Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Onderzoeksartikel
Dit protocol heeft tot doel de antitumorale effectiviteit van ruscogenine in cellen van het nasofaryngeale carcinoom te evalueren. Het beschrijft uitgebreide methodologieën — waaronder assays voor levensvatbaarheid, migratie, apoptose en ferroptose — om systematisch te verduidelijken hoe deze verbinding een dubbele celdood induceert door KDM1A te targeten en te downreguleren.
Nasofaryngeaal carcinoom (NPC) is een zeer agressieve maligniteit. De natuurlijke verbinding ruscogenine (Rus) vertoont anti-kankerpotentieel. Deze studie verduidelijkt het specifieke werkingsmechanisme bij nasofaryngeaal carcinoom (NPC) door de effecten op NPC-cellen en de onderliggende moleculaire route te onderzoeken. De humane nasofaryngeale carcinoom (NPC)-cellijn, C666-1, werd behandeld met verschillende concentraties Rus. Er werd een reeks in vitro-assays uitgevoerd om de cellevensvatbaarheid, proliferatie, migratie, invasie, apoptose en ferroptose te evalueren. De rol van lysine-specifieke demethylase 1A (KDM1A) werd onderzocht met behulp van Western blot en moleculaire docking, en de mediërende rol ervan werd gevalideerd via overexpressie-rescue-experimenten. Ruscogenine verminderde dosisafhankelijk de proliferatieve, clonogene, migratieve en invasieve capaciteiten van C666-1-cellen. Mechanistisch gezien induceerde Rus-behandeling zowel apoptose, aangetoond door de activering van executioner caspase-3 en een verschuiving naar pro-apoptotische signalering via de Bax/Bcl-2-balans, als ferroptose, gekenmerkt door verhoogde lipideperoxidatie en intracellulair ijzer. Deze anti-tumoreffecten waren sterk gecorreleerd met de downregulatie van KDM1A. Cruciaal is dat de geforceerde overexpressie van KDM1A de Rus-geïnduceerde apoptose en ferroptose significant attenuationeerde en de onderdrukking van maligne fenotypes omkeerde, wat de kritische mediërende rol van KDM1A bevestigt. Ruscogenine remt de maligne progressie van nasofaryngeaal carcinoom door KDM1A te downreguleren, waardoor apoptose en ferroptose worden bevorderd. Deze bevindingen identificeren de Rus-KDM1A-as als een veelbelovend therapeutisch doelwit voor de behandeling van NPC.
Nasofaryngeaal carcinoom (NPC) is een type kanker dat wordt veroorzaakt door de samenwerking van genetische en omgevingsfactoren1. Hoewel radiotherapie opmerkelijke vooruitgang in de behandeling heeft geboekt, blijft de algehele overleving van NPC-patiënten onbevredigend. Dit komt waarschijnlijk doordat NPC-cellen zich snel kunnen vermenigvuldigen en zeer vatbaar zijn voor metastasering naar regionale lymfeklieren enstante organen2. Daarom is het essentieel om de moleculaire mechanismen te onderzoeken die de progressie van NPC bevorderen. Onlangs is ontdekt dat ferroptose, een nieuwe vorm van celdood die op ijzerafhankelijke wijze wordt gereguleerd door Fe2⁺ en lipideperoxiden, een cruciale rol speelt bij NPC3. Huidig bewijs heeft aangetoond dat ferroptose een belangrijke rol speelt bij NPC en dat de inductie ervan de radiotherapie bij kanker kan verbeteren4,5.
Vanwege de minimale toxiciteit en minder bijwerkingen worden Chinese kruidenformules al duizenden jaren op grote schaal gebruikt voor de behandeling van kanker6,7. Als een vorm van medicatie met meerdere componenten, meerdere targets en een synergetisch effect, worden traditionele Chinese geneeskunde (TCM) voorschriften ingezet als effectieve complementaire therapie bij het voorkomen en behandelen van kanker, waaronder NPC8,9,10. Radix ophiopogonis (RO), de wortel van de overblijvende kruidachtige plant Ophiopogon japonicus, is erin geslaagd om NPC effectief te verlichten als adjuvante therapie11,12. Ruscogenine (Rus), de belangrijkste component in RO, wordt beschreven als bezittend van krachtige anticancerogene effecten13. In muismodellen van colorectale kanker kan Rus beschadigingen aan tight junctions verbeteren en tumormigratie remmen14. Belangrijk is dat Rus ook de levensvatbaarheid van pancreaskankercellen kan verlagen door ferroptose te induceren. Het effect van Rus op NPC is echter nog onduidelijk.
