Methodenartikel

Multimodale evaluatie van elektroacupunctuurbehandeling voor knieartrose bij muizen

13 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/71901

⸱

6 oktober 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Acupuncture and Moxibustion, Shuguang Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 3Institute of Science and Technology for Brain-Inspired Intelligence, Fudan University, 4Renji Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Deze studie combineert gedragsmatige en beeldvormingstechnieken voor een multimodale, longitudinale beoordeling van muizen met artrose na elektroacupunctuur, inclusief kraakbeinvleuring en scoren volgens de Osteoarthritis Research Society International (OARSI).

Samenvatting

Artrose is een chronische degeneratieve gewrichtsaandoening die vaak de knie treft en pijn, zwelling, stijfheid en functionele beperkingen veroorzaakt. Synoviale ontsteking en veranderingen in de periarticulaire spieren dragen bij aan het ontstaan en de progressie van de ziekte. Klinisch bewijs suggereert dat elektroacupunctuur lokale ontsteking kan verlichten en het kraakbeensmetabolisme kan moduleren. In deze studie werd knieartrose bij muizen geïnduceerd door chirurgische destabilisatie van de mediale meniscus. De resultaten werden beoordeeld met een multimodaal protocol bestaande uit de rotarod-test, echografie, infraroodthermografie, MRI en histologische kleuring. Het volume van de gewrichtsholte en de huidtemperatuur werden longitudinaal gemonitord, en MRI aan het eindpunt en Safranin O-Fast Green-kleuring werden gebruikt om signaalveranderingen in de periarticulaire spieren en kraakbeenpathologie te beoordelen. Elektroacupunctuur was geassocieerd met een verbeterde motorische prestatie, verminderde gewrichtszwelling, een hogere lokale huidtemperatuur, minder uitgesproken signaalveranderingen in de periarticulaire spieren op MRI-beelden en lagere scores voor kraakbeendegeneratie. Deze bevindingen ondersteunen het gebruik van dit multimodale protocol om elektroacupunctuur-gerelateerde uitkomsten te beoordelen in een preklinisch muismodel.

Inleiding

Knieartrose (KOA) is de meest voorkomende osteoarticulaire aandoening wereldwijd, met naar schatting 250 miljoen getroffenen1. De pathologische kenmerken omvatten progressieve kraakbeendegeneratie en synoviale proliferatie, en klinisch manifesteert het zich door pijn, zwelling en functionele beperkingen2,3.

Artrose (OA) werd lange tijd beschouwd als een niet-inflammatoire gewrichtsaandoening, maar tegenwoordig wordt erkend dat er een inflammatoire component aanwezig is, waarbij synovitis bij de meeste patiënten detecteerbaar is. Pro-inflammatoire cytokinen zoals interleukine (IL)-1β en IL-18, samen met reactieve zuurstofverbindingen en biomechanische stress, worden geacht bij te dragen aan het pathologische proces4. Ontsteking gaat vaak gepaard met een verhoogde lokale doorbloeding, wat zich klinisch manifesteert als roodheid, warmte en zwelling5. Naast het versnellen van kraakbeendegeneratie en functionele achteruitgang, kan ontsteking bijzonder actief zijn tijdens de vroege stadia van de ziekte. Daarom zou het monitoren van de inflammatoire status over tijd inzicht kunnen geven in behandelstrategieën die gericht zijn op het onderliggende mechanisme en een stadiumgerichte aanpak mogelijk maken6,7. Eerdere studies met echografie (US) van muisknieën identificeerden een driehoekig gebied tussen de tibiale en femorale condylen. Histologische analyse bevestigde dat dit gebied zacht weefsel bevat, waaronder het synovium, de meniscus en het vetkussen, evenals ruimtes gevuld met synoviaal vocht. Dit via echografie gedetecteerde gebied wordt gedefinieerd als het interarticulaire volume, dat de bovengenoemde zachtweefselgebieden omvat8.

Bovendien is temperatuur een cruciale fysieke parameter die direct de progressie van gewrichtsentsteking weerspiegelt. Verhoogde lokale temperatuur is een van de vier klassieke tekenen van ontsteking, en thermografische beeldvorming maakt een precieze detectie en kwantificering van deze thermische veranderingen mogelijk9. Een recente systematische review benadrukte de correlatie tussen de oppervlaktetemperatuur van de huid en zowel inflammatoire als degeneratieve gewrichtsaandoeningen10, wat de bruikbaarheid van infraroodthermografie (IRT) in artritisonderzoek en klinisch management verder onderbouwt11. Bovendien biedt IRT een indirecte maatstaf die gerelateerd is aan weefselperfusie en metabole activiteit, wat nuttig kan zijn voor het monitoren van therapeutische reacties.

In deze studie hebben we de rotarod-test, US, IRT en magnetic resonance imaging (MRI) gecombineerd om de effecten van elektroacupunctuur (EA) te evalueren in een muismodel van OA. Deze multimodale aanpak maakte een gelijktijdige beoordeling mogelijk van de motorische prestaties, gewrichtsmorfologie, thermische veranderingen en ontsteking van zacht weefsel; uitkomsten die niet uitsluitend via histologie verkrijgbaar zijn. Belangrijk is dat dit panel complementaire informatie biedt over meerdere biologische niveaus met minimale extra kosten of arbeid. Hierdoor is het bijzonder geschikt voor preklinische studies die herhaalde, niet-invasieve monitoring over een bepaalde periode vereisen, vooral wanneer wordt verwacht dat de onderzochte interventie slechts bescheiden effecten teweegbrengt of wanneer het temporele profiel van de respons onzeker is. Voor zover wij weten is dit de eerste studie die deze specifieke combinatie van technieken, inclusief gewrichtsholtevolume, spierontsteking en lokale temperatuur, gebruikt om de therapeutische respons op elektroacupunctuur bij OA te volgen. Het door ons beschreven protocol is praktisch en reproduceerbaar, en wij geloven dat het kan dienen als een nuttige referentie voor toekomstige longitudinale real-time effectiviteitsbeoordelingen in vergelijkbare experimentele settings.

Protocol

Alle experimentele procedures zijn beoordeeld en goedgekeurd door de commissie voor ethiek met betrekking tot laboratoriumdieren van Wuchuang Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. (ethische goedkeuringsnummer: WTPZ20260209001). Alle dieren die in deze studie zijn gebruikt, waren 8 weken oude C57BL/6-muizen met een gewicht van ongeveer 20 g, aangeschaft bij een commerciële leverancier (zie de Tabel met materialenHet experiment omvatte 24 muizen. Na een acclimatisatieperiode van 1 week werden de dieren willekeurig toegewezen, waarbij zes muizen aan elk van de vier experimentele condities werden toegewezen. Deze condities bestonden uit een sham-operatie, destabilisatie van de mediale meniscus (DMM), sham-acupunctuur (SA) en elektroacupunctuur (EA). Het aantal gebruikte dieren werd bepaald zonder prospectieve steekproefberekening; in plaats daarvan werd de groepsgrootte gekozen op basis van eerdere elektroacupunctuurstudies met vergelijkbare artrosemodellen en eindpunten, en in overeenstemming met het 3V-principe.

