Behoud van In Vivo Weefselcomplexiteit in een Olfactorisch Zenuwstelselmodel van Muizen met behulp van Whole-Mount Analyse voor het Bestuderen van Neurale Regeneratie

Francesca Oieni; Joshua Ingles; James A St John; Ronak Reshamwala

doi:10.3791/72036

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Behoud van In Vivo Weefselcomplexiteit in een Olfactorisch Zenuwstelselmodel van Muizen met behulp van Whole-Mount Analyse voor het Bestuderen van Neurale Regeneratie

116 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/72036

⸱

18 augustus 2026

Francesca Oieni¹^,² , Joshua Ingles¹^,² , James A St John¹^,² , Ronak Reshamwala¹^,²

¹Griffith Institute for Biomedicine and Glycomics, Griffith University, ²Clem Jones Centre for Neurobiology and Stem Cell Research, Griffith University

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol beschrijft een volledige workflow voor het behoud van de anatomische complexiteit van het olfactorische zenuwstelsel van de muis. Hier hebben we de volledige workflow gedetailleerd, inclusief dissectie, weefselpreparatie en beeldvorming. Dit protocol kan worden gebruikt om het olfactorische systeem te bestuderen onder normale of abnormale omstandigheden, inclusief natuurlijke herstelcondities.

Samenvatting

In het tijdperk van driedimensionale (3D) beeldvorming is gebleken dat standaard immunohistochemie zeer beperkt is bij studies naar pathologie en complexe menselijke anatomie. Door slechts smalle coupes te analyseren, kunnen grotere structuren en essentiële aspecten van de weefselarchitectuur cruciale contextuele details verliezen, wat leidt tot onvolledige of misleidende interpretaties. Hoewel tweedimensionale (2D) secties een basisbegrip van de histoarchitectuur hebben ondersteund, zijn ze onvoldoende om de werkelijke driedimensionale realiteit van biologische weefsels vast te leggen.

Een toenemend aantal studies in diverse anatomische regio's maakt nu gebruik van technieken waarbij intacte anatomische eenheden worden geïsoleerd - flat mount-, whole-mount- of en face-preparaten - gecombineerd met fluorescentiemicroscopie met een hoge resolutie. Deze benaderingen bieden een meer volledige visualisatie en interpretatie van de structurele organisatie. Dit is bijzonder belangrijk in het olfactorische zenuwstelsel, waar het definiëren van complexe cellulaire mechanismen die ten grondslag liggen aan het opmerkelijke regeneratieve vermogen een context over de volledige dikte vereist. Bij dunne coupes bestaat het risico dat cruciale pathofysiologische kenmerken, die nog onvoldoende zijn gedefinieerd, over het hoofd worden gezien.

Gezien deze beperkingen en de kennislacune met betrekking tot de cellulaire interacties die de olfactorische regeneratie aansturen, was de ontwikkeling van een verfijnde whole-mounttechniek die in staat is om de complexiteit van het volledige weefseldikte te behouden essentieel. Volledige olfactorische slijmvliezen werden geïsoleerd als monsters van de volledige weefseldikte, vergezeld van een geoptimaliseerd protocol voor antilichaampenetratie. Hoge-resolutie imaging (EVIDENT SpinSR) en 3D-reconstructie maakten een nauwkeurige visualisatie van cellulaire interacties in vivo mogelijk.

Inleiding

Het olfactorische zenuwstelsel (ONS) vormt een uniek en goed onderbouwd model voor het bestuderen van mechanismen van neurale regeneratie, aangezien het gedurende het hele leven het unieke vermogen tot neuronale omloop behoudt¹. De potentie voor klinische vertaling van dit neuro-reparatieve vermogen blijft echter beperkt door aanzienlijke hiaten in ons begrip van het gedrag van de cellen in het olfactorische systeem²^,³^,⁴. De cellulaire responsen en anatomische organisatie van het ONS, waaronder primaire olfactorische neuronen, olfactorische omhullingsc....