Epigenetica is het belangrijkste onderzoeksveld voor de pathogenese van kanker en biedt meerdere effectieve behandelingen15. Als een van de goed bestudeerde epigenetische modificaties is histonmethylering betrokken bij de ontwikkeling van kanker en is het tevens een belangrijk doelwit voor medicijnontwerp16. De dynamische modulatie van histonmethylering wordt gemedieerd door methyltransferasen en demethylasen17. KDM1A is een histon-lysine-demethylase waarvan is aangetoond dat het, vanwege de betrokkenheid bij epigenetische modulatie, een cruciale rol speelt bij carcinogenese18. Bovendien is gebleken dat KDM1A een oncoproteïne is met een hoge expressie in meerdere kankersoorten, zoals long- en pancreaskanker19. Guo et al. rapporteerden dat verhoogde KDM1A-waarden de expressie van phosphatase and tensin homolog (PTEN) konden onderdrukken en de proliferatie en migratie van NPC-cellen konden versterken, terwijl apoptose werd geremd20. Tegelijkertijd werd ook vastgesteld dat upregulatie van KDM1A ferroptose in longkanker kon onderdrukken21. Analyse van de Super-PRED-database wees uit dat KDM1A een potentieel doelwit is van Rus.
Ondanks het erkende antitumorale potentieel van Rus bij andere kankersoorten, blijven de specifieke rol en moleculaire mechanismen bij nasofarynxcarcinoom volledig onontdekt, wat een aanzienlijke lacune in het onderzoek vormt. Bovendien hebben eerdere rapporten KDM1A afzonderlijk gekoppeld aan tumorproliferatie en ferroptose-resistentie, maar is er nog geen studie uitgevoerd naar de vraag of het targeten van KDM1A gelijktijdig meerdere celdeath-paden in NPC kan triggeren. Daarom biedt deze studie een sterke rationale voor de hypothese dat Rus de maligne progressie van NPC-cellen kan onderdrukken door KDM1A direct te downreguleren.
Deze studie was erop gericht deze lacune te vullen door systematisch het effect van Rus op de proliferatie, migratie en invasie van NPC-cellen te evalueren. De primaire noviteit van dit onderzoek ligt in het blootleggen van een duale-mechanisme strategie. De focus lag op het vermogen van Rus om gelijktijdig zowel klassieke apoptose als ijzer-afhankelijke ferroptose te induceren. Door de nieuwe Rus-KDM1A-signaleringsas te valideren, brengt deze studie de huidige kennis significant vooruit door aan te tonen hoe een enkele natuurlijke verbinding tumorresistentie kan overwinnen via een gelijktijdige blokkade van meerdere pathways, wat een veelbelovende preklinische rationale biedt voor gerichte NPC-therapie.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Celkweek, behandeling en transfectie
De humane nasofaryngeale carcinoom (NPC) cellijn, C666-1 (RRID: CVCL_M597), en de niet-maligne humane nasofaryngeale epitheliale cellijn, NP69 (RRID: CVCL_F755), werden bij een commerciële leverancier gekocht. Beide cellijnen werden geauthenticeerd via Short Tandem Repeat (STR) profiling en vóór gebruik bevestigd vrij te zijn van mycoplasma-contaminatie. Voor routineuze kweek werden C666-1 cellen gepropageerd in RPMI 1640 medium aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS) en 1% penicilline-streptomycine. NP69 cellen werden gekweekt in serumvrij keratinocytenmedium aangevuld met 10% FBS, 10 ng/mL recombinant epidermale groeifactor en 1% penicilline-streptomycine. Ruscogenine (Rus; zuiverheid ≥ 98%) werd bij een commerciële leverancier gekocht. Beide cellijnen werden onderhouden in een bevochtigde incubator bij 37 °C onder 5% CO₂. Voor behandelingen werden cellen gedurende 24 h22 blootgesteld aan Ruscogenine (Rus) in variërende concentraties (10, 20, 50 µM). Voor transfectie werden plasmiden die coderen voor lysine-specifieke demethylase 1A voor overexpressie (oe-KDM1A) en een overeenkomstige negatieve controle lege vector (oe-NC), verkregen van een commerciële leverancier, getransfecteerd in C666-1 cellen wanneer de celconfluentie 70–80% bereikte. Specifiek werden 2,5 µg plasmide-DNA en 5 µL van een lipide-gebaseerd transfectiereagens elk verdund in 150 µL van een medium met verlaagd serumgehalte, voorzichtig gemengd, 20 min bij kamertemperatuur geïncubeerd en vervolgens toegevoegd aan elke well van een 6-well plaat volgens het protocol van de fabrikant. Cellen werden 48 h bij 37 °C geïncubeerd, waarna de transfectie-efficiëntie werd bevestigd.
