele proces gebruikt. Biologische materialen werden behandeld met aseptische technieken en al het afval werd afgevoerd volgens vastgestelde biohazard-beheerprotocollen. Alle reagentia, verbruiksartikelen en apparatuur die in deze studie zijn gebruikt, staan vermeld in de Materiaaltabel, inclusief fabrikantgegevens en relevante specificaties om reproduceerbaarheid te waarborgen.
1. Selectie van deelnemers
Deelnemers werden gerekruteerd uit systematisch gezonde volwassenen tussen 20 en 30 jaar die voldoende naleving van de studieprocedures aantoonden. Personen met een voorgeschiedenis van systemische ziekten, hematologische aandoeningen of aandoeningen waarvan bekend is dat ze de bloedplaatjesfunctie of wondengenezing beïnvloeden, werden niet als geschikt beschouwd. Aanvullende uitsluitingscriteria waren zwangerschap of lactatie, huidig roken, recente infectie, bekende overgevoeligheid voor cobalamine of alfa-tocopherol, en het gebruik van vitaminesupplementen of medicijnen die de bloedplaatjesactiviteit in de voorgaande zes maanden konden verstoren. Om de biologische variabiliteit te verminderen, werden alleen vrijwilligers met normale baseline hematologische bevindingen opgenomen, en alle deelnemers werden voorafgaand aan opname geëvalueerd om geschiktheid voor PRF-voorbereiding te waarborgen. Als een voorlopig verkennend klinisch onderzoek gebruikte deze studie een steekproefgrootte gebaseerd op haalbaarheid en de beschikbaarheid van in aanmerking komende deelnemers gedurende de studieperiode, en werden steekproeven van twaalf deelnemers geanalyseerd.
2. Bloedafname en groepstoewijzing
Perifeer veneus bloed werd van elke deelnemer afgenomen met toevoegingsvrije glazen buisjes van 10 mL onder aseptische omstandigheden. In totaal werden er vijf buizen per deelnemer verkregen. Eén buis werd toegewezen voor volledige bloedtellinganalyse, en één buis werd gebruikt om de basisniveau serumcobalamine en alfa-tocopferolwaarden te bepalen. De overige drie buizen werden toegewezen voor de bereiding van bloedplaatrijk fibrine (PRF). Hiervan diende één buis als controlegroep voor PRF zonder toevoegingen, één buis kreeg cobalamine (1 mL) vóór centrifugatie om cobalamin-verrijkte PRF te verkrijgen, en één buis kreeg alfa-tocopherol (0,5 mL) voorafgaand aan centrifugatie om alfa-tocopheroolverrijkte PRF te verkrijgen. Cobalamine werd toegediend als een steriele injecteerbare oplossing (1000 μg/mL), en alfa-tocoperole werd gebruikt in ampulvorm (2 mL). Alle monsters werden direct na bloedafname verwerkt om voortijdige stolling te voorkomen.
3. PRF voorbereiding
Perifere veneuze bloedmonsters werden van elke deelnemer afgenomen met behulp van steriele, antistollingsvrije glazen buizen. Direct na de verzameling werden de buizen in een centrifuge geplaatst en zonder vertraging verwerkt om voortijdige stolling te voorkomen. Centrifugatie werd uitgevoerd bij 2700 tpm (708 × g) gedurende 12 minuten (bij kamertemperatuur) met een rotorsysteem met vaste hoek. Na voltooiing van de centrifugatie werden drie duidelijke lagen waargenomen: een lagere rode bloedcelfractie, een bovenste plasmalaag met weinig bloedplaatjes en een intermediair fibrine-stolsel dat het bloedplaatje-rijke fibrine (PRF) vertegenwoordigt. Het PRF-stolsel werd zorgvuldig gescheiden van de rode bloedcellaag met behulp van steriele instrumenten en geïsoleerd voor verdere verwerking. Voor de bereiding van verrijkte PRF-groepen werden de aangewezen additieven direct voorafgaand aan centrifugatie in de bloedmonsters gebracht onder gestandaardiseerde omstandigheden. Deze aanpak maakte het mogelijk om bioactieve verbindingen in de zich ontwikkelende fibrinematrix te integreren tijdens de vorming van stolsels (Figuur 1).
