Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Onderzoeksartikel
ZeLan-extract verbeterde de endocriene en metabole fenotypes bij DHEA-geïnduceerde PCOS-ratten. Geïntegreerde 16S rRNA-sequencing en serummetabolomics toonden een gedeeltelijk herstel van de alpha-diversiteit van de darmmicrobiota, een veranderde microbiële samenstelling en veranderingen in metabolieten met betrekking tot steroïdhormonen, galzuren en korteketenige vetzuren.
Deze studie onderzocht de therapeutische effecten van ZeLan-extract op het polycystair ovariumsyndroom (PCOS) en evalueerde de associatie hiervan met de remodellering van het darmmicrobiota-metaboloom. Vierentwintig vrouwelijke Sprague-Dawley ratten werden willekeurig verdeeld in een controlegroep, een PCOS-modelgroep geïnduceerd door dehydroepiandrosteron (DHEA) en een ZeLan-behandelingsgroep (n = 8 per groep). Na 28 dagen interventie werden de serumhormoonspiegels gemeten via ELISA; de samenstelling van het darmmicrobiota werd geanalyseerd met 16S rRNA-gensequencing en de serummetabole profielen werden gekarakteriseerd met UHPLC-Q-TOF-MS. Er werd een Spearman-correlatieanalyse met controle voor meervoudig testen uitgevoerd om associaties tussen het microbiota en het metaboloom te verkennen. ZeLan verbeterde de met PCOS geassocieerde fenotypes significant, waarbij het lichaamsgewicht, testosteron (0,92 vs. 1,85 ng/mL, P < 0,05), de LH/FSH-ratio en de insulinespiegels werden verlaagd in vergelijking met de modelgroep. Sequencing toonde aan dat ZeLan de microbiële alfa-diversiteit gedeeltelijk herstelde (Shannon-index: 5,79 vs. 4,19) en de Firmicutes-Bacteroidetes-ratio verlaagde. ZeLan was geassocieerd met een verrijking van Lactobacillus en Ruminococcus en een lagere abundantie van Bacteroides, Prevotella en Escherichia. Metabolomics identificeerde 52 gewijzigde metabolietkenmerken, waarbij de belangrijkste veranderingen betrekking hadden op steroidhormonen, galzuren zoals lithocholzuur en kortketenige vetzuren zoals boterzuur. Deze bevindingen suggereren dat ZeLan PCOS-gerelateerde endocriene en metabole stoornissen verbetert en geassocieerd is met de remodellering van darmmicrobiële en serummetabole profielen.
Het polycystair ovariumsyndroom (PCOS) is een van de meest voorkomende endocriene stoornissen bij vrouwen in de reproductieve leeftijd, met een wereldwijde prevalentie die wordt geschat tussen 6% en 20%, afhankelijk van de gehanteerde diagnostische criteria1. Deze complexe metabole en reproductieve stoornis wordt gekenmerkt door een geheel van klinische manifestaties, waaronder hyperandrogenisme, ovulatiestoornissen en polycystaire ovariummorfologie, die gezamenlijk bijdragen aan aanzienlijke reproductieve, metabole en psychologische gevolgen2. Naast de directe impact op de vruchtbaarheid wordt PCOS in toenemende mate erkend als een systemische aandoening die geassocieerd is met langetermijngezondheidscomplicaties, waaronder diabetes mellitus type 2, cardiovasculaire ziekten en endometriumcarcinoom, waardoor er een aanzienlijke belasting ontstaat voor zowel individuele patiënten als zorgsystemen wereldwijd3. De pathofysiologie van PCOS is nog niet volledig begrepen, hoewel algemeen wordt aanvaard dat het complexe interacties omvat tussen genetische aanleg, omgevingsfactoren en leefstijlbepalende factoren, die culmineren in de karakteristieke hormonale en metabole verstoringen die bij getroffen personen worden waargenomen4.
