miR‑486‑3p is downgereguleerd bij patiënten met een acuut cerebraal infarct en obstructief slaapapneu-syndroom, correleert negatief met de ernst van de ziekte en inflammatoire markers, en voorspelt een slechte prognose op 1‑jaars termijn, wat het potentieel ervan als diagnostische en prognostische biomarker ondersteunt.
Onderzoeksartikel
Retrospectieve cohortstudie naar de spiegels van miR-486-3p in perifeer bloed bij patiënten met een acuut cerebraal infarct en obstructief slaapapneusyndroom
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Acuut cerebraal infarct (ACI) gecompliceerd door obstructief slaapapneu syndroom (OSAS) brengt een hoog risico op recidiverend beroerte en overlijden met zich mee, maar effectieve biomarkers voor deze comorbide aandoening blijven beperkt. In deze retrospectieve cohortstudie werden tussen november 2020 en december 2023 270 patiënten met ACI geïncludeerd, die werden ingedeeld in de ACI-groep (n = 100, apnea-hypopnea index [AHI] < 5) en de ACI-met-OSAS-groep (n = 170, AHI ≥ 5), waarbij de laatste verder werd gestratificeerd in subgroepen met mild (5 ≤ AHI < 15, n = 60), matig (15 ≤ AHI < 30, n = 75) en ernstig (AHI ≥ 30, n = 35) OSAS. De expressie van serum miR-486-3p werd gemeten via RT-qPCR, en ontstekingsmarkers, waaronder tumornecrosefactor-α (TNF-α), C-reactief proteïne (CRP) en hypoxie-induceerbare factor-1α (HIF-1α), werden gekwantificeerd via ELISA. De diagnostische waarde van miR-486-3p werd geëvalueerd met behulp van receiver operating characteristic curve-analyse, en de prognostische significantie werd beoordeeld via Kaplan-Meier-overlevingsanalyse en Cox-regressiemodellen. miR-486-3p was merkbaar lager in de comorbide groep en vertoonde een sterke diagnostische capaciteit (AUC = 0,927). Opvallend was dat er een duidelijke dosisafhankelijke trend werd waargenomen over de OSAS-ernstsubgroepen, waarbij miR-486-3p progressief afnam en TNF-α en CRP stapsgewijs toenamen van mild naar ernstig OSAS. Spearman-correlatieanalyses toonden aan dat miR-486-3p negatief correleerde met AHI, de NIHSS-score, TNF-α en CRP. Bij een follow-up van 1 jaar hadden patiënten met een lage miR-486-3p-expressie significant slechtere functionele uitkomsten vergeleken met patiënten met een hoge expressie. Multivariate Cox-regressie bevestigde miR-486-3p als een onafhankelijke beschermende factor voor de prognose na 1 jaar. Deze bevindingen suggereren dat miR-486-3p kan dienen als een nieuwe diagnostische en prognostische biomarker voor ACI-patiënten met OSAS, potentieel via de regulerende rol in systemische inflammatie, en rechtvaardigen verdere validatie in grotere prospectieve cohorten.
Inleiding
Het obstructieve slaapapneu-syndroom (OSAS) is een veelvoorkomende aandoening die wordt gekenmerkt door herhaalde onderbrekingen van de ademhaling tijdens de slaap1. OSAS wordt vaak geassocieerd met comorbiditeiten zoals metabole, cardiovasculaire, renale, pulmonale en neuropsychiatrische stoornissen2. Naast de algemene associaties met cardiovasculaire en metabole ziekten vormt OSAS een specifieke en ernstige bedreiging bij een acuut ischemisch infarct, waarbij het tot 70% van de gevallen compliceert en de risico's op neurologische achteruitgang, mortaliteit en recidiverende beroertes verhoogt3,4,5. Een acuut cerebraal infarct (ACI) is de meest prevalente vorm van een beroerte. Hoewel er de afgelopen jaren aanzienlijke vooruitgang is geboekt in de behandeling van ACI, lijden de meeste patiënten nog steeds aan ernstige beperkingen of overlijden zij zelfs6. De synergetische interactie tussen ACI in combinatie met OSAS verergert de ischemische schade en systemische inflammatie, waardoor de risico's op recidieven van beroertes, invaliditeit en mortaliteit aanzienlijk toenemen. Bijgevolg is het identificeren van betrouwbare biomarkers voor de vroege diagnose en het management van deze risicovolle comorbiditeit van cruciaal belang.
Micro-RNA's (miRNA's) hebben de afgelopen jaren veel potentie getoond als biomarkers. Hiervan is miR-486-3p van groot belang bij neurovasculaire aandoeningen. Voorgaand onderzoek heeft aangetoond dat de expressie van miR-486-3p wordt geremd bij obstructief slaapapneu (OSA)7. Daarnaast kan een behandeling met rabiesvirus-glycoproteïne-miR-486-3p-exosomen neurobehaviorale stoornissen, hersenoedeem, beschadiging van de bloed-hersenbarrière en neurodegeneratie verlichten8, wat erop wijst dat miR-486-3p een rol speelt bij hersenletsel. Na een ACI worden microglia in het beschadigde hersenweefsel geactiveerd, wat de secretie van inflammatoire cytokinen bevordert5. OSAS veroorzaakt symptomen van intermitterende hypoxie, wat leidt tot activatie van het sympathische zenuwstelsel en oxidatieve stress, waardoor een systemische inflammatoire cascade-reactie wordt getriggerd9. miR-486-3p is nauw verbonden met inflammatie10. Deze bewijslast suggereert dat miR-486-3p kan dienen als een moleculaire schakel tussen OSAS-gerelateerde hypoxie, systemische inflammatie en herstel na een beroerte.
Het expressieprofiel, de diagnostische nauwkeurigheid en de prognostische betekenis bij ACI-patiënten met OSAS zijn echter nog niet systematisch onderzocht, en het blijft onbekend of er een dosisafhankelijke correlatie bestaat met de ernst van OSAS of met inflammatoire mediatoren. Om deze leemtes op te vullen, evalueerde deze studie de diagnostische waarde van miR-486-3p voor OSAS bij ACI-patiënten, onderzocht de dosisafhankelijke relatie met de ernst van OSAS en inflammatoire markers (TNF-α, CRP en HIF-1α), en beoordeelde de prognostische bruikbaarheid voor functionele uitkomsten na 1 jaar. Naar ons weten is dit de eerste uitgebreide studie die aantoont dat miR-486-3p kan dienen als een nieuwe diagnostische en prognostische biomarker voor de comorbiditeit ACI-OSAS, mogelijk via de regulatie van systemische inflammatie.
Protocol
Deze studie is goedgekeurd door de ethische commissie van het Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University (goedkeuringsnummer: XYFY2024-KL238-01) en was vrijgesteld van de vereiste om aanvullende geïnformeerde toestemming van patiënten te verkrijgen. De gebruikte reagentia en apparatuur staan vermeld in de Tabel met materialen.