Figuur 1: Stroomdiagram dat het methodologische protocol voor het verkrijgen van de PRF-monsters demonstreert. 1 mL cobalamine (A) en 0,5 mL alfa-tocopherol (B) werden aan bloedmonsters toegevoegd voorafgaand aan centrifugatie. De resulterende PRF-monsters bevinden zich in de buisjes (C) en nadat ze van de rode bloedcellaag (D) zijn gescheiden. Definitieve cobalamine-verrijkte PRF (E) en alfa-tocopherol-verrijkte PRF (F). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
4. In vitro incubatie van PRF-monsters
Elk PRF-stolsel werd in een steriele buis geplaatst, en celkweekmedium werd toegevoegd in een gestandaardiseerde verhouding van 1 mL per 1 g stolsel (1:1, v/w) om een consistente diffusieomgeving over alle monsters te garanderen. De buizen werden op een orbitale shaker geplaatst en geïncubeerd bij 37 °C gedurende een totale duur van 72 uur om de geleidelijke afgifte van groeifactoren en cytokines uit de PRF-matrix te vergemakkelijken. Supernatanten werden verzameld bij 24 uur en 72 uur, overgebracht in steriele microbuisjes en opgeslagen bij −80 °C tot verdere analyse. Celkweekmedium werd zonder serumsuppletie gebruikt om interferentie door exogene groeifactoren te voorkomen en om te waarborgen dat alle gemeten biomoleculen uitsluitend afkomstig waren van de PRF-matrix.
5. ELISA-analyse van groeifactor
De concentraties van plaatlet-afgeleide groeifactor (PDGF), transformerende groeifactor-β1 (TGF-β1), vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF), insuline-achtige groeifactor-1 (IGF-1), fibroblast groeifactor-2 (FGF-2), interleukine-1β (IL-1β) en tumornecrosefactor-α (TNF-α) in de verzamelde supernatanten werden gekwantificeerd met enzym-gekoppelde immunosorbent-assay kits volgens de instructies van de fabrikanten. De absorptiewaarden werden gemeten op 450 nm met een microplaatlezer, en de analytenconcentraties werden berekend op basis van standaard kalibratiecurves.
6. Statistische analyse
Statistische analyses werden uitgevoerd met IBM SPSS Statistics for Windows (versie 20.0). De gegevens werden uitgedrukt als gemiddelde ± standaarddeviatie en mediaan (minimum–maximum), indien van toepassing. De normaliteit van de gegevensverdeling werd beoordeeld met behulp van de Shapiro–Wilk-test. Intra-groep vergelijkingen tussen tijdspunten werden uitgevoerd met behulp van de gepaarde t-test of Wilcoxon teken-rang test, terwijl intergroepsvergelijkingen werden uitgevoerd met herhaalde maatstaven van variantie of de Friedman-test, afhankelijk van toepassing. Een p-waarde van <0,05 werd als statistisch significant beschouwd.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Succesvolle voorbereiding van controle, cobalamin-verrijkte en alfa-tocopherol-verrijkte plaatjesrijke fibrine (PRF) werd bij alle deelnemers bereikt. Macroscopisch onderzoek bevestigde de vorming van goed gestructureerde PRF-stolsels met behouden fibrine-integriteit en voldoende mechanische stabiliteit, waardoor gestandaardiseerde behandeling, incubatie en daaropvolgende biochemische analyses mogelijk werden (Tabel 1).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De huidige studie toont aan dat bloedplaatjerijk fibrine (PRF) biologisch kan worden verfijnd door gerichte verrijking met cobalamine en alfa-tocopherol vóór centrifugatie, wat resulteert in een duidelijke en reproduceerbare modulatie van groeifactor- en cytokineafgifteprofielen. Deze bevindingen versterken het zich ontwikkelende concept dat PRF niet slechts een passief autoloog raamwerk is, maar een biologisch responsieve matrix waarvan het regeneratieve gedrag kan worden aangepast door...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Alpha-Tocopherol (Vitamin E) | AKSU FARMA, Istanbul, Turkey | A11HA03 | Ampule EVIGEN 2 mL |
