Methodenartikel

Een fluorescentie-gebaseerde methode om de dynamica van lipidendruppels en organelen tijdens mitose in hepatomacellen te visualiseren

163 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/71222

⸱

15 mei 2026

 ,  ,  , 
1Department of Biological Chemistry, Showa Medical University Graduate School of Pharmacy

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol maakt reproduceerbare visualisatie van lipidendruppels en organeldynamiek tijdens mitose mogelijk met behulp van gesynchroniseerde hepatomacellen.

Samenvatting

Intracellulaire lipidendruppels (LD's) zijn alomtegenwoordig in verschillende celtypen. LD's slaan neutrale lipiden op zoals triacylglycerol en cholesterylester en spelen belangrijke rollen in het energiemetabolisme, signaaloverdracht en stressreacties. Hoewel LD's worden erkend als intracellulaire organellen, blijft hun gedrag tijdens de celcyclusprogressie onduidelijk. Tijdens de mitose ondergaan verschillende organellen, waaronder mitochondriën en het Golgi-apparaat, uitgebreide remodellering en daaropvolgende reassemblage, wat de vraag oproept of LD's ook celcyclusafhankelijke veranderingen ondergaan. Aangezien LD's kunnen dienen als energiebronnen en signaalhubs, is het verduidelijken van hun dynamiek tijdens mitose van bijzonder belang. Om dit aan te pakken, presenteren we een protocol dat celcyclussynchronisatie combineert met fluorescerende LD-kleuring in hepatomacellen. Cellen worden gesynchroniseerd op de G2/M-grens met behulp van een cycline-afhankelijke kinase 1-remmer-gebaseerde aanpak, vrijgegeven in de celcyclus en verzameld op specifieke tijdstippen. De LD's worden vervolgens gelabeld met een neutrale lipidekleurstof en gevisualiseerd met fluorescentiemicroscopie. Deze methode biedt een reproduceerbare benadering om LD-herverdeling tijdens mitose te onderzoeken en kan breed worden toegepast op studies naar organelbiologie, metabole regulatie en kankercelfysiologie.

Inleiding

De celcyclus is een sterk georkestreerde gebeurtenis die zorgt voor de nauwkeurige duplicatie en segregatie van chromosomaal DNA 1,2, waarbij intracellulaire organellen dynamisch worden gereorganiseerd3. Het bestaat uit vier hoofdfasen: G1, S, G2 en M 1,2. Tijdens de mitose lijnen gedupliceerde chromosomen zich uit op het equatoriaal vlak van de bipolaire spil en worden vervolgens overgedragen aan twee dochtercellen4. Organellen zoals mitochondriën en het Golgi-apparaat ondergaan tijdens mitoseeen uitgebreide remodelatie 5,6,7,8. Deze organellen fragmenteerden in kleine blaasjes voordat ze werden verdeeld over de twee dochtercellen, waar ze zich tijdens de progressie door de volgende celcyclus3 weer samenvoegen.

Lipidedruppels (LD's) zijn neutrale, lipidenhoudende organellen die bestaan uit een kern van neutrale lipiden omgeven door een fosfolipide-monolaag. Ze zijn geassocieerd met een diverse set eiwitten en komen veel voor in veel cellentypen, waaronder prolifererende cellen 9,10. De eiwit- en lipidensamenstelling van LD's varieert afhankelijk van cel- en weefseltype11. Onder deze eiwitten is de perilipine (PLIN) familie uitgebreid bestudeerd, en PLIN2 stabiliseert LD's in hepatocyten12,13. Naast structurele stabilisatie zijn PLIN-familie-eiwitten betrokken bij de regulatie van LD-dynamiek en interacties met andere cellulaire componenten14. LD's functioneren niet alleen als opslagdepots voor triacylglycerol en cholesterylester, maar ook als hubs voor energiemetabolisme15, signaalroutes16 en stressadaptatie17. Bij pathologische aandoeningen, zoals metabole disfunctie-geassocieerde steatohepatitis (MASH, voorheen aangeduid als NASH), is de ophoping van LD aanzienlijk verhoogd vergeleken met gezonde controle18,19, wat het belang ervan in de ziektebiologie benadrukt. Echter, er was slechts beperkte waarneming beschikbaar van de ruimtelijke lokalisatie van LD's in delende cellen, ondanks uitgebreid onderzoek naar de dynamiek van mitochondriën, het endoplasmatisch reticulum en het Golgi-apparaat tijdens mitose. We analyseerden LD-lokalisatie tijdens mitose, met behulp van de hier gepresenteerde methode. We hebben eerder gerapporteerd dat LD's ruimtelijke verspreidingspatronen vertoonden die verschillen van die van andere intracellulaire organellen20.

