Methodenartikel

Een enkele intraveneuze dosis indolproducerende verzwakte brucella bij NOD-muizen: Beoordeling van het begin van type 1 diabetes en immuunremodelering op het eilandje

124 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/71193

⸱

26 mei 2026

 ,  ,  , 
1Department of Microbial Pathogenesis and Immunology, Texas A'M University Health Science Center, 2Department of Veterinary Pathobiology, College of Veterinary Medicine ' Biomedical Sciences, Texas A'M University, 3Bond Life Sciences Center, The University of Missouri

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol beschrijft intraveneuze toediening van een indolproducerende verzwakte Brucella melitensis-stam aan NOD/ShiLtJ-muizen, gevolgd door longitudinale diabetesmonitoring, pancreashistologie en optionele high-plex ruimtelijke proteomica en single-cell RNA-sequencing om de immuunreprogrammering van eilandjes te beoordelen.

Samenvatting

Type 1 diabetes (T1D) ontstaat door auto-immuunvernietiging van alvleeskliercellen β, en huidige therapieën slagen er niet in om duurzame immuuntolerantie te herstellen. Metabolisch gemodificeerde bacteriën die immunomodulerende metabolieten produceren, vormen een veelbelovende eenmalige therapeutische strategie. Hier presenteert dit artikel een uitgebreid protocol waarbij een enkele intraveneuze toediening van een indol-producerende verzwakte Brucella melitensis-stam BmΔvjbR::tnaA wordt gebruikt om effecten op het begin van auto-immuundiabetes bij prediabetische vrouwelijke NOD/ShiLtJ-muizen te beoordelen.

Het protocol begint met het bereiden van BmΔvjbR::tnaA uit bevroren glycerolvoorraden, het verbouwen ervan in selectief medium tot de middenlogfase en het berekenen van kolonievormende eenheden op basis van optische dichtheid. Vrouwelijke NOD-muizen van <5 weken oud worden zonder narcose vastgebonden en intraveneus geïnjecteerd via de laterale staartader met een gedefinieerde bacteriële dosis in fosfaatgeborrelde zoutoplossing, terwijl ze op verwarmingskussens worden gehouden. De bloedglucose wordt 2 keer per week gemonitord na een vasten van 2 uur van 70–105 dagen, waarbij diabetes wordt gedefinieerd als glucose ≥250 mg/dL bij twee opeenvolgende metingen. Op experimentele eindpunten worden oogstte alvleesklieren gefixeerd in neutraal gegebufferde formaline gedurende 72 uur, paraffine-ingebed, en doorgesneden voor hematoxyline- en eosinekleuring, insuline-immunohistochemie en kwantificering van totale eilandjesoppervlakte. Formaline-gefixeerde paraffine-ingebedde secties worden ingediend voor ruimtelijke proteomics met een 25-marker antilichaampaneel om regulatoire en effector-immuunpopulaties te visualiseren. Ten slotte ondergaat vers alvleesklierweefsel single-cell isolatie, 3′ bibliotheekvoorbereiding, sequencing en Seurat-gebaseerde bio-informatica analyse om transcriptieveranderingen tussen immuun- en stromale populaties te profileren.

Dit geïntegreerde protocol maakt reproduceerbare eenmalige bacteriële therapietoediening en multimodale karakterisering van de immuunremodellering van eilandjes mogelijk, en biedt een kader voor het testen van metaboliet-gemodificeerde microben in auto-immuunmodellen en het dissectieren van weefselspecifieke immuunmechanismen bij enkelcelresolutie.

Inleiding

Type 1 diabetes (T1D) is een chronische auto-immuunziekte die wordt gekenmerkt door immuungemedieerde vernietiging van insulineproducerende alvleeskliercellen β, wat leidt tot levenslange insulineafhankelijkheid en een verhoogd risico op vasculaire complicaties1. De NOD/ShiLtJ-muis herhaalt belangrijke kenmerken van menselijke auto-immuundiabetes, waaronder spontane insulitis en progressie naar openlijke diabetes, en wordt veel gebruikt als preklinisch model voor mechanistische en therapeutische studies 1,2,3. Huidige T1D-therapieën—waaronder immunosuppressieve medicijnen, monoklonale antilichamen en adoptieve regulerende T-cel (Treg)-therapieën—kunnen de ziekteprogressie tijdelijk vertragen, maar slagen er vaak niet in om duurzame herstel van immuuntolerantie of blijvend behoud van β-celmassa te bieden. 11.