Patiënten en specimens
Deze studie was een retrospectieve cohortstudie. Van november 2020 tot december 2023 werden in totaal 270 patiënten die een ACI ondergingen in het Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University opeenvolgend gerekruteerd. Het proces van patiëntselectie is samengevat in Aanvullende figuur 1. In aanmerking komende patiënten werden geïdentificeerd via dagelijkse screening van alle nieuwe opnames op de beroeneenheid. Het begin van de symptomen binnen 72 u vóór opname werd geverifieerd door het inzien van de spoedmedische dossiers en bevestigd door een gecertificeerde neuroloog via de patiëntanamnese en interviews met familieleden. De steekproefomvang werd berekend op basis van het vermogen om een significant verschil in miR-486-3p-niveaus tussen groepen aan te tonen. Uitgaande van een effectgrootte van 0,5, een tweezijdige α van 0,05 en een power (1-β) van 0,80, waren minimaal 64 patiënten per groep vereist. De uiteindelijke groepsgroottes weerspiegelen de feitelijke rekrutering en de hogere prevalentie van OSAS binnen de beroenpopulatie, en geen vooraf bepaalde toewijzing. Patiënten met ACI in combinatie met OSAS werden gedurende 1 jaar gevolgd op hun prognose.
De inclusiecriteria waren: (1) Acut ischemisch stroke met symptoomonset binnen 72 u vóór opname, bevestigd door magnetic resonance imaging. (2) Het vermogen om de vragenlijsten van het onderzoek en de neurologische beoordelingen te begrijpen en te voltooien. (3) De ernst van de ACI werd bij opname beoordeeld met de National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS). Wanneer de NIHSS-score <5 is, wordt dit geclassificeerd als milde ACI; wanneer de NIHSS-score tussen 5 en 20 ligt, wordt dit beschouwd als matige ACI. Belangrijke exclusiecriteria omvatten een voorgeschiedenis van maligne tumoren, reeds bestaande ernstige fysieke beperking of psychiatrische stoornissen, ernstige cardiale, pulmonale of renale insufficiëntie, en grote chirurgische ingrepen of trauma's in de voorafgaande 3 maanden, actieve infecties of auto-immuunziekten; een eerdere beroerte binnen 6 maanden; immunosuppressieve therapie; en een eerdere diagnose of behandeling van OSAS (inclusief continuous positive airway pressure therapie).
Voor MRI-bevestiging ondergingen alle patiënten een standaard MRI van de hersenen op een 3,0-T systeem, inclusief de volgende sequenties: T1-gewogen, T2-gewogen, fluid-attenuated inversion recovery (FLAIR), diffusie-gewogen beeldvorming (DWI) en apparent diffusion coefficient (ADC) mapping. Acuut infarct werd gedefinieerd als de aanwezigheid van een hyperintense signaal op DWI met een overeenkomstig hypointense signaal op ADC. Alle MRI-scans werden geïnterpreteerd door twee ervaren neuroradiologen die blind waren voor de klinische gegevens, waarbij discrepanties via consensus werden opgelost. De NIHSS-score werd bij opname bepaald door gecertificeerde neurologen voorafgaand aan elke trombolytische of endovasculaire behandeling.
Nuchtere veneuze bloedmonsters werden afgenomen tussen 24 u en 48 u na het begin van het beroerte, na een nachtvasten van ten minste 8 u. Bloedafnames vonden plaats tussen 6:00 uur en 8:00 uur om circadiane variaties te minimaliseren. In totaal werd 5 mL perifeer veneus bloed verzameld in vacuümbuizen gecoat met EDTA. Binnen 2 u na afname werden de bloedmonsters gecentrifugeerd bij 1.500 × g gedurende 15 min bij 4 °C met een gekoelde centrifuge. Het serumsupernatans werd zorgvuldig verdeeld in RNase-vrije microcentrifugebuisjes van 1,5 mL en onmiddellijk bewaard bij −80 °C tot de RNA-extractie. Herhaalde vries-dooi-cycli werden strikt vermeden; alle aliquots werden voorafgaand aan de analyse onderworpen aan maximaal één vries-dooi-cyclus.
Groepering van patiënten
Deelnemers werden gegroepeerd op basis van hun AHI-scores uit polysomnografie. Alle registraties werden uitgevoerd in het slaaplaboratorium van het ziekenhuis tussen 22:00 en 06:00 uur gedurende een minimale duur van 7 h. De gemonitorde fysiologische kanalen omvatten: elektro-encefalografie (EEG; zes kanalen), elektro-oculografie (EOG; twee kanalen), elektro-myografie (EMG; kin en bilaterale musculus tibialis anterior), elektro-cardiografie (ECG; enkele afleiding), nasale luchtstroom (thermistor en druktransducer), thoracale en abdominale ademhalingsinspanning (respiratoire inductieplethysmografie) en pulsoximetrie (SpO2). De slaapstudietechnicus berekende de AHI. De score van slaapstadia en respiratoire gebeurtenissen werd handmatig uitgevoerd door een gecertificeerde slaaptechnicus volgens de scorehandleiding uit 2012 van de American Academy of Sleep Medicine (AASM), met gebruik van de Somnolyzer 24×7 software. Volgens de algemeen aanvaarde diagnostische criteria van de American Academy of Sleep Medicine is een AHI van 5 of meer gebeurtenissen per uur de standaarddrempel voor het diagnosticeren van OSA. Daarom werden deelnemers met een AHI < 5 geclassificeerd als de ACI-groep (n = 100), terwijl deelnemers met een AHI ≥ 5 werden geclassificeerd als de ACI gecombineerde OSAS-groep (n = 170). Onder degenen met een AHI ≥ 5 (ACI gecombineerde OSAS-groep, n = 170) werden patiënten verder gestratificeerd in drie ernst-subgroepen op basis van vastgestelde criteria: mild OSAS (5 ≤ AHI < 15, n = 60), matig OSAS (15 ≤ AHI < 30, n = 75) en ernstig OSAS (AHI ≥ 30, n = 35). Deze stratificatie maakte evaluatie mogelijk van de dosisafhankelijke relatie tussen hypoxische belasting, miR‑486‑3p expressie en inflammatoire markers. Patiënten met een eerdere OSAS-behandeling (bijv. CPAP) werden niet in de studie opgenomen om confounding van de baseline AHI-meting te voorkomen.
