Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Een model van piroxicam-versnelde enterocolitis bij interleukine-10 knockoutmuizen voor het bestuderen van door ontsteking veroorzaakte metabole veranderingen

74 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/71448

⸱

11 augustus 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, The University of Texas Southwestern Medical Center, 2Department of Pathology, University of Texas Southwestern Medical Center, 3Department of Internal Medicine, University of Texas Southwestern Medical Center

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol gebruikt piroxicam om de ontwikkeling van colitis te versnellen in het interleukine (IL-10)-knockout muismodel. Het protocol zorgt voor synchronisatie van colitis, wat resulteert in rigoureuze, reproduceerbare resultaten onafhankelijk van geslacht, achtergrondspanning of vivariumcondities. Het dient als een nuttig model voor het bestuderen van metabole veranderingen tijdens darmontsteking.

Samenvatting

Inflammatoire darmziekte (IBD) is een chronische ontstekingsziekte van het spijsverteringskanaal die wereldwijd meer dan 10 miljoen mensen treft. Hoewel er veel onderzoek is gericht op de immunologische mechanismen en gevolgen achter IBD, is er minder bekend over hoe mucosale ontsteking bijdraagt aan metabole ontregeling, waaronder gewichtsverlies en verminderde eetlust. Hier beschrijven de auteurs een muismodel van piroxicam-accelereerde enterocolitis bij interleukine-10-knockout (IL-10-KO) muizen om ontstekingsgeïnduceerde metabole ontregeling te bestuderen. Het is bekend dat IL-10-KO muizen spontane enterocolitis ontwikkelen en een verhoogde vatbaarheid hebben voor enterocolitis veroorzaakt door infecties of medicijnen. Echter, vivariumcondities en de achtergrond van de stam zijn gerapporteerd als verstorende factoren in de ontwikkeling van colitis in dit model. Piroxicam, een niet-steroïd ontstekingsremmer (NSAID), is aangetoond dat het enterocolitis in diermodellen kan triggeren of versnellen door de slijmvliesblootstelling aan luminale bacteriën te vergroten. In dit protocol kregen mannelijke en vrouwelijke IL-10-KO muizen een piroxicam-verrijkt dieet in plaats van een regulier chow-dieet. Voedselinname en lichaamsgewicht werden dagelijks gemeten om veranderingen in het hele lichaam te weerspiegelen, samen met klinische manifestaties van enterocolitis zoals diarree en rectale bloedingen. Het protocol is efficiënt en reproduceerbaar, veroorzaakt tegelijkertijd enterocolitis bij meerdere muizen en maakt het mogelijk om metabole disregulatie te beoordelen in een inflammatoire darmziektemodel. Verdere studies met dit protocol kunnen de effecten van enterocolitis op andere componenten van metabole disregulatie onderzoeken, zoals energieverbruik en lichaamssamenstelling, en bredere verbanden onthullen tussen inflammatoire darmziekten en gastheermetabolisme.

Inleiding

De ziekte van Crohn en colitis ulcerosa, gezamenlijk bekend als inflammatoire darmziekte (IBD), zijn chronische auto-immuunziekten van het maag-darmkanaal die worden gekenmerkt door ontsteking van het slijmvlies met klinische manifestaties zoals buikpijn, gewichtsverlies, hematochezie en diarree. IBD treft miljoenen mensen wereldwijd, met de hoogste prevalentie in verwesterde samenlevingen1. In de VS wordt geschat dat meer dan 3 miljoen mensen getroffen zijn 2,3, met een stijgende incidentie en prevalentie, vooral onder kinderen en jongeren.

