Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Onderzoeksartikel

Correlationele analyse van Qiming Granule met het CMKLR1-gecentreerde netwerk en systemische inflammatie via de darm-retina-as bij diabetische retinopathie

121 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/72700

⸱

15 september 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine

In dit artikel

Samenvatting

Deze studie toont aan dat Qiming Granule (QMG) diabetische retinopathie (DR) verbetert door de darm-retina-as te moduleren. QMG hervormde de darmmicrobiota, onderdrukte systemische inflammatie en herstelde het op CMKLR1 gecentreerde regulatienetwerk, waardoor histopathologische schade aan het netvlies werd omgekeerd. Deze bevindingen positioneren QMG als een veelbelovende darm-retina therapeutische strategie voor DR.

Samenvatting

Diabetische retinopathie (DR) is een neurovasculaire complicatie die wordt gedreven door chronische hyperglykemie en systemische inflammatie, waarbij opkomend bewijs de darm-retina-as markeert als een kritiek maar onderbenut therapeutisch doelwit. Deze studie onderzoekt of Qiming Granule (QMG) zijn beschermende werking tegen DR uitoefent door de darm-retina-as te moduleren. C57BL/6-muizen werden gerandomiseerd in experimentele groepen en onderworpen aan verschillende interventies. Retinale histopathologische veranderingen werden beoordeeld via hematoxyline-eosin (HE)-kleuring. Serumspiegels van inflammatoire cytokinen (IL-1β, IL-6, TNF-α) werden gemeten met een enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). De expressie van belangrijke regulatoire eiwitten (CMKLR1, Wnt5a, PPAR-γ, AP-1, TP53) in zowel retinale als coloniweefsels werd gedetecteerd via Western blot (WB). De samenstelling en diversiteit van het darmmicrobioom werden gekarakteriseerd door full-length 16S rDNA-sequencing. Correlationele analyses werden uitgevoerd om de relaties tussen het darmmicrobioom en inflammatoire factoren of belangrijke eiwitten te beoordelen. QMG-behandeling verbeterde retinale histopathologische abnormaliteiten, getuige de herstel van de laminaire architectuur van de retina, gedeeltige herstel van het aantal retinale ganglioncellen (P < 0,001) en het omkeren van retinale verdunning (P < 0,01). Het verlaagde daarnaast significant de serumspiegels van IL-1β, IL-6 en TNF-α (P < 0,0001). Langs de darm-retina-as keerde QMG de abnormale expressie van belangrijke regulatoire eiwitten om, in het bijzonder het CMKLR1-gecentreerde netwerk (Wnt5a, PPAR-γ, AP-1, TP53). Bovendien herstelde QMG de samenstelling, diversiteit en functie van het darmmicrobioom, en correlationele analyses onthulden dat QMG systemische inflammatie koppelt aan deze regulatoire eiwitten om de darm-retina-as te moduleren. Deze studie levert preliminaire farmacologische bewijzen dat QMG DR verbetert door het CMKLR1-gecentreerde regulatoire netwerk (inclusief Wnt5a, PPAR-γ, AP-1 en TP53) en systemische inflammatie te koppelen via de darm-retina-as, waardoor QMG wordt gepositioneerd als een veelbelovende therapeutische strategie via de darm-retina-as voor DR.

Inleiding

Diabetische retinopathie (DR), een van de meest voorkomende microvasculaire complicaties van diabetes mellitus (DM), is wereldwijd een belangrijke oorzaak van blindheid bij volwassenen in de werkende leeftijd1. Wereldwijd treft DR ongeveer 20–30% van de DM-populatie2. Chronische hyperglykemie drijft de pathogenese van DR aan door een cascade van pathologische gebeurtenissen te triggeren, waaronder een verslechterde neurovasculaire koppeling, verhoogde ontstekingsreacties en oxidatieve stress3. Onlangs zijn veranderingen in de diversiteit en samenstelling van de darmmicrobiota waargenomen bij diabetische patiënten met retinopathie in vergelijking met patiënten zonder deze aandoening4,5. Bijgevolg is de darm-retina-as — een bidirectioneel communicatienetwerk dat intestinale homeostase verbindt met de gezondheid van het netvlies — naar voren gekomen als een nieuwe factor die bijdraagt aan de progressie van DR. De specifieke moleculaire mediatoren die darm-retina-signalen vertalen naar retinopathologie zijn echter grotendeels onbekend, wat de identificatie van betrouwbare biomarkers en therapeutische doelwitten beperkt.