Beoordeling van de prognose
Het tijdstip van 1 jaar laat acute effecten wegebben en de cumulatieve hypoxische belasting van OSAS manifesteren, wat een robuust venster biedt om de prognostische impact ervan te beoordelen. De klinische prognose van patiënten met ACI in combinatie met OSAS werd geëvalueerd aan de hand van de modified Rankin Scale (mRS) na het begin van de ziekte. Alle mRS-beoordelingen werden uitgevoerd door gecertificeerde neurologen die voorafgaand aan de studie een gestandaardiseerde training hadden gevolgd, met gebruik van het gestructureerde mRS-interviewformulier. De inter-beoordelaarsbetrouwbaarheid werd getoetst met een kappacoëfficiënt >0,85. De follow-upbeoordeling vond plaats tijdens een geplande polikliniekbezoek. Voor patiënten die niet persoonlijk aanwezig konden zijn, werd een gestructureerd telefonisch interview afgenomen door een getrainde researchverpleegkundige aan de hand van een gestandaardiseerd script. Alle beoordelaars waren geblindiseerd voor de miR-486-3p-spiegels en de OSAS-status van de patiënten. Om consistentie tussen de poliklinische en telefonische beoordelingen te waarborgen, werd in beide formaten dezelfde gestructureerde vragenlijst gebruikt en voltooiden alle beoordelaars een kalibratie-oefening voorafgaand aan de studie. Patiënten met scores van 0–2 werden in de groep met een goede prognose geplaatst, en patiënten met scores van 3–6 in de groep met een slechte prognose. Geen enkele patiënt ging verloren tijdens de follow-up. De SAQLI, ESS, TNF-α en HIF-1α werden geëvalueerd als prognostische variabelen in plaats van te worden gebruikt voor het definiëren van de prognosegroepen. De NIHSS, SAQLI en ESS werden afgenomen door getraind onderzoekspersoneel. De SAQLI en ESS werden afgenomen als door de interviewer toegediende vragenlijsten in een rustige kamer.
Score-index
NIHSS is een kwantitatieve schaal voor beroertes11, waarbij hogere scores duiden op een grotere ernst van ACI. SAQLI is een vragenlijst over de kwaliteit van leven bij OSA op een schaal van 1–7, waarbij hogere scores duiden op een slechtere kwaliteit van leven, met betrekking tot dagelijkse activiteiten, sociale interacties, emotionele toestanden, symptomen en behandelingsgerelateerde symptomen12. ESS wordt gebruikt om de door patiënten gerapporteerde slaperigheid overdag te onderzoeken, met een scorebereik van 0 tot 24, waarbij een score > 10 duidt op slaperigheid overdag13.
RNA-extractie en reverse transcriptie
Totaal RNA werd geëxtraheerd uit 200 µL serum met behulp van TRIzol-reagens. Kort samengevat werden serummonsters gemengd met 800 µL TRIzol, 5 min geïncubeerd bij kamertemperatuur en 15 min gecentrifugeerd bij 12,000 × g bij 4 °C. Er werd chloroform (200 µL) toegevoegd, waarna het mengsel 15 s krachtig werd geschud, 3 min geïncubeerd en 15 min gecentrifugeerd bij 12,000 × g bij 4 °C. De waterige fase werd overgebracht naar een nieuw buisje en het RNA werd geprecipiteerd met 500 µL isopropanol, 1 u geïncubeerd bij −20 °C en 10 min gecentrifugeerd bij 12,000 × g bij 4 °C. De RNA-pellet werd gewassen met 75% ethanol, aan de lucht gedroogd en opgelost in 20 µL RNase-vrij water. De RNA-concentratie en -zuiverheid werden bepaald met een microvolume-spectrofotometer, waarbij een A260/A280-ratio tussen 1,8 en 2,0 werd geaccepteerd voor verdere analyse. De RNA-integriteit werd geverifieerd via agarosegelelektroforese.
Omgekeerde transcriptie werd uitgevoerd met 500 ng totaal RNA met de Reverse Transcription Kit in een totaal reactievolume van 20 µL, waarbij random hexamer primers werden gebruikt volgens het protocol van de fabrikant. De omgekeerde transcriptiereactie werd uitgevoerd bij 25 °C gedurende 10 min, 42 °C gedurende 60 min en 70 °C gedurende 5 min. Het resulterende cDNA werd bewaard bij −20 °C tot gebruik.
RT-qPCR
De expressie van miR-486-3p werd gedetecteerd met een SYBR Green-gebaseerde real-time PCR-kit voor microRNA-kwantificering op een real-time kwantitatief PCR (qPCR)-systeem. Het reactiemengsel bevatte 10 µL 2× SYBR Green Master Mix, 2 µL cDNA-template (verdund 1:5), 1 µL van elke primer (10 µM) en nucleasevrij water tot een eindvolume van 20 µL. De primersequenties zijn als volgt (van 5'-3'): miR-486-3p-forward: TCGGCAGCGGGGCAGCUCAGU, reverse: CTCAACTGGTGTCGTGGA; en U6-forward: CTCGCTTCGGCAGCACA, reverse: AACGCTTCACGAATTTGCGT. De qPCR-cycluscondities waren: 95 °C gedurende 2 min, gevolgd door 40 cycli van 95 °C gedurende 30 s, 60 °C gedurende 30 s en 72 °C gedurende 60 s. Elk monster werd in triplicaat uitgevoerd, en in elke run werd een controle zonder template meegenomen. De specificiteit van de amplificatie werd bevestigd via smeltcurve-analyse van 60 °C tot 95 °C. De drempelcyclus (Ct) werd automatisch bepaald door de QuantStudio 6 Pro-software (v1.5) met de standaard drempelinstelling. Het miR-486-3p-niveau werd berekend met de 2-ΔΔCT-methode en genormaliseerd ten opzichte van U6. U6 werd gevalideerd als een stabiel referentiegen in onze serummonsters met behulp van het NormFinder-algoritme om consistentie tussen de groepen te waarborgen. De inter-assay en intra-assay variatiecoëfficiënten waren <5%.
ELISA
De serumconcentraties van C-reactief proteïne (CRP), TNF-α en HIF-1α werden bepaald met behulp van de ELISA-kit. De experimentele procedures werden uitgevoerd volgens de instructies van de fabrikant. Kort samengevat werden serummonsters op ijs ontdooid en 1:2 verdund met de meegeleverde verdunningsbuffer. Monsters en standaarden werden toegevoegd aan vooraf gecoate 96-well platen (100 µL/well) en gedurende 2 u bij 37°C geïncubeerd. Na vier keer wassen met 300 µL wasbuffer werd 100 µL biotin-geconjugeerd detectie-antilichaam toegevoegd en gedurende 1 u bij 37°C geïncubeerd. Na een volgende wasstap werd 100 µL horseradishperoxidase-geconjugeerd streptavidine toegevoegd en gedurende 30 min bij 37°C in het donker geïncubeerd. Het chromogene substraat (tetramethylbenzidine, 100 µL) werd toegevoegd en gedurende 15 min bij 37°C beschermd tegen licht geïncubeerd. De reactie werd gestopt met 50 µL stopoplossing en de absorbentie werd gemeten bij 450 nm met een microplate-reader. De concentraties werden berekend aan de hand van standaardcurves die waren gegenereerd met bekende concentraties van recombinante eiwitten. Elk monster werd in dubbeltoestage gemeten en de gemiddelde waarde werd gebruikt voor de analyse. Kwaliteitscontrolemonsters van de fabrikant werden in elke plaat opgenomen; resultaten werden alleen geaccepteerd wanneer de QC-waarden binnen het door de fabrikant gespecificeerde bereik vielen.