Hedendaagse therapeutische benaderingen voor PCOS richten zich primair op symptomatisch management via farmacologische interventies, waaronder orale contraceptiva voor menstruratieregulatie, metformine voor insulinesensibilisatie en antiandrogenen voor de beheersing van hirsutisme5. Deze conventionele behandelingen bieden echter vaak onvolledige symptoomverlichting en zijn frequent geassocieerd met bijwerkingen die hun toepasbaarheid op lange termijn beperken, in het bijzonder bij vrouwen met een kinderwens6. Bijgevolg is er een groeiende belangstelling voor het onderzoeken van complementaire en alternatieve geneeskundige benaderingen, in het bijzonder de traditionele Chinese geneeskunde (TCM), die eeuwen aan empirische ervaring heeft opgebouwd in de behandeling van gynaecologische aandoeningen via holistische regulatiemechanismen7. Onder de talrijke botanische geneesmiddelen die zijn onderzocht voor het management van PCOS, heeft Lycopus lucidus Turcz. (in de Chinese geneeskunde algemeen bekend als ZeLan) aanzienlijke aandacht getrokken vanwege de traditionele toepassingen bij het bevorderen van de bloedsomloop, het oplossen van stase en het reguleren van de menstruatie8. Gepubliceerde fytochemische studies wijzen uit dat L. lucidus polyfenolen en flavonoïdenrijke fracties bevat met antioxidatieve en anti-inflammatoire activiteit8,9. Daarom werd het gestandaardiseerde totale flavonoïdengehalte gebruikt als de chemische kwaliteitscontrole-index voor het extract in de huidige studie, hoewel de identificatie van de specifieke actieve monomeren die verantwoordelijk zijn voor de regulatie van microbiota en metabolisme in de toekomst gerichte fytochemische analyse vereist.
Het darmmicrobioom is naar voren gekomen als een kritieke regulator van het metabolisme en de endocriene functie van de gastheer, waarbij steeds meer bewijs de betrokkenheid ervan ondersteunt bij de pathogenese van diverse metabole aandoeningen, waaronder PCOS10. Het concept van de darm-ovarium-as is voorgesteld om de bidirectionele communicatie tussen intestinale micro-organismen en de ovariële functie te beschrijven, gemedieerd door microbiële metabolieten, immuunsignalering en neuroendocriene paden11. Bij vrouwen met PCOS is consistent aangetoond dat er sprake is van dysbiose in de darmen, gekenmerkt door een verminderde microbiële diversiteit, veranderde ratio's tussen Firmicutes en Bacteroidetes, en een afgenomen abundantie van gunstige bacteriën zoals Lactobacillus- en Bifidobacterium-soorten12. Men denkt dat deze microbiële verstoringen bijdragen aan de pathofysiologie van PCOS via meerdere mechanismen, waaronder een verhoogde intestinale permeabiliteit, systemische laaggradige ontsteking en een veranderd metabolisme van galzuren en kortketenige vetzuren (SCFA), die vervolgens de insulinegevoeligheid en androgeensynthese beïnvloeden13. Belangrijk is dat interventies gericht op het darmmicrobioom, waaronder probiotica, prebiotica en dieetwijzigingen, veelbelovende resultaten hebben laten zien bij het verlichten van PCOS-symptomen, wat de darm-ovarium-as ondersteunt als therapeutisch doelwit14.
Metabolomics, de uitgebreide analyse van metabolieten van kleine moleculen in biologische systemen, biedt een krachtige benadering voor het karakteriseren van metabole verstoringen die geassocieerd zijn met ziektebeelden en voor het evalueren van de biochemische effecten van therapeutische interventies15. De integratie van 16S rRNA-gensequencing voor microbiome-profilering met untargeted metabolomics maakt systematisch onderzoek mogelijk naar de relaties tussen darmmicrobiële gemeenschappen en het metabolisme van de gastheer, wat inzicht biedt in microbiota-metaboloom-interacties die zowel de pathogenese van ziekten als behandelingsresponsen kunnen begeleiden. Ondanks de theoretische rationale voor het targeten van de darm-ovarium-as bij de behandeling van PCOS en de traditionele indicaties van ZeLan voor gynaecologische aandoeningen, zijn er tot nu toe geen studies die systematisch hebben onderzocht of ZeLan-extract de interface tussen het darmmicrobiota en het metaboloom bij PCOS moduleert. Deze lacune in de kennis beperkt ons begrip van de met ZeLan geassocieerde biologische responsen en belemmert de rationele optimalisatie van deze botanische interventie voor de behandeling van PCOS.