Het richten op Tregs en andere regulerende populaties is een belangrijk aandachtspunt van opkomende T1D-therapieën, waaronder autologe polyklonale Treg-infuusen, gemanipuleerde antigeen-specifieke Tregs en IL-2-gebaseerde regimes 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11 . Echter, een pro-inflammatoire microomgeving binnen alvleeskliereilandjes kan de effectiviteit van deze benaderingen ondermijnen, wat de noodzaak benadrukt om lokaal immuunnetwerken van weefselresidentente herprogrammeren 2,7. Microbiële afgeleide tryptofaanmetabolieten, met name indool en verwante verbindingen, kunnen zowel aangeboren als adaptieve immuniteit moduleren door regulerende T-celdifferentiatie te bevorderen, anti-inflammatoire macrofagenpolarisatie te induceren en Th17-responsen te onderdrukken12,13. Levende microbiële therapieën en metabolisch gemodificeerde bacteriën vormen daarom een veelbelovende strategie om immunomodulerende metabolieten in situ af te leveren en de weefselimmuniteit te hervormen 12,13,14,15,16,17,18.

We hebben eerder een metabolisch gemanipuleerde Brucella melitensis-stam ontwikkeld, BmΔvjbR::tnaA, die constitutief indool produceert en auto-immuun artritis controleert door Tregs uit te breiden en ontstekingsmicroomgevingen te herstructureren 14,15,16. Verzwakte Brucella-stammen zoals BmΔvjbR zijn uitgebreid gekarakteriseerd als vaccinplatforms en kunnen genetisch worden aangepast om immunoregulerende ladingen te dragen 14,15,16.

Hier presenteren we een gedetailleerd protocol voor het evalueren van een enkele intraveneuze dosis BmΔvjbR::tnaA in het NOD/ShiLtJ-model, inclusief bacteriële voorbereiding, gestandaardiseerde intraveneuze toediening, diabetesmonitoring en multimodale analyse van alvleesklierweefsel door histologie, high-plex ruimtelijke proteomics en single-cell RNA-seq. Deze workflow biedt een praktisch kader voor het testen van metaboliet-gemodificeerde microben als enkeldosis-immunotherapieën bij orgaanspecifieke auto-immuniteit. Een eerdere dosis-responsanalyse toonde veiligheid en verdraagbaarheid aan tot 1 × 1010 CFU van de verzwakte stam.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle dierproeven werden uitgevoerd in strikte overeenstemming met ethische richtlijnen en goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van Texas A&M University (Protocolnummer: 2021-0123).

