Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Onderzoeksartikel

Clopidogrel-geïnduceerde schade aan het maagslijmvlies geassocieerd met stress van het endoplasmatisch reticulum bij ratten

65 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/72097

⸱

28 augustus 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Gastroenterology Department, Dagang Hospital of Binhai New Area, 2Clinical Laboratory, Tianjin Adicon Clinical Laboratories Co., Ltd.

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Deze studie onderzoekt letsel aan het maagslijmvlies geassocieerd met clopidogrel-behandeling bij ratten en maagepitheelcellen, waarbij de nadruk ligt op de associatie met moleculaire veranderingen gerelateerd aan stress van het endoplasmatisch reticulum, apoptose en systemische ontsteking.

Samenvatting

Clopidogrel wordt op grote schaal gebruikt als antiplateletmiddel voor de preventie en behandeling van arteriële trombotische aandoeningen, maar de klinische toepassing ervan kan worden beperkt door gastro-intestinale bijwerkingen, waaronder beschadiging van het maagslijmvlies. Omdat de overleving van epitheelcellen essentieel is voor het behoud van de integriteit van het maagslijmvlies, stelden wij de hypothese op dat clopidogrel-geïnduceerde beschadiging van het maagepitheel gepaard zou gaan met veranderingen in markers gerelateerd aan ER-stress en apoptose. Om deze hypothese te toetsen, werden GES-1 humane maagepitheelcellen behandeld met verschillende concentraties clopidogrel, waarna de celviabiliteit, apoptose, celcyclusverdeling en moleculaire veranderingen werden geëvalueerd met behulp van de Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay, flowcytometrie, kwantitatieve real-time polymerasekettingreactie (qRT-PCR) en Western blotting. Parallel daaraan kregen Sprague-Dawley ratten clopidogrel toegediend via een sonde om een in vivo model van maagslijmvliesbeschadiging te vestigen. Pathologische veranderingen van het maagslijmvlies werden beoordeeld via hematoxyline- en eosinekleuring, en serumspiegels van inflammatoire cytokinen werden gemeten met een enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Clopidogrel verminderde de viabiliteit van GES-1 cellen, bevorderde apoptose en veranderde de progressie van de celcyclus. Bij ratten induceerde clopidogrel erosie van het maagslijmvlies, oedeem en infiltratie van inflammatoire cellen, vergezeld van verhoogde serumspiegels van interleukine (IL)-1β, IL-6 en tumornecrosefactor-α (TNF-α). Clopidogrel verhoogde bovendien de expressie van de ER-stressmarkers C/EBP homologous protein (CHOP) en activating transcription factor 5 (ATF5), verhoogde de expressie van Bcl-2-associated X protein (Bax), verlaagde de expressie van B-cell lymphoma 2 (Bcl-2) en verhoogde de Bax/Bcl-2 ratio in zowel maagweefsels als GES-1 cellen. Deze bevindingen suggereren dat clopidogrel-geïnduceerde beschadiging van het maagslijmvlies geassocieerd is met een verhoogde expressie van ER-stressgerelateerde markers en een verstoring van de Bax/Bcl-2 balans, hoewel in deze studie geen direct causaal ER-stress-mitochondriale apoptosepad werd vastgesteld.

Inleiding

De aangeboren en adaptieve immuunsystemen van het maagslijmvlies, bestaande uit epitheelcellen, immuuncellen en signaleringsmoleculen, werken samen om de mucosale integriteit te behouden en dienen als een kritieke fysiologische barrière tegen schadelijke factoren1,2. Deze beschermende functie is essentieel voor de gastro-intestinale homeostase, en verstoring hiervan kan bijdragen aan de ontwikkeling van maagziekten, waaronder gastritis3. Klinisch gezien is door geneesmiddelen geïnduceerde beschadiging van het maagslijmvlies een veelvoorkomende complicatie, waarbij niet-steroïde anti-inflammatoire geneesmiddelen en antiplateletmiddelen tot de meest frequente oorzaken behoren4. De integriteit van het maagslijmvlies is afhankelijk van een dynamisch evenwicht tussen celproliferatie en apoptose5. Chronische blootstelling aan omgevingsfactoren, waaronder medicatie, kan dit evenwicht verstoren, apoptose bevorderen en leiden tot mucosale beschadiging6,7. Het endoplasmatisch reticulum speelt een centrale rol bij het behoud van de intracellulaire homeostase. Onder omstandigheden van cellulaire stress activeert de accumulatie van misvouwen of ongevouwen eiwitten de unfolded protein response, waaronder de PERK/eIF2α/ATF4/CHOP-signalering, wat apoptose kan bevorderen en de expressie van eiwitten uit de B-cell lymphoma 2 (Bcl-2)-familie kan veranderen8. ATF5 is ook betrokken bij mitochondriële stressreacties en de interactie tussen mitochondriële dysfunctie en stress van het endoplasmatisch reticulum9. Recente klinische bewijzen wijzen erop dat continue antiplatelettherapie, waaronder clopidogrel, geassocieerd is met progressieve beschadiging van het slijmvlies van de maag en dunne darm10.