De huidige studie is ontworpen om de therapeutische werkzaamheid van ZeLan-extract te onderzoeken in een DHEA-geïnduceerd ratmodel van PCOS en om geassocieerde veranderingen in het darmmicrobiota-metaboloom te evalueren via geïntegreerde 16S rRNA-sequencing en ongerichte metabolomics-analyse. Specifiek hebben we de effecten van ZeLan-extract op PCOS-gerelateerde fenotypes geëvalueerd, waaronder lichaamsgewicht, serumtestosteron, de ratio luteïniserend hormoon ten opzichte van follikelstimulerend hormoon (LH/FSH) en insulinespiegels; we hebben veranderingen in de samenstelling van het darmmicrobiota en de alpha-diversiteit na ZeLan-behandeling gekarakteriseerd; we hebben differentiële serummetabolietkenmerken en verrijkte metabole paden geïdentificeerd die geassocieerd zijn met de ZeLan-interventie; en we hebben correlaties onderzocht tussen specifieke darmmicrobiële taxa en sleutelmetabolieten. Door deze doelstellingen aan te pakken, streefden we ernaar om associatieve multi-omics bewijslast te leveren voor de ZeLan-gerelateerde modulatie van de darm-ovariumas bij PCOS.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Alle experimentele procedures in de huidige studie werden uitgevoerd in overeenstemming met de National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals en zijn goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee (Goedkeuringsnr. IACUC-2023-0156).
Dieren
Vrouwelijke Sprague-Dawley ratten (n = 24, 6 weken oud, lichaamsgewicht 180–200 g) werden verkregen uit het Laboratory Animal Center van de gelieerde instelling en gehuisvest onder gecontroleerde omgevingscondities (temperatuur 22 ± 2°C, luchtvochtigheid 50 ± 10%, 12-uurs licht/donkercyclus) met ad libitum toegang tot standaard knaagdiervoer en gezuiverd water. Na een acclimatisatieperiode van één week werden de dieren willekeurig toegewezen aan drie experimentele groepen (n = 8 per groep): Controle, PCOS-model en ZeLan-behandeling. De steekproefomvang werd bepaald op basis van eerdere studies naar veranderingen in het darmmicrobioom in PCOS-modellen, waarbij een poweranalyse uitwees dat 8 dieren per groep 80% power zouden bieden om een 1,5-voudig verschil in alpha-diversiteitsindices aan te tonen bij α = 0,05.