Kwaliteitscontrole en reproduceerbaarheid
Alle laboratoriumassays werden uitgevoerd in overeenstemming met de MIQE-richtlijnen (Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments) voor RT-qPCR en de toepasselijke rapportagestandaarden voor ELISA. Belangrijke instrumenten werden gekalibreerd volgens de schema's van de fabrikanten. Negatieve en positieve controlemonsters werden opgenomen in elke batch RT-qPCR- en ELISA-runs om de variabiliteit tussen platen te bewaken. Alle gegevens werden geregistreerd en beheerd met Microsoft Excel, en de corresponderende auteur zal gedetailleerde experimentele protocollen en ruwe gegevens verstrekken op redelijk verzoek.
Statistische analyse
Gegevens werden geanalyseerd met SPSS 23.0 en statistische en grafische software. De normale verdeling werd beoordeeld met de Shapiro–Wilk-toets. Continue variabelen worden gepresenteerd als gemiddelde ± SD of mediaan (IQR), en werden vergeleken met de t‑toets of de Mann–Whitney U-toets, afhankelijk van de situatie. Categorische variabelen werden vergeleken met de χ2-toets. Correlaties werden onderzocht met Pearson- of Spearman-analyses op basis van de gegevensverdeling. De voorspellende waarde werd bepaald met de ROC-curve en geverifieerd met 5-voudige kruisvalidatie. De optimale afkapwaarde voor miR-486-3p werd bepaald door de Youden-index te maximaliseren. Pearson- en Spearman-correlatieanalyses werden gebruikt om correlaties te beoordelen. Voor de prognostische analyse werden patiënten gestratificeerd op basis van de mediaan van de miR‑486‑3p-expressie; Kaplan–Meier-curves met de log‑rank-toets werden gebruikt om overlevingsuitkomsten tussen groepen te vergelijken. Variabelen met P < 0,1 in de univariate Cox-regressie werden ingevoerd in het multivariate Cox-model. P < 0,05 werd beschouwd als statistisch significant.
Resultaten
Baselinekenmerken in de ACI-groep en de gecombineerde ACI-OSAS-groep
Zoals weergegeven in Tabel 1, bestond de ACI-groep uit 68 mannen en 32 vrouwen, met een gemiddelde leeftijd van 62,84 ± 12,65 jaar, en de gecombineerde ACI-OSAS-groep omvatte 16 mannen en 54 vrouwen, met een gemiddelde leeftijd van 61,31 ± 11,25 jaar. De gecombineerde ACI-OSAS-groep had significant hogere AHI, NIHSS-scores en CRP-waarden. De twee groepen vertoonden echter vergelijkbare distributies van leeftijd, geslacht, BMI, hypertensie, DM, cardiopathie, dyslipidemie, roken, drinken, trombolyse en TOAST.
Veranderingen in miR-486-3p en ontstekingsmarkers over OSAS-ernstsubgroepen
Om de dosisafhankelijke relatie tussen de ernst van OSAS en moleculaire veranderingen te evalueren, hebben we de 170 patiënten met ACI en OSAS op basis van AHI-criteria gestratificeerd in mild (5 ≤ AHI < 15, n = 60), matig (15 ≤ AHI < 30, n = 75) en ernstig (AHI ≥ 30, n = 35) subgroepen. Zoals getoond in Figuur 1A–C, werd een duidelijk gradueel patroon waargenomen over de vier groepen (ACI, mild, matig en ernstig OSAS). Specifiek nam de expressie van miR-486-3p progressief af van de ACI-groep naar de subgroep met ernstige OSAS (Figuur 1A, P < 0,01 vs. ACI-groep). In tegenstelling hiermee namen de serumwaarden van TNF-α en CRP stapsgewijs toe met de ernst van OSAS (Figuur 1B,C, P < 0,01 vs. ACI-groep). Deze bevindingen wijzen erop dat de hypoxische belasting veroorzaakt door OSAS geassocieerd is met een graduele onderdrukking van miR-486-3p en een parallelle toename van systemische ontsteking.
Diagnostische waarde van miR-486-3p voor OSAS bij ACI-patiënten
miR-486-3p kan een significante diagnostische waarde hebben bij ACI in combinatie met OSAS, met een AUC van 0,927 (optimale afkapwaarde was 0,845), en een sensitiviteit en specificiteit van respectievelijk 92,94% en 79,0% (Figuur 1D). Om de robuustheid van het diagnostische model te evalueren en mogelijke overfitting uit te sluiten, werd een 5-voudige kruisvalidatie uitgevoerd voor de ROC-analyse van miR-486-3p. Zoals getoond in Aanvullende Tabel 1, was de gemiddelde AUC over de vijf folds 0,928 (variërend van 0,847 tot 0,969), wat zeer consistent was met de schijnbare AUC van 0,927 uit de oorspronkelijke analyse. De gemiddelde sensitiviteit en specificiteit waren respectievelijk 8,83% en 87,0%.
Correlaties van miR-486-3p met de ernst van de beroerte en ontstekingsmarkers bij ACI gecombineerd met OSAS
In de ACI-groep met OSAS onthulden Spearman-correlatieanalyses dat de expressie van miR-486-3p significant negatief correleerde met de NIHSS-score (Figuur 2A), TNF-α (Figuur 2B) en CRP (Figuur 2C).
Prognostische indicatoren in de groepen met een goede en een slechte prognose
Patiënten met ACI in combinatie met OSAS werden op basis van mRS-scores ingedeeld in een groep met een goede prognose en een groep met een slechte prognose. Zoals aangetoond in Tabel 2, waren de mRS-score, SAQLI-score, ESS-score, HIF-1α en TNF-α verhoogd in de groep met een slechte prognose.
Prognostische waarde van miR-486-3p voor 1-jaarsuitkomsten bij patiënten met ACI in combinatie met OSAS
De resultaten van de Kaplan-Meier-curve gaven aan dat hoge spiegels van miR-486-3p geassocieerd waren met een goede prognose, terwijl lage spiegels geassocieerd waren met een slechte prognose (Figuur 2D). In de univariate analyse waren de expressie van miR-486-3p en de NIHSS-score geassocieerd met de klinische uitkomsten. Andere variabelen, waaronder de SAQLI-score (P = 0,078), HIF-1α (P = 0,086), TNF-α (P = 0,072), leeftijd (P = 0,082), DM (P = 0,067), cardiopathie (P = 0,065) en AHI (P = 0,069), vertoonden marginaal significante associaties met de prognose en werden daarom ook meegenomen in de multivariate Cox-analyse. In de multivariate analyse bleef miR-486-3p een onafhankelijke beschermende factor (HR = 0,437, 95% BI: 0,278–0,684, P < 0,001), terwijl cardiopathie (HR = 1,82, 95% BI: 1,070–3,104, P = 0,027) en de NIHSS-score (HR = 1,597, 95% BI: 1,08–2,529, P = 0,046) naar voren kwamen als onafhankelijke risicofactoren voor slechte klinische uitkomsten (Tabel 3).