Clopidogrel is een veel voorgeschreven antiplaatjesaggregatiemiddel dat metabolische activering vereist voordat het irreversibel bindt aan P2Y12-receptoren op plaatjes, waardoor adenosine-difosfaat-gemedieerde plaatjesaggregatie wordt geremd en antithrombotische effecten ontstaan11. Deze bioactivering vindt primair plaats via hepatische cytochroom P450-enzymen. Daarom reproduceert directe blootstelling van gekweekte gastrische epitheelcellen aan de moederverbinding clopidogrel niet de volledige metabolische en farmacokinetische context van een clopidogrelbehandeling in vivo. Er is echter toenemend bewijs dat een behandeling met clopidogrel geassocieerd kan zijn met recidiverende maagulcera en gastro-intestinale bloedingen, wat het belang onderstreept van een balans tussen antithrombotische effectiviteit en gastro-intestinale veiligheid12,13,14. Hoewel deze bijwerkingen zijn gerapporteerd, blijven de mechanismen ten grondslag aan clopidogrel-geassocieerde schade aan het maagslijmvlies onvolledig begrepen, wat de ontwikkeling van gerichte preventieve en therapeutische strategieën beperkt. In de huidige studie hebben we de effecten van clopidogrel op het maagslijmvlies onderzocht met behulp van Sprague-Dawley-ratten en GES-1-cellen. De ratten kregen clopidogrel via sondevoeding, en aanvullende in vitro experimenten werden uitgevoerd met GES-1-cellen. Histopathologische, moleculaire en cellulaire analyses werden uitgevoerd om te onderzoeken of clopidogrel-geïnduceerde schade aan het maagslijmvlies geassocieerd is met stress van het endoplasmatisch reticulum en apoptose. Bijgevolg richtte de huidige studie zich op het karakteriseren van de moleculaire veranderingen geassocieerd met clopidogrel-geïnduceerde maagschade, in plaats van het vaststellen van een causaal signaleringspad. Onze bevindingen bieden aanvullend inzicht in de moleculaire veranderingen geassocieerd met clopidogrel-geïnduceerde schade aan het maagslijmvlies en kunnen bijdragen aan toekomstige studies gericht op het voorkomen en beheersen van deze bijwerkingen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle experimentele procedures met dieren zijn beoordeeld en goedgekeurd door het Lab of Animal Experimental Ethical Inspection van Dr. Can Biotechnology (Zhejiang) Co., Ltd. De studie is uitgevoerd in overeenstemming met de institutionele richtlijnen voor de zorg en het gebruik van laboratoriumdieren. Het goedkeuringsnummer voor dierethiek was DRK-20251015210.