1. Voorbereiding en karakterisering van BmΔvjbR::tnaA

  1. Achtergrond en opslag van bacteriële stam
    OPMERKING: BmΔvjbR::tnaA is afgeleid van Brucella melitensis 16M met deletie van de vjbR-virulentieregulator en het inbrengen van het Escherichia coli tnaA-gen voor constitutieve indoolproductie, zoals eerder beschreven 14,15,16.
    1. Houd glycerolvoorraden op −80 °C in 20% glycerol.
  2. Bacteriële kweek op selectieve agar
    1. Haal een bevroren glycerolvoorraad uit −80 °C opslag. Streep 10–20 μL op tryptische sojaagar (TSA) platen, aangevuld met chloramfenicol (25–30 μg/mL).
    2. Incubeer platen bij 37 °C onder omgevingscondities CO₂ gedurende 48–72 uur totdat individuele kolonies (2–3 mm diameter) zichtbaar zijn.
      VOORZICHTIG: Werken met Brucella-stammen vereist passende bioveiligheidsvoorzieningen (minimaal BSL2). Volg de institutionele bioveiligheidsprotocollen en de vereiste goedkeuringen.
  3. Vloeibare cultuurvoorbereiding
    1. Kies een verse TSA-plaat (≤1 week oud). Kies 2–3 geïsoleerde kolonies met behulp van een steriele lus.
    2. Inoculeer in 10 mL tryptische sojabouillon (TSB) aangevuld met chloramfenicol (25–30 μg/mL) in een steriele buis van 15 mL. Incubeer bij 37 °C met schudden bij 250 rpm onder omgevingscondities van CO₂.
      OPMERKING: Voor opschaling gebruik je een 250 mL baffed Erlenmeyer-fles.
  4. Groeimonitoring en oogst
    1. Blank de spectrofotometer met steriele TSB aangevuld met chloramphenicol.
    2. Meet OD₆₀₀ elke 2–3 uur.
    3. Blijf incuberen totdat OD₆₀₀ 2,0 ± 0,2 (ongeveer 18–24 uur) bereikt.
      KRITIEKE STAP: Oogst bij OD₆₀₀ = 2,0 ± 0,2 voor consistente bacteriële concentratie en levensvatbaarheid.
      OPMERKING: Onder deze omstandigheden komt OD₆₀₀₀ ≈ 2.0 overeen met de midden- tot late logaritmische fase.
  5. CFU-schatting
    1. Schat de bacterieconcentratie met behulp van de relatie:
      OD₆₀₀ = 1 komt overeen met 5 × 109 CFU/mL.
      OPMERKING: Een 10 mL kweek bij OD₆₀₀ = 2,0 bevat ongeveer 1 × 1011 CFU.
    2. OPTIONEEL: Maak 10-voudige seriële verdunning (10⁻6 tot 10⁻9) in steriele PBS. Plaat 100 μL op TSA aangevuld met chloramfenicol. Broed op 37 °C gedurende 48–72 uur. Tel kolonies om CFU te bevestigen.
  6. Bacteriële oogst en concentratie
    1. Breng de 10 mL kweek over in een steriele 15 mL conische buis.
    2. Centrifugeer op 3.000–4.000 × g gedurende 10 minuten op kamertemperatuur.
    3. Aspireer en gooi het supernatant voorzichtig af zonder het pelletje te verstoren.
  7. Herophanging voor injectie
    1. Voeg 1 ml steriele, endotoxinevrije 1× fosfaatgeboterde zoutoplossing (PBS, pH 7,4) toe aan de bacteriële pellet. Voorzichtig opnieuw ophangen door 10–15x te pipetteren totdat een homogene suspensie is bereikt zonder zichtbare klonten.
      OPMERKING: De uiteindelijke concentratie is ongeveer 1 × 10à 11 CFU/mL.
  8. Opslag en gebruik
    1. Houd de bacteriële suspensie op ijs in een gesloten buis. Gebruik de suspensie voor intraveneuze injecties binnen 4 uur na voorbereiding.
      OPMERKING: Niet invriezen of 's nachts bewaren, omdat de levensvatbaarheid van bacteriën afneemt.
      PAUZEPUNT: Bacteriën kunnen tot 4 uur op ijs worden gehouden; Gebruik op dezelfde dag wordt aanbevolen.

2. NOD/ShiLtJ muizeninkoop, huisvesting en voorbereiding

  1. Haal vrouwelijke NOD/ShiLtJ-muizen aan. Acklimatiseer muizen minstens 7 dagen voorafgaand aan de experimenten.
    OPMERKING: Gebruik vrouwelijke muizen vanwege een hogere en consistentere diabetesincidentie.
  2. Huismuizen in individueel geventileerde kooien onder specifieke ziekteverwekkervrije omstandigheden. Houd tot vijf muizen per kooi in stand.
  3. Zorg voor beddengoed, milieuverrijking, voedsel en water ad libitum. Houd de temperatuur 20–24 °C, de luchtvochtigheid 40–60% en een licht/donker cyclus van 12 uur.
  4. Gebruik muizen jonger dan 5 weken. Record basisgewichten.
  5. Randomiseer muizen op kooiniveau in behandel- en controlegroepen. Ken unieke identificaties toe (oor-tag of staarttatoeage) aan elke muis.
    OPMERKING: Houd een masterrecord bij van alle muizen en groepsopdrachten.
  6. Breng de kooien minstens 30 minuten voor de injectie naar de procedurekamer. Plaats de kooien op verwarmingsmatten ingesteld op 37–40 °C om de verwijding van de staartader te bevorderen.