Hier bieden we een gedetailleerd protocol om de verspreiding van LD's en andere intracellulaire organellen tijdens mitose in hepatomacellen te onderzoeken. De methode omvat celcyclussynchronisatie en fluorescentiekleuring, waardoor de LD-dynamiek tijdens mitose reproduceerbaar kan worden weergegeven. Representatieve resultaten tonen aan dat LD's celcyclusafhankelijke veranderingen in de ruimtelijke verdeling tussen interfase en mitose vertonen, wat een vergelijkende analyse van LD-lokalisatie tijdens celdeling mogelijk maakt. Deze benadering kan breed worden toegepast om organellokalisatie, dynamiek en metabole regulatie te bestuderen in zowel fysiologische als pathologische contexten.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. Standaardoplossingen die voor dit protocol nodig zijn

  1. Bereid 24% (w/v) vetzuurvrije serumalbumine (BSA) oplossing voor in 150 mM NaCl.
  2. Bereid 10 mM RO-3306 (een selectieve cycline-afhankelijke kinase 1 (CDK1) remmer) stockoplossing voor die onder steriele omstandigheden in DMSO is opgelost.
    OPMERKING: Andere veelgebruikte oplossingen, zoals NaOH, NaCl en fosfaatgevulde zoutoplossing (PBS), zijn bereid volgens de standaard laboratoriumpraktijk. PBS werd bereid door 2,6 g NaH₂PO₄·2H₂O, 29 g Na₂HPO₄·12H₂O, 80 g NaCl en 2,0 g KCl in gedestilleerd water op te lossen en het uiteindelijke volume aan te passen naar 1 L.

2. Bereiding van oleïnezuur geconjugeerd met BSA

  1. Doe 90 mg oliezuur in een 50 ml beker en voeg 2 ml ethanol (99,5%) toe om het op te lossen.
  2. Voeg 100 μL 5 N NaOH toe aan de oplossing en roer tot ze volledig gemengd zijn.
  3. Verdamp ethanol onder een stroom stikstofgas.
  4. Voeg 10 mL 150 mM NaCl toe en incubeer het mengsel bij 60 °C gedurende 5 minuten.
  5. Voeg langzaam 12,5 ml ijsgekoelde 24% (w/v) BSA-bouillonoplossing toe aan de oliezuuroplossing (2,4) en roer het mengsel voorzichtig gedurende 10 minuten om geleidelijk en homogeen mengen bij kamertemperatuur mogelijk te maken.
  6. Stel de pH aan naar 7,4 en breng het eindvolume naar 25 mL met 150 mM NaCl. De uiteindelijke concentratie oleïnezuur zal 12,8 mM zijn.
  7. Filter de oplossing door een 0,22 μm-filter onder steriele omstandigheden en bewaar aliquots tot 2 weken bij 4 °C of bij -20 °C voor langere opslag.

3. G2/M-randsynchronisatie van cellen

  1. Bereid de benodigde bedieningselementen voor.
    1. Bereid onbehandelde asynchrone cellen voor zonder RO-3306-behandeling als basiscontrole.
    2. Voor met oleïnezuur behandelde aandoeningen bereid je cellen voor die alleen met oleïnezuur zijn behandeld zonder synchronisatie als basiscontrole.
    3. Voor fluorescentiekleuring voer je voor elke fluorofoor enkele kleuringscontroles uit om de signaalspecificiteit te verifiëren en spectrale overlap tussen kanalen uit te sluiten (aanvullende figuur 1).
    4. Verzamel beelden met sequentiële acquisitie-instellingen of geschikte filterconfiguraties om spectrale overlap en kanaaloverspraak te minimaliseren.
      OPMERKING: Deze controles zijn essentieel om celcyclusafhankelijke veranderingen te onderscheiden van de basisverdeling van organelen en voor het valideren van fluorescentiespecificiteit.
  2. Houd HuH7-cellen in Dulbecco's aangepaste Eagle's medium, aangevuld met 10% foetaal rundserum, 100 U/mL penicilline en 100 μg/mL streptomycine bij 37 °C in een 5% CO₂-incubator.
  3. Plaats glazen deklijsten in een 35-mm kweekschaal. Zaad 2 × 105 cellen per 35 mm schotel in het hierboven beschreven medium en incubeer de cellen een nacht bij 37 °C in een 5% CO₂-incubator.
  4. Was cellen twee keer met PBS en incubeer vervolgens met een vers medium dat 9 μM RO-3306 en 0,5 mM oliezuur bevat.
  5. Incubeer de cellen 20 uur onder standaard kweekomstandigheden.