Vestiging van het PCOS-model en behandelingsprotocol
Het PCOS-model werd opgezet via een goed gevalideerd protocol waarbij dehydroepiandrosteron (DHEA; Sigma-Aldrich, USA), opgelost in sesamolie, dagelijks gedurende 21 opeenvolgende dagen in een dosis van 6 mg/100 g lichaamsgewicht subcutaan in de dorsale nekkegio werd geïnjecteerd. Controledieren ontvingen equivalente volumes van de sesamolie-drager. De volledige experimentele tijdlijn bestond uit 7 dagen acclimatisatie, 21 dagen modelinductie en 28 dagen interventie, met eindpuntbemonstering op protocoldag 56, inclusief de acclimatisatieperiode (Figuur 1). Het ZeLan-extract werd bereid uit geauthenticeerd Lycopus lucidus Turcz. kruid via waterige extractie en was gestandaardiseerd om een gehalte aan totale flavonoïden van niet minder dan 2,5% te bevatten via high-performance liquid chromatography, wat diende als het chemische kwaliteitscontrole-criterium voor het botanische extract. Na voltooiing van de DHEA-geïnduceerde modelopzet kregen ratten in de ZeLan-groep dagelijks gedurende 28 opeenvolgende dagen 200 mg/kg lichaamsgewicht ZeLan-extract via orale gavage, terwijl de Controle- en Modelgroepen equivalente volumes gedestilleerd water ontvingen. De dosis van 200 mg/kg werd gekozen als een verkennende farmacologische dosis op basis van eerdere ervaringen met botanische extracten in diermodellen en voorlopige overwegingen omtrent de verdraagzaamheid; een formele dosis-responsevaluatie maakte geen deel uit van het huidige ontwerp. Het lichaamsgewicht werd wekelijks geregistreerd gedurende de experimentele periode. In dit experimentele ontwerp werd de succesvolle vestiging van het PCOS-model geëvalueerd aan de hand van het DHEA-inductieprotocol samen met de endocriene en metabole eindpuntfenotypes, waaronder lichaamsgewicht, serumtestosteron, de LH/FSH-ratio en nuchtere insuline. Ovariële histopathologische examinatie, follicultelling, kwantificering van het corpus luteum en seriële monitoring van de oestruscyclus werden niet opgenomen als eindpunten voor modelbevestiging; de interpretatie van de ovariële dysfunctie was daarom gebaseerd op endocriene en metabole meetwaarden in plaats van directe beoordeling op weefselniveau.
Monsterverzameling en verwerking
Monsters (serum en feces) werden verzameld bij alle drie de groepen (n = 8 per groep) voor daaropvolgende biochemische analyses, microbiota-analyses en metabolomics-analyses. Eindpuntcollecties werden in de ochtend uitgevoerd na een nacht vasten om circadiane en voedingsgerelateerde variabiliteit te verminderen. Bloedmonsters werden onder anesthesie verzameld uit de abdominale aorta en gecentrifugeerd bij 3.000 × g gedurende 15 minuten bij 4°C om serum te verkrijgen, dat in aliquoten werd verdeeld en bewaard bij -80°C tot de hormoon- en metabolomics-analyses. Verse fecesmonsters werden onder aseptische omstandigheden direct uit het caecum verzameld in steriele cryotubes, tijdens transport op droogijs bewaard, binnen 10 minuten na collectie snel bevroren in vloeibare stikstof en bewaard bij -80°C tot de 16S rRNA-gensequencing.
Metingen van serumhormonen
Serumconcentraties van testosteron, luteïniserend hormoon (LH), follikelstimulerend hormoon (FSH) en insuline werden gekwantificeerd met behulp van commercieel verkrijgbare enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kits (Cusabio Biotech, Wuhan, China) volgens de instructies van de fabrikant. De LH/FSH-ratio werd berekend als een samengestelde index voor de gonadotropine-onbalans die kenmerkend is voor PCOS. Alle monsters werden in dubbeltoets geanalyseerd, en metingen met een variatiecoëfficiënt voor de dubbeltoets van meer dan 15% werden herhaald. De intra-assay en inter-assay variatiecoëfficiënten moesten respectievelijk onder de 10% en 15% blijven. Potentiële uitschieters werden gescreend aan de hand van brongegevens en informatie over de assay-prestaties, en geen enkele waarde werd uitsluitend op statistische gronden uitgesloten zonder een gedocumenteerde technische reden.
16S rRNA-gensequencing en bio-informatische analyse
Totaal bacterieel genomisch DNA werd geëxtraheerd uit de inhoud van het caecum met behulp van de QIAamp DNA Stool Mini Kit (Qiagen, Duitsland) volgens het protocol van de fabrikant. De DNA-kwaliteit en -kwantiteit werden beoordeeld via NanoDrop spectrophotometrie en agarosegelelektroforese, en de DNA-extracten werden bewaard bij -80°C voorafgaand aan de constructie van de bibliotheek. De V3-V4 hypervariabele regio's van het 16S rRNA-gen werden geamplificeerd met behulp van de universele primers 338F (5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3') en 806R (5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3') met Illumina-adaptersequenties. Amplicon-bibliotheken werden geconstrueerd, gezuiverd, gekwantificeerd, samengevoegd in equimolaire concentraties en gesequenced op het Illumina NovaSeq 6000-platform (Novogene, Peking, China) met paired-end 250 bp reads.