Cell counting kit-8 (CCK-8) assay
De celviabiliteit na Rus-behandeling werd gekwantificeerd met behulp van de CCK-8-assay. Voor deze procedure werden de cellen eerst uitgezaaid in 96-wells platen en gedurende de nacht gekweekt. De assay werd gestart door 10 µL CCK-8-oplossing toe te voegen, en na 2 u incubatie werd de resulterende colorimetrische verandering gemeten als de optische dichtheid (OD) bij 450 nm met een plaatlezer.
Kolonievormingsassay
Om de clonogene overleving te beoordelen, werden C666-1-cellen gezaaid in 6-wells platen en gedurende 14 dagen gekweekt. Na de incubatieperiode werden de resulterende kolonies gefixeerd met 100% methanol gedurende 10 min, waarna ze gedurende 30 min werden gevisualiseerd met 0,5% kristalviolet. Het aantal gekleurde kolonies werd vervolgens gekwantificeerd via microscopische beeldvorming en telling.
Western blot
Voor Western blot-analyse werd eerst totaal eiwit uit cellen geëxtraheerd met RIPA-buffer, en de resulterende lysaten werden gecentrifugeerd (12.000 × g) om het supernatant te verzamelen. Voor de kwantificering van de eiwitgehaltes werd een BCA-assay gebruikt. Gelijke hoeveelheden totaal eiwit (30 µg per lane) werden geladen en gescheiden via 10% natriumdodecylsulfaat-polyacrylamidegelelektroforese (SDS-PAGE). Na de scheiding werden de eiwitten overgezet op polyvinylideenfluoride (PVDF)-membranen bij een constante spanning van 100 V gedurende 90 min op ijs. De membranen werden vervolgens gedurende 2 u bij kamertemperatuur geblokkeerd in 5% runder serumalbumine (BSA) bereid in tris-gebufferde zoutoplossing met 0,1% Tween 20 (TBST). De membranen werden vervolgens overnight bij 4°C geïncubeerd met de volgende primaire antilichamen verdund in blokkeringsbuffer (allemaal 1:1000): Ki67, PCNA, MMP2, MMP9, Bcl-2, Bax, KDM1A, SLC7A11, GPX4, ACSL4, TFR1 en β-actine. Ten slotte, na een incubatie van 2 u met HRP-geconjugeerde secundaire antilichamen, werden de immunoreactieve banden gevisualiseerd met behulp van een enhanced chemiluminescence (ECL) detectiereagens, en werd densitometrische analyse uitgevoerd met beeldanalyse-software.
Wondkras-assay
Voor de wondhelingsassay werden C666-1-cellen gekweekt tot 80% confluentie in 6-wells platen. Er werd een uniforme wond in de monolaag gemaakt door te schrapen met een 200 µL pipetpunt. Losgeraakte cellen werden verwijderd met een PBS-wasbeurt, waarna het kweekmedium werd vervangen door serumvrij medium voor een incubatie van 24 h. Beelden van het wondgebied werden vastgelegd op 0 h en 24 h met behulp van een lichtmicroscoop om de celmigratie te beoordelen.
Transwell-assay
Celinvasie werd geëvalueerd met behulp van transwell-kamers (poriegrootte 8-µm) die vooraf waren gecoat met 50 µL basaalmembraanmatrix. Het invasieve vermogen van C666-1-cellen werd bepaald met behulp van Transwell-kamers. De bovenste inserts werden gezaaid met cellen gesuspendeerd in serumvrij medium, terwijl de onderste wells DMEM met 10% FBS bevatten. Na een incubatie van 24-h werden de cellen die op de apicale zijde van het membraan waren gebleven, voorzichtig verwijderd. Voor kwantificatie werden de cellen op het basolaterale oppervlak gefixeerd in methanol, gekleurd met 0,1% kristalviolet en geteld aan de hand van afbeeldingen vastgelegd met lichtmicroscopie.