4. Verwijdering van het RO-3306-reagens uit de gesynchroniseerde cellen om de mitotische fase binnen te gaan

  1. Was cellen (stap 3.4) drie tot vijf keer met PBS.
  2. Was cellen één keer met vers kweekmedium.
  3. Incubeer cellen in vers medium gedurende 1 uur bij 37 °C in een 5% CO₂-incubator om toegang tot de mitose mogelijk te maken.
    OPMERKING: Het verwijderen van RO-3306 maakt het mogelijk dat gesynchroniseerde cellen de mitotische fase binnengaan vanaf de G2/M-grens. Na het uitwassen van het reagens gaat een aanzienlijk deel van de cellen binnen ongeveer 1 uur in de mitotische fase, gedurende welke tijd mitotische cellen kunnen worden geïdentificeerd door celafronding en chromosoomcondensatie. Het optimale tijdstip om een specifieke mitosefase te observeren kan variëren afhankelijk van het celtype en de kweekomstandigheden.

5. Monstervoorbereiding van mitotische cellen

  1. Fixeer cellen met 4% paraformaldehyde in PBS gedurende 10 minuten op kamertemperatuur.
    VOORZICHTIG: Mitotische cellen hebben de neiging zich los te maken van de schaal; Vermijd het wassen vóór fixatie.
    OPMERKING: Bij PLIN3-kleuring werden cellen gefixeerd met een combinatie van 2% paraformaldehyde en 2% glutaraldehyde.
  2. Permeabiliseer vaste cellen met 0,1% (w/v) Triton X-100 in PBS gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur.
  3. Blokcellen met 1% (w/v) BSA in PBS gedurende 1 uur op kamertemperatuur.

6. Het kleuren van LD's en andere cellulaire organellen

  1. Verwijder voorzichtig de glazen dekstukken uit de kweekschaal met fijne pincetten en plaats ze met de celzijde omhoog in een bevochtigde kamer om uitdrogen te voorkomen.
    OPMERKING: Voer alle volgende kleuringsstappen uit in een bevochtigde en lichtbeschermde omgeving om fluorescentiesignalen te behouden.
  2. Was cellen twee keer met PBS en incubeer met primaire antilichamen verdund in PBS gedurende 1 uur op kamertemperatuur.
  3. Was cellen twee keer met PBS en incubeer met secundaire antilichamen verdund in PBS gedurende 1 uur bij kamertemperatuur.
  4. Was cellen twee keer met PBS en kleur met een neutrale lipide fluorescerende kleurstof gedurende 10 minuten op kamertemperatuur.
    OPMERKING: Kleurstoffen met duidelijke spectrale eigenschappen zijn geselecteerd om flexibele multikleurbeeldvorming mogelijk te maken en spectrale overlap met andere organelmarkers te minimaliseren.
  5. Was cellen twee keer met PBS en kleur kernen met een DNA-bindende fluorescerende kleurstof (DAPI: excitatie, 350–410 nm; emissie, 420–450 nm) verdund 1:1.000 in PBS gedurende 5 minuten.
  6. Was cellen twee keer met PBS en monteer de dekfolies vervolgens op glazen glaasjes met een antifade-montagemedium om fluorescentie tijdens beeldvorming te behouden.
  7. Sluit de randen van de dekfolies af met doorzichtige nagellak om uitdroging en beweging tijdens de beeldvorming te voorkomen.
    OPMERKING: Omdat fluorescerende signalen geleidelijk vervagen, maak beelden binnen 1 week na het kleuren.