Dieren en cellijnen

De ethische goedkeuring omvatte het gebruik van 20 SPF-grade Sprague–Dawley ratten. In totaal werden 12 mannelijke SPF-grade Sprague–Dawley ratten, in de leeftijd van 6–8 weken en met een gewicht van 280–300 g aan het begin van het experiment, opgenomen in deze studie. De ratten waren afkomstig van Hangzhou Ziyuan Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (Hangzhou, China; productielicentie nr. SCXK [Zhejiang] 2024-0004) en werden willekeurig toegewezen aan de controlegroep en de clopidogrel-behandelde groep, met zes ratten per groep. De ratten werden gehuisvest in een gecontroleerde omgeving bij ongeveer 22°C onder een licht/donkercyclus van 12 u, met vrije toegang tot standaardvoer en gesteriliseerd drinkwater. Alle ratten kregen één week de tijd om te acclimatiseren voor aanvang van het experiment. Clopidogrelhydrogensulfaat werd gesuspendeerd in 0,5% natriumcarboxymethylcellulose (CMC-Na) in een concentratie van 0,781 mg/mL. Ratten in de clopidogrel-behandelde groep ontvingen clopidogrelhydrogensulfaat via orale gavage in een volume van 10 mL/kg lichaamsgewicht (equivalent aan 1 mL/100 g lichaamsgewicht en een dosis van 7,81 mg/kg) één keer daags gedurende 3 opeenvolgende dagen. Ratten in de controlegroep ontvingen een gelijk volume 0,5% CMC-Na. De dosis en de behandelingsduur van 3 dagen waren geselecteerd op basis van een eerder beschreven kortetermijnratmodel voor orale toediening van clopidogrel. Na de laatste gavage op dag 3 werd het voer gedurende 12 u weggenomen, terwijl water ad libitum werd aangeboden. De ratten werden geanestheseerd in een inductiekamer met 3% isofluraan in zuurstof, en de anesthesie werd in stand gehouden met 1,5%–2,0% isofluraan toegediend via een neusmasker. Voldoende anesthesiediepte werd bevestigd door de afwezigheid van corneale en pedale terugtrekreflexen. Bloed werd verzameld via terminale hartpunctie onder diepe anesthesie. Terwijl ze diep geanestheseerd bleven, werden de ratten geëuthanaseerd door exsanguinatie gevolgd door bilaterale thoracotomie. De dood werd bevestigd door de afwezigheid van spontane ademhaling en hartactiviteit gedurende ten minste 5 min, samen met de afwezigheid van corneale en pedale terugtrekreflexen. De maag werd vervolgens snel verwijderd, geopend langs de grote kromming en voorzichtig gespoeld met ijskoud saline.

De humane gastrische mucosale epitheelcellijn GES-1 werd verkregen van iCell Bioscience Inc. (Shanghai, China; Cat. No. iCell-h062) en werd door de leverancier geauthenticeerd via short tandem repeat-profilering. Cellen werden gekweekt in RPMI-1640 medium aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS) en 1% penicilline-streptomycine in een bevochtigde incubator bij 37°C met 5% CO₂. Voor de experimenten werden cellen uit vroege passages, tussen passage 3 en 10, gebruikt. Wanneer de celconfluentie ongeveer 80%–90% bereikte, werden de cellen gesplitst met een ratio van 1:3. Cellen in de logaritmische groeifase werden gebruikt voor de daaropvolgende experimenten. Voor de CCK-8 assay werden cellen uitgezaaid in 96-wells platen met 6 × 103 cellen/well. Voor apoptose- en celcyclusanalyses werden cellen uitgezaaid in 6-wells platen met ongeveer 5 × 105 cellen/well en mochten ze hechten voorafgaand aan de behandeling met clopidogrel.

Chemicaliën en oplossingen

Clopidogrelwaterstofsulfaat (Cat. No. C874834; zuiverheid ≥ 99%) werd gebruikt voor de dier- en celexperimenten. Een clopidogrel-stamsoplossing werd bereid door 100 mg clopidogrelpoeder op te lossen in dimethylsulfoxide (DMSO) om een 1 M stamsoplossing te verkrijgen. De stamsoplossing werd voor gebruik verder verdund tot de vereiste werkconcentraties. De 1 M stamsoplossing werd seriële verdund met DMSO om 1000× doseeroplossingen te bereiden bij concentraties van 10, 100, 200, 400, 600, 800 en 1000 mM. Direct voor de behandeling werd elke 1000× doseeroplossing toegevoegd aan volledig cultuurmedium in een verhouding van 1:1000 (v/v) om uiteindelijke clopidogrelconcentraties van respectievelijk 0,01, 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 en 1,0 mM te verkrijgen. De vehikelcontrolegroep ontving een gelijk volume DMSO zonder clopidogrel. De uiteindelijke DMSO-concentratie werd zo in alle groepen op 0,1% (v/v) gehouden. Gecultiveerde GES-1-cellen reproduceren de hepatische cytochroom P450-gemedieerde bioactivering van clopidogrel niet. Daarom werd directe clopidogrelbehandeling gebruikt als een verkennend blootstellingsmodel voor de moederverbinding. Het concentratiebereik werd gekozen om concentratieafhankelijke cellulaire responsen onder de experimentele omstandigheden te karakteriseren en mag niet worden geïnterpreteerd als equivalent aan klinisch haalbare plasma- of maagweefselconcentraties.