Flowcytometrie
Apoptose werd gekwantificeerd met behulp van flowcytometrie. Voor de monsterbereiding werden C666-1-cellen verzameld, gespoeld met ijskoud PBS en vervolgens resuspendeerd in 100 µL bindingsbuffer. De cellen werden vervolgens gecokleurd met Annexin-V-FITC (20 µg/mL) en propidiumjodide (PI). Deze kleuring werd 15 min op ijs uitgevoerd, beschermd tegen licht. De gegevens werden direct verzameld met een flowcytometer om het percentage apoptotische cellen te bepalen.
Detectie van caspase-3 activiteit
De Caspase-3-activiteit werd gemeten met een commerciële assaykit volgens de instructies van de fabrikant. In het kort werden C666-1-cellen gelyseerd en werden de supernatanten verzameld na centrifugatie bij 14.000 × g. Na een incubatie van 2 u met het bijgeleverde reagens werd de absorbentie van elk supernatant gekwantificeerd bij 405 nm.
RT-qPCR
Totaal RNA werd gezuiverd uit C666-1-cellen met behulp van een commercieel RNA-extractiereagens. Het resulterende RNA werd volgens het protocol van de fabrikant met een commerciële kit reverse-getranscribeerd tot eerste-streng cDNA. Genexpressie-analyse werd vervolgens uitgevoerd via kwantitatieve PCR (qPCR) op een real-time PCR-systeem met een SYBR Green-gebaseerde mastermix. De vergelijkende Ct (2⁻△△Ct) methode werd gebruikt om de relatieve transcriptniveaus te bepalen. De primersequenties die voor amplificatie werden gebruikt waren: β-actin (Forward: 5'-CATGTACGTTGCTATCCAGGC-3'; Reverse: 5'-CTCCTTAATGTCACGCACGAT-3') en KDM1A (Forward: 5'-TGACCGGATGACTTCTCAAGA-3'; Reverse: 5'-GTTGGAGAGTAGCCTC AAATGTC-3').
Thiobarbituurzuur-reactieve stoffen (TBARS) assay
Om lipideperoxidatie te meten, werden eerst supernatten van C666-1-cellen geprepareerd door precipitatie (15% TCA, 500 mM BHA) en centrifugatie gedurende 10 min bij 10.000 × g. Deze supernatten werden vervolgens gereageerd met 0,375% thiobarbituurzuur en 10 min bij 100 °C verhit om het MDA-TBA-adduct te genereren. Het niveau van dit adduct, dat indicatief is voor lipideperoxidatie, werd bepaald door de absorbantie bij 532 nm te meten met een microplaatlezer23.
Detectie van lipide reactieve zuurstofspecies (ROS)
Lipidperoxidatie werd gedetecteerd met behulp van een fluorescente sonde voor lipidperoxidatie. C666-1-cellen werden gezaaid in 6-wells platen, gedurende de nacht gekweekt en vervolgens blootgesteld aan de fluorescente sonde (2 µM). Deze sonde vertoont bij oxidatie een fluorescentieverschuiving van rood naar groen. De verhouding tussen groene en rode fluorescentie werd geanalyseerd met een laser-scanning confocale microscoop en software voor beeldanalyse. De uitgezette verhouding tussen groene en rode fluorescentie was duidelijk gedefinieerd en werd gebruikt als kwantitatieve indicator voor de niveaus van lipidperoxidatie24.
Detectie van Fe2+
Het intracellulaire ferro-ijzergehalte (Fe2⁺) werd gemeten met behulp van een intracellulaire fluorescerende ijzersonde. C666-1-cellen werden 10 min lang geïncubeerd met 10 µM fluorescerende sonde. Na het wassen met PBS om overtollige sonde te verwijderen, werden de cellen geanalyseerd via fluorescentiemicroscopie.
Moleculaire docking-analyse
Moleculaire docking is een cruciale computationele methode die de ontwikkeling van nieuwe geneesmiddelen faciliteert door de bindingsaffiniteit en interactie tussen een ligand en het doelprotein te voorspellen via de evaluatie van hun bindingsmodi25. De 3D-structuur van KDM1A (PDB ID: 6NQU) is verkregen via de RCSB PDB-webpagina (https://www.rcsb.org/). Voor de preparatie van de KDM1A-proteïnestructuur is water en irrelevante kleine liganden verwijderd. De moleculaire docking-simulatie is uitgevoerd met moleculaire docking-software met gebruik van het Lamarckian Genetic Algorithm, en de visualisatie is uitgevoerd met behulp van moleculaire visualisatiesoftware26.