De exacte mechanismen achter de pathogenese van IBD zijn nog onvolledig begrepen, maar men denkt algemeen dat de ziekte het gevolg is van een overdreven immuunrespons op de darmmicrobiota bij genetisch gevoelige personen. Cytokines die ontstekingsreacties reguleren spelen een cruciale rol bij het handhaven van de darmhomeostase en bij de ontwikkeling van IBD. Hiervan is interleukine-10 (IL-10) een goed bestudeerd ontstekingsremmend cytokine dat helpt de immunologische homeostase bij mensen te behouden door zowel de aangeboren als de adaptieve armen van de immuunrespons 6,7 te reguleren. Opmerkelijk is dat polymorfismen in IL-10 en zijn receptor (IL-10RA/B) zijn vastgesteld bij baby's met zeer vroeg beginnende IBD (VEO-IBD), die klassiek binnen de eerste levensmaanden perianale ziekte presenteren8. Deze associatie wordt verder ondersteund door grootschalige exoomsequencing van volwassen patiënten met de ziekte van Crohn, waarbij IL-10RA werd geïdentificeerd als een ziektegevoeligheidslocus in niet-monogene IBD9. Bovendien is een niet-genetische route beschreven waarbij IL-10 neutraliserende antilichamen worden opgenomen bij VEO-IBD-patiënten, wat het belang van deze route voor het handhaven van mucosale immuunhomeostase10 verder benadrukt.

Voortbouwend op menselijke studies die IL-10 impliceren bij IBD, zijn interleukine-10-knockout (IL-10-KO) muizen ontwikkeld als model om de rol van IL-10 bij IBD te bestuderen. IL-10-KO muizen staan bekend om het ontwikkelen van spontane enterocolitis met een overdreven CD4+ Th1-respons op prikkels, meestal beginnend bij 8–12 weken van11 jaar. De ontwikkeling van spontane enterocolitis bij IL-10-KO muizen kan echter onvoorspelbaar zijn zonder een versnelde agent 12,13,14, afhankelijk van genetische stam, samenstelling van het microbiota en de huisvestingsomstandigheden 15,16. Het gebruik van een betrouwbaar protocol om colitis op te wekken is cruciaal voor het praktisch bruikbaar maken van het IL-10-KO-model. Eerdere studies maakten gebruik van niet-steroïde ontstekingsremmers (NSAID's) zoals piroxicam om enterocolitis op te wekken bij IL-10-KO muizen17,18. Deze studies hebben zich echter vooral gericht op immunologische veranderingen, met relatief weinig nadruk op de effecten van enterocolitis op de stofwisseling of op de rol van geslacht in de ernst van colitis19. De auteurs beschrijven hierin het gebruik van een met piroxicam verrijkt dieet om enterocolitis te induceren bij IL-10-KO muizen en karakteriseren metabole disregulatie en mucosale ontstekingsreacties in dit model met zowel mannelijke als vrouwelijke muizen. Dit protocol meet lichaamsgewicht en voedselinname om veranderingen in het hele lichaam te weerspiegelen, evenals klinische manifestaties van colitis en histologische en transcriptomische veranderingen die een mucosale ontsteking weerspiegelen. Dit efficiënte en reproduceerbare model biedt een waardevol hulpmiddel om de relatie tussen IBD en gastheermetabolisme te onderzoeken.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle dierproeven zijn uitgevoerd in overeenstemming met het protocol dat is goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van het University of Texas Southwestern Medical Center, in overeenstemming met de "Guide for the Care and Use of Laboratory Animals" [Goedkeuringsnummer: 2017-102011]. Euthanasie werd uitgevoerd volgens de richtlijnen van de instelling. Er was geen verdoving nodig voor de uitgevoerde procedures. Specifieke details voor materialen worden beschreven in de Tabel van Materiaal.

1. Het vaststellen van het piroxicam-versnelde enterocolitismodel bij IL-10-KO muizen

  1. Houd IL-10-KO muizen in een specifieke pathogegeenvrije (SPF) faciliteit op een 12-uur lichtcyclus met ad libitum toegang tot voedsel en water.
  2. Individueel huisvesten muizen van 7–8 weken oude, leeftijds- en geslachtsgematchte muizen in microisolatorkooien. Laat muizen minstens een week voor de start van het experiment wennen aan eenpersoonswoningen en dagelijkse behandeling.
    OPMERKING: Zorg ervoor dat het lichaamsgewicht >20 g voor reutjes of >17 g voor vrouwtjes is, en dat muizen vrij zijn van gevechtswonden.
  3. Wijs muizen toe aan een experimentele groep en een controlegroep. Voor de experimentele groep vervang de standaard chow door piroxicam versterkt chow. Voor de controlegroep bied verse standaardmaaltijden aan. Voeg 50 g voer toe aan elke kooihopper.
    OPMERKING: Verdeel minstens vijf muizen per geslacht per geslacht. De met piroxicam versterkte chow (200 ppm) werd door Teklad bereid met behulp van piroxicam die door de onderzoekers werden geleverd voor de productie van een speciaal laboratoriumdierdieet. Om variabiliteit per batch te minimaliseren, wordt aanbevolen dat alle dieren binnen een bepaald experiment voedsel uit dezelfde productiebatch ontvangen. Waar mogelijk moet dezelfde batch ook in experimenten worden gebruikt om de reproduceerbaarheid te verbeteren.