Ruwe sequencingreads werden verwerkt met de QIIME2-pipeline (versie 2022.2). Paired-end reads werden gedemultiplexed, samengevoegd, kwaliteitsgefilterd met een Phred-score drempelwaarde van ten minste 20 en verwerkt met DADA2 om chimeer sequencing te verwijderen en amplicon sequence variants (ASVs) te genereren. De taxonomische classificatie werd uitgevoerd tegen de SILVA 138 referentiedatabase met behulp van een naive Bayes-classifier. Alpha-diversiteitsmetrieken, waaronder de Shannon-index, Simpson-index en Chao1-estimator, werden berekend om de diversiteit en rijkdom binnen de monsters te beoordelen. De output van de sequencingdiepte, inclusief read-samenvattingen, ASV-abundantietabellen, Good's coverage en rarefactiecurve-bestanden, werden behandeld als onderdeel van de microbiome-dataset zoals beschreven in de sectie Gegevensbeschikbaarheid. Linear discriminant analysis effect size (LEfSe) werd gebruikt om ziekte-geassocieerde taxa te identificeren in de vergelijking tussen de Controlegroep en de Modelgroep, met een LDA-score drempelwaarde groter dan 2.0 en P < 0.05; de ZeLan-geassocieerde omkeer werd geëvalueerd door de richting van de verschuivingen in taxonomische abundantie in de ZeLan-groep te vergelijken met die in de Modelgroep.
Niet-gerichte metabolomics-analyse
Serummetabolomische profilering werd uitgevoerd met ultra-high-performance vloeistofchromatografie gekoppeld aan quadrupole time-of-flight massaspectrometrie (UHPLC-Q-TOF-MS; Agilent 1290 Infinity II/6550, USA). Serummonsters (100 μL) werden gemengd met 400 μL koude methanol:acetonitril (1:1, v/v) met interne standaarden, gevortexed en 1 uur bij -20°C geïncubeerd om eiwitten te laten neerslaan. Na centrifugatie bij 14.000 × g gedurende 15 minuten werden de supernatanten gedroogd onder een stroom stikstof en gereconstitueerd in 100 μL acetonitril:water (1:1, v/v) voor analyse. Chromatografische scheiding werd bereikt op een ACQUITY UPLC HSS T3-kolom (2,1 × 100 mm, 1,8 μm) bij een temperatuur van 40°C, met water houdende 0,1% mierenzuur als mobiele fase A en acetonitril houdende 0,1% mierenzuur als mobiele fase B bij een stroomsnelheid van 0,30 mL/min. Voor de scheiding van metabolieten werd een gradiëntprogramma gebruikt waarbij de organische fase werd verhoogd van 5% naar 95%, gevolgd door het wassen en her-equilibreren van de kolom. Massaspectrometrische gegevens werden verzameld in zowel positieve als negatieve electrospray-ionisatiemodi met een scanbereik van m/z 50–1200; de bronparameters omvatten een capillairspanning van 3,5 kV, een drooggasstroom van 10 L/min, een drooggastemperatuur van 325°C, een nebulizerdruk van 35 psi en een fragmentorspanning van 120 V.