Statistische analyse
Alle experimenten werden uitgevoerd met ten minste drie onafhankelijke biologische replica's, en de resultaten worden weergegeven als het gemiddelde ± standaarddeviatie (SD). De statistische analyse is uitgevoerd met behulp van statistische analysesoftware. Verschillen tussen meerdere groepen werden geëvalueerd via een eenweg-variantieanalyse (ANOVA), gevolgd door de post-hoc test voor meervoudige vergelijkingen van Tukey. Een P-waarde van minder dan 0,05 werd beschouwd als een indicatie voor een statistisch significant verschil.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Ruscogenine remt selectief de levensvatbaarheid en proliferatie van nasofaryngeale carcinoomcellen
In deze studie werd eerst het effect van ruscogenine (Rus) onderzocht op de levensvatbaarheid van zowel normale nasofaryngeale epitheelcellen (NP69) als nasofaryngeale carcinoomcellen (NPC) (C666-1). Zoals vastgesteld met de CCK-8-assay, vertoonde Rus-behandeling bij concentraties van 10, 20 en 50 µM geen significante toxiciteit voor de normale NP69-cellen. Omgekeerd belemmerde r...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Nasofarynxcarcinoom (NPC) is een ernstige maligniteit met een hoge prevalentie van metastase, wat verklaart waarom betere interventies dringend noodzakelijk zijn27. Hier wordt aangetoond dat ruscogenine (Rus), een natuurproduct verkregen als derivaat van Radix ophiopogonis, sterke antitumorale effecten heeft op NPC-cellen. Er wordt tevens geconcludeerd dat Rus de progressie van NPC voorkomt door de histon-demethylase KDM1A te onderdrukken, wat vervolgens twee verschillende typen geprogram...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs verklaren dat er geen concurrerende financiële belangen zijn. De auteurs verklaren dat er geen generatieve AI-tools zijn gebruikt bij het concept van de studie, de gegevensverzameling, de gegevensanalyse of het genereren van figuren. AI-ondersteunde technologieën zijn uitsluitend gebruikt voor kleine taalredactie en grammaticaal correctie tijdens het opstellen van dit manuscript. De auteurs dragen de volledige verantwoordelijkheid voor de inhoud en integriteit van het gepubliceerde werk.
Niet van toepassing.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 7500 Fast Real-Time PCR-systeem | Applied Biosystems | 4351106 | RT-qPCR-analyse |
| Annexin-V-FITC/PI-apoptosekit | BD Biosciences | 556547 | Detectie van apoptose via flowcytometrie |
| Anti-ACSL4-antilichaam | Abcam | ab155282 | Primair antilichaam voor Western blot |
| Anti-Bax-antilichaam | Cell Signaling Technology (CST) | 5023 | Primair antilichaam voor Western blot |
| Anti-Bcl-2 antilichaam | Cell Signaling Technology (CST) | 15071 | Primair antilichaam voor Western blot |
| Antilichamen | |||
| Anti-GPX4-antilichaam | Abcam | ab125066 | Primair antilichaam voor Western blot |
| Anti-KDM1A (LSD1) antilichaam | Cell Signaling Technology (CST) | 2139 | Primair antilichaam voor Western blot |
| Anti-Ki67-antilichaam | Abcam | ab16667 | Primair antilichaam voor Western blot |
| Anti-MMP2-antilichaam | Abcam | ab92536 | Primair antilichaam voor Western blot |
| Anti-MMP9-antilichaam | Abcam | ab76003 | Primair antilichaam voor Western blot |
| Anti-PCNA-antilichaam | Cell Signaling Technology (CST) | 13110 | Primair antilichaam voor Western blot |
| Anti-konijn IgG, HRP-gekoppeld | Cell Signaling Technology (CST) | 7074 | Secundaire antilichaam |
| Anti-SLC7A11 (xCT) antilichaam | Abcam | ab175186 | Primair antilichaam voor Western blot |
| Anti-TFR1-antilichaam | Abcam | ab84036 | Primair antilichaam voor Western blot |