1. Preoperatieve zorg en modellering

OPMERKING: Alle modelleringsprocedures werden uitgevoerd door een ervaren chirurgisch technicus. Plaats de dieren pas terug in hun kooien nadat ze het bewustzijn hebben hervonden op een verwarmingsmat.

  1. Acclimateer de muizen gedurende ten minste 7 dagen aan de experimentele omgeving voordat het experiment begint.
  2. Steriliseer alle chirurgische instrumenten voorafgaand aan de operatie. Desinfecteer het operatiegebied grondig.
  3. Zet de gasanesthesieapparatuur aan. Plaats de muis in de inductiekamer en induceer algehele anesthesie met 2–3% isofluraan gedurende 5 min.
  4. Nadat de inductie van de anesthesie is voltooid, wordt de muis overgebracht naar de operatietafel. Handhaaf de anesthesie door continu 1–1.5% isofluraan toe te dienen via een anesthesiemasker totdat de chirurgische procedure is voltooid.
  5. Positioneer de muis in rugligging met het kniegewricht naar boven gericht. Zorg dat de positie stabiel is en de chirurgische plaats volledig is vrijgelegd. Gebruik DMM om een model te creëren in het rechter achterpoot12. Maak voor de Sham-groep een incisie op dezelfde locatie en hecht deze vervolgens dicht.
    1. DMM-chirurgisch proces
      1. Maak een longitudinale mediale parapatellaire incisie van 1 cm om het kniegewricht vrij te leggen.
      2. Maak via de mediale parapatellaire incisie die in stap 1.5.1.1 is gemaakt een longitudinale opening in het gewrichtskapsel. Gebruik een pincet om het kapsel voldoende te scheiden van het omliggende weefsel. Ondersteun vervolgens de distale achterpoot in de linkerhand zonder overmatige druk uit te oefenen en gebruik het pincet om de patella en het patellaire ligament lateraal te verschuiven, waardoor het kniegewricht wordt blootgelegd. Behandel de poot gedurende deze procedure voorzichtig om letsel te voorkomen.
        OPMERKING: Een adequate release van het gewrichtskapsel zorgt ervoor dat de patella met minimale kracht kan worden verplaatst.
      3. Druppel tijdens de operatie steriele zoutoplossing op het oppervlak van het gewrichtskraakbeen om uitdroging te voorkomen.
      4. Lokaliseer de mediale meniscus in de ruimte tussen de mediale femorale condyl en het mediale tibiale plateau. Volg vanaf de laterale zijde het mediale meniscotibiale ligament tot aan de aanhechting bij de tibiale intercondylaire eminentie. Stabiliseer de achterpoot voorzichtig met de hand en transecteer het ligament met een No. 10 chirurgisch mesje, waarbij u er zorg voor draagt dat het kraakbeen onder de mediale meniscus niet wordt geraakt. OPMERKING: Zorg ervoor dat het gewrichtskraakbeen en andere ligamenten niet worden beschadigd. In veel gevallen moet het bovenliggende vetkussen worden teruggetrokken, maar niet verwijderd, om het ligament te kunnen identificeren.
      5. Breng de randen van het kniegewrichtskapsel bij elkaar en zet deze vast met 6-0 absorbeerbaar hechtmateriaal.
      6. Sluit de huid met 6-0 zijdehechting12.
  6. Instilleer voor de postoperatieve zorg één druppel 0.25% bupivacaïne in de chirurgische plaats voor lokale analgesie, en houd de muizen in stand met ad libitum toegang tot voedsel en water.
    OPMERKING: Handhaaf tijdens de anesthesie de zuurstofstroom binnen het bereik van 0.5–1 NL/min. Een succesvolle anesthesie werd bevestigd door het verlies van de righting reflex, de afwezigheid van terugtrekreacties bij een knijpbeweging in de teen en een stabiele, regelmatige ademhaling. Gebruik tijdens de gehele operatie steriele fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) als irrigatievloeistof om de hydratatie van het kraakbeen te behouden. De specifieke maten en specificaties van de absorbeerbare hechting voor de sluiting van het gewrichtskapsel en de zijdehechting voor de huidsluiting zijn gedetailleerd in de Table of Materials.

2. Elektroacupunctuurbehandeling

OPMERKING: Interventies in de SA- en EA-groepen begonnen 1 week na de vestiging van het model (Figuur 1A). Beide groepen kregen om de dag een behandeling, drie keer per week, gedurende 15 min per sessie over een periode van 4 weken. De Sham- en DMM-groepen ondergingen dezelfde anesthesie- en immobilisatieprocedures volgens hetzelfde schema, maar zonder naalden of elektrische stimulatie. Alle operators zijn vóór het experiment getraind om consistentie te waarborgen bij de selectie van acupunctuurpunten, de inbrenghoek en de diepte.

  1. Plaats de muizen in de inductiekamer en haal ze eruit nadat de anesthesie met isofluraan is geïnduceerd.
  2. Houd de muizen in rugligging onder continue inhalatieanesthesie met isofluraan (1,5–2,0% in 100% O₂) gedurende de volledige elektroacupuncturesessie om een rustige en stabiele toestand te waarborgen.
  3. Lokaliseer nauwkeurig de acupunctuurpunten bij de muizen. Breng twee steriele wegwerplaagden (0,16 mm × 25 mm) in de acupunctuurpunten ST36 (Zusanli) en SP10 (Xuehai) op de onderste ledematen in tot een huiddiepte van 5 mm13 (Figuur 1B).
    ​OPMERKING: ST36 bevindt zich 1 mm lateraal van de anterior tubercle van de tibia, 3 mm onder de kop van de fibula en direct onder het kniegewricht. SP10 bevindt zich op het mediale dijbeen, 3 mm boven de superomediale rand van de patella bij de mediale prominentie van de musculus quadriceps wanneer de knie gebogen is.
    1. In de SA-groep worden de naalden oppervlakkig, tot een diepte van ongeveer 1 mm, ingebracht in aangrenzende gebieden die geen acupunctuurpunten zijn in plaats van ST36 of SP10, waarna ze worden aangesloten op het EA-apparaat zonder stroomtoevoer14.
      OPMERKING: De SA-groep verschilt dus van de EA-groep wat betreft de plaatsing van de naalden, de insertiediepte en de afwezigheid van elektrische stimulatie, maar is gelijkgeschakeld voor alle andere procedurele parameters. Vergeleken met de DMM-groep krijgt de SA-groep oppervlakkige naaldbehandeling op niet-acupunctuurpunten en een aansluiting op het apparaat zonder stroom, terwijl de DMM-groep alleen anesthesie en immobilisatie krijgt.
  4. Sluit de naald aan op het elektronische acupunctuurapparaat en pas stimulatie toe bij 2/100 Hz en 2 mA om lichte spiertrillingen op te wekken. Start de EA-stimulatie voor 15 min, 3 keer per week, beginnend 7 dagen na de modellering, en ga hiermee 4 weken door.
  5. Plaats de muis na de behandeling op een warmtepad en breng deze terug in de kooi zodra het bewustzijn is teruggekeerd.