2. Monitoring van lichaamsgewicht en voedingsgedrag

  1. Met een analytische weegschaal noteer je het lichaamsgewicht van elke muis. Weeg elke muis afzonderlijk op hetzelfde tijdstip, elke dag gedurende 7 opeenvolgende dagen. Rapporteer het dagelijkse lichaamsgewicht als percentage van het basisgewicht op dag 0 (ingesteld op 100%).
    OPMERKING: Een gewichtsverlies van meer dan 20% duidt op overmatige stress en risico op nadrijvende overlijden. Muizen moeten worden geëuthanaseerd als deze drempel wordt bereikt.
  2. Met een analytische schaal noteer je het initiële gewicht van het met piroxicam versterkte voer en het standaardvoedsel in elke kooi.
  3. Meet vervolgens het resterende voedsel in elke kooihopper op hetzelfde tijdstip, elke dag, gedurende 7 opeenvolgende dagen.
  4. Bereken de dagelijkse voedselconsumptie door het dagelijkse voedselgewicht af te trekken van het resterende voedsel van de vorige dag.
    OPMERKING: Controleer routinematig de hoeveelheid voedsel en vul deze bij als deze onder de 10 g ligt. De smakelijkheid van piroxicam chow beïnvloedt de inname niet en moet sterk lijken op die van standaard food.

3. Monitoring van ziekteactiviteit

  1. Op dag 0 en 7 inspecteer je visueel de ontlastingspellets van individuele muizen en bepaal je de aanwezigheid van bloed in de ontlasting.
  2. Als er geen bloed zichtbaar is, voer dan een fecaal occult bloedtest uit door een pellet op de testkaart te smeren en vervolgens het meegeleverde ontwikkelreagens toe te voegen. Scoreresultaten volgens Tabel 1.
  3. Op dag 0 en 7 inspecteer je visueel vers geholpen fecale pellets om de consistentie van de ontlasting te beoordelen. Gebruik een platte tang om de consistentie te bepalen. Scoreresultaten volgens Tabel 1.
  4. Bepaal op dag 0 en 7 de mate van rectale prolaps door het perianale gebied te inspecteren. Scoreresultaten volgens Tabel 1.
  5. Meet het lichaamsgewicht zoals hierboven beschreven. Scoreresultaten volgens Tabel 1.
    OPMERKING: Disease activity Index (DAI) scoring moet door dezelfde onderzoeker gedurende het hele experiment op een geblindeerde manier worden uitgevoerd om consistentie te waarborgen, waarnemersbias te minimaliseren en de betrouwbaarheid van de beoordeling te verbeteren.

4. Oogst van colonisch weefsel

  1. Muizen worden geëuthanaseerd door CO2-verstikking en cervicale ontwrichting, zoals elders gerapporteerd20.
  2. Plaats de muis in rugligging en spray 70% ethanol op de buikbuik.
  3. Til de huid op met een tang en gebruik een chirurgische schaar om langs de middenlijn te knippen. Leg de buikholte bloot en lokaliseer de colon.
  4. Maak de dikke darm en het ceum bloot met een stomp dissectie. Verwijder de colon en bloc, inclusief het cekumum en de anale manchet.
  5. Plaats de dikke darm op een vlak oppervlak en verwijder eventueel bindweefsel.
  6. Meet en registreer de lengte van de dikke darm.
  7. Na het meten van de dikke darmlengte verwijder je het ceum door te snijden bij de ceco-colonische overgang.
  8. Bereid een 10 mL spuit voor gevuld met fosfaatgebuffte zoutoplossing (PBS) met een bijgevoegde 22-gauge kogeltip herbruikbare stalen gavage-naald. Rijg de naald in de dikke darm en spoel de darminhoud weg.
  9. Plaats de doorgespoelde dikke darm in een petrischaal met PBS en spoel af om de resterende inhoud te verwijderen. Zodra het is goedgekeurd, gebruik het voor downstream assays.