3. Intraveneuze toediening via de laterale staartvader

  1. Met een steriele techniek wordt 100 μL van de bacteriële suspensie in steriele insulinespuiten (29G–30G) getapt. Label elke spuit met de bijbehorende muis-ID.
  2. Maak controlespuiten klaar met 100 μL steriele PBS.
    OPMERKING: Bereid spuiten direct voor de injectie voor.
  3. Plaats elke muis in een rem, zodat je bij de staart kunt komen.
    OPMERKING: Gebruik geen anesthesie bij injecties in de staartven.
  4. Veeg de achterkant af met 70% ethanol en laat aan de lucht drogen.
  5. Visualiseer de laterale staartaren bij voldoende licht.
    TIP: Verwarm de staart als de aderen niet zichtbaar zijn.
  6. Houd het distale derde deel van de staart met zachte spanning vast. Steek de naald met een kleine hoek (10–15°) in de laterale ader in.
  7. Injecteer 100 μL langzaam over 5–10 s. Haal de naald terug en oefen zachte druk uit met steriele gaas.
    KRITIEKE STAP: Bevestig succesvolle intraveneuze injectie door afwezigheid van weerstand, zwelling of blanchering.
  8. Zet de muis terug in zijn kooi op een warmtemat. Let 5–10 minuten op tekenen van stress. Noteer eventuele bijwerkingen.
  9. Voer injecties uit voor alle muizen in willekeurige volgorde binnen een venster van 2 uur.

4. Bloedsuikermonitoring en diabetesdefinitie

  1. Begin met glucosemonitoring 7 dagen na de injectie. Meet de bloedsuiker twee keer per week tot het eindpunt van de studie.
  2. Verwijder voedsel 2 uur voor de meting terwijl je water behoudt.
  3. Bind de muis vast. Maak de staarttip schoon met 70% ethanol.
  4. Snijd de staart met een steriele lancet of naald. Gooi de eerste druppel bloed weg. Verzamel de tweede druppel op een glucometerteststrip. Noteer bloedsuikerwaarden samen met de muisidentificatie en datum.
    OPMERKING: Gebruik een nieuwe site als de staartpunt littekens krijgt.
  5. Definieer diabetes als bloedsuiker ≥ 250 mg/dL op twee opeenvolgende metingen met een afstand van minstens 24 uur.
  6. Euthanaceer muizen die ernstige ziekteverschijnselen vertonen volgens de institutionele richtlijnen.

5. Pancrea-oogst, fixatie en verwerking

  1. Euthanaseer muizen volgens goedgekeurde protocollen. Ontleed en verzamel zorgvuldig de alvleesklier, inclusief alle lobben.
  2. Plaats de alvleesklier in 10% neutrale gebuffreerde formaline met een minimale fixatie-tot-weefsel verhouding van 10:1. Fix 72 uur op kamertemperatuur.
    VOORZICHTIG: Hanteer formaline in een chemische dampkap met de juiste PBM.
  3. Breng de weefsels na fixatie over naar 70% ethanol.
  4. Stuur gefixeerde weefsels naar een histologiekernfaciliteit voor paraffine-inbedding, doorsnijden bij 5 μm dikte op positief geladen glaas, hematoxyline- en eosinekleuring, en insuline-immunohistochemie.
    OPMERKING: Vraag ongekleurde secties aan als er aanvullende analyses stroomafwaarts gepland zijn.

6. Histologische evaluatie en kwantificatie van eilandjesoppervlak

  1. Maak afbeeldingen van de hele dia's met een dia-scanner of microscoop.
  2. Open afbeeldingen in de gerefereerde software. Annoteer islets handmatig met de juiste tools.
  3. Meet het eilandjesgebied met annotatietools.
  4. Exporteer metingen voor analyse.
    OPMERKING: Het totale eilandje omvat endocriene en infiltrerende cellen.

7. Diverse downstream-analyses

  1. Bereken de gemiddelde eilandjesoppervlakte per muis. Vergelijk groepen met behulp van passende statistische tests.
  2. Optioneel: Analyse van ruimtelijke proteomica (zie Aanvullende Tabel S1)
    1. Bereid FFPE-secties voor op positief geladen dia's. Dien monsters in bij een aanbieder van ruimtelijke proteomics. Specificaties van het antilichaampaneel geven.
  3. Optioneel: Single-cell RNA-sequencing (zie Aanvullende Tabel S2)
    1. Oogst alvleesklier en plaats deze in een koud medium.
    2. Stuur monsters in bij een genomische kernfaciliteit voor enkelcelisolatie en bibliotheekvoorbereiding.
    3. Processequencinggegevens met behulp van geschikte pijplijnen (bijv. Cell Ranger, Seurat).
    4. Plaats sequencinggegevens in een openbare repository vóór publicatie.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Hoewel het bredere protocol dat in dit manuscript wordt beschreven sindsdien is geoptimaliseerd tot een preventief regime met één dosis, worden deze pilotuitkomsten hier uitsluitend gepresenteerd om de verwachte histologische en glycemische uitlezingen te illustreren die met deze workflow haalbaar zijn.