3. Dynamische beoordeling van de effectiviteit van EA

OPMERKING: Alle beoordelingen (rotarod-test, echo, IRT, MRI en OARSI-scoring) werden uitgevoerd door onderzoekers die blind waren voor de groepsindeling, waarbij de groepsidentiteiten geheim werden gehouden tot alle data-analyses waren voltooid. Beeldacquisitie en data-analyse werden door afzonderlijke personen afgehandeld, en de histologische evaluatie werd onafhankelijk uitgevoerd door twee pathologen die blind waren voor de behandelgroepen. Geen van de beoordelaars nam deel aan de toewijzing van dieren of de elektroacupunctuurinterventie.

  1. Rotarod-vermoeidheidstest
    1. Train de muizen vooraf om hen te laten wennen aan het experimentele apparaat vóór de formele tests.
    2. Plaats tijdens de formele test elke muis individueel op de rotarod, die versnelt met een snelheid van 4 omwentelingen per minuut totdat de muis eraf valt.
    3. Noteer direct de duur dat elke muis op de staaf blijft. Houd een interval van 30 min aan tussen de proeven voor elke muis en bereken de gemiddelde waarde van drie herhaalde proeven.
      OPMERKING: Gebruik de rotarod-test om de motorische coördinatie te beoordelen vóór de vestiging van het OA-model en na voltooiing van de EA-behandeling. Om postoperatieve pijn te minimaliseren, dient de gegevensverzameling met de rotarod tijdens de eerste week na de operatie te worden beperkt.
  2. US-onderzoek bij kleine dieren
    ​OPMERKING: De stapsgewijze procedure voor echografische beeldvorming en afbakening van de gewrichtsholte wordt getoond in Figuur 2.
    1. Plaats de muis vóór de formele gegevensverzameling in een anesthesiekamer totdat de motorische functies verloren gaan, en gebruik vervolgens ontharingscrème om het haar van het rechterkniegewricht te verwijderen. Wees zo voorzichtig mogelijk bij het verwijderen van de vacht van een muis; veeg deze voorzichtig af met warm water om irritatie bij de muis te minimaliseren.
      OPMERKING: Handhaaf de blindering tijdens de analyse door alleen diercodes en tijdspunten weer te geven totdat alle volumemetingen zijn voltooid en de groepsinformatie wordt onthuld voor statistische analyse.
    2. Zet het echografie-systeem aan, installeer de echotransducer voor kleine dieren en stel het juiste onderzoeksprotocol voor muizen in. Plaats de muis gelijktijdig in een kooi voor continue anesthesie.
    3. Zodra de anesthesie is voltooid, wordt de muis overgebracht naar het controleplatform en wordt isofluraan-inhalatieanesthesie toegediend via een neusmasker. Positioneer de muis met de kop van de operator afgewend en de staart naar de operator toe.
    4. Buig het kniegewricht, zet de muis vast en breng een US-koppelingsmiddel aan op de huid over het patellaire ligament.
    5. Stel de probe af en positioneer deze zodanig dat deze parallel loopt aan het kniegewricht.
    6. Stel de scandistantie in op 4 mm en de stapgrootte op 0,04 mm. Lokaliseer de gewrichtsholte op het beeld op basis van de anatomische positie. Beweeg het dier niet tijdens de probe-scan.
    7. Verwerf de beelden. Identificeer de gewrichtsholte: een driehoekig gebied met duidelijke grenzen tussen het femur, de tibia en de bovenliggende huid en spieren.
    8. Benoem en sla de scanresultaten op, en exporteer deze vervolgens naar de analysecomputer met behoud van de oorspronkelijke mapstructuur.
    9. Analyseer het volume van de kniegewrichtsholte met behulp van software. Ga naar de module Study en klik op de functie Import.
    10. Blader naar en selecteer de data-map, vink de te importeren databestanden aan en dubbelklik om ze te openen.
    11. Selecteer in de display-modus opeenvolgend Image Processing | Load to 3D | Cross-sectional View | Volume Measurement | Start.
    12. Gebruik het muiswiel of de slice-schuifregelaar om door de coupes van proximaal naar distaal te scrollen, en lokaliseer de coupe waar de gewrichtsholte voor het eerst verschijnt (meestal zichtbaar als een driehoekig gebied met duidelijke grenzen tussen het femur, de tibia en het bovenliggende huid- en spierweefsel).
    13. Begin met het traceren op de coupe waar de gewrichtsholte voor het eerst verschijnt. Klik met de linkermuisknop om de contour te beginnen tekenen.
    14. Traceer punt voor punt langs de rand van de gewrichtsholte om een gesloten contour te tekenen totdat de gewrichtsholte volledig verdwijnt.
    15. Klik op Finish; het systeem genereert een 3D-gesegmenteerd volume en geeft de volumemetingresultaten weer.
    16. Selecteer het gewenste bestandstype om het beeld te exporteren als een beeldregiobestand in TIFF-formaat (.tif).
  3. Infraroodthermografie bij kleine dieren
    ​OPMERKING: Metingen werden uitgevoerd 1 dag vóór de operatie, 7 dagen na de operatie en aan het einde van de behandeling bij muizen met OA. Voer de IRT 6 u na de behandeling uit in een temperatuurgecontroleerde kamer (22–24 °C), waarbij de muizen 30 min vóór de beeldvorming zijn geacclimatiseerd.
    1. Plaats het dier in rugligging met de achterpoten uitgestrekt en zet alle ledematen met tape vast op de tafel om een consistente blootstelling van de knieën te garanderen. Plaats de muis in een inductiekamer en dien continu isofluraan toe tot volledige anesthesie is bereikt.
    2. Zet de geanestheseerde muis in rugligging vast op de operatietafel en handhaaf een constante omgevingstemperatuur.
    3. Pak de achterpoot van de muis voorzichtig vast om het rechterkniegewricht te strekken, en gebruik vervolgens een infraroodthermische camera om beelden vast te leggen en de temperaturen in het gebied te meten.
    4. Gebruik de standaard emissiviteit van de huid (0,98). Verwerf de beelden 3 min na diepe anesthesie. Definieer de region of interest (ROI) van de knie als de mediale gewrichtslijn bij de femuro-tibiale articulatie, en de enkel-ROI als het dorsale oppervlak van het tibiotalaire gewricht. Laat alle ROI's handmatig afbakenen door één getrainde operator op basis van deze landmarks.
    5. Analyseer de beelden met de bijbehorende software van het apparaat om temperatuurgegevens van het kniegewricht en de omringende huid af te lezen, en stel meetcontrolepunten in bij de enkel- en kniegewrichten waar de temperatuurgradiënten afnemen.
  4. MRI bij kleine dieren
    ​OPMERKING: Na de EA-behandeling werd MRI voor kleine dieren gebruikt om lokale ontsteking in de kniegewrichten van muizen in elke groep te beoordelen.
    1. Plaats de muis voor anesthesie in een anesthesiedoos. Zodra de motorische functies verloren gaan, wordt ontharingscrème op beide kniegewrichten aangebracht.
    2. Veeg na 1 min de ontharingscrème af met gaas dat is bevochtigd met warm water om de ontharing van beide kniegewrichten te voltooien.
      ​OPMERKING: Zorg ervoor dat zoveel mogelijk van de vacht van de muis wordt verwijderd en voer de ontharing onder anesthesie uit.
    3. Stel het juiste protocol in met behulp van een gantry op maat voor muizen.
      1. Zorg ervoor dat het positioneringsapparaat een three-plane fast gradient echo-sequentie gebruikt (TR/TE = 50/3 ms, field of view (FOV) = 30 × 30 mm, plakdikte 1 mm) om het kniegewricht in het beeld te centreren; gebruik een T2-gewogen fast spin echo (T2WI)-sequentie om het kniegewricht van de muis te scannen.
      2. Gebruik de volgende scanparameters: repetitietijd (TR) van 2.500 ms, echotijd (TE) van 8 ms, field of view (FOV) van 20 × 20 mm, matrix van 256 × 256, plakdikte van 0,5 mm, geen tussenplakruimte en 10 opeenvolgende coupes die het gebied van de femorale condyl tot het tibiale plateau bestrijken; de duur van een enkele scan wordt geschat op ongeveer 8 min en 20 s.
      3. Bestudeer de verkregen T2-gewogen beelden om morfologische veranderingen in het kniekraakbeen, synovium, gewrichtsholte en omringende weke delen waar te nemen, en beoordeel gewrichtseffusie, synoviale verdikking en lokale ontsteking.
    4. Plaats de muis op de gantry, induceer inhalatieanesthesie met isofluraan via een masker en zet de ledematen vast met medische tape om een consistente opwaartse positionering van de knieën te waarborgen.
    5. Schuif de gantry in de MRI-scanner voor beeldvorming.
      1. Bevestig op de three-plane localizer dat de kniegewrichtsruimte parallel loopt aan het coronale vlak, het slab-centrum is uitgelijnd met de gewrichtsruimte en darmwindingen of luchtholtes buiten de FOV vallen om susceptibiliteitsartefacten te voorkomen; indien de positionering onjuist is, lokaliseer en scan dan opnieuw.
    6. Exporteer de verkregen multi-echo T2-gewogen beelden in DICOM- of NIfTI-formaat voor kwalitatieve beoordeling.
    7. Beoordeel de MR-beelden door visueel de signaalintensiteit en distributie van hyperintense gebieden binnen het kniegewricht en de periarticulaire weke delen te onderzoeken, en vergelijk de ontstekingssignalen tussen de groepen op basis van deze geëxporteerde beelden.