7. Observatie van intracellulaire organellen en hun subcellulaire lokalisatie

  1. Neem fluorescentiebeelden met behulp van breedveldfluorescentiemicroscopie om snel meerdere cellen te screenen en representatieve interfase- en mitotische cellen te selecteren, met lage excitatieintensiteit en snelle acquisitie-instellingen om fotobleaching te minimaliseren.
  2. Maak beelden van de geselecteerde cellen met de juiste vergroting voor fluorescentiekleuringsanalyse.
    OPMERKING: Interfasecellen vertonen doorgaans een intacte enkele kern die centraal in het cytoplasma is geplaatst. Daarentegen vertonen mitotische cellen gecondenseerde chromosomen die zijn uitgelijnd in het evenaarvlak van de bipolaire spindel. Deze morfologische kenmerken kunnen dienen als visuele criteria om interfase- en mitotische cellen te onderscheiden.
  3. Visualiseer LD's en nucleaire morfologie met behulp van geschikte filtersets voor neutrale lipidefluorescerende kleurstoffen en een DNA-bindende fluorescerende kleurstof met de breedveldfluorescentiemicroscopie.
    OPMERKING: Selecteer filtersets volgens de specificaties van het gebruikte microscoopsysteem.
  4. Voor validatie met hogere resolutie kunt u fluorescentiebeelden maken met behulp van confocale microscopie uitgerust met een objectief met een hoge numerieke apertuur (bijv. 60×, NA ≥1.2). Detecteer fluorescentiesignalen voor neutrale lipidefluorescerende kleurstoffen en een DNA-bindende fluorescerende kleurstof met behulp van geschikte excitatielasers en emissiefilterinstellingen. Verwerk beelden met gebruik van algemeen beschikbare software voor beeldverwerving en analyse.
    OPMERKING: Afhankelijk van het microscoopsysteem kunnen water- of olie-onderdompelingsobjectieven worden gebruikt. De keuze van het onderdompelingsmedium moet voldoen aan de aanbevelingen van de fabrikant en het experimentele doel. Breedveldfluorescentiemicroscopie is geschikt voor routinematige observatie en vergelijking van LD-verdeling tussen interfase- en mitotische cellen, terwijl confocale microscopie wordt aanbevolen wanneer een hogere ruimtelijke resolutie vereist is.

8. Kwantificering van het aantal en de grootte van LD's

  1. Neem fluorescentiebeelden van cellen onder identieke beeldvormingsomgevingen voor alle omstandigheden.
  2. Open de verkregen beelden met beeldanalysesoftware.
  3. Stel passende drempels in om LD's te identificeren en voer deeltjesanalyse uit om het aantal en de oppervlakte van lipidendruppels te kwantificeren.
    OPMERKING: Beeldparameters moeten onder alle omstandigheden constant worden gehouden om een nauwkeurige vergelijking van LD-getal en -oppervlak te garanderen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Synchronisatie van hepatomacellen bij de G2/M-grens met behulp van RO-3306

Om de dynamiek van intracellulaire organellen tijdens mitose te onderzoeken, werd RO-3306, een selectieve CDK1-remmer, gebruikt om de cellen op de G2/M-grens 20,21 te synchroniseren. Wanneer cellen 20 uur met de CDK1-remmer werden behandeld, gevolgd door nog eens 1 uur in een nieuw medium, was meer dan 50% van de cellen gesynchroniseerd aan de G...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

De waargenomen herverdeling van LD's tijdens mitose suggereert dat hun positionering niet willekeurig is, maar samenhangt met de reorganisatie van het cytoskelet en de progressie van de celcyclus. In het bijzonder kan de uitsluiting van LD's uit het spilgebied ruimtelijke beperkingen weerspiegelen die worden opgelegd door mitotische spilassemblage of actieve transportmechanismen die organelsegregatie tijdens celdeling in stand houden. In deze studie presenteren we een eenvoudige en repro...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs geven aan dat zij geen belangenconflicten hebben met betrekking tot de inhoud van dit artikel.