5. Histologieanalyse

  1. Leg de dikke darm plat op een glazen sparat. Gebruik een tang om het weefsel om zich heen te wikkelen, beginnend aan het distale uiteinde, om een "Swiss roll" te vormen. Op deze manier blijft het distale/anale uiteinde in de binnenste rol, terwijl de meer proximale gebieden zich uitstrekken naar de buitenste rol.
  2. Met een naald van 27 gauge pin je de gerolde colon om de rol vast te houden en plaats je deze in een inbeddings-tissue cassette.
  3. Om weefsels te herstellen, dompel je de weefselcassettes 16 uur onder in een gebuffreerde formalineoplossing bij 4 °C.
    VOORZICHTIG: 10% formaline is schadelijk bij contact met de huid en kan ernstige huidbrandwonden en oogschade veroorzaken. Ga voorzichtig om met beschermende handschoenen en een wetenschappelijke bril. Restformaline moet op de juiste manier worden afgevoerd volgens institutionele richtlijnen.
  4. Na formalinefixatie worden weefsels verwerkt voor paraffine-inbedding en worden deze in secties geplaatst voor montering op glazen glaasjes.
    OPMERKING: Monsters moeten worden ingediend bij een histologielaboratorium met de benodigde apparatuur voor het verwerken van weefselcassettes in paraffine, scrollsectie, diamontage en hematoxyline- en eozinkleuring.
  5. Kleurweefselslides met hematoxyline en eosine (HE), volgens vastgestelde protocollen21.
  6. Met behulp van het histologische scoresysteem beschreven in Tabel 2 evalueer u de volgende histologische kenmerken in elke sectie: weefselschade door enterocolitis, lamina propria inflammatoire celinfiltratie en percentage van het betrokken gebied. Tel de scores in elke sectie samen om een totaalscore te genereren (Tabel 2).
    Totaalscore = Kenmerken × Betrokkenheid (Weefselschade) + Kenmerken × Betrokkenheid (Lamina Propria Inflammatoire Celfilteratie) (1)
  7. Representatieve histopathologische beelden van weefselschade en celinfiltratie zijn te vinden in de publicatie van Erben et al.22.
    OPMERKING: Histologische scoring moet op een geblindeerde manier worden uitgevoerd, bij voorkeur door een getrainde patholoog, om consistentie en betrouwbaarheid van de beoordeling te waarborgen.