Samenvatting van de bevindingen
Samenvattend heeft de huidige studie aangetoond dat miR‑486‑3p significant is verlaagd bij ACI-patiënten met comorbide OSAS en een hoge diagnostische nauwkeurigheid vertoont voor het identificeren van OSAS in deze populatie. Er werd een duidelijke dosisafhankelijke relatie waargenomen over de subgroepen van OSAS-ernst, waarbij miR‑486‑3p progressief afnam en ontstekingsmarkers (TNF‑α en CRP) stapsgewijs toenamen van milde naar ernstige OSAS. Correlatieanalyses bevestigden verder dat miR‑486‑3p negatief geassocieerd was met zowel de ernst van de beroerte (NIHSS) als systemische ontsteking. Belangrijk is dat een lage expressie van miR‑486‑3p voorspellend was voor slechte functionele uitkomsten na 1 jaar, en multivariate Cox-regressie identificeerde miR‑486‑3p als een onafhankelijke beschermende factor na correctie voor potentiële confounders, waaronder NIHSS en AHI. Gezamenlijk ondersteunen deze bevindingen de hypothese dat miR‑486‑3p kan dienen als een nieuwe diagnostische en prognostische biomarker voor ACI-OSAS comorbiditeit, mogelijk via zijn regulerende rol bij systemische ontsteking.
DATABESCHIKBAARHEID:
De ruwe gegevens ter ondersteuning van de bevindingen van deze studie zijn beschikbaar in Aanvullend Bestand 1, waarin de basiskenmerken, miR‑486‑3p expressieniveaus, ELISA-metingen en 1‑jaar mRS follow-up gegevens voor alle geïnschreven patiënten zijn opgenomen.
Figuur 1Veranderingen in miR-486-3p en inflammatoire markers over subgroepen van ACI gecombineerd met OSAS-ernst en de diagnostische prestaties van miR-486-3p voor OSAS. (A) Relatieve expressie van miR-486-3p in de ACI-groep en de ACI-gecombineerde OSAS-subgroepen. (B) Gecombineerde serum TNF-α-concentratie. (C) Serum CRP-concentratie in de ACI-groep (AHI < 5, n=10) en mild (5 ≤ AHI < 15, n=60), matig (15 ≤ AHI < 30, n=75), en ernstige (AHI ≥ 30, n=35) OSAS-subgroepen. (D) ROC-curve van miR-486-3p voor het onderscheiden van ACI-patiënten met OSAS van patiënten zonder OSAS. ***P < 0.001. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2Correlaties van miR-486-3p met de ernst van de beroerte en ontstekingsmarkers, en de prognostische waarde voor uitkomsten na één jaar. (A–C) Spearman-correlatieanalyses van de expressie van miR-486-3p met de NIHSS-score, TNF-α en CRP. (D) Kaplan-Meier-overlevingcurven voor de kans op een goede prognose bij een follow-up van 1 jaar, gestratificeerd naar de mediane miR-486-3p-expressie. ***P < 0.001. Klik hier voor een grotere versie van deze figuur.
| Variabele | ACI (n=100) | ACI en OSAS (n=170) | P-waarde | |
| Leeftijd (jaar) | 62.84 ± 12.65 | 61.31 ± 1.25 | 0.303 | |
| Geslacht (man/vrouw) | 68/32 | 116/54 | 0.968 | |
| BMI (kg/m2 | 24.74 ± 3.57 | 25.02 ± 3.47 | 0.531 | |
| Hypertensie, n (%) | 74 (74%) | 134 (78.82%) | 0.365 | |
| DM, n (%) | 2 (22%) | 43 (25.29%) | 0.543 | |
| Cardiopathie, n (%) | 13 (13%) | 25 (14.71%) | 0.698 | |
| AHI (keer/u) | 2.07 ± 1.42 | 19.95 ± 9.19 | < 0.01*** | |
| NIHSS-score | 1.70 ± 1.18 | 4.05 ± 1.73 | < 0.01*** | |
| CRP (ng/mL) | 2.03 ± 0.17 | 3.01 ± 0.27 | < 0.01*** | |
| ACI-graad (mild/matig) | 9/1 | 69/101 | < 0.01*** | |
| Dyslipidemie (ja/nee) | 52/48 | 96/74 | 0.478 | |
| Roken (ja/nee) | 48/52 | 91/79 | 0.382 | |
| Drinken (ja/nee) | 40/60 | 87/83 | 0.076 | |
| Trombolyse (ja/nee) | 38/62 | 81/89 | 0.124 | |
| TOAST | 0.487 | |||
| Cardio-embolie (n) | 2 | 36 | ||
| Occlusie van kleine vaten (n) | 18 | 28 | ||
| Atherosclerose van grote arteriën (n) | 13 | 25 | ||
| Beroerte van onbepaalde etiologie (n) | 5 | 19 | ||
| Beroerte van andere bepaalde etiologie (n) | 42 | 62 | ||
Tabel 1: Baselinekenmerken van ACI-patiënten met en zonder OSAS. Gegevens worden weergegeven als gemiddelde ± SD voor continue variabelen of n (%) voor categorische variabelen. P -waarden zijn berekend met de onafhankelijke t-test voor continue variabelen en de chi-kwadraattoets voor categorische variabelen. ACI, acuut cerebraal infarct; OSAS, obstructief slaapapneu-syndroom; BMI, body mass index; DM, diabetes mellitus; AHI, apnea‑hypopnea index; NIHSS, National Institutes of Health Stroke Scale; CRP, C-reactief proteïne; TOAST, Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment.
| Variabele | Goede prognose (n=97) | Slechte prognose (n=73) | p-waarde |
| mRS-score | 0.88 ± 0.84 | 4.55 ± 1.08 | < 0.001*** |
| SAQIL-score | 2.59 ± 1.17 | 3.12 ± 1.48 | 0.009** |
| ESS-score | 8.69 ± 2.76 | 10.05 ± 2.79 | 0.002** |
| HIF-1α (pg/mL) | 1159.94 ± 277.86 | 1283.88 ± 445.15 | 0.027* |
| TNF-α (pg/mL) | 121.4 ± 12.87 | 128.4 ± 11.67 | < 0.001*** |
Tabel 2: Prognostische indicatoren in de groepen met een goede en slechte prognose van ACI-patiënten met OSAS. Patiënten werden ingedeeld in groepen met een goede prognose (mRS 0–2, n = 97) en een slechte prognose (mRS 3–6, n = 73) op basis van mRS-scores na 1 jaar. Gegevens worden weergegeven als gemiddelde ± SD. P-waarden werden berekend met de onafhankelijke t-test. mRS, modified Rankin Scale; SAQLI, Calgary Sleep Apnea Quality of Life Index; ESS, Epworth Sleepiness Scale; HIF‑1α, hypoxia‑inducible factor‑1α; TNF‑α, tumor necrose factor‑α.