De algemene ziektecontext en het contrast tussen gezonde en type 1 diabetische alvleesklier worden schematisch weergegeven in Figuur 1A

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Een cruciale beperking van de hier gepresenteerde representatieve uitkomsten is dat de gegevens die de analytische eindpunten illustreren (Figuur 3) afkomstig zijn van een vroege pilotcohort met een tweedosisschema. Omdat dit protocol is aangepast tot een preventief regime met één dosis, zijn toekomstige grootschalige studies met het hier beschreven geoptimaliseerde enkeldosisprotocol nodig om formele statistische effectiviteit vast te stellen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen concurrerende financiële belangen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door National Institutes of Health Grants R01CA273002 en R21AI167793 aan J.S. en P.d.F., en door een NIH Institutional National Research Service Award (T32) ter ondersteuning van K.D. Wij erkennen de instelling van het Texas A&M University Health Science Center. Wij danken Dr. Yava Jones-Hall voor blinde histopathologiebeoordelingen, het Song-laboratorium voor pilot- en diertechnische ondersteuning, het Texas A&M Institute for Genome Sciences & Society (TIGSS) Molecular Genomics Workspace voor de voorbereiding en sequencing van single-cell RNA-seq bibliotheek, de TIGSS Bioinformatics Core voor data-analyse en -interpretatie, en Akoya Biosciences voor ruimtelijke proteomics-diensten. Wij erkennen de steun van het Texas A&M Institute for Genome Sciences & Society (TIGSS) Bioinformatics Core (TBC) voor hun ondersteuning.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
10% Neutral Buffered Formalin (NBF)VWR10790-714
10x Genomics Chromium ControllerTIGSS Molecular Genomics Workspace, Texas A&M University
70% EthanolVWR89125-164
Adhesive microscope slides for FFPELeica Biosystems3800084E
Akoya mouse FFPE antibody panel (~25 markers)Akoya Biosciences[Panel ID/custom panel]
Bioanalyzer or TapeStation with DNA HS kitsTIGSS Molecular Genomics Workspace, Texas A&M/ Agilent
BmΔvjbR::tnaA bacterial strainLab stock (Song/de Figueiredo labs)
Cell Ranger pipeline10x Genomicsv7.1
ChloramphenicolResearch Products International56-75-7
Chromium Next GEM Single Cell 3' kit10x Genomics via TIGSS core
Collagenase from Clostridium histolyticumMillipore SigmaC7657-100MG
DAPI nuclear stainAkoya Biosciences[Service-provided]
FFPE embedding, H&E staining, insulin IHC, and slide scanningVMBS Histology Laboratory, Texas A&M Universityhttps://vetmed.tamu.edu/vmbs-histology-lab/
Glucose test stripsEKF Diagnostics / Fisher Scientific22-022-649
Glucose test strips (alternate)Ascensia Diabetes CareCONTOUR NEXT test strips
Glycerol (bulk, 500 mL)Millipore SigmaG7893-500ML
Glycerol (sterile, 100 mL)Sigma Aldrich (G Biosciences)G5516-100ml
GraphPad Prism (or R survival package)GraphPad Software / Rv10.2
Handheld glucometerAscensia Diabetes CareCONTOUR NEXT EZ
Illumina NextSeq 2000 sequencerTIGSS Molecular Genomics Workspace, Texas A&M University
Insulin syringes,29–30 G (U-100)VWR10002-702
Lancets for diabetes testingBecton, Dickinson and Company (BD)366594
Liberase TL Research GradeMillipore Sigma5401020001
Low-temperature heating padsConduct ScienceRWD-69025
Miltenyi nuclei/cell isolation kitTIGSS Molecular Genomics Workspace, Texas A&M/ Miltenyi Biotec
Mouse heating pad (alternate)Kent ScientificRightTemp
Mouse restrainersBraintree ScientificTV-RED 150-STD
NOD/ShiLtJ mice (female, 5 weeks)The Jackson LaboratoryStrain #001976
P2 XLEAP 100-cycle flow cell kitIllumina via TIGSS core
PhenoCycler data acquisition and QC serviceAkoya Biosciences
PhenoCycler reagents and imaging workflowAkoya Biosciences[Service-provided]
PhenoCycler-Fusion systemAkoya Biosciences
Phosphate-buffered saline (PBS), 1xThermo Fisher10010023
Protector RNase InhibitorMillipore Sigma3335402001
Qubit Fluorometer and dsDNA HS Assay KitTIGSS Molecular Genomics Workspace, Texas A&M/ Thermo Fisher
QuPathOpen sourcev0.4.3
R softwareR Projectv4.0+
Seurat (R package)Satija Lab / CRANv4.3
StarDistOpen sourcev0.8.3
Tryptone Soy Agar (TSA)VWRCA90002-706