6. Immunofluorescentiekleuring van formaline-gefixeerd paraffine-ingebed weefsel

  1. Plaats folie-glaasjes in een slide-rek en plaats ze 1 uur in een dijendroger van 55 °C om paraffine te smelten.
  2. Plaats de slides in een beitsrek en dompel het rek achtereenvolgens 3 minuten onder in kleurpotjes met xyleen. Herhaal deze stap drie keer.
  3. Doe het kleurrek 3 minuten onder in kleurpotjes met 100% ethanol. Herhaal deze stap drie keer.
  4. Dompel het beitsrek 3 minuten onder in de kleurpot met 95% ethanol.
  5. Dompel het beitsrek 3 minuten onder in de kleurpot met 80% ethanol.
  6. Doe het kleurrek 5 minuten onder in kleurpotten met gedeïoniseerd (DI) water.
    OPMERKING: Alle voorgaande stappen moeten worden uitgevoerd in een geventileerde kap vanwege de xyleendampen. Ga voorzichtig om met beschermende handschoenen en een wetenschappelijke bril. Restxyleen moet correct worden afgevoerd volgens de institutionele richtlijnen.
  7. Breng de glaasglaasjes over naar een preparatrek en dompel ze onder in een kleurpotje met 1× citraat-extractieoplossing.
  8. Plaats de vlekpot in de steun van de vlekschaal.
  9. Plaats de steun van de vlekbak in de snelkookpan.
  10. Kook 15 minuten in een snelkookpan.
  11. Haal de slides uit de snelkookpan en laat ze afkoelen tot kamertemperatuur.
  12. Incubeer glaasjes met een 300 μL blokkeringsbuffer (3,5% geitenserum verdund in PBS) gedurende 1 uur in een bevochtigde kamer. Zorg ervoor dat het weefsel volledig bedekt is met de blokkeringsbuffer.
  13. Blootstelling aan de slides aan 300 μL primaire antistof, verdund in blokkeringsbuffer, gedurende 16 uur bij 4 °C, binnen een bevochtigde kamer. Zorg ervoor dat het weefsel volledig bedekt is met het primaire antilichaam. Het volgende primaire antilichaam werd gebruikt: Anti-S100A8/S100A9 (1:500).
    OPMERKING: Antistofverdunningen zijn specifiek voor reagentia en dienen de aanbevelingen van de leverancier te volgen.
  14. Spoel de glaasjes af door ze drie keer 5 minuten in PBS te dompelen in een kleurpotje.
  15. Blootstelling van slides aan 300 μL van een verdund fluorescerend secundair antilichaam in blokkeringsbuffer gedurende 1 uur bij kamertemperatuur, in een bevochtigde kamer. Zorg ervoor dat het weefsel volledig bedekt is met het secundaire antilichaam. Het volgende fluorescerende secundaire antilichaam werd gebruikt: geitenanti-Rabbit Alexa Fluor 555 (1:150 verdunning).
    OPMERKING: Vanaf dat moment moeten preparaten beschermd worden tegen licht om fotobleeken van fluoroforen te voorkomen. Verdunningen van secundaire antilichamen zijn reagentia-specifiek en dienen de aanbevelingen van de leverancier te volgen.
  16. Spoel de glaasjes af door ze drie keer 5 minuten in PBS te dompelen in een kleurpotje.
  17. Blootstel glaasjes aan nucleaire kleuring door ze 20 minuten in een kleuringspot onder te dompelen in Hoechst-oplossing, verdund 1:5000 in PBS.
  18. Spoel de glaasjes af door ze drie keer 5 minuten in PBS te dompelen in een kleurpotje.
  19. Veeg voorzichtig eventuele PBS van de dia's met een niet-schurend weefsel. Voeg 50 μL antifade montagemedium en een coverslip toe.

7. RNA-extractie

  1. Vries de hele dikke darm of een fragment in vloeibare stikstof en bewaar het vervolgens bij -80 °C. Alternatief dompel je in 1,5 mL RNALater-conserveringsoplossing en bewaar volgens de instructies van de fabrikant.
  2. Ontdooi eerder bevroren dikke darm en plaats ze op een vlak oppervlak. Verstoor en homogeniseer het weefsel met een handzame homogenisator.
  3. Isoleer RNA met behulp van de kit, volgens de instructies van de fabrikant.
  4. Meet de RNA-concentratie met een spectrofotometer. Een260/A280-verhouding > 1,8 en A260/A230-verhoudingen van 2,0–2,2 duiden op acceptabele RNA-zuiverheid.
  5. Ga verder met reverse transcriptie, gevolgd door qPCR met SYBR groene intercalerende kleurstof.
  6. Analyseer resultaten met behulp van het kwantificatieplatform of een vergelijkbaar instrument.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Mannelijke en vrouwelijke IL-10-KO muizen ontwikkelen enterocolitis na een korte blootstelling aan een met piroxicam verrijkt dieet (Figuur 1A–E). Op dag 2 vertoonden muizen die aan piroxicam waren blootgesteld statistisch significant een groter gewichtsverlies dan hun gecontroleerde controles die regelmatig voedsel van hetzelfde geslacht hadden, en er werd vergelijkbaar gewichtsverlies waargenomen tussen de geslachten (...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Inflammatoire darmziekte is een complexe polygene aandoening waarbij preklinische modellen als onschatbare instrumenten dienen om routes te ontleden die bijdragen aan de pathogenese van IBD en nieuwe diagnostische en therapeutische strategieën te ontwikkelen. Momenteel vertrouwen veel preklinische IBD-modellen op chemische blootstelling, zoals dextransulfaatnatrium (DSS), oxazolon en trinitrobenzeensulfonzuur (TNBS), vanwege hun gebruiksgemak. Genetische modellen die spontane colitis ont...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs geven geen relevante openbaarmakingen aan.