Dankbetuigingen

Deze studie werd ondersteund door de Showa University Grant for Young Researchers en JSPS KAKENHI Grant Number 24K10084.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
0.25% Trypsin/EDTAWako201-16945Celdissociatie
10 cm schaalCorning430167Celcultuur
35 mm weefselcultuurschaalIWAKI3000-035Celcultuur
6 cm weefselcultuurschaalIWAKI3010-060Celcultuur
Anti-PLIN2 (ADRP) antilichaamProteintech15294-1-APLipiddruppel marker
Anti-PLIN3 (TIP47) antilichaamProteintech10694-1-APLipiddruppel marker
Anti-α-tubulin antilichaamSigma-AldrichT6199Mitosespindel marker
BODIPY 493/503InvitrogenD3922Neutrale lipidkleuring
Fles-top filter (0.22 μm)NESTWNB343001Steriele filtratie van OA–BSA oplossing
Rundserumalbumine (BSA)Sigma-AldrichA8022Blocking reagens
Klare nagellakCommercieel verkrijgbaarNiet van toepassingAfdichting van deksels
Confocale microscoopOlympusFV1200Beeldvorming met hoge resolutie
DAPIDojindo340-07971Kernkleuring
D-PBS (–)Wako049-29793Celcultuur
Dulbecco’s Gemodificeerd Eagle’s Medium (DMEM)Wako041-30081Celcultuurmedium
Ethanol (99,5%)Wako057-00456Solvent voor oliezuur
Vetzuur-vrije BSASigma-AldrichA7030Carriereiwit voor oliezuur
Foetaal runder serumGibco10270-106Medium aanvulling
Fluorescente secundaire antilichamen (Alexa Fluor–geconjugeerd)Commercieel verkrijgbaarNiet van toepassingSoortspecifieke secundaire antilichamen voor immunofluorescentie
FV10-ASW softwareOlympusNiet van toepassingBeeldverwerving en verwerking
Glazen deksels (φ15 mm)Matsunami2-176-03Celzaaien voor microscopie
Glazen microscoopglazenMatsunamiSFF-001Glazen platen voor het bevestigen van deksels
Glutaraldehyde (25% oplossing)Wako073-00536Alternatieve fixatie voor PLIN3
HuH7 cellenJCRB Cell BankJCRB0403Menselijke hepatoma cel lijn
LipidTOX Red Neutral Lipid StainInvitrogenH34476Alternatieve lipiddruppelkleuring
Stikstofgas (N2)Commercieel verkrijgbaarNiet van toepassingVerdamping van ethanol
OliezuurSigma-AldrichO1383Voor bereiding van oliezuur–BSA conjugaten
Paraformaldehyde, 4% in PBSNacalai Tesque09154-85Fixatie
Penicilline–StreptomycineGibco15140-122Antibiotica
Fosfaat-gebufferde zoutoplossing (×10)Niet van toepassingNiet van toepassingKan worden vervangen door een andere leverancier
RO-3306Sigma-AldrichSML0569CDK1 remmer voor G2/M synchronisatie
SlowFade Diamond Antifade MountantInvitrogenS36963Montage medium
Natriumchloride (NaCl)Wako191-01665Bereiding van 150 mM NaCl
Natriumhydroxide (NaOH)Wako080-01061Gebruikt voor de saponificatie van oliezuur
Tali Cellular Analysis SlidesThermoT10794Gebruikt voor celcyclusanalyse
Tali Image-based CytometerThermoNiet van toepassingGebruikt voor celcyclusanalyse
Triton X-100Sigma-AldrichT8787Celpermeabilisatie
Widefield fluorescence microscoopKEYENCEBZ-9000Snelle screening van mitotische cellen

