Deze studie betrof uitsluitend plantmateriaal en bevatte geen experimenten met mensen of dieren. Daarom was geen ethische goedkeuring vereist. De onderzoeksmiddelen die in dit protocol worden gebruikt, zijn opgesomd in de Tabel met Materialen.
1. Experimentele locatie
Het experiment werd uitgevoerd tijdens de seizoenen 2023/24 en 2024/25 op het proefbedrijf van het El-Qassassin Horticultural Research Station, provincie Ismailia, Egypte (30°53′ N, 31°56′ E), om de respons van venkelplanten (F. vulgare Mill.) op organische bemesting en de toepassing van biostimulanten te evalueren. De klimatologische omstandigheden tijdens de groeiperiode (november–april) werden geregistreerd door het meteorologisch station van Ismailia. De gemiddelde minimum- en maximumluchttemperaturen varieerden respectievelijk van 12–18 °C en 22–30 °C, terwijl de relatieve vochtigheid varieerde van 50%–65%. Tijdens de experimentele perioden werden geen extreme weersomstandigheden geregistreerd (Figuur 1).

Figuur 1: Schematische weergave van het split-plot experimentele ontwerp, waarbij de compostthee-niveaus zijn toegewezen aan de hoofdpercelen en de biostimulant-behandelingen zijn toegewezen binnen de subpercelen over drie herhalingen. Ct.1, Ct.2 en Ct.3 komen overeen met 360, 480 en 600 liters per hectare (ha) als bodemtoepassing, waarbij de bladbespuitingen F.1, F.2, F.3, F.4 en F.5 respectievelijk 2 cm3/L water vertegenwoordigen voor de Controle, Azolla, Spirulina, Nostoc en Chlorella extracten. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
2. Plantmateriaal
Venkelzaden werden verkregen van de Medicinal and Aromatic Plants Research Department, Horticulture Research Institute, Agricultural Research Center, Dokki, Giza, Egypte. De zaden werden tijdens de eerste week van november in kwekerijbedden gezaaid, en de zaailingen werden na vestiging later uitgedund tot één plant per heuvel.
3. Bodembemonstering en analyse
Voorafgaand aan de bodembereiding werden samengestelde bodemmonsters (0–30 cm diepte) verzameld, aan de lucht gedroogd, gezeefd door een 2 mm zeef en geanalyseerd op fysische en chemische eigenschappen met behulp van standaardprotocollen13,14 (Tabel 1).
| Deeltjesgrootteverdeling (%) | Textuurklasse | *O.M. (%) |
| Grof zand | Fijn zand | Slib | Klei | Zanderig | 0.48 |
| 80.65 | 14.06 | 3.8 | 1.49 |
| pH | EC dS/m | SP % | Kationen (meq/l) | Anionen (meq/l) |
| Ca++ | Mg++ | Na+ | K+ | HCO3- | Cl- | SO4 |
| 8 | 0.79 | 28 | 4 | 2.68 | 1.79 | 0.61 | 1.4 | 4.38 | 2.98 |
| *O.M.(%): organische stof |
Tabel 1: Fysische en chemische eigenschappen van de experimentele bodem. Kenmerken omvatten de korrelgrootteverdeling, textuurklasse, organische stofgehalte, pH, elektrische geleidbaarheid, verzadigingspercentage en de belangrijkste kationen en anionen.
4. Experimentele opzet
Het experiment volgde een split-plot randomized complete block design met drie herhalingen. De niveaus van compostthee werden toegewezen aan de hoofdplots en de biostimulantbehandelingen aan de subplots (Figuur 2). Elke plot mat 8,4 m2 en bevatte 24 planten verdeeld over drie rijen (4 m in lengte), met 70 cm tussen de rijen en 50 cm tussen de planten binnen de rijen.
Druppelirrigatie werd toegepast met emitters die 4 L h⁻1 per plant leverden gedurende 1 h om de twee dagen. Om interferentie tussen de behandelingen te voorkomen, werd één rug tussen de percelen onbeplant gelaten als bufferzone.
Alle percelen ontvingen tijdens de bodembewerking twee weken vóór het planten 24 t ha⁻1 compost. Minerale meststoffen werden toegepast op 50% van de aanbevolen dosis (RD): 360 kg ha⁻1 ammoniumsulfaat (20,6% N), 240 kg ha⁻1 calciumsuperfosfaat (15,5% P₂O₅) en 120 kg ha⁻1 kaliumsulfaat (48% K₂O). Stikstof- en kaliummeststoffen werden in drie gelijke doses met intervallen van 15 dagen toegediend, terwijl fosformeststof als één enkele basisdosering werd toegepast. Gedurende de hele groeiperiode werden standaard agronomische praktijken gevolgd.