| Variabele | HR | Univariate 95% BI | P | HR | Multivariabel 95%-BI | P | ||
| Verlaag | Bovenkant | Verlaag | Bovenste | |||||
| miR-486-3p | 0.442 | 0.228 | 0.679 | <0.001 | 0.437 | 0.278 | 0.684 | <0.001 |
| SAQLI-score | 0.628 | 0.375 | 1.053 | 0.078 | 0.713 | 0.416 | 1.22 | 0.217 |
| ESS-score | 0.922 | 0.595 | 1.429 | 0.718 | ||||
| HIF-1α | 0.694 | 0.457 | 1.053 | 0.086 | 0.802 | 0.523 | 1.229 | 0.311 |
| TNF-α | 1.469 | 0.966 | 2.233 | 0.072 | 1.494 | 0.978 | 2.284 | 0.063 |
| Leeftijd | 1.445 | 0.955 | 2.188 | 0.082 | 1.29 | 0.845 | 1.97 | 0.238 |
| Geslacht | 0.829 | 0.534 | 1.285 | 0.401 | ||||
| BMI | 1.196 | 0.786 | 1.821 | 0.402 | ||||
| Hypertensie | 0.754 | 0.465 | 1.222 | 0.252 | ||||
| DM | 1.512 | 0.972 | 2.351 | 0.067 | 1.246 | 0.79 | 1.965 | 0.343 |
| Cardiopathie | 1.611 | 0.971 | 2.673 | 0.065 | 1.822 | 1.07 | 3.104 | 0.027 |
| AHI | 1.468 | 0.97 | 2.222 | 0.069 | 1.125 | 0.734 | 1.725 | 0.588 |
| NIHSS-score | 1.588 | 1.027 | 2.455 | 0.037 | 1.597 | 1.008 | 2.529 | 0.046 |
| Dyslipidemie | 1.178 | 0.776 | 1.788 | 0.442 | ||||
| Roken | 0.895 | 0.593 | 1.35 | 0.596 | ||||
| Drinken | 1.116 | 0.738 | 1.689 | 0.603 | ||||
| Trombolyse | 1.259 | 0.834 | 1.902 | 0.272 | ||||
Tabel 3: Univariabele en multivariabele Cox-regressieanalyses voor een slechte prognose na 1 jaar bij ACI-patiënten met OSAS. HR, hazard ratio; CI, betrouwbaarheidsinterval; SAQLI, Calgary Sleep Apnea Quality of Life Index; ESS, Epworth Sleepiness Scale; HIF‑1α, hypoxia‑inducible factor‑1α; TNF‑α, tumornecrosefactor‑α; BMI, body mass index; DM, diabetes mellitus; AHI, apneu-hypopneu-index; NIHSS, National Institutes of Health Stroke Scale. Variabelen met P < 0,1 in de univariabele analyse werden opgenomen in het multivariabele Cox-model.
Aanvullende Figuur 1: Stroomschema van patiëntenselectie en stratificatie van subgroepen.Klik hier om dit bestand te downloaden.
Aanvullende Tabel 1: Vijfvoudige kruisvalidatie voor interne validatie van de diagnostische waarde van miR‑486‑3p. AUC, oppervlakte onder de curve; CI, betrouwbaarheidsinterval. De gemiddelde AUC, sensitiviteit en specificiteit werden berekend als het rekenkundig gemiddelde over de vijf folds.Klik hier om dit bestand te downloaden.
Aanvullend bestand 1: De ruwe gegevens ter ondersteuning van de bevindingen van deze studie.Klik hier om dit bestand te downloaden.
Discussie
Patiënten met OSAS ondervinden herhaaldelijke collaps en obstructie van de luchtwegen, wat leidt tot intermitterende hypoxie (IH) en overmatige slaperigheid overdag (EDS), hetgeen neuronale schade kan veroorzaken14OSAS komt zeer veelvuldig voor na een ACI, waarbij ongeveer 72% van de patiënten wordt getroffen, en verergert het cardiovasculaire risico aanzienlijk.15ACI vormt een spectrum van neurologische uitval als gevolg van gelokaliseerde cerebrale ischemie en hypoxie secundair aan inadequate perfusie16De intermitterende hypoxie die centraal staat in de pathologie van OSAS synergeert waarschijnlijk met de ischemische insulten van ACI, waardoor hersenbeschadiging wordt versterkt. Desondanks is onderzoek dat zich specifiek richt op deze risicovolle comorbide toestand schaars. Toenemend bewijs wijst erop dat miRNA's een cruciale rol spelen in de pathogenese van zowel OSAS als ACI.17,18Er is eerder opgemerkt dat miR-486-3p geassocieerd kan zijn met OSAS en ACI. Daarom hebben wij miR-486-3p onderzocht als een potentiële moleculaire schakel tussen OSAS en ACI. Opvallend is dat deze cohort is samengesteld van november 2020 tot december 2023, een periode die de COVID-19-pandemie omvat. Opgetelde bewijzen suggereren dat aanhoudende systemische ontsteking, veroorzaakt door een SARS-CoV-2-infectie, neuronaal letsel kan verergeren en de progressie van neurodegeneratieve laesies kan bevorderen.19,20De huidige studie richt zich echter niet op SARS-CoV-2/COVID-19-infectie, en onze onderzoeksdoelstellingen en het ontwerp zijn niet gerelateerd aan COVID-19. Er werd een significant lager serumgehalte aan miR-486-3p gevonden bij ACI in combinatie met OSAS, wat een eerste klinisch bewijs levert voor de rol hiervan bij deze comorbiditeit en de noodzaak voor verder onderzoek benadrukt.
De NIHSS-score kan de ernst van een beroerte beoordelen11. De AHI bij polysomnografie wordt gewoonlijk gebruikt om OSAS te diagnosticeren, waarbij een hogere AHI-score wijst op een ernstiger OSAS21. Gezien de klinische en logistieke uitdagingen van polysomnografie is het identificeren van toegankelijke biomarkers voor obstructieve slaapapneu bij patiënten met een beroerte cruciaal22. De huidige bevindingen gaven aan dat miR-486-3p een aanzienlijk diagnostisch potentieel heeft voor ACI in combinatie met OSAS, aangezien de spiegels hiervan omgekeerd correleren met zowel de AHI- als de NIHSS-scores, wat de ernst van de aandoening weerspiegelt.
Methodologisch gezien demonstreert deze studie de haalbaarheid van het integreren van moleculaire profilering met kwantitatieve klinische fenotypering in één enkele cohort om gelijktijdig de diagnostische nauwkeurigheid, dosis-responsvariabelen en prognostische waarde te evalueren. Dit geïntegreerde raamwerk kan dienen als referentie voor toekomstige studies naar de ontdekking van biomarkers bij comorbiditeiten gerelateerd aan beroertes, waarbij complexe interacties tussen meerdere pathofysiologische routes traditionele analyses met een enkel eindpunt vaak bemoeilijken.
IH is een kenmerk van OSAS en induceert inflammatie en weefselschade door pro-inflammatoire signaleringspaden te activeren23. Cruciaal is dat deze inflammatoire toestand kruist met en de pathogenese van ACI verergert, waarbij post-ischemische inflammatie secundaire hersenschade medieert24,25. Belangrijke inflammatoire mediatoren zoals TNF-α en CRP zijn verhoogd bij beide aandoeningen en bevinden zich op het snijvlak van hypoxie-geïnduceerde en ischemie-getriggerde inflammatoire cascades, waardoor ze cruciale moleculen zijn in de comorbide pathologie van ACI en OSA26,27,28. Daarom werden de serumconcentraties van TNF-α en CRP bij patiënten met ACI gecombineerd met OSAS gemeten. In deze studie suggereren de waargenomen negatieve correlaties tussen serum miR-486-3p-spiegels en TNF-α- en CRP-spiegels bij ACI-gecombineerde OSAS een potentiële link tussen dit miRNA en de systemische inflammatoire toestand die kenmerkend is voor deze comorbide aandoening.