Cel-subcultuur

Compleet medium werd bereid door basaal kweekmedium aan te vullen met FBS en penicilline-streptomycine. Wanneer de celconfluentie ongeveer 80% bereikte, werd het kweekmedium verwijderd en werden de cellen drie keer gewassen met steriele fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS). De cellen werden vervolgens gedurende ongeveer 1–2 min gedigereerd met een trypsine-ethylenediaminetetraazijnzuur (EDTA)-oplossing. Na gedeeltelijke celdetachering werd compleet medium toegevoegd om de digestie te stoppen. De celsuspensie werd gecentrifugeerd bij 1.200 × g gedurende 3 min. Na verwijdering van het supernatant werd de celpellet geresuspendeerd in 1–2 mL compleet medium en gezaaid in nieuwe kweekschalen volgens de experimentele vereisten.

CCK-8 Celviabiliteitsassay

GES-1-cellen in de logaritmische groeifase werden gezaaid in 96-wellplaten met 6 × 103 cellen/well en gedurende de nacht gekweekt om celhechting mogelijk te maken. Na adhesie werden de cellen gedurende 24 uur behandeld met verschillende concentraties clopidogrel (0, 0,01, 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 en 1,0 mM). De controlegroep ontving dezelfde uiteindelijke concentratie van het vehikel. Na de behandeling werd CCK-8-oplossing aan elke well toegevoegd en geïncubeerd bij 37°C volgens de instructies van de kit. De absorptie bij 450 nm werd gemeten met een microplatelezer. De cellevensvatbaarheid werd berekend als een percentage van de controlegroep. Op basis van de concentratie-responresultaten werd een behandeling met 0,1 mM clopidogrel gedurende 24 uur gekozen voor de daaropvolgende analyses van apoptose, celcyclus, qPCR en Western blot.

Flowcytometrie-analyse

GES-1-cellen werden gezaaid in 6-well platen en na aanhechting van de cellen 24 h behandeld met 0,1 mM clopidogrel. Na de behandeling werden zowel de drijvende als de adherentie cellen verzameld. De adherente cellen werden gedigesteerd met trypsine zonder EDTA, twee keer gewassen met koude PBS en resuspendeerd in bindingsbuffer. De cellen werden gekleurd met een Annexin V-FITC/PI Apoptosis Kit volgens de instructies van de fabrikant. Na incubatie bij kamertemperatuur in het donker werden apoptotische cellen gedetecteerd met een RaiseCyte 2L6C flowcytometer. Gegevens werden verzameld met de RaiseFlower-acquisitiesoftware en geanalyseerd met FlowJo-software (versie 10.8.1). Vroeg-apoptotische, laat-apoptotische en totale apoptotische celpopulaties werden gekwantificeerd met FlowJo-software.

Flowcytometrische analyse van de celcyclusverdeling

GES-1-cellen werden uitgezaaid in 6-wells platen en gedurende 24 h behandeld met 0,1 mM clopidogrel. Na de behandeling werden de cellen geoogst, gewassen met PBS en gefixeerd in vooraf gekoelde 70% ethanol bij 4°C. De gefixeerde cellen werden vervolgens gewassen om resterende ethanol te verwijderen en in het donker geïncubeerd met RNase A en een propidiumjodide-kleuringsoplossing volgens de instructies van de fabrikant. De celcyclusdistributie werd geanalyseerd met een flowcytometer. De gegevens werden verzameld met de acquisitiesoftware en geanalyseerd met FlowJo-software. De celcyclusdistributies werden gefit met behulp van het Watson-model, waarna de percentages cellen in de G0/G1-, S- en G2/M-fasen werden berekend.