4. Pathologische en morfologische observaties

  1. Fixatie en sectionering van muisknieën
    1. Fixeer beide knie-monsters van muizen in 10% paraformaldehyde gedurende 48 u. Dompel de monsters vervolgens 30 min in fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) en spoel ze af.
    2. Na het wegnemen van overtollig vocht worden de monsters onmiddellijk overgebracht naar vers bereide decalcificatievloeistof (pH 7,2–7,4); vervang de vloeistof elke 3 dagen;
    3. Zet de decalcificatie voort gedurende 2 weken, spoel de monsters af onder stromend water en dompel ze vervolgens 2 u in 75% ethanol.
    4. Voer een geautomatiseerde gradiënt-dehydratatie uit in een weefselprocessor gedurende 18 u.
    5. Na dehydratatie wordt het monster 2 u in voorverwarmde paraffine gedoopt in een paraffine-inbeddingsapparaat, waarna wordt overgegaan tot inbedding;
    6. Positioneer bij sagittale inbedding van het kniegewricht het mediale gewrichtsoppervlak naar beneden, zodat dit oppervlak als eerste wordt gesneden.
    7. Plaats het weefselblok op de microtoom en voer continue sectionering uit bij 4 µm. Verzamel 21 opeenvolgende coupes nadat de mid-meniscus-scheiding is bereikt.
    8. Spreid de coupes op een coupespreider. Gebruik een pincet om de preparaten op het wateroppervlak te scheiden en neem ze op met dekglasjes, waarbij twee preparaten per dekglasje worden verzameld;
    9. Plaats de coupes plat in een driedroger voor meer dan 1 u om volledige verdamping van het vocht te garanderen. Plaats de coupes in een monsterdoos en ontwas ze in een oven bij 60 °C gedurende 8 u. Bewaar deze voor later gebruik.
      ​OPMERKING: Alle paraformaldehyde-fixatief, decalcificatievloeistof en ethanolwasbeurten moeten als gevaarlijk afval worden ingezameld en afgevoerd volgens de institutionele richtlijnen.
  2. Safranine O-Fast Green kleuring
    1. Plaats ongekleurde coupes op een kleuringsrek en verhit ze 5 min in een oven. Bereid tijdens deze tijd de kleuringsoplossing voor in een zuurkast.
    2. Laat de coupes afkoelen tot kamertemperatuur en ontwas ze vervolgens routinematig tot water.
    3. Breng de coupes over naar een natte box en kleur ze 5 min met verse Weigert-oplossing (Deel A + Deel B).
    4. Spoel 3 x 1 s met water.
    5. Differentieer 15 s met 1% zoutzuur in ethanol en spoel vervolgens 10 min met gedestilleerd water.
    6. Kleur 4 min en 55 s met Fast Green-oplossing.
    7. Was de coupes snel 10-15 s met een 1% azijnzuuroplossing om residuen van Fast Green te verwijderen en laat ze vervolgens aan de lucht drogen.
    8. Dompel 4 min 35 s in Safranine O-kleuring.
    9. Dehydrateer de coupes snel gedurende 3-5 s met 95% ethanol, gevolgd door spoelingen met absolute ethanol gedurende 2 x 1 min.
    10. Klaar maken met xyleen, inklaren met neutrale hars en 4 u in een zuurkast plaatsen om het xyleen te laten verdampen.
    11. Bekijk en scan de coupe met een whole-slide scanner.
      OPMERKING: Xyleen, zuur-alcohol, azijnzuur, paraformaldehyde en de in deze studie gebruikte kleuringsoplossingen, waaronder Weigert-oplossing, Fast Green en Safranine O, zijn gevaarlijke materialen. Alle handelingen moeten in een zuurkast worden uitgevoerd onder gebruik van geschikte persoonlijke beschermingsmiddelen, waaronder nitrilhandschoenen, een laboratoriumjas en een veiligheidsbril. Gevaarlijk afval, inclusief gebruikte reagentia en spoelvloeistoffen, moet gescheiden worden, waarbij xyleenafval gescheiden van waterig afval wordt gehouden, wordt verzameld in aangewezen containers en wordt afgevoerd volgens de institutionele regelgeving.