Referenties

  1. Bender, C., et al. A phase 2 randomized trial with autologous polyclonal expanded regulatory T cells in children with new-onset type 1 diabetes. Sci Transl Med. 16, eadn2404 (2024).
  2. Yang, S. J., et al. Pancreatic islet-specific engineered Tregs exhibit robust antigen-specific and bystander immune suppression in type 1 diabetes models. Sci Transl Med. 14, eabn1716 (2022).
  3. . NOD/ShiLtJ (001976) datasheet Available from: https://www.jax.org/strain/001976 (2026)
  4. Raeber, M. E., et al. Interleukin-2 immunotherapy reveals human regulatory T cell subsets with distinct functional and tissue-homing characteristics. Immunity. 57 (9), 2232-2250.e10 (2024).
  5. Efe, O., et al. A humanized IL-2 mutein expands Tregs and prolongs transplant survival in preclinical models. J Clin Invest. 134 (5), e173107 (2024).
  6. Haque, M., et al. Stem cell-derived tissue-associated regulatory T cells suppress the activity of pathogenic cells in autoimmune diabetes. JCI Insight. 4 (7), e126471 (2019).
  7. Su, W., et al. Protein prenylation drives discrete signaling programs for the differentiation and maintenance of effector Treg cells. Cell Metab. 32 (6), 996-1011.e17 (2020).
  8. Hassan, M., Elzallat, M., Mohammed, D. M., Balata, M., El-Maadawy, W. H. Exploiting regulatory T cells (Tregs): cutting-edge therapy for autoimmune diseases. Int Immunopharmacol. 155, 114624 (2025).
  9. Chen, X., et al. Differential roles of human CD4+ and CD8+ regulatory T cells in controlling self-reactive immune responses. Nat Immunol. 26 (2), 230-239 (2025).
  10. Huang, Q., Zhu, J. Regulatory T cell-based therapy in type 1 diabetes: latest breakthroughs and evidence. Int Immunopharmacol. 140, 112724 (2024).
  11. Passerini, L., Forlani, A., Gregori, S. Advances in regulatory cell therapy for type 1 diabetes: emerging strategies and future directions. Eur J Immunol. 55 (5), e202451722 (2025).
  12. Singh, N. P., et al. Dietary indoles suppress delayed-type hypersensitivity by inducing a switch from proinflammatory Th17 cells to anti-inflammatory regulatory T cells through regulation of microRNA. J Immunol. 196 (3), 1108-1122 (2016).
  13. Krishnan, S., et al. Gut microbiota-derived tryptophan metabolites modulate inflammatory response in hepatocytes and macrophages. Cell Rep. 23 (4), 1099-1111 (2018).
  14. Das, J. K., et al. A metabolically engineered bacterium controls autoimmunity and inflammation by remodeling the pro-inflammatory microenvironment. Gut Microbes. 14 (1), 2143222 (2022).
  15. Plocica, J., et al. Engineering live attenuated vaccines: old dogs learning new tricks. J Transl Autoimmun. 6, 100198 (2023).
  16. Bender, E. Could a bacteria-stuffed pill cure autoimmune diseases?. Nature. 577, S12-S13 (2020).
  17. Chen, G., Wang, C., Wan, Q., Dong, F., Radstake, T. Editorial: next generation therapeutic modality to cure autoimmune diseases. Front Immunol. 16, 1631995 (2025).
  18. Adedokun, A. I., et al. Exploring immunotherapeutic strategies for bacterial and viral diseases. Explor Immunol. 5, 100320 (2025).
  19. Bankhead, P., et al. QuPath: open source software for digital pathology image analysis. Sci Rep. 7 (1), 16878 (2017).
  20. Satija, R., Farrell, J. A., Gennert, D., Schier, A. F., Regev, A. Spatial reconstruction of single-cell gene expression data. Nat Biotechnol. 33 (5), 495-502 (2015).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Indole producerende Brucellaintraveneuze injectiesingle cell sequencingspatiale proteomicsinsuline immunohistochemiebacteri le therapieauto immuun diabetes
Video binnenkort beschikbaar

Gerelateerde artikelen