Kwantitatieve Real-Time PCR (qPCR)

Totaal RNA werd geëxtraheerd uit GES-1 cellen en rattenmaagweefselmonsters met een RNA-extractiekit volgens de instructies van de kit. Voor weefselmonsters werden maagslijmvliesweefsels snel verzameld, gehomogeniseerd onder lage-temperatuuromstandigheden en onderworpen aan RNA-extractie. De RNA-concentratie en -zuiverheid werden bepaald door de absorptie bij 260 en 280 nm te meten. Gelijke hoeveelheden RNA werden omgezet in complementair DNA (cDNA) met een reverse transcriptiekit met verwijdering van genomisch DNA. Kwantitatieve real-time PCR werd uitgevoerd met een SYBR Green-gebaseerde PCR-mastermix. Elke reactie werd uitgevoerd in een totaal volume van 20 µL bestaande uit 10 µL 2× mastermix, 1 µL cDNA, 0,4 µL forward primer, 0,4 µL reverse primer en 8,2 µL RNase-vrije ddH₂O. De thermische cycluseigenschappen waren als volgt: initiële denaturatie bij 95°C gedurende 10 min, gevolgd door 40 cycli van denaturatie bij 95°C gedurende 10 s, annealing bij 60°C gedurende 30 s en extensie bij 72°C gedurende 30 s. De expressieniveaus van CHOP, ATF5, Bcl-2 en Bax werden bepaald. GAPDH werd gebruikt als intern referentiegen. De relatieve genexpressie werd berekend met de 2−ΔΔCt-methode. Primersequenties zijn opgenomen in Aanvullende Tabel 1.

Western Blot

Totaaleiwit werd geëxtraheerd uit GES-1-cellen en maagweefselmonsters van ratten. Voor de celmonsters werden behandelde GES-1-cellen gewassen met koude PBS en gelyseerd met radioimmunoprecipitatie-assay (RIPA) lysisbuffer met een protease-inhibitor. Voor de weefselmonsters werden maagslijmvliesweefsels gehomogeniseerd in RIPA-buffer onder lage-temperatuuromstandigheden en vervolgens gecentrifugeerd om het supernatant te verzamelen. Eiwitconcentraties werden bepaald met een BCA-eiwitassay. In totaal 20 µg eiwit per lane werd gescheiden via sodiumdodecylsulfaat-polyacrylamidegelelektroforese (SDS-PAGE) en overgebracht op polyvinylideendifluoride (PVDF) membranen. Na blokkeren met bovien serumalbumine (BSA) werden de membranen overnight bij 4°C geïncubeerd met primaire antilichamen tegen CHOP (1:1000), ATF5 (1:1000), Bcl-2 (1:1000), Bax (1:1000) en β-actin (1:5000). Na het wassen werden de membranen geïncubeerd met de corresponderende met mierikswortelperoxidase geconjugeerde secundaire antilichamen (1:10000). Eiwitbanden werden gevisualiseerd met een enhanced chemiluminescence-reagens en vastgelegd met een chemiluminescentie-beeldvormingssysteem. Bandintensiteiten werden gekwantificeerd met beeldanalyse-software en genormaliseerd naar β-actin.

Histopathologische Evaluatie

Monsters van maagweefsel werden verzameld van Sprague–Dawley ratten na behandeling met clopidogrel en gefixeerd in 10% neutraal gebufferde formaline. De monsters werden gedehydrateerd, ontkleurd, ingebed in paraffine en gesneden met een dikte van 4 µm. De paraffinecoupes werden gekleurd met hematoxiline en eosine. Histopathologische veranderingen werden kwalitatief geëvalueerd onder een lichtmicroscoop op basis van mucosale morfologie, epitheliale integriteit, oedeem en infiltratie van ontstekingscellen. Representatieve afbeeldingen werden vastgelegd. Er is geen histologisch scoringssysteem toegepast.

Immunohistochemie

Paraffine-ingebedde coupes van maagweefsel werden gedeparaffineerd in xyleen en gerehydrateerd via een gradiënt van ethanol. Hitte-geïnduceerde antigeenherstel werd uitgevoerd in citraatbuffer. Endogene peroxidase-activiteit werd geblokkeerd met 3% waterstofperoxide gedurende 10 min, en aspecifieke binding werd geblokkeerd met normaal geiten serum gedurende 30 min bij kamertemperatuur. De coupes werden vervolgens overnacht bij 4°C geïncubeerd met primaire antilichamen tegen CHOP, ATF5, Bcl-2 en Bax. Na het wassen met PBS werden de coupes geïncubeerd met het overeenkomstige mierikswortelperoxidase-geconjugeerde secundaire antilichaam. Immunoreactieve signalen werden gevisualiseerd met behulp van een DAB-chromogene oplossing, gevolgd door tegenkleuring met hematoxyline. De coupes werden gedehydrateerd, geklaard, gemonteerd en onderzocht onder een lichtmicroscoop. Representatieve afbeeldingen werden vastgelegd en het positieve kleuringsareaal werd gekwantificeerd met behulp van software voor beeldanalyse.