Figuur 2: Olieopbrengst per hectare (kg ha⁻¹) en de relatieve toename in vergelijking met de controlebehandeling (T1: Ct1 × F1) tijdens het eerste (S1) en tweede (S2) seizoen. Ct1 vertegenwoordigt het laagste niveau van compostthee (360 L ha⁻¹), en F1 vertegenwoordigt de ongespoten controle. Behandelingen zijn als volgt gedefinieerd: T1 (Ct1 × F1), T2 (Ct1 × F2), T3 (Ct1 × F3), T4 (Ct1 × F4), T5 (Ct1 × F5), T6 (Ct2 × F1), T7 (Ct2 × F2), T8 (Ct2 × F3), T9 (Ct2 × F4), T10 (Ct2 × F5), T11 (Ct3 × F1), T12 (Ct3 × F2), T13 (Ct3 × F3), T14 (Ct3 × F4), en T15 (Ct3 × F5). Foutenbalken vertegenwoordigen de standaardfouten van het gemiddelde (SEM). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
5. Behandelingen met compostthee
Rijpe compost op basis van planten werd gedurende 24–48 u aerobisch geëxtraheerd in zoet water. De resulterende compostthee had een elektrische geleidbaarheid van 1,2–1,6 dS m⁻1 en een licht alkalische pH (7,5–8,0). De compostthee werd via druppelirrigatie aangebracht in hoeveelheden van 360, 480 of 600 L ha⁻1 over een periode van 16 weken, beginnend één maand na de zaai.
6. Bereiding en toepassing van de biostimulant
Verse biomassa van Azolla caroliniana, Spirulina platensis, Nostoc muscorum en Chlorella vulgaris werd gehomogeniseerd in gedestilleerd water in een verhouding van 1:10 (w/v), gefiltreerd en verdund tot een eindconcentratie van 2 cm3 L⁻1 (ongeveer 1200 L ha⁻1). Extracten werden vers bereid vóór toepassing en drie keer tijdens het groeiseizoen (30, 60 en 90 dagen na het planten) aangebracht als bladbespuiting met een handspuit tot aan het afvloeien.
7. Vastgelegde gegevens
Vegetatieve groeiparameters
Zes willekeurig geselecteerde planten uit elke experimentele eenheid werden geoogst 65 dagen na het planten. De plantlengte (cm) werd gemeten van de basis tot de top van de hoofdstengel. Het totale verse kruidgewicht (g) en het droggewicht (g) werden genoteerd, waarbij het droggewicht werd bepaald na het oven-drogen van monsters bij 70 °C gedurende 48 h tot een constant gewicht. Het aantal takken per plant werd berekend als het gemiddelde aantal over de bemonsterde planten.
Extractie van etherische olie (EO)
Essentiële olie werd gedestilleerd uit 40 g geoogste vruchten middels hydro-distillatie gedurende 3 h, volgens de methode beschreven door Miller15. De geëxtraheerde olie kreeg de tijd om ongestoord te staan om volledige scheiding te waarborgen16.
Bepaling van het gehalte en het rendement van essentiële olie
Het gehalte aan essentiële olie (% w/w) werd als volgt berekend:

Waarbij:
WEO = gewicht van de geëxtraheerde essentiële olie (g)
Wsample = drooggewicht van het plantmonster dat aan hydrodistillatie is onderworpen (g)
De opbrengst aan essentiële olie per plant werd als volgt berekend:

Waarbij:
DWplant = drooggewicht van de hele plant per plant (g)
EO content = percentage essentiële olie op basis van drooggewicht (% w/w)
Opmerking: Er werd aangenomen dat de dichtheid van de essentiële olie ongeveer 1 g cm⁻3 was, waardoor omrekening van grammen naar kubieke centimeters mogelijk was.
De opbrengst aan essentiële olie per hectare werd als volgt berekend:

Waarbij:
EO yieldplant - 1= opbrengst essentiële olie per plant (cm3)
Nplants = aantal planten per hectare
1000 = conversiefactor van cm3 naar L
Opmerking: Alle berekeningen van de olieopbrengst waren gebaseerd op droge stof om variabiliteit door het vochtgehalte van de plant te voorkomen.
Opbrengstkenmerk
Het aantal schermkransen per plant werd in het stadium van fruitrijping vastgelegd door alle schermkransen op elke plant te tellen.
8. Statistische analyse
Voor elk kenmerk en seizoen werden de waarnemingen op replica-niveau op normaliteit getest met de Shapiro-Wilk-toets. Omdat er geen significante afwijkingen van de normaliteit werden waargenomen (p > 0.05), is parametrische analyse toegepast. De gegevens werden geanalyseerd met behulp van variantieanalyse (ANOVA) voor een split-plot-ontwerp met Statistix 8.1 (Analytical Software, 2008), en de behandelingsgemiddelden werden vergeleken met de least significant difference (LSD)-toets17.
Hoofdcomponentanalyse (PCA) werd uitgevoerd als een multivariabel instrument om de relaties tussen de gemeten kenmerken samen te vatten. Eigenwaarden werden gebruikt om de relatieve bijdrage van elke component te bepalen, en biplot-visualisatie werd gebruikt om behandelingen en associaties tussen kenmerken te vergelijken18.