5. Statistische analyse

  1. Rapporteer continue gegevens als gemiddelde ± standaarddeviatie (SD), tenzij anders aangegeven; OARSI-scores worden gerapporteerd als mediaan (P25, P75).
  2. Voer voor resultaten die als gemiddelde ± SD zijn gerapporteerd meergroepvergelijkingen uit met behulp van een eenweg-variantieanalyse (ANOVA), gevolgd door Tukey post hoc-toetsen. De OARSI-scores werden geanalyseerd met de Kruskal-Wallis-toets, gevolgd door post hoc-toetsen met de eenzijdige Mann-Whitney-toets voor paarsgewijze vergelijkingen tussen de twee groepen15.
  3. Beschouw P-waarden < 0,05 als statistisch significant ("ns" geeft aan dat er geen significant verschil is).

Resultaten

De rotarod-test toonde een langere latentietijd tot vallen in de EA-groep dan in de DMM-groep (P < 0,05), terwijl de SA-groep niet significant verschilde van de DMM-groep (Figuur 1C en Tabel 1). Voorafgaand aan de modellering vertoonden longitudinale echoscans van het kniegewricht (scandistantie 4 mm; stapgrootte 0,04 mm) geen significante verschillen in het volume van de gewrichtsholte tussen de groepen (Figuur 3A,B en Tabel 2). Eén week na de modellering toonde driedimensionale reconstructie een significant groter gewrichtsholtevolume aan in de DMM-, SA- en EA-groepen dan in de Sham-groep (P < 0,05), zonder significante verschillen tussen de DMM-, SA- en EA-groepen (P > 0.05) (Figuur 3A,C). Na 4 weken EA-behandeling was het volume van de gewrichtsholte in de EA-groep significant lager dan in de DMM-groep (P < 0.05) (Figuur 3A,D), in overeenstemming met een verminderde zwelling van de gewrichtsholte.

IRT is een techniek die wordt gebruikt om temperatuurinformatie van het brandvlak binnen een gezichtsveld te verzamelen en om oppervlaktetemperatuurverdelingen in pseudokleurenweergave weer te geven16. Er waren geen significante verschillen in de oppervlaktetemperatuur van de huid tussen de groepen vóór de modellering of 1 week na de modellering (Figuur 4A-C en Tabel 3). Echter, na de EA-behandeling was de oppervlaktetemperatuur van de huid in de DMM-groep significant lager dan in de Sham-groep. In contrast hiermee was de oppervlaktetemperatuur van de huid in de EA-groep significant hoger dan die in de DMM-groep (Figuur 4A,D), wat aantoont dat EA geassocieerd was met een hogere lokale oppervlaktetemperatuur van de huid dan DMM, terwijl dit voor SA niet het geval was.

MRI-beelden lieten geen zichtbare signaalafwijkingen van de periarticulaire spieren zien in de Sham-groep, meer uitgesproken signaalveranderingen in de DMM-groep, minder uitgespronken veranderingen in de EA-groep en vergelijkbare veranderingen in de SA- en DMM-groepen (Figuur 5A). Na de EA-behandeling werden de rechterkniegewrichten geoogst, ingebed in paraffine en sagittaal gesneden in secties van 4 µm. De secties werden gekleurd met Safranin O-Fast Green en geclassificeerd met behulp van het OARSI histopathologische systeem. In vergelijking met de Sham-groep vertoonde de DMM-groep een grotere slijtage van het gewrichtskraakbeen en een hogere OARSI-score. De EA-groep vertoonde minder kraakbeendegeneratie en een lagere OARSI-score dan de DMM-groep (P < 0.05), terwijl de SA-groep niet significant verschilde van de DMM-groep (Figuur 5B,C en Tabel 4).

figure-results-1
Figuur 1: Experimenteel tijdsschema, acupunctuurpuntendiagram en rotarod-test bij muizen met OA. (A) Experimenteel tijdsschema. (B) Diagram van acupunctuurpunten. (C) Rotarod-test. n = 6 per groep. Elke muis voltooide drie tests. Gegevens worden weergegeven als gemiddelde ± SD. ### Sham vs DMM, P < 0,001; ns, SA vs DMM, P > 0,05; ** EA vs DMM, P < 0,01. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-2
Figuur 2: Stapsgewijze echografische pemeriksaan. (A) Plaats de muis in een inductiekamer voor anesthesie. (B) Breng ontharingscrème aan op het achterste ledemaat. (C) Wacht 1 min nadat de crème gelijkmatig is aangebracht. (D) Veeg overtollige ontharingscrème en haar af met gaas. (E) Inspecteer het onthaarde achterste ledemaat. (F) Plaats de muis vóór de beeldacquisitie opnieuw in de inductiekamer voor anesthesie. (G) Breng echogel aan op het achterste ledemaat en roteer de probe totdat deze parallel loopt aan de longitudinale as van het achterste ledemaat. (H) Maak echografische beelden. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-3
Figuur 3: Representatieve afbeeldingen en kwantitatieve resultaten van echografie-onderzoeken bij kleine dieren in muizen met OA. (A) Driedimensionale echografische reconstructies van het kniegewricht voor de operatie, 1 week na de operatie en na EA-behandeling (scandistantie, 4 mm; stapgrootte, 0.04 mm). Schaalbalken = 2 mm. (B) Volume van de gewrichtsholte vóór de operatie (n = 6 per groep). (C) Volume van de gewrichtsholte 1 week na de operatie (n = 6 per groep). (D) Volume van de gewrichtsholte na EA-interventie (n = 6 per groep). ### Sham vs DMM, P < 0.001; ns, SA vs DMM, P > 0.05; *** EA vs DMM, P < 0.001. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-4
Figuur 4: Representatieve infraroodthermogrammen en kwantitatieve resultaten van de huidtemperatuur bij muizen met OA. (A) Thermogrammen van de onderste ledematen vóór de operatie, 1 week na de operatie en na de EA-behandeling. Elk thermogram is weergegeven met het automatische temperatuurbereik van de infraroodcamera-software; daarom zijn de kleuren niet direct vergelijkbaar tussen de panelen. Kwantitatieve vergelijkingen dienen gebaseerd te worden op de spreidingsdiagrammen in panelen B–D.(B–D) Kwantitatieve analyse van de huidtemperatuur van de regio van belang (ROI) bij het kniegewricht, gedefinieerd als de mediale gewrichtslijn bij het femurotibiale gewricht.(B) Huidtemperatuur van de onderste ledematen vóór de operatie (n = 6 per groep). (C) Huidtemperatuur van de onderste ledematen 1 week na de operatie (n = 6 per groep). (D) Huidtemperatuur van de onderste ledematen na de EA-interventie (n = 6 per groep). Gegevens worden weergegeven als gemiddelde ± SD. ### Sham vs DMM, P < 0.001; ns, SA vs DMM, P > 0.05; ** EA vs DMM, P < 0.01. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-5
Figuur 5: Representatieve MRI-beelden van signaalveranderingen in periarticulaire spieren, histologische doorsneden van het kniegewricht en kwantitatieve resultaten bij muizen met OA. (A) Representatieve MRI-beelden van elke groep. (B) Representatieve met Safranine O-Fast Green gekleurde kniedoorsneden. Schaalbalken = 1 mm. (C) OARSI-scores voor kraakbeenpathologie (n = 6 per groep). OARSI-scores worden weergegeven als mediaan (P25, P75). ### Sham vs DMM, P < 0,001; ns, SA vs DMM, P > 0,05; ** EA vs DMM, P < 0,01. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