Immunofluorescentiële kleuring

Paraffine-ingebedde secties van maagweefsel werden gedeparaffineerd, gehydrateerd en onderworpen aan hitte-geïnduceerde antigeenherstel in citraatbuffer. Na blokkering met normaal geiten serum gedurende 30 min werden de secties een nacht bij 4°C geïncubeerd met primaire antilichamen tegen CHOP (1:50), ATF5 (1:100), Bcl-2 (1:50) en Bax (1:200). Na het wassen met PBS werden de secties 1 h bij kamertemperatuur in het donker geïncubeerd met de overeenkomstige fluorescente secundaire antilichamen (1:500) en vervolgens tegengekleurd met DAPI. Beelden werden vastgelegd met een fluorescentiemicroscoop bij een vergroting van ×200. Drie willekeurig geselecteerde, niet-overlappende velden per dier werden geanalyseerd met Image-Pro Plus 6.0, waarbij de fluorescentie-intensiteit werd uitgedrukt als IOD/Area. Er werden drie dieren per groep in de analyse opgenomen.

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

Bloedmonsters werden afgenomen van Sprague–Dawley ratten na de behandeling en mochten bij kamertemperatuur stollen. Serum werd gescheiden door centrifugatie en bewaard bij −80°C tot aan de analyse. De serumspiegels van IL-1β, IL-6 en TNF-α werden gemeten met ELISA-kits volgens de instructies van de kit. De absorbentie werd gemeten met een microplaatlezer en de cytokineconcentraties werden berekend aan de hand van de standaardcurves.

Statistische analyse

Statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van statistische analysesoftware. Gegevens worden weergegeven als het gemiddelde ± SD. Normaliteit en homogeniteit van de variantie werden respectievelijk beoordeeld met de Shapiro–Wilk-test en de Levene-test. Vergelijkingen tussen twee groepen werden uitgevoerd met de Student's t-test. Vergelijkingen tussen meerdere groepen werden uitgevoerd met een eenweg-variantieanalyse gevolgd door de post hoc-test van Dunnett. Een waarde van P < 0,05 werd beschouwd als statistisch significant. Alle celexperimenten werden uitgevoerd met ten minste drie onafhankelijke biologische replica's.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Clopidogrel vermindert de levensvatbaarheid van GES-1-cellen en verhoogt apoptose in vitro

We hebben eerst onderzocht of clopidogrel de levensvatbaarheid en apoptose van GES-1-cellen beïnvloedt. CCK-8-assays toonden aan dat behandeling met clopidogrel de levensvatbaarheid van GES-1-cellen significant verminderde (Figuur 1A,B), wat duidt op een verminderde celviabiliteit. Op basis van de algemene afname van de levensvatbaa...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Clopidogrel wordt op grote schaal gebruikt voor de preventie en behandeling van cardiovasculaire ziekten; het klinische gebruik ervan is echter geassocieerd met bloedingsrisico's en gastro-intestinale complicaties, waaronder peptische zweren, bloedingen en perforaties19. Daarom is het begrijpen van de moleculaire veranderingen die gepaard gaan met clopidogrel-geïnduceerde maagschade belangrijk voor het verbeteren van de preventie en het beheer van deze bijwerkingen. In de huidige studie hebben we ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

Belangenverstrengeling:

De auteurs verklaren dat zij geen bekende concurrerende financiële belangen of persoonlijke relaties hebben die invloed zouden hebben kunnen uitoefenen op het in deze studie gerapporteerde werk.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door het project “Fundamental Research on the CHOP/ATF5/Bcl-2 Signaling Pathway in Clopidogrel-Induced Gastric Mucosal Epithelial Cell Apoptosis” (Project No. 2023BWKY009).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Annexin V-FITC/PI-apoptosedetectiekitElabscienceE-CK-A211Apoptosedetectiekit
ATF5-antilichaamProteintech67066-1-APPrimair antilichaam
BCA-eiwitbepalingskitSolarbioPC0020Eiwitconcentratiemeting
Bax-antilichaamProteintech50599-1-APPrimair antilichaam
Bcl-2-antilichaamProteintech26593-1-APPrimair antilichaam
β-actine antilichaamProteintech66009-1-IgPrimair antilichaam
BlokkeerbufferBeyotimeP0252Blokkeeroplossing voor Western blot
CCK-8 celondertellingskitKeyGen BiotechKGA317Celviabiliteitsassay
cDNA-synthesekitTransGen BiotechAU341Kit voor synthese van eerste-strengs cDNA met verwijdering van genomisch DNA
Kit voor celcyclusdetectieLianke BiotechnologyCCS012Cellcyclusanalysekit
CHOP-antilichaamProteintech15204-1-APPrimair antilichaam
Clopidogrelhydrogeensulfaat (zuiverheid ≥99%)MacklinC874834Experimenteel geneesmiddel
DAB-chromogeensetBeyotimeP0201MImmunohistochemisch substraat
Dimethylsulfoxide (DMSO)MedChemExpressHY-Y0320COplosmiddel
Enhanced Chemiluminescence (ECL)-reagensMeilunbioMA0186Chemiluminescent substraat
Foetaal runderserum (FBS)Gibco10099-141Celcultuursupplement
GES-1 menselijke gastrische epitheelcellijniCell BioscienceiCell-h062Menselijke gastrische epitheellaagcellijn
Hematoxyline en eosine (H&E) KleuringskitBeyotimeC0105SHistologische kleuring
Met mierikswortelperoxidase (HRP) geconjugeerd secundair antilichaamProteintechRGAM001/RGAR001Secundaire antilichaam
Waterstofperoxide-oplossingAbsintABS9333-100mLReagens voor blokkeren van endogene peroxidase
IL-1β ELISA-kitMEIMIANMM-0047R2Serumcytokine-assay
IL-6 ELISA-kitMEIMIANMM-0190R2Serumcytokineanalyse
MicroplaatlezerBeijing Liuyi BiotechnologyWD-2102BAbsorbantiemeting
Penicilline-streptomycine-oplossingSolarbioP1400Antibioticumoplossing
Fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS)ServicebioG4202-500ML1× PBS
Polyvinylideenfluoride (PVDF)-membraanMilliporeIPVH00010Western blot-membraan
Verdunner voor primaire antistoffenBeyotimeP0023AAntilichaamverdunningsoplossing
EiwitmolecuulgewichtmarkerGistenWJ103Voorbehandelde eiwitladder
Quantitative Real-Time PCR Master Mix (SYBR Green)CWBioCW3008qPCR-reagens
Radio-immunoprecipitatie-assay (RIPA) lysisbufferSolarbioR0010Eiwitextractiebuffer
RNase ALianke BiotechnologyCCS012Reagens voor celcyclusanalyse
RPMI-1640 mediumServicebioG4535-500MLBasaal celkweekmedium
Sprague-Dawley-rattenHangzhou Ziyuan Laboratory Animal Technology Co., Ltd.Geen gegevens beschikbaarSPF-graad
TNF-α ELISA-kitMEIMIANMM-0180R2Serumcytokine-analyse
Kit voor extractie van totaal RNATransGen BiotechER501-01RNA-extractiekit
Trypsine-EDTA-oplossingSolarbioT1300Cel-dissociatiereagens