OSAS heeft een zeer nadelig effect op de kwaliteit van leven, en de SAQLI is een OSA-specifieke vragenlijst voor de kwaliteit van leven29. EDS is een veelvoorkomend symptoom van OSAS, en OSAS vergezeld door EDS leidt tot meer ongunstige gebeurtenissen en een slechtere prognose30. De ESS wordt algemeen gebruikt om de ernst van slaperigheid overdag te bepalen31. Bij OSAS worden recurrente episodes van IH beschouwd als een onafhankelijke risicofactor voor vaatziekten32. Bovendien kan oxidatieve stress afkomstig van IH leiden tot complicaties zoals osteoporose, een verhoogd cardiovasculair risico en neurologische veranderingen33. Daarom werd in deze studie ook de expressie van HIF-1α onderzocht. De bevinding van verhoogde HIF-1α in de groep met een slechte prognose bij ACI in combinatie met OSAS is in overeenstemming met de pathofysiologie van chronische intermitterende hypoxie bij OSAS. Bovendien toonden de resultaten aan dat miR-486-3p en TNF-α gecorreleerd waren met de prognose bij ACI in combinatie met OSAS, waarbij lage niveaus van miR-486-3p geassocieerd waren met een slechte prognose. Dit suggereert een potentiële cascade waarin IH-geïnduceerde HIF-1α miR-486-3p onderdrukt, wat bijdraagt aan de upregulatie van inflammatoire mediatoren zoals TNF-α, waardoor hersenletsel bij ACI wordt verergerd.
Deze studie kent nog beperkingen. Dit onderzoek wordt beperkt door de afwezigheid van controlegroepen (gezond, alleen OSAS), wat het onmogelijk maakt om een normaal bereik voor miR-486-3p te definiëren en veranderingen die specifiek zijn voor comorbiditeit te onderscheiden van die van OSAS alleen. Toekomstig werk moet daarom deze groepen betrekken om het expressieprofiel van miR-486-3p volledig in kaart te brengen. Bovendien is het onvoldoende om het specifieke regulatiemechanisme van miR-486-3p louter op basis van correlatie af te leiden. We zullen het moleculaire mechanisme in toekomstige experimenten verder verifiëren.
Vanuit een translationeel perspectief suggereren de hoge diagnostische accuratesse en de onafhankelijke prognostische waarde van miR‑486‑3p verschillende potentiële klinische toepassingen. Als bloedgebaseerde biomarker zou het geïntegreerd kunnen worden in de routinematige diagnostiek van beroertes om ACI-patiënten met onderliggend OSAS te identificeren, wat een vroege verwijzing voor polysomnografie en tijdige interventie faciliteert. Het monitoren van miR‑486‑3p-niveaus tijdens de acute en subacute fasen kan helpen bij het volgen van inflammatoire dynamiek en het stratificeren van patiënten op basis van prognostisch risico, waardoor gepersonaliseerde rehabilitatiestrategieën mogelijk worden. Deze translationele wegen verdienen verder onderzoek in prospectieve, multicentrische studies. Over het algemeen kan miR-486-3p betrokken zijn bij ACI in combinatie met OSAS door het reguleren van inflammatoire factoren en heeft het diagnostische en prognostische waarde bij ACI in combinatie met OSAS.
Openbaarmakingen
Deze studie werd gefinancierd door ‘Research on Stroke Prevention and Treatment Technologies’ (Nr. WKZX2023CZ0143).
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 3.0T MRI-scanner | Siemens Healthineers, Germany | MAGNETOM Skyra | Hersencan voor bevestiging van acuut cerebraal infarct |
| ELISA-microplaten met 96 putjes | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., China | XBS-PLATE | Antigeen-antilichaamreactie voor ELISA-detectie |
| AASM Clinical Practice Guidelines for Sleep-Disordered Breathing | American Academy of Sleep Medicine | 2020 full guideline | Gestandaardiseerde AHI-diagnostische en OSAS-ernststratificatiecriteria |
| Calgary Sleep Apnea Quality of Life Index (SAQLI) Chinees gevalideerde versie | University of Calgary | 2021 translated edition | Kwaliteit-van-levenbeoordeling voor ACI-patiënten gecompliceerd door OSAS |
| EDTA-K2 5 mL vacuüm bloedafnamebuizen | BD Biosciences, USA | 367863 | Perifere veneuze bloedafname voor serumscheiding |
| Epworth Sleepiness Scale (ESS) Chinees gevalideerde versie | Johns Hopkins University | 2018 revised edition | Evaluatie van slaperigheid overdag bij beroertepatiënten |
| GraphPad Prism 9 | GraphPad Software, USA | Version 9.4.1 | Spreidingsdiagrammen, boxplots, visualisatie van ROC-curven |
| Human CRP ELISA Kit | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Shenzhen, China | XBS-H001 | Kwantitatieve detectie van serum C-reactief proteïne |
| Human HIF-1α ELISA Kit | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Shenzhen, China | XBS-H007 | Kwantitatieve detectie van serum hypoxia-induceerbare factor-1α |
| Human TNF-α ELISA Kit | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Shenzhen, China | XBS-H003 | Kwantitatieve detectie van serum TNF-α inflammatoire factor |
| IBM SPSS Statistics 23.0 | IBM, Armonk, NY, USA | Version 23.0 | Alle statistische analyses (t-test, correlatie, ROC, Kaplan–Meier, Cox-regressie) |
| Microplaat-spectrofotometer | Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA) | Multiskan FC | Absorptiemeting voor ELISA-platen bij 450 nm |
| miR-486-3p & U6 qPCR-primers | Sangon Biotech, Shanghai, China | Custom synthesis | Amplificatie van target- en referentiegenen voor qPCR |
| miScript SYBR Green PCR Kit | Qiagen GmbH, Hilden, Germany | 218073 | Real-time kwantitatieve PCR-amplificatie van miR-486-3p en U6 |
| NIH Stroke Scale (NIHSS) Chinees gevalideerde versie | National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS), USA | Standard clinical edition | Basisbeoordeling van neurologische ernst voor ACI-patiënten |
| PSG-slaapscore-software | BMC Medical Co., Ltd., China | v3.2 | Geautomatiseerde voorlopige score van slaapademhalingsgebeurtenissen |
| QuantStudio 6 Pro Real-Time PCR-systeem | Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA) | QuantStudio 6 Pro | RT-qPCR-amplificatie, acquisitie van smeltcurve, registratie van Ct-waarde |
| QuantStudio Real-Time PCR-software | Applied Biosystems, USA | v1.7 | Export van qPCR-ruwe data, analyse van Ct-waarde |
| Gekoelde tafelcentrifuge | Xiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd., Hunan, China | TDZ5-WS | Serumscheiding uit volbloed (2700 × g, 4 °C) |
| RevertAid RT Reverse Transcription Kit | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA | K1691 | Reverse transcriptie van serum-miRNA naar cDNA |
| RNase-vrije 1,5 mL microcentrifugebuisjes | Axygen, USA | MCT-150-C | Aliquoteren en bewaren van gescheiden serum |
| TRIzol RNA-isolatiereagens | Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA | 15596026 | Totale RNA-extractie uit menselijke serummonsters |
| Ultra-lage temperatuurvriezer | Haier Biomedical, Shandong, China | DW-86L388 | Langetermijnbewaring van serummonsters bij −80 °C |
| YH-600B Polysomnografie-monitor | BMC Medical Co., Ltd., Beijing, China | YH-600B | Overnight slaapmonitoring en AHI-berekening voor OSAS-diagnose |
Referenties
- Lv R, et al. Pathophysiological mechanisms and therapeutic approaches in obstructive sleep apnea syndrome. Signal Transduct Target Ther. 2023;8(1):218.