GroepNWeek 5
Schijnbehandeling6101.300 ± 5.416
DMM670.280 ± 3.363###
SA670.060 ± 7.796
EA684.390 ± 9.504**
Opmerking: ### Sham vs DMM, P < 0,001; ** EA vs DMM, P < 0.01.

Tabel 1: Rotarod-test (gemiddelde ± SD; n = 6 per groep). ### Sham vs DMM, P < 0,001; ** EA vs DMM, P < 0,01.

GroepNWeek 0Week 1Week 5
Placebo-behandeling62.029 ± 0.0552.056 ± 0.0712.061 ± 0.079
DMM62.058 ± 0.0682.591 ± 0.056###2.926 ± 0.088###
SA62.056 ± 0.0452.592 ± 0.0762.915 ± 0.112
EA62.032 ± 0.0592.548 ± 0.0742.177 ± 0.110***
Opmerking: ### Sham vs DMM, P < 0,001; *** EA t.o.v. DMM, P < 0.001.

Tabel 2: Volume van de gewrichtsholte (gemiddelde ± SD; n = 6 per groep). ### Sham vs DMM, P < 0,001; *** EA vs DMM, P < 0,001.

GroepNWeek 0Week 1Week 5
Placebo-behandeling635.517 ± 1.36635.717 ± 0.54635.650 ± 0.701
DMM635.783 ± 1.29235.033 ± 0.78132.967 ± 1.223###
SA635.583 ± 1.78035.283 ± 0.86133.267 ± 0.501
EA635.500 ± 1.51035.417 ± 0.88234.533 ± 0.929**
Opmerking: ### Sham vs DMM, P < 0,001; ** EA t.o.v. DMM, P < 0.01.

Tabel 3: Huidtemperatuur (gemiddelde ± SD; n = 6 per groep). ### Sham vs DMM, P < 0,001; ** EA vs DMM, P < 0,01.

GroepNWeek 5Mediaan
Schijnbehandeling60.000 (0.000, 0.250)0
DMM64.000 (3.000, 4.250)###4
SA64.000 (3.000, 4.250)4
EA62.500 (1.750, 3.000)**2.5
Opmerking: ### Sham vs DMM, P < 0,001; ** EA vs DMM, P < 0.01.

Tabel 4: OARSI-score [mediaan (P25, P75); n = 6 per groep]. ### Sham vs DMM, P < 0.001; ** EA vs DMM, P < 0.01.

Discussie

Knieartrose (KOA) is een progressieve degeneratieve aandoening, en huidige therapeutische interventies bieden beperkte effectiviteit bij het stoppen van de onderliggende progressie17. Verslechterde spierfunctie en verminderde fysieke prestaties zijn klinisch significante voorspellers van de ernst van de symptomen. Bijgevolg is het actief beheren van beïnvloedbare risicofactoren essentieel om de progressie van KOA te vertragen18. Met behulp van een multimodaal evaluatiesysteem toonde deze studie aan dat EA geassocieerd was met een verbeterde motorische prestatie, een verminderd gewrichtsholtevolume, een hogere lokale huidoppervlaktetemperatuur, minder uitgesproken MRI-signaalveranderingen in de periarticulaire spieren en lagere OARSI-scores bij muizen met OA.

De resultaten van de IRT ondersteunen dit geïntegreerde beeld verder. Eén week na de operatie verschilden de huidtemperaturen niet tussen de groepen, inclusief de Sham-groep, wat waarschijnlijk een uniforme reactie op het chirurgische trauma weerspiegelt, gekenmerkt door voorbijgaande vasoconstrictie en oppervlakkig oedeem die de warmte-emissie vanaf het huidoppervlak tijdelijk verminderden. In tegenstelling hiermee suggereert de significante thermische divergentie die na de behandeling werd waargenomen dat de anti-inflammatoire en microcirculatoire effecten van EA cumulatief zijn in plaats van onmiddellijk, en pas zichtbaar worden na herhaalde sessies. Deze uitkomstmaten kunnen onderling gerelateerd zijn. Zwelling van de gewrichtsholte weerspiegelt over het algemeen de mate van synoviale ontsteking en effusie, terwijl de lokale microcirculatoire status nauw verbonden is met veranderingen in de vasculaire permeabiliteit tijdens een ontsteking19. In onze experimenten viel de afname van het gewrichtsvolume na toediening van EA samen met een stijging van de lokale temperatuur. Hoewel IRT de bloedstroom niet direct meet, suggereren de gelijktijdige veranderingen dat een verbeterde lokale bloedstroom de klaring van inflammatoire mediatoren kan faciliteren, waardoor de inflammatoire infiltratie in het synovium en de omliggende spieren wordt verminderd. De daaropvolgende verbetering van de motorische functie kan voortkomen uit de gecombineerde voordelen van verminderde zwelling en verzachte ontsteking. Over het geheel genomen lijken de waargenomen veranderingen in deze parameters onderling verbonden reacties te zijn in plaats van geïsoleerde gebeurtenissen. Dit patroon suggereert dat EA meerdere pathologische processen op een geïntegreerde manier kan moduleren in plaats van te werken via een enkel mechanisme20.

Vergeleken met conventionele histologische eindpuntbeoordelingen biedt het in deze studie gebruikte multimodale dynamische monitoringsysteem duidelijke praktische voordelen. Echografie voor kleine dieren maakt longitudinale, niet-invasieve tracking van gewrichtseffusie mogelijk zonder blootstelling aan straling, waardoor de inter-individuele variabiliteit die inherent is aan weefselafname op het eindpunt wordt omzeild21. MRI voor kleine dieren vult de echo aan door gedetailleerde visualisatie van signaalveranderingen in de periarticulaire spieren te bieden. Dit maakt een kwalitatieve beoordeling van spierontsteking mogelijk die met alleen echo mogelijk niet volledig zou worden vastgelegd. In combinatie met IRT voor real-time meting van de lokale huidtemperatuur biedt deze aanpak een indirecte indicator voor de resolutie van de ontsteking. De beschikbaarheid van deze beeldvormingsmodaliteiten maakt herhaalde metingen gedurende het behandelverloop haalbaar. Naast naleving van de 3V-principes maakt dit longitudinale ontwerp herhaalde observaties binnen elk dier mogelijk, wat de invloed van interindividuele variabiliteit minimaliseert. Voor zover wij weten is er geen eerdere dierstudie geweest waarin acupunctuur voor OA is geëvalueerd door echo, MRI, thermografie, gedragstesten en histopathologie te integreren binnen één enkel experimenteel kader. Deze multilevel-aanpak levert complementaire gegevens op over functionele, morfologische en histologische domeinen, wat een uitgebreidere beoordeling biedt dan enig enkel eindpunt kan leveren.