Dankbetuigingen

We willen de kernfaciliteiten van UTSW bedanken die hebben bijgedragen aan het hier gepresenteerde werk. Dit werk werd ondersteund door de volgende financieringsbronnen: NIH via K08DK127197 (LS-D), T32DK007745 (JW) en de Southwestern Foundation via de Docstars-beurs (LS-D).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
10% buffered formalinStatLab28600-11 Galllon
27 G needlesBD305109
Anti-S100A8 + S100A9 antibodyAbcamAB288715
BalanceFisher scientificS94792DFisher Science Education Portable Balances, 300 g
Citrate bufferSigma AldrichC9999-1000mL
DI waterFisher scientificSTLSL301
Dissecting forcepsFisher scientific22-327379
Ethanol, 100% 200 proofFisher scientificNC1675398Pharmco Products ETHYL ALCOHOL 200 PROOF
Ethanol, 190 proof, 95%Fisher scientificAC615110010
Ethanol, 80%Fisher scientificT08204K7
EZ-Quick Slide Staining DishIHC worldIW-2511Staining jar
EZ-Quick Slide Staining RackIHC worldIW-2512Slide rack
Feeding needleFisher scientificNC992498622 gauge, 25 mm
Fine scissorsFisher scientific14060-11
Flat forcepsFisher scientific21-125-109
Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ 555Thermo FisherAB_2535849
Handheld homogenizerFisher scientific15-340-167
HemoCueDanlee Medical Products, Inc.BCK 64151AHemoccult Dev/ Single Slide Test Cards - CLIA Waived
Hoechst 33342Invitrogen62249
IL-10 KO MiceThe Jason LaboratoryStrain #: 002251IL10-KO mice, genotype: B6.129P2-IL-10tm1Cgn/J
IVC mouse cagingAllentownMouse 500
Liquid nitrogenAirgasNI UHP300
Microscope cover glassFisher scientific12541033
NanodropThermo FisherND-ONE-W
Normal Goat serumVector labsS-1000-20
Phosphate buffered saline (PBS)Sigma AldrichD8537
Petri dishesFisher scientificFB0875713
PiroxicamSigma AldrichP0847supply to inotiv for preparation of custom animal diet
Piroxicam-fortified chowInotivCustom200 ppm
Primer: Mouse GAPDH forwardSigma AldrichN/A5' AGGTCGGTGTGAACGGATTTG 3' forward
Primer: Mouse GAPDH reverseSigma AldrichN/A5' TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA 3' reverse
Primer: Mouse IFN-G forwardSigma AldrichN/A5' ACTGGCAAAAGGATGGTGAC 3' forward
Primer: Mouse IFN-G reverseSigma AldrichN/A5' TGAGCTCATTGAATGCTTGG 3' reverse
Primer: Mouse IL-10 forwardSigma AldrichN/A5' CTTGCACTACCAAAGCCACA 3' (common)
Primer: Mouse IL-10 reverseSigma AldrichN/A5' GTTATTGTCTTCCCGGCTGT 3' (Wild type reverse)
Primer: Mouse IL-10 reverse (2)Sigma AldrichN/A5' CCACACGCGTCACCTTAATA 3' (Mutant reverse)
Primer: Mouse IL-1B forwardSigma AldrichN/A5' GCTGAAAGCTCTCCACCTCA 3' forward
Primer: Mouse IL-1B reverseSigma AldrichN/A5' AGGCCACAGGTATTTTGTCG 3' reverse
Primer: Mouse IL-6 forwardSigma AldrichN/A5' GTTCTCTGGGAAATCGTGGA 3' forward
Primer: Mouse IL-6 reverseSigma AldrichN/A5' TTTCTGCAAGTGCATCATCG 3' reverse
Primer: Mouse TNF forwardSigma AldrichN/A5' GCAGGTTCTGTCCCTTTCAC 3' forward
Primer: Mouse TNF reverseSigma AldrichN/A5' AGTGCCTCTTCTGCCAGTTC 3' reverse
QuantStudio 7 ProThermo FisherA43183
RNAlater solutionInvitrogenAM7020RNA Stabilization Solution, 100 mL
Rneasy mini kitQiagen74104
SHURDry SD-II Slide DryerGeneral dataSD-ll-120
Simport Scientific EasyDip Slide Staining RackFisher scientific22-038-494Staining rack
SlowFade Gold antifade reagentInvitrogenS36936
Staining dish supportBioSBBSB7086
Staintray IHC slide staining systemIHC worldM918-1Humidified chamber for IHC
SuperScript VILOInvitrogen11755050
SYBR Green Master mixApplied BiosystemsA46109
Tintoretriever pressure cookerBioSBBSB7008
Tissue cassettesFisher scientific 50-197-8152Research Products International Corp Tissue Processing Cassette, Pink, 500 per Case
XylenePharmco3990000001 Gallon