| Centrifuge (40° fixed-angle rotor) | Process for PRF, Nice, France | 913023410238 | Duo Centrifuge |
| Cobalamin (Vitamin B12) | DEVA HOLDING, Istanbul, Turkey | B03BA01 | Ampule DODEX 1000 mcg/mL |
| Eppendorf Tubes | Axygen | PCR-02-C | 200 stuks |
| Glass Blood Collection Tubes | Hema & Tube (Istanbul, Turkey) | HNM8080 | (10 mL) Geen anticoagulantia |
| HRP Solution | Inbegrepen in ELISA kit | ||
| Human ELISA Kit - FGF | Wuhan Fine Biotech | EH0541 | Fine Test |
| Human ELISA Kit - IGF-1 | Wuhan Fine Biotech | ER0030 | Fine Test |
| Human ELISA Kit - PDGF | Wuhan Fine Biotech | ER1240 | Fine Test |
| Human ELISA Kit - TGFβ-1 | Wuhan Fine Biotech | EH0287 | Fine Test |
| Human ELISA Kit - VEGF | Wuhan Fine Biotech | EH0327 | Fine Test |
| Human IL-1β ELISA Kit | Wuhan Fine Biotech | EH0185 | Fine Test |
| Human TNF-α ELISA Kit | Wuhan Fine Biotech | EH0302 | Fine Test |
| Micropipettes & Tips | Eppendorf | 3123000063 | 1 Set |
| Microplate Reader | Biochrome | EZ Read 400 | 450 nm |
| Orbital Shaker | Stuart | SSM3 | Mini Gyro-Rocke |
| Precision Scale | Sartorius | H51-D | 1 stuk |
| RPMI-1640 Cell Culture Medium | HyClone, Cytiva, USA | SH30027.01 | 500 mL |
| Sterile Scissors | ASA Dental (Istanbul, Turkey) | 0305-1 | 1 stuk |
| Stop Solution | Inbegrepen in ELISA kit | ||
| Substrate Solution | Inbegrepen in ELISA kit | ||
| Wash Buffer | Inbegrepen in ELISA kit |
Referenties
- Dohan, D. M., Choukroun, J., Diss, A., Dohan, S. L., Dohan, A. J. J., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part I: technological concepts and evolution. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e37-e44 (2006).
- Miron, R. J., Zucchelli, G., Pikos, M. A., Salama, M., Lee, S., et al. Use of platelet-rich fibrin in regenerative dentistry: a systematic review. Clin Oral Investig. 21 (6), 1913-1927 (2017).
- Kobayashi, E., Flückiger, L., Fujioka-Kobayashi, M., Sawada, K., Sculean, A., et al. Comparative release of growth factors from PRP, PRF, and advanced-PRF. Clin Oral Investig. 20 (9), 2353-2360 (2016).
- Choukroun, J., Diss, A., Simonpieri, A. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part IV: clinical effects on tissue healing. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101 (3), e56-e60 (2006).
- Miron, R. J., Fujioka-Kobayashi, M., Bishara, M., Zhang, Y., Hernandez, M., Choukroun, J. Platelet-rich fibrin and soft tissue wound healing: a systematic review. Tissue Eng Part B Rev. 23 (1), 83-99 (2017).
- Ghanaati, S., Booms, P., Orlowska, A., Kubesch, A., Lorenz, J., et al. Advanced platelet-rich fibrin: a new concept for cell-based tissue engineering by means of inflammatory cells. J Oral Implantol. 40 (6), 679-689 (2014).
- Demirbilek, F., Alkaya, B., Ucak Turer, O., Yilmaz, M. B., Haytac, M. C., Ozcan, M. Enhancing platelet-rich fibrin: influence of hyaluronic acid and collagen on growth factor release and biomechanical properties in vitro. J Vis Exp. (222), e68693 (2025).
- Fawzy El-Sayed, K. M., Cosgarea, R., Sculean, A., Doerfer, C. Can vitamins improve periodontal wound healing/regeneration?. Periodontol 2000. 94 (1), 539-602 (2024).
- Ozcan, M., Topcu, B. E., Alkaya, B., Yilmaz, M. B., Ucak Turer, O., Haytac, M. C. Effects of ascorbic acid and cholecalciferol on growth factor release, cytokines, and biomechanical properties of platelet rich fibrin: in vitro. study. BMC Oral Health. 26 (1), 262 (2026).
- Kozlak, S. T., Walsh, S. J., Lalla, R. V. Reduced dietary intake of vitamin B12 and folate in patients with recurrent aphthous stomatitis. J Oral Pathol Med. 39 (5), 420-423 (2010).