Verschillende beperkingen moeten worden erkend. Ten eerste is dit werk gebaseerd op observationele gegevens uit dierproeven en ontbreekt mechanistisch bewijs uit in vitro studies. Het blijft onbekend of EA de NOD-like receptor family pyrin domain 3 (NLRP3)/caspase-1/IL-1β-route activeert. IL-1β en IL-18 zijn belangrijke mediatoren van synoviale en spierontsteking, en hun rijping vereist activatie van het NLRP3-inflammasoom22. We kunnen ook niet bepalen of de waargenomen verbeteringen in de circulatie correleren met veranderingen in de expressie van vascular endothelial growth factor (VEGF) of endothelial nitric oxide synthase (eNOS)23. Ten tweede hebben we één enkele EA-parameter (2/100 Hz) toegepast op twee acupunten (ST36 en SP10). Of verschillende instellingen of alternatieve combinaties van acupunten superieure resultaten zouden kunnen opleveren, vereist verder onderzoek24. Ten derde zijn alle beelddenmerken door één operator verzameld. Hoewel deze aanpak technische consistentie waarborgde, is de interbeobseverbetrouwbaarheid niet beoordeeld, wat de generaliseerbaarheid van de beeldvormingsresultaten mogelijk beperkt. Ten vierde hebben we een controlegroep weggelaten die enkel aan fixatie was onderworpen, waardoor het uitdagend is om de effecten van anesthesie, immobilisatie en hantering volledig te scheiden van de therapeutische effecten van EA. Vijfde is de SA-procedure ontworpen als een minimale controle om effecten specifiek voor acupunten, diepe weefsels en elektrische stimulatie te verminderen. Het verschil in naaldendiepte tussen de werkelijke en de sham-interventies voorkomt echter dat we de bijdrage van enkel de diepte kunnen isoleren. Bijgevolg moeten onze bevindingen worden geïnterpreteerd als een vergelijking tussen het volledige EA-protocol en een minimale sham-procedure, in plaats van een strikte evaluatie van elektrische stimulatie op zich. Zesde waren de cameradistantie, de beeldhoek en het absolute ROI-oppervlak niet formeel gedocumenteerd, wat een technische beperking vormt. Een laatste beperking is het gebruik van afzonderlijke ANOVA's per tijdstip, waarbij correlaties van herhaalde metingen en de interactie tussen tijd en groep worden genegeerd, wat de sensitiviteit voor dynamische veranderingen vermindert.

Samenvattend was EA geassocieerd met anti-inflammatoire en functionele uitkomsten in een muismodel van DMM-geïnduceerde KOA. Ondanks beperkingen zoals een variabele resolutie over verschillende modaliteiten, de operatorafhankelijkheid van US en IRT, de hoge kosten van MRI en potentiële stress door herhaalde metingen, blijft het protocol een haalbaar platform voor longitudinale multimodale beoordeling. Het geïntegreerde systeem biedt een kader voor preklinische evaluatie. Toekomstig werk moet de elektrische parameters optimaliseren en gebruikmaken van organoïden, organ‑on‑chip en AI-platforms om mechanismen te verduidelijken en gepersonaliseerde therapie te sturen25,26. Verbeterde sham-controles, gestandaardiseerde protocollen en een langere follow-up zijn tevens vereist om de klinische translatie te verbeteren.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen belangenconflicten te verklaren.

Dankbetuigingen

Dit onderzoek werd ondersteund door het Science and Technology Innovation Action Plan in Shanghai (23YF1447900 aan JMC) en de National Natural Science Foundation of China (U23A20508 aan LQY, 82575196 aan HSC, en U24A6013 aan HX).

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
1% azijnzuuroplossingSolarbioCat# G1371Differentiatie-/wasoplossing voor kleuring
1% zoutzuur in ethanolSolarbioCat# G1371Zuur-alcohol differentiatieoplossing
7T MRI voor kleine dierenShanghai Chenguang7T MRI NOVALMRI-systeem voor kleine dieren
Acupunctuurnaalden (0,16 mm × 25 mm)Wuxi Jiajian Medical Instrument, Wuxi, Chinalot nr. 491226Steriele acupunctuurnaalden
Hechtende microscoopglazenJiangsu ShitaiMH0662Microscoopglazen voor weefselcoupes
Watervrije ethanolShanghai Titan Technology Co., Ltd.64-17-5Ethanol voor dehydratatie
C57BL/6 muizenShanghai Silaike Laboratory Animal Co., Ltd.https://www.slaccas.com/Proefdieren
DekglasjesJiangsu ShitaiNiet vermeldVerzamelen en monteren van weefselcoupes
Decalcificatie-oplossingSerivebioG1105-500mlReagens voor decalcificatie van bot en gewricht, pH 7,2-7,4
Apparaat voor elektrische therapieSuzhou Medical Supplies Factory Co., Ltd.SD-ZElektro-acupunctuurstimulator
EthylendiaminetetraazijnzuurShanghai Titan Technology Co., Ltd.60-00-4Chelaterend reagens
Fiji (ImageJ)National Institutes of Health (NIH)ImageJ gebundeld met 64-bit Java 8.Software voor beeldanalyse
GaasWeizhe MedicalType A1: Standaard gaasjes (steriel)Materiaal voor ontharing en reiniging
OntharingscrèmeVEETNiet vermeldDepilatoire crème
Infrarood beeldanalyse-softwareFLIRVersie niet vermeldSoftware geleverd bij de infrarood thermische imager
Infrarood thermische imagerFLIR435-0007-03 (vroege batch)Infrarood thermografie-systeem
Inhalatie-anesthesiesysteem voor kleine dierenMatrx07149Gas-anesthesiesysteem voor kleine dieren
Isofluraan (inhalatie-anestheticum)RWD217140901Inhalatie-anestheticum
Naisikang medische waterbestendige elastische tape (3,81 cm × 4,57 m)Naisikang™732Materiaal voor positionering van ledematen bij MRI
Gemodificeerde Safranine O en Fast Green kleuringskit (voor bot)SolarbioCat# G1371Kleuringskit voor kraakbeen en bot
NaaldvoerRWDF21001-12Intraoperatief klemmen en hechten
Neutraal harsmontagemediumbiosharp23338664Histologisch montagemedium
ZuurstofNiet vermeldNiet vermeldDraaggas voor inhalatie-anesthesie
Paraffine-inbeddingsmachineLEICAEG1150CParaffine-inbeddingssysteem
Paraffine-microtoomLEICARM2235Rotatiemicrotoom
Paraffineepredia151534Inbeddingsmedium
ParaformaldehydeSinopharm Reagents Co., Ltd.80096618Weefselfixatief
PBSServicebioG0002Fosfaatgebufferde zoutoplossing
Rotarod-apparaatPanlabLE8205Rotarod vermoeidheidstestsysteem
Ultrasone beeldvormingsplatform voor kleine dierenFujiVevo 3100Ultrasoonsysteem voor kleine dieren
NatriumhydroxideShanghai Titan Technology Co., Ltd.G19852HLaboratoriumreagens
StereomicroscoopOlympusSZ61Dissectiemicroscoop
Hechtnaalden met draad (6-0 absorbeerbare hechtdraad en 6-0 zijden hechtdraad)Ningbo Medical Suture Co., Ltd.Cosmetic Needles 1/2 4X12 40Postoperatief hechten
Scalpelmesjes (10#)Hangzhou Nuoyang Biotechnology Co., Ltd.20090120Incisie van het mediale meniscusligament
WeefseldehydratorLEICATP1020Geautomatiseerde weefselprocessor
WeefseldrogerLEICAHI1220Glaasdroger
Weefsel-inbeddingsblokjesJiangsu ShitaiREF31050102WInbeddingsverbruiksartikelen
WeefselspreiderLEICAHI1210Systeem voor het spreiden van coupes
Ultrasoon analyse-software (Vevo Lab 3.1.0)OpticVersie 3.1.0Driedimensionale ultrasoon analyse-software
Ultrasoon koppelingsmiddelHu Qingyu TangYY0299-2008Ultrasone koppelingsgel
Whole-slide scannerOlympusVS200Digitaal slide-scanningsysteem
XyleenSinopharm Reagents Co., Ltd.10023418Klaringsreagens