Referenties

  1. Mills JC, Shivdasani RA. Gastric epithelial stem cells. Gastroenterology. 2011;140(2):412-424.
  2. Zhou CB, et al. The role of pyroptosis in gastrointestinal cancer and immune responses to intestinal microbial infection. Biochim Biophys Acta Rev Cancer. 2019;1872(1):1-10.
  3. Boltin D, Niv Y. Pharmacological and alimentary alteration of the gastric barrier. Best Pract Res Clin Gastroenterol. 2014;28(6):981-994.
  4. Kwon DA, et al. Protective effects of a standardized extract (HemoHIM) using indomethacin- and ethanol/HCl-induced gastric mucosal injury models. Pharm Biol. 2019;57(1):543-549.
  5. Guo XZ, et al. Effect of Bax, Bcl-2 and Bcl-xL on regulating apoptosis in tissues of normal liver and hepatocellular carcinoma. World J Gastroenterol. 2002;8(6):1059-1062.
  6. Gomi A, et al. Effect of Bifidobacterium bifidum BF-1 on gastric protection and mucin production in an acute gastric injury rat model. J Dairy Sci. 2013;96(2):832-837.
  7. Chiou SK, et al. Suppression of growth arrest and DNA damage-inducible 45alpha expression confers resistance to sulindac- and indomethacin-induced gastric mucosal injury. J Pharmacol Exp Ther. 2010;334(3):693-702.
  8. Chen X, et al. Endoplasmic reticulum stress: molecular mechanism and therapeutic targets. Signal Transduct Target Ther. 2023;8(1):352.
  9. Lian X, et al. ATF5-regulated mitochondrial unfolded protein response attenuates neuronal damage in epileptic rats by reducing endoplasmic reticulum stress through mitochondrial ROS. Neurochem Res. 2024;49(2):388-401.
  10. He C, et al. Progression of gastrointestinal injury during antiplatelet therapy after percutaneous coronary intervention: a secondary analysis of the OPT-PEACE randomized clinical trial. JAMA Netw Open. 2023;6(11):e2343219.
  11. Zongdan J, et al. The mechanism of miR-363-3p/DUSP10 signaling pathway involved in the gastric mucosal injury induced by clopidogrel. Toxicol Mech Methods. 2021;31(2):150-158.
  12. Chan FK, et al. Clopidogrel versus aspirin and esomeprazole to prevent recurrent ulcer bleeding. N Engl J Med. 2005;352(3):238-244.
  13. Taha AS, et al. Upper gastrointestinal mucosal abnormalities and blood loss complicating low-dose aspirin and antithrombotic therapy. Aliment Pharmacol Ther. 2006;23(4):489-495.
  14. Wu HL, et al. Increased endoplasmic reticulum stress response is involved in clopidogrel-induced apoptosis of gastric epithelial cells. PLoS One. 2013;8(9):e74381.
  15. Forsgard RA, et al. Intestinal permeability to iohexol as an in vivo marker of chemotherapy-induced gastrointestinal toxicity in Sprague-Dawley rats. Cancer Chemother Pharmacol. 2016;78(4):863-874.
  16. Wu H, et al. Clopidogrel-induced gastric injury in rats is attenuated by stable gastric pentadecapeptide BPC 157. Drug Des Devel Ther. 2020;14:5599-5610.
  17. Zhu XM, et al. The involvement of endoplasmic reticulum stress response in immune dysfunction of dendritic cells after severe thermal injury in mice. Oncotarget. 2017;8(6):9035-9052.
  18. Oakes SA, Papa FR. The role of endoplasmic reticulum stress in human pathology. Annu Rev Pathol. 2015;10:173-194.
  19. Abrignani MG, et al. Gastroprotection in patients on antiplatelet and/or anticoagulant therapy: a position paper of the National Association of Hospital Cardiologists (ANMCO) and the Italian Association of Hospital Gastroenterologists and Endoscopists (AIGO). Eur J Intern Med. 2021;85:1-13.
  20. Takahashi K, et al. Influence of antiplatelet drugs on gastric ulcer healing after endoscopic submucosal dissection in patients with early gastric cancer. DEN Open. 2025;5(1).
  21. Wu H, et al. Role of MKP-5-p38/MAPK pathway in clopidogrel-induced gastric mucosal epithelial cells apoptosis and tight junction dysfunction. Am J Transl Res. 2020;12(5):1741-1753.
  22. Fu X, et al. Protective effect of teprenone on gastric mucosal injury induced by dual antiplatelet therapy in rats. Am J Transl Res. 2021;13(4):2702-2709.
  23. Oyadomari S, Mori M. Roles of CHOP/GADD153 in endoplasmic reticulum stress. Cell Death Differ. 2004;11(4):381-389.
  24. Sears TK, Angelastro JM. The transcription factor ATF5: role in cellular differentiation, stress responses, and cancer. Oncotarget. 2017;8(48):84595-84609.
  25. Zhang Y, et al. Puerarin attenuates neurological deficits via Bcl-2/Bax/cleaved caspase-3 and Sirt3/SOD2 apoptotic pathways in subarachnoid hemorrhage mice. Biomed Pharmacother. 2019;109:726-733.
  26. Manas A, et al. Immunohistochemical detection of the pro-apoptotic BaxΔ2 protein in human tissues. Histochem Cell Biol. 2020;154(1):41-53.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Clopidogrel-geïnduceerde maagschadeGES-1-cellenapoptosemarkerscelviabiliteitsassayflowcytometrieWestern blotinflammatoire cytokinenBax/Bcl-2-ratio

Dit artikel is gepubliceerd

Video binnenkort beschikbaar

Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.