Ruwe databestanden werden geconverteerd naar het mzXML-formaat en verwerkt met het XCMS-pakket in R voor piekdetectie, uitlijning van retentietijden en integratie van piekgebieden. Kwaliteitscontrolemonsters, bereid door het poolen van gelijke aliquoten van alle serumextracten, werden gedurende de analytische sequentie ingevoegd om de stabiliteit van het instrument te bewaken. Kenmerken met een overmatige hoeveelheid ontbrekende waarden of een instabiele reproduceerbaarheid van de kwaliteitscontrole werden verwijderd vóór de statistische modellering. De identificatie van metabolieten werd uitgevoerd door het matchen van de exacte massa, retentietijd en MS/MS-fragmentatiepatronen met de Human Metabolome Database (HMDB), METLIN en interne spectrale bibliotheken. Multivariate statistische analyses werden uitgevoerd met MetaboAnalyst 5.0. Metabolietkenmerken die werden behouden voor verdere rapportage werden geprioriteerd op basis van een gecombineerd criterium dat de multivariate discriminerende bijdrage, de richting van de fold-change en statistisch bewijs incorporeerde; P-waarden werden gecorrigeerd met de Benjamini-Hochberg-methode om rekening te houden met meervoudig testen. De volledige geannoteerde rapportagetabel, met 52 metabolietkenmerken, is opgenomen als Supplementary Table 1. Pathway-enrichmentanalyse werd uitgevoerd met behulp van de Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG)-database.
Statistische analyse
Alle statistische analyses zijn uitgevoerd met SPSS versie 26.0 (IBM Corporation, Armonk, NY, USA) en R-software (versie 4.2.1). Continue gegevens zijn uitgedrukt als gemiddelde ± standaarddeviatie (SD) en zijn voorafgaand aan de inferentiële toetsing op normaliteit getoetst met de Shapiro-Wilk-test. Voor normaal verdeelde gegevens is een éénweg variantieanalyse (ANOVA), gevolgd door de post hoc-test van Tukey, gebruikt voor vergelijkingen tussen meerdere groepen; voor niet-normaal verdeelde gegevens is de Kruskal-Wallis-test met de post hoc-test van Dunn gebruikt. Correlaties tussen darmmicrobiële taxa en serummetabolieten zijn geëvalueerd met de rangcorrelatiecoëfficiënt van Spearman en gevisualiseerd als hiërarchisch geclusterde heatmaps. P-waarden van correlaties zijn gecorrigeerd voor meervoudig testen met de Benjamini-Hochberg-methode voor de false-discovery rate, en alleen correlaties die consistent waren in richting en statistisch significant waren, zijn geïnterpreteerd. Een tweezijdige P-waarde < 0,05 werd als statistisch significant beschouwd, tenzij een aangepaste drempelwaarde voor de P-waarde was gespecificeerd.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Effecten van ZeLan-extract op klinische PCOS-fenotypes
Toediening van DHEA induceerde PCOS-achtige endocriene en metabole fenotypes bij ratten, wat werd aangetoond door significante stijgingen in het lichaamsgewicht, de serumtestosteronconcentratie, de LH/FSH-ratio en de nuchtere insulinewaarden in vergelijking met de controlegroep (alle P < 0,05). Distributionele beoordeling met de Shapiro-Wilk-test ondersteunde parametrische analyse voor de belangrijkste eindpunten betref...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De huidige studie levert bewijs dat ZeLan-extract de PCOS-gerelateerde endocriene en metabole fenotypes verbetert in een DHEA-geïnduceerd ratmodel en dat deze effecten geassocieerd zijn met gunstige veranderingen in de samenstelling van het darmmicrobioom en de serummetabole profielen. De geïntegreerde multi-omics benadering toonde aan dat behandeling met ZeLan hyperandrogenemie, een verhoogde LH/FSH-ratio en insulineresistentie verbeterde, terwijl de alfa-diversiteit van het darmmicrobioom gedeeltelijk werd hersteld, de...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs hebben geen belangenconflicten te verklaren.