Referenties

  1. Hracs L, Windsor JW, Gorospe J, et al. Global evolution of inflammatory bowel disease across epidemiologic stages. Nature. 2025;642(8067):458-466.
  2. Dahlhamer JM, Zammitti EP, Ward BW, Wheaton AG, Croft JB. Prevalence of Inflammatory Bowel Disease Among Adults Aged ≥18 Years - United States, 2015. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2016;65(42):1166-1169.
  3. Ng SC, Shi HY, Hamidi N, et al. Worldwide incidence and prevalence of inflammatory bowel disease in the 21st century: a systematic review of population-based studies. Lancet. 2017;390(10114):2769-2778.
  4. Caron B, Honap S, Peyrin-Biroulet L. Epidemiology of Inflammatory Bowel Disease across the Ages in the Era of Advanced Therapies. J Crohns Colitis. 2024;18(Supplement_2):ii3-ii15.
  5. Ye Y, Manne S, Treem WR, Bennett D. Prevalence of Inflammatory Bowel Disease in Pediatric and Adult Populations: Recent Estimates From Large National Databases in the United States, 2007-2016. Inflamm Bowel Dis. 2020;26(4):619-625.
  6. Rubtsov YP, Rasmussen JP, Chi EY, et al. Regulatory T cell-derived interleukin-10 limits inflammation at environmental interfaces. Immunity. 2008;28(4):546-558.
  7. Shouval DS, Biswas A, Goettel JA, et al. Interleukin-10 receptor signaling in innate immune cells regulates mucosal immune tolerance and anti-inflammatory macrophage function. Immunity. 2014;40(5):706-719.
  8. Glocker EO, Kotlarz D, Boztug K, et al. Inflammatory bowel disease and mutations affecting the interleukin-10 receptor. N Engl J Med. 2009;361(21):2033-2045.
  9. Sazonovs A, Stevens CR, Venkataraman GR, et al. Large-scale sequencing identifies multiple genes and rare variants associated with Crohn’s disease susceptibility. Nat Genet. 2022;54(9):1275-1283.
  10. Griffin H, Ceron-Gutierrez L, Gharahdaghi N, et al. Neutralizing Autoantibodies against Interleukin-10 in Inflammatory Bowel Disease. N Engl J Med. 2024;391(5):434-441.
  11. Kühn R, Löhler J, Rennick D, Rajewsky K, Müller W. Interleukin-10-deficient mice develop chronic enterocolitis. Cell. 1993;75(2):263-274.
  12. Berg DJ, Davidson N, Kühn R, et al. Enterocolitis and colon cancer in interleukin-10-deficient mice are associated with aberrant cytokine production and CD4(+) TH1-like responses. J Clin Invest. 1996;98(4):1010-1020.
  13. Mizoguchi A. Animal models of inflammatory bowel disease. Prog Mol Biol Transl Sci. 2012;105:263-320.
  14. Hart ML, Ericsson AC, Franklin CL. Differing Complex Microbiota Alter Disease Severity of the IL-10-/- Mouse Model of Inflammatory Bowel Disease. Front Microbiol. 2017;8:792.
  15. Keubler LM, Buettner M, Häger C, Bleich A. A Multihit Model: Colitis Lessons from the Interleukin-10-deficient Mouse. Inflamm Bowel Dis. 2015;21(8):1967-1975.
  16. Büchler G, Wos-Oxley ML, Smoczek A, et al. Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions. Inflamm Bowel Dis. 2012;18(5):943-954.
  17. Berg DJ, Zhang J, Weinstock JV, et al. Rapid development of colitis in NSAID-treated IL-10-deficient mice. Gastroenterology. 2002;123(5):1527-1542.
  18. Hale LP, Gottfried MR, Swidsinski A. Piroxicam treatment of IL-10-deficient mice enhances colonic epithelial apoptosis and mucosal exposure to intestinal bacteria. Inflamm Bowel Dis. 2005;11(12):1060-1069.