- Alekhya, K., Muppirala, S. Oral manifestations of vitamin B12 (cobalamin) deficiency: a review. Int Healthc Res J. 3 (1), 9-15 (2019).
- Pavithra, R., Ramaprabha, G., Rajasekar, S., Lakshmi Sree, S. Vitamin deficiency and periodontal disease: a tie-in relationship. Sch J Appl Med Sci. 5 (1A), 74-81 (2017).
- Singh, N., Chander Narula, S., Kumar Sharma, R., Tewari, S., Kumar Sehgal, P. Vitamin E supplementation, superoxide dismutase status, and outcome of scaling and root planing in patients with chronic periodontitis: a randomized clinical trial. J Periodontol. 85 (2), 242-249 (2014).
- Miron, R. J., Fujioka-Kobayashi, M., Sculean, A., Zhang, Y. Optimization of platelet-rich fibrin. Periodontol 2000. 94 (1), 79-91 (2024).
- Miron, R. J., Estrin, N. E., Ahmad, P., Farshidfar, N., Fujioka-Kobayashi, M., et al. Thirty years of autologous platelet concentrates: from platelet-rich plasma to platelet-rich fibrin. J Periodontal Res. , (2025).
- Caruana, A., Savina, D., Macedo, J. P., Soares, S. C. From platelet-rich plasma to advanced platelet-rich fibrin: biological achievements and clinical advances in modern surgery. Eur J Dent. 13 (2), 280-286 (2019).
- Pietruszka, P., Chruścicka, I., Duś-Ilnicka, I., Paradowska-Stolarz, A. PRP and PRF-subgroups and divisions when used in dentistry. J Pers Med. 11 (10), 944 (2021).
- Dohan Ehrenfest, D. M., Bielecki, T., Jimbo, R., Barbé, G., Del Corso, M., et al. Do the fibrin architecture and leukocyte content influence the growth factor release of platelet concentrates? An evidence-based answer comparing a pure platelet-rich plasma (P-PRP) gel and a leukocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF). Curr Pharm Biotechnol. 13 (7), 1145-1152 (2012).
- Schär, M. O., Diaz-Romero, J., Kohl, S., Zumstein, M. A., Nesic, D. Platelet-rich concentrates differentially release growth factors and induce cell migration in vitro. Clin Orthop Relat Res. 473 (5), 1635-1643 (2015).
- Isobe, K., Watanebe, T., Kawabata, H., Kitamura, Y., Okudera, T., et al. Mechanical and degradation properties of advanced platelet-rich fibrin (A-PRF), concentrated growth factors (CGF), and platelet-poor plasma-derived fibrin (PPTF). Int J Implant Dent. 3 (1), 17 (2017).
- El Bagdadi, K., Kubesch, A., Yu, X., Al-Maawi, S., Orlowska, A., et al. Reduction of relative centrifugal forces increases growth factor release within solid platelet-rich-fibrin (PRF)-based matrices: a proof of concept of LSCC (low speed centrifugation concept). Eur J Trauma Emerg Surg. 45 (3), 467-479 (2019).
- Yaşar, N. &. #. 1. 9. 9. ;., Ünsal, G., Kocaelli, H. A., Orhan, K., Sağ, F. B. Comparative analysis of local application of titanium-platelet rich fibrin (T-PRF) and leukocyte-platelet rich fibrin (L-PRF) in bone defect healing: a micro-CT and histopathological study in rabbit models. Microsc Res Tech. 88 (7), 2073-2084 (2025).
- O'Leary, F., Samman, S. Vitamin B12 in health and disease. Nutrients. 2 (3), 299-316 (2010).
- Traber, M. G., Atkinson, J. Vitamin E, antioxidant and nothing more. Free Radic Biol Med. 43 (1), 4-15 (2007).
- Ozcan, M., Arçay Polat, G., Alkaya, B., Uçak Türer, O., Yilmaz, M. B., Haytac, M. C. Evaluation of circadian variation in growth factors of platelet-rich fibrin: a pilot study. J Vis Exp. (224), e68902 (2025).
- Ozcan, M., Ciritci Kabaklı, S., Alkaya, B., Isler, S. C., Ucak Turer, O., Oksuz, H., et al. The impact of local and systemic penicillin on antimicrobial properties and growth factor release in platelet-rich fibrin: in vitro. study. Clin Oral Investig. 28 (1), 61 (2024).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.