Deze studie werd gefinancierd door het Hebei Provincial Administration of Traditional Chinese Medicine Scientific Research Planning Project (Subsidienummer 2021316).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Acetonitril | Fisher Chemical / Thermo Fisher Scientific | A955-4 | Optima LC-MS-kwaliteit, 4 L; mobiele fase en monsterreconstitutie |
| ACQUITY UPLC HSS T3-kolom | Waters Corporation | 186003539 | 100 Å, 1.8 μm, 2.1 × 100 mm; UHPLC-scheiding |
| Agarosegelelektroforese-systeem | Bio-Rad Laboratories | 1704486 | Mini-Sub Cell GT horizontaal elektroforese-systeem; DNA-kwaliteitsbeoordeling |
| Agilent 1290 Infinity II/6550 UHPLC-Q-TOF-MS | Agilent Technologies | G7120A/G7167B/G7116B/G6550B | 1290 Infinity II UHPLC-module set gekoppeld aan 6550 iFunnel Q-TOF MS; platform voor niet-gerichte metabolomics van serum |
| DADA2-algoritme | Bioconductor | Versie 1.24.0 | ASV-generatie en chimeraverwijdering; versie afgestemd op de workflow van R 4.2.1/Bioconductor 3.15 |
| Dehydroepiandrosteron (DHEA) | Sigma-Aldrich / MilliporeSigma | D4000 | Inductie van PCOS-model; 6 mg/100 g lichaamsgewicht; CAS 53-43-0 |
| Gedestilleerd water | Invitrogen / Thermo Fisher Scientific | 10977015 | UltraPure DNase/RNase-vrij gedestilleerd water; vehikel voor orale gavage in de Controle- en Modelgroepen |
| Mierenzuur | Fisher Chemical / Thermo Fisher Scientific | A117-50 | Optima LC-MS-kwaliteit, 50 mL; 0,1% additief voor LC-MS mobiele fasen |
| Human Metabolome Database | University of Alberta / HMDB | HMDB 5.0 | Metaboliet-annotatiedatabase |
| Illumina NovaSeq 6000-platform | Illumina | 20012850 | Sequencing-systeem gebruikt door de sequencing-dienstverlener voor paired-end 250 bp 16S rRNA-sequencing |
| Lycopus lucidus Turcz. kruid | Beijing Tongrentang Chinese Medicine Co., Ltd. | Batch ZL-20230315 | Geauthenticeerd botanisch grondmateriaal voor ZeLan-waterextract |
| Methanol | Fisher Chemical / Thermo Fisher Scientific | A456-4 | Optima LC-MS grade, 4 L; eiwitprecipitatie voor serummetabolomics |
| METLIN-database | Scripps Research | METLIN Classic 2023 | Database voor massaspectrale annotatie van metabolieten |
| NanoDrop-spectrofotometer | Thermo Fisher Scientific | ND-ONE-W | NanoDrop One microvolume UV-Vis spectrofotometer; bepaling van DNA-kwantiteit en -zuiverheid |
| QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit | Qiagen | 51604 | DNA-extractie uit caecuminhoud; 50-prep feces-DNA-kit |
| QIIME2 | QIIME2-ontwikkelteam | Versie 2022.2 | Verwerking van 16S rRNA-sequenties |
| R-software | R Foundation | Versie 4.2.1 | Statistische analyse en XCMS-verwerking |
| Serum-ELISA-kits voor testosteron, LH, FSH en insuline | Cusabio Biotech | CSB-E05100r; CSB-E12654r; CSB-E06869r; CSB-E05070r | Rat testosteron-, LH-, FSH- en insuline-ELISA-kits voor kwantificering van hormonen en insuline in serum |
| Sesamolie | Sigma-Aldrich / MilliporeSigma | S3547 | Draagmiddel voor DHEA-injectie |
| Natriumpentobarbital | Sigma-Aldrich / MilliporeSigma | P3761 | Anesthesie; 50 mg/kg intraperitoneaal |
| SPSS-software | IBM Corporation | Versie 26.0 | Statistische analyse |
| Universele 16S rRNA-primers 338F/806R | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | Maatsynthese: 338F/806R | Amplificatie van de V3-V4-regio's; 338F ACTCCTACGGGAGGCAGCAG, 806R GGACTACHVGGGTWTCTAAT |
| XCMS-pakket | Bioconductor / R | Versie 3.18.0 | Piekndetectie, uitlijning van retentietijden en integratie |
| ZeLan-extract | In-house waterig extract | Batch ZLE-20230402 | Behandeling via orale gavage; gestandaardiseerde totale flavonoïden ≥2.5% |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.