- Gleeson M, McNicholas WT. Bidirectional relationships of comorbidity with obstructive sleep apnoea. Eur Respir Rev. 2022;31(164):210256.
- Seiler A, et al. Prevalence of sleep-disordered breathing after stroke and TIA: a meta-analysis. Neurology. 2019;92(7):e648-e654.
- Zhou Y, et al. Correlation between obstructive sleep apnea and hypoperfusion in patients with acute cerebral infarction. Front Neurol. 2024;15:1363053.
- Du W, Fan L, Du J. Neuroinflammation-associated miR-106a-5p serves as a biomarker for the diagnosis and prognosis of acute cerebral infarction. BMC Neurol. 2023;23(1):248.
- Tang Y, et al. Analysis of carotid vulnerable plaque MRI high-risk features and clinical risk factors associated with concomitant acute cerebral infarction. BMC Cardiovasc Disord. 2023;23(1):173.
- Santamaria-Martos F, et al. Circulating microRNA profile as a potential biomarker for obstructive sleep apnea diagnosis. Sci Rep. 2019;9(1):13456.
- Sheng B, et al. Exosome-mediated delivery of miR-486-3p alleviates neuroinflammation via. SIRT2-mediated inhibition of mitophagy after subarachnoid hemorrhage. Stroke Vasc Neurol. 2025;10(3):335-346.
- May AM, Mehra R. Obstructive sleep apnea: role of intermittent hypoxia and inflammation. Semin Respir Crit Care Med. 2014;35(5):531-544.
- Verjans R, et al. Functional screening identifies microRNAs as multicellular regulators of heart failure. Sci Rep. 2019;9(1):6055.
- Kwah LK, Diong J. National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS). J Physiother. 2014;60(1):61.
- Tanellari O, et al. Study on quality of life of patients with obstructive sleep apnea: pilot study. Medicina (Kaunas). 2025;61(7):1234.
- Hajikarim-Hamedani A, Rassa S, Tarjoman T, Shafiei M. Assessment of sleep patterns in migraine sufferers using the Epworth Sleepiness Scale. J Headache Pain. 2025;26(1):58.
- Liu X, et al. The relationship between inflammation and neurocognitive dysfunction in obstructive sleep apnea syndrome. J Neuroinflammation. 2020;17(1):229.
- Dharmakulaseelan L, Boulos MI. Sleep apnea and stroke: a narrative review. Chest. 2024;166(4):857-866.
- Song XD, Li SX, Zhu M. Plasma miR-409-3p promotes acute cerebral infarction via. suppressing CTRP3. Kaohsiung J Med Sci. 2021;37(4):324-333.
- Wu Z, et al. Integrated analysis of competitive endogenous RNA networks in acute ischemic stroke. Front Genet. 2022;13:833545.
- Li K, Wei P, Qin Y, Wei Y. MicroRNA expression profiling and bioinformatics analysis of dysregulated microRNAs in obstructive sleep apnea patients. Medicine (Baltimore). 2017;96(34):e7917.
- Sriram S, Mehkri Y, Quintin S, Lucke-Wold B. Shared pathophysiology: understanding stroke and Alzheimer's disease. Clin Neurol Neurosurg. 2022;218:107306.
- Small C, Mehkri Y, Panther E, Felisma P, Lucke-Wold B. Coronavirus disease 2019 and stroke: pathophysiology and management. Can J Neurol Sci. 2023;50(4):495-502.
- Tamin S, et al. Association between laryngopharyngeal reflux and obstructive sleep apnea in adults. PeerJ. 2022;10:e13303.
- Fabbri M, et al. Measuring subjective sleep quality: a review. Int J Environ Res Public Health. 2021;18(3):1082.
- Song R, Baker TL, Watters JJ, Kumar S. Obstructive sleep apnea-associated intermittent hypoxia-induced immune responses in males, pregnancies, and offspring. Int J Mol Sci. 2024;25(3):1852.
- Liu X, et al. Effects of Kudiezi injection on serum inflammatory biomarkers in patients with acute cerebral infarction. Dis Markers. 2018;2018:7936736.
- Liang Z, et al. Effects of remote ischemic postconditioning on the proinflammatory neutrophils of peripheral blood in acute cerebral infarction. Aging (Albany NY). 2023;15(10):4481-4497.
- Imani MM, et al. Serum and plasma tumor necrosis factor alpha levels in individuals with obstructive sleep apnea syndrome: a meta-analysis and meta-regression. Life (Basel). 2020;10(6):87.
- Bian F, Kang S, Cui H, Wang F, Luan T. The clinical efficacy of compound Danshen injection on acute cerebral infarction and on the changes in the CRP, D-dimer, and IL-6 levels. Am J Transl Res. 2021;13(7):8126-8133.
- Tie YX, Fu YY, Xu Z, Peng Y. Relationship between C-reactive protein levels and obstructive sleep apnea syndrome. Genet Mol Res. 2016;15(2): DOI:10.4238/gmr.15027808.
- Dutt N, Janmeja AK, Mohapatra PR, Singh AK. Quality of life impairment in patients of obstructive sleep apnea and its relation with the severity of disease. Lung India. 2013;30(4):289-294.
- Feng X, et al. Test-retest reliability of Epworth Sleepiness Scale score in patients with untreated obstructive sleep apnea. Nat Sci Sleep. 2024;16:2299-2309.
- Lapin BR, Bena JF, Walia HK, Moul DE. The Epworth Sleepiness Scale: validation of one-dimensional factor structure in a large clinical sample. J Clin Sleep Med. 2018;14(8):1293-1301.
- Zolotoff C, et al. Obstructive sleep apnea, hypercoagulability, and the blood-brain barrier. J Clin Med. 2021;10(14):3099.
- Meliante PG, et al. Molecular pathology, oxidative stress, and biomarkers in obstructive sleep apnea. Int J Mol Sci. 2023;24(6):5478.