| Anti-β-actine-antilichaam | Cell Signaling Technology (CST) | 4970 | Primaire antilichaam voor ladingscontrole |
| Assaykits | |||
| AutoDock 4.2 | Scripps Research Institute | Sinds er geen brontekst is verstrekt, kan ik geen vertaling produceren. Voeg aub de Engelse tekst toe die u vertaald wilt hebben. | Moleculaire docking-simulatie |
| BCA-proteinassaykit | Beyotime Biotechnology | P0012 | Eiwitkwantificering |
| BODIPY 581/591 C11-sonde | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) | D3861 | Detectie van lipide ROS (2 μM) |
| C666-1 cellijn | iCell Bioscience Inc. | iCell-h378 | Menselijke nasofaryngeale carcinoomcellijn |
| Caspase-3 activiteitsassaykit | Beyotime Biotechnology | C1115 | Evaluatie van apoptose |
| CCK-8 assay kit | Dojindo Molecular Technologies | CK04 | Meting van de cellevensvatbaarheid |
| Chemicaliën & Reagentia | |||
| CytoFLEX flowcytometer | Beckman Coulter | CytoFLEX | Apoptoseanalyse |
| ECL-detectiereagens | MilliporeSigma | WBKLS0500 | Visualisatie van Western blot (Immobilon) |
| Apparatuur | |||
| Foetaal Runderserum (FBS) | Gibco (Thermo Fisher Scientific) | 10099141 | Celkweeksupplement |
| GraphPad Prism 8.0 | GraphPad-software | Omdat u geen brontekst heeft verstrekt, kan ik geen vertaling genereren. Voer aub de Engelse tekst in die u vertaald wilt hebben naar het Nederlands. | Statistische analyse en grafische weergave |
| ImageJ-software | NIH | Omdat er geen brontekst is verstrekt, kan ik geen vertaling produceren. Gelieve de tekst aan te leveren die u vertaald wilt hebben. | Analyse van beelddensitometrie |
| Serumvrij keratinocytmedium | iCell Bioscience Inc. | iCell-019 | Voor NP69-celcultuur |
| Laser-scanning confocale microscoop | Carl Zeiss | LSM 880 | BODIPY C11 fluorescentie-imaging |
| Licht- / fluorescentiemicroscoop | Olympus | IX73 | Wondscratch-assay, Transwell & Fe2+-beeldvorming |
| LightCycler 480 SYBR Green I Master | Roche Diagnostics | 4887352001 | Kwantitatieve real-time PCR |
| Lipofectamine 2000-reagens | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) | 11668019 | Celtransfectiereagens |
| Matrigel | Corning | 356234 | Basementmembraanmatrix voor invasie-assay |
| Microplaatlezer | Molecular Devices | SpectraMax M5 | Absorbantiemeting (405, 450, 532 nm) |
| NP69-cellijn | iCell Bioscience Inc. | iCell-h431 | Normale humane nasofaryngeale epitheelcellijn |
| oe-KDM1A & oe-NC-plasmiden | Shanghai GenePharma Co., Ltd. | Maatwerk-synthese | Plasmiden voor KDM1A-overexpressie |
| Phen Green SK (PGSK)-sonde | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) | P14312 | Intracellulaire Fe2+-detectie (10 μM) |
| Pymol 3.0 | Het lijkt erop dat uw tekst is afgebroken. Kunt u de volledige brontekst aanleveren die u vertaald wilt hebben?ödinger | Omdat er geen brontekst is verstrekt, kan er geen vertaling worden gemaakt. Voer a.u.b. de Engelse tekst in die vertaald moet worden naar het Nederlands. | Visualisatie van moleculaire docking |
| Omzetkingskit voor reverse transcriptie | Roche Diagnostics | 4379012001 | Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit |
| RIPA-lysebuffer | Solarbio (Beijing, China) | R0010 | Totale proteinextractie |
| RPMI 1640-medium | iCell Bioscience Inc. | iCell-0002 | Voor C666-1 celkweek |
| Ruscogenine (Rus) | MedChemExpress (MCE) | HY-N0193 | Medicijnbehandeling, zuiverheid ≥ 98% |
| Software | |||
| TBARS-assaykit | Cayman Chemical | 10009055 | Meting van lipideperoxidatie |
| TRizol-reagens | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific)* | 15596026 | Totale RNA-extractie |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.