Referenties

  1. Wang, G., Jiang, Q., Zhang, C. The role of mitotic kinases in coupling the centrosome cycle with the assembly of the mitotic spindle. J Cell Sci. 127 (Pt 19), 4111-4122 (2014).
  2. Asteriti, I. A., De Mattia, F., Guarguaglini, G. Crosstalk between AURKA and PLK1 in mitotic entry and spindle assembly. Front Oncol. 5, 283(2015).
  3. Gavet, O., Pines, J. Progressive activation of Cyclin B1-CDK1 coordinates entry to mitosis. Dev Cell. 18 (4), 533-543 (2010).
  4. Mardin, B. R., Agircan, F. G., Lange, C., Schiebel, E. Plk1 controls the NEK2A-PP1γ antagonism in centrosome disjunction. Curr Biol. 21 (13), 1145-1151 (2011).
  5. Taguchi, N., Ishihara, N., Jofuku, A., Oka, T., Mihara, K. Mitotic phosphorylation of dynamin-related GTPase DRP1 participates in mitochondrial fission. J Biol Chem. 282 (15), 11521-11529 (2007).
  6. Mitra, K., Wunder, C., Roysam, B., Lin, G., Lippincott-Schwartz, J. A hyperfused mitochondrial state achieved at G1-S regulates cyclin E buildup and entry into S phase. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (29), 11960-11965 (2009).
  7. Makiyama, T., et al. Trafficking of acetyl-C16-ceramide-NBD with long-term stability and no cytotoxicity into the Golgi complex. Traffic. 16 (5), 476-492 (2015).
  8. Tang, D., Yuan, H., Vielemeyer, O., Perez, F., Wang, Y. Sequential phosphorylation of GRASP65 during mitotic Golgi disassembly. Biol Open. 1 (12), 1204-1214 (2012).
  9. Xia, Y., et al. Silencing of ste20-type kinase TAOK1 confers protection against hepatocellular lipotoxicity through metabolic rewiring. Hepatol Commun. 7 (4), e0037(2023).
  10. Makishima, M., et al. Translation inhibitors induce formation of cholesterol ester-rich lipid droplets. PLoS ONE. 7 (8), e42379(2012).
  11. Krahmer, N., et al. Protein correlation profiles identify lipid droplet proteins with high confidence. Mol Cell Proteomics. 12 (5), 1115-1126 (2013).
  12. Takahashi, K., et al. Glucagon regulates intracellular distribution of adipose differentiation-related protein during triacylglycerol accumulation in the liver. J Lipid Res. 51 (9), 2571-2580 (2010).
  13. Itabe, H., Yamaguchi, T., Nimura, S., Sasabe, N. Perilipins: A diversity of intracellular lipid droplet proteins. Lipids Health Dis. 16 (1), 83(2017).
  14. Herker, E., Vieyres, G., Beller, M., Krahmer, N., Bohnert, M. Lipid droplet contact sites in health and disease. Trends Cell Biol. 31 (5), 345-358 (2021).
  15. Krahmer, N., et al. Organellar proteomics and phospho-proteomics reveal subcellular reorganization in diet-induced hepatic steatosis. Dev Cell. 47 (2), 205-221.e7 (2018).
  16. Ramosaj, M., et al. Lipid droplet availability affects neural stem/progenitor cell metabolism and proliferation. Nat Commun. 12 (1), 7362(2021).
  17. Cruz, A. L. S., Barreto, E. A., Fazolini, N. P. B., Viola, J. P. B., Bozza, P. T. Lipid droplets: Platforms with multiple functions in cancer hallmarks. Cell Death Dis. 11 (2), 105(2020).
  18. Mashek, D. G., Khan, S. A., Sathyanarayan, A., Ploeger, J. M., Franklin, M. P. Hepatic lipid droplet biology: Getting to the root of fatty liver. Hepatology. 62 (3), 964-967 (2015).
  19. Minami, Y., et al. Liver lipophagy ameliorates nonalcoholic steatohepatitis through extracellular lipid secretion. Nat Commun. 14 (1), 4084(2023).
  20. Makiyama, T., et al. Behavior of intracellular lipid droplets during cell division in Huh7 hepatoma cells. Exp Cell Res. 433 (2), 113855(2023).
  21. Makiyama, T., Higashi, S., Sakane, H., Nogami, S., Shirataki, H. γ-taxilin temporally regulates centrosome disjunction in a NEK2A-dependent manner. Exp Cell Res. 362 (2), 412-423 (2018).
  22. Aizawa, R., Ibayashi, M., Mitsui, J., Tsukamoto, S. Lipid droplet formation is spatiotemporally regulated in oocytes during follicular development in mice. J Reprod Dev. 70 (1), 18-24 (2024).
  23. Ohsaki, Y., Maeda, T., Fujimoto, T. Fixation and permeabilization protocol is critical for the immunolabeling of lipid droplet proteins. Histochem Cell Biol. 124 (5), 445-452 (2005).
  24. Helps, N., Luo, X., Barker, H., Cohen, P. Nima-related kinase 2 (NEK2), a cell-cycle-regulated protein kinase localized to centrosomes, is complexed to protein phosphatase 1. Biochem J. 349 (Pt 2), 509-518 (2000).
  25. O'Regan, L., Blot, J., Fry, A. M. Mitotic regulation by nima-related kinases. Cell Div. 2, 25(2007).
  26. Xie, K., et al. MDT-28/PLIN-1 mediates lipid droplet-microtubule interaction via DLC-1 in Caenorhabditis elegans. Sci Rep. 9 (1), 14902(2019).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Lipid droplet dynamiekfluorescentiemicroscopiecelcyclussynchronisatievisualisatie van mitosekleuring van neutrale lipidenorganelremodelleringenergiemetabolismecelcyclusprogressie

Gerelateerde artikelen