Referenties

  1. Lee BJ et al. Association between metabolic syndrome and knee osteoarthritis: a cross-sectional nationwide survey study. J Rehabil Med. 2019;51(6):464-70.
  2. Glyn-Jones S et al. Osteoarthritis. Lancet. 2015;386(9991):376-87.
  3. Hunter DJ, Bierma-Zeinstra S. Osteoarthritis. Lancet. 2019;393(10182):1745-59.
  4. Rahmati M, Mobasheri A, Mozafari M. Inflammatory mediators in osteoarthritis: a critical review of the state-of-the-art, current prospects, and future challenges. Bone. 2016;85:81-90.
  5. Fokam D, Lehmann C. Clinical assessment of arthritic knee pain by infrared thermography. J Basic Clin Physiol Pharmacol. 2019;30(3):20170218.
  6. Ren G et al. Serum and synovial fluid cytokine profiling in hip osteoarthritis: distinct from knee osteoarthritis and correlated with pain. BMC Musculoskelet Disord. 2018;19(1):39.
  7. Siqueira MB et al. Comparison of synovial fluid cytokine levels between traumatic knee injury and end-stage osteoarthritis. J Knee Surg. 2017;30(2):128-33.
  8. Xu H et al. Utilization of longitudinal ultrasound to quantify joint soft-tissue changes in a mouse model of posttraumatic osteoarthritis. Bone Res. 2017;5:17012.
  9. Tattersall GJ. Infrared thermography: a non-invasive window into thermal physiology. Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 2016;202:78-98.
  10. Schiavon G et al. Infrared thermography for the evaluation of inflammatory and degenerative joint diseases: a systematic review. Cartilage. 2021;13(2_suppl):1790S-801S.
  11. De Marziani L et al. Infrared thermography in symptomatic knee osteoarthritis: joint temperature differs based on patient and pain characteristics. J Clin Med. 2023;12(6):2319.
  12. Zhao Y, Liu B, Liu CJ. Establishment of a surgically-induced model in mice to investigate the protective role of progranulin in osteoarthritis. J Vis Exp. 2014;(84):e50924.
  13. Jiang Y et al. Electroacupuncture ameliorates cerebrovascular impairment in Alzheimer’s disease mice via melatonin signaling. CNS Neurosci Ther. 2023;29(3):917-31.
  14. Wang Z et al. Effect of electroacupuncture on the kisspeptin system in a pubertal rat model of polycystic ovary syndrome. Acupunct Med. 2021;39(5):491-500.
  15. Brochard S, et al. A single intraarticular injection of a tranexamic acid-modified hyaluronic acid (HA/TXA) alleviates pain and reduces OA development in a murine model of monosodium iodoacetate-induced osteoarthritis. Front Pharmacol. 2024;15:1456495.
  16. Mi B et al. A preliminary study on the diagnostic value of infrared thermography in children with idiopathic thrombocytopenic purpura. Sheng Wu Yi Xue Gong Cheng Xue Za Zhi. 2020;37(4):652-60.
  17. Bannuru RR et al. OARSI guidelines for the non-surgical management of knee, hip, and polyarticular osteoarthritis. Osteoarthritis Cartilage. 2019;27(11):1578-89.
  18. Oliveira MC, Vullings J, van de Loo FAJ. Osteoporosis and osteoarthritis are two sides of the same coin paid for obesity. Nutrition. 2020;70:110486.
  19. Ramezanpour S et al. Impact of sustained synovitis on knee joint structural degeneration: 4-year MRI data from the Osteoarthritis Initiative. J Magn Reson Imaging. 2023;57(1):153-64.
  20. Zhao M et al. Electroacupuncture alleviates osteoarthritis and is associated with activation of the Nrf2/HO-1 pathway and reduced ferroptosis-related changes. Front Mol Biosci. 2026;13:1764620.
  21. Blackshear CP et al. Three-dimensional ultrasound versus computerized tomography in fat graft volumetric analysis. Ann Plast Surg. 2018;80(3):293-6.
  22. Karmakar V et al. Targeting the NLRP3 inflammasome as a novel therapeutic target for osteoarthritis. Inflammopharmacology. 2025;33(2):461-84.
  23. Wilson TG et al. Circulating miR-126-3p is a mechanistic biomarker for knee osteoarthritis. Nat Commun. 2025;16(1):2021.
  24. Wang J et al. Effects of electroacupuncture on knee osteoarthritis in rats through suppressing p38 MAPK/ERK/CREB pathway. J Inflamm Res. 2026;19:581985.
  25. Cao JC, et al. Electrostrategies in orthopaedic research. Biomater Transl. 2025;6(3):294-313.
  26. Wei Y, et al. Organoids in aging research: Bridging cutting-edge biotechnology with the wisdom of traditional Chinese medicine.Organoid Res. 2026;2(1):025460035.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

muismodelsynoviale ontstekingrotarod-testmagnetic resonance imaginginfraroodthermografiekraakbeenpathologiehistologische kleuring
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.