  19. Holgersen K, Kvist PH, Markholst H, Hansen AK, Holm TL. Characterization of enterocolitis in the piroxicam-accelerated interleukin-10 knock-out mouse--a model mimicking inflammatory bowel disease. J Crohns Colitis. 2014;8(2):147-160.
  20. B C, K B, V B, et al. Recommendations for euthanasia of experimental animals: Part 2. DGXT of the European Commission. Laboratory animals. 1997;31(1).
  21. Ellis JL, Yin C. Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish. J Vis Exp. 2017;(123):55630.
  22. Erben U, Loddenkemper C, Doerfel K, et al. A guide to histomorphological evaluation of intestinal inflammation in mouse models. Int J Clin Exp Pathol. 2014;7(8):4557-4576.
  23. Holgersen K, Kutlu B, Fox B, et al. High-resolution gene expression profiling using RNA sequencing in patients with inflammatory bowel disease and in mouse models of colitis. J Crohns Colitis. 2015;9(6):492-506.
  24. Ananthakrishnan AN, Adler J, Chachu KA, et al. AGA Clinical Practice Guideline on the Role of Biomarkers for the Management of Crohn’s Disease. Gastroenterology. 2023;165(6):1367-1399.
  25. Singh S, Ananthakrishnan AN, Nguyen NH, et al. AGA Clinical Practice Guideline on the Role of Biomarkers for the Management of Ulcerative Colitis. Gastroenterology. 2023;164(3):344-372.
  26. Sifuentes-Dominguez LF, Li H, Llano E, et al. SCGN deficiency results in colitis susceptibility. eLife. 2019;8:e49910.
  27. Sellon RK, Tonkonogy S, Schultz M, et al. Resident enteric bacteria are necessary for development of spontaneous colitis and immune system activation in interleukin-10-deficient mice. Infect Immun. 1998;66(11):5224-5231.
  28. Bábíčková J, Tóthová Ľ, Lengyelová E, et al. Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens. Inflammation. 2015;38(5):1996-2006.
  29. Wagnerova A, Babickova J, Liptak R, Vlkova B, Celec P, Gardlik R. Sex Differences in the Effect of Resveratrol on DSS-Induced Colitis in Mice. Gastroenterol Res Pract. 2017;2017:8051870.
  30. Maite CB, Roy M, Emilie V. The Effect of Sex-Specific Differences on IL-10-/- Mouse Colitis Phenotype and Microbiota. Int J Mol Sci. 2023;24(12):10364.
  31. Dokoshi T, Seidman JS, Cavagnero KJ, et al. Skin inflammation activates intestinal stromal fibroblasts and promotes colitis. J Clin Invest. 2021;131(21):e147614.
  32. Dokoshi T, Chen Y, Cavagnero KJ, et al. Dermal injury drives a skin-to-gut axis that disrupts the intestinal microbiome and intestinal immune homeostasis in mice. Nat Commun. 2024;15(1):3009.
  33. Allard C, Zizzari P, Quarta C, Cota D. Food intake and body weight in rodent studies: the devil is in the details. Nat Metab. 2022;4(11):1424-1426.
  34. M W, R L, S S, et al. Combination therapy using intestinal organoids and their extracellular vesicles for inflammatory bowel disease complicated with osteoporosis. Journal of Orthopedic Translation. 2025;53.
  35. Y G, H Z, Y Y, et al. Injectable body temperature-responsive hydrogel for encephalitis treatment via sustained release of nano-anti-inflammatory agents. Biomaterials translational. 2024;5(3).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Piroxicam enterocolitisinflammatoire darmziektemetabole dysregulatiemuismodelNSAID ge nduceerde colitismucosale ontstekinggewichtsverliesmeting van voedselinnameenergieverbruik

Dit artikel is gepubliceerd

Video binnenkort beschikbaar

Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.