De darm-retina-as beschrijft een complex bidirectioneel communicatienetwerk tussen de intestinale microbiota en hun metabolieten enerzijds en het retinale weefsel anderzijds via immunologische, metabole, neuroendocriene en vasculaire routes, waardoor hun homeostatisch evenwicht wordt gemoduleerd6. Op moleculair niveau wordt de darm-retina-as gekenmerkt door de dysregulatie van belangrijke stress-responsieve en celbestemmingsbepalende eiwitten, in het bijzonder AP-1 en TP537,8,9. Daarnaast blijkt CMKLR1, een belangrijke chemokine-receptor, een cruciale mediator te zijn van endotheeldisfunctie en metabole dysregulatie, wat een kritieke verbinding vormt tussen veranderingen in de darmmicrobiota en de pathogenese van diabetische retinopathie10. Belangrijk is dat Wnt-signalering een dubbele regulerende rol vervult bij het handhaven van de vasculaire homeostase van de retina en de functie van de intestinale epitheliale barrière11, terwijl PPAR-signalering fungeert als een hoofdregulator van inflammatoire reacties en metabole processen in zowel oculair als intestinaal weefsel12,13. Deze moleculaire spelers vormen gezamenlijk een onderling verbonden signaleringsnetwerk binnen de darm-retina-as, wat nieuwe mechanistische inzichten en therapeutische mogelijkheden biedt voor diabetesgerelateerde complicaties. Het targeten van structurele en functionele veranderingen langs deze as vormt daarom een veelbelovende strategie voor het beheer van DR.

Traditionele Chinese Geneeskunde (TCM) heeft historisch gezien een belangrijke rol gespeeld bij de behandeling van diabetes en de daarmee samenhangende retinopathie, waarbij therapeutische beslissingen gebaseerd zijn op syndroomdifferentiatie14. Qiming Granule (QMG), bestaande uit Astragalus membranaceus, Pueraria lobata, Rehmannia glutinosa, Lycium barbarum, Senna obtusifolia, Leonurus japonicus, Typha angustifolia, en Whitmania pigra, wordt op brede schaal toegepast bij de behandeling van DR. QMG is goedgekeurd door de National Medical Products Administration van China (Goedkeuringsnr. Z20090036), heeft klinische studies succesvol afgerond en heeft een handelsvergunning ontvangen. QMG vertoont beschermende effecten door de verdikking van het basaalmembraan in de capillairen van het netvlies te voorkomen, schade aan pericyten en de microvasculatuur van het netvlies te verminderen en de lokale pathologische morfologie van het oog te behouden15, waardoor het een veelbelovende therapie is voor de aanpak van DR. Door zich te richten op sleutelproteïnen en inflammatoire factoren, oefenen de actieve componenten van QMG anti-inflammatoire, antioxidatieve en anti-apoptotische effecten uit, wat een mechanistische basis biedt voor de modulatie van de darm-retina-as16. Deze eigenschappen vormen een mechanistische basis voor de potentiële modulatie van de darm-retina-as door QMG, maar weinig studies hebben deze link onderzocht. Daarom is deze studie erop gericht de effectiviteit van QMG bij het moduleren van de darm-retina-as te valideren, om experimenteel bewijs te leveren voor het therapeutische potentieel bij DR.

Deze studie slaat een brug tussen theoretische voorspellingen en in vivo experimentele gegevens om de werkzaamheid van QMG bij het moduleren van de darm-retina-as te valideren. Deze bevindingen tonen aan dat QMG DR verbetert door het CMKLR1-gecentreerde regulatoire netwerk (inclusief Wnt5a, PPAR-γ, AP-1 en TP53) te koppelen aan systemische inflammatie via de darm-retina-as, waardoor QMG wordt gepositioneerd als een veelbelovende, op de darm-retina-as gerichte therapeutische strategie voor DR. De grafische samenvatting wordt getoond in Figuur 1.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle dierproeven werden uitgevoerd in overeenstemming met de ARRIVE-richtlijnen. De studie werd goedgekeurd door de Ethische Toetsingscommissie van Sichuan Scientist Biotechnology Co., Ltd. (IACUC ISSUE SYST-2024-011).  Een gedetailleerde experimentele tijdlijn die het studieontwerp samenvat, is weergegeven in Aanvullende Figuur 1.

Voorbereiding en behandeling van dieren

Muizen werden diep genarceerd met 2% isofluraan via inhalatie. Onder diepe anesthesie werd bloed afgenomen via retro-orbitale enucleatie. Direct na de bloedafname werden de oogballen geënucleerd voor het oogsten van retinaal weefsel. Vervolgens werd onder diepe anesthesie cervicale dislocatie uitgevoerd om euthanasie te waarborgen. Colonweefsels werden daarna onmiddellijk gedisseceerd. Dieren die bijwerkingen vertoonden, werden prompt uit de studie verwijderd en kregen de passende veterinaire zorg.

Randomisatie en blindering

Mannelijke C57BL/6-muizen, 5 weken oud en met een gewicht tussen 20 en 30 gram, werden gehuisvest onder strikt gereguleerde omstandigheden, waaronder temperatuur en luchtvochtigheid. Na één week acclimatisatie werden de C57BL/6-muizen via een door de computer gegenereerde willekeurige reeks in drie groepen verdeeld (controle-, model- en interventiegroepen). De randomisatiesequentie werd gegenereerd door een onderzoeker die niet betrokken was bij de verzorging van de dieren of de beoordeling van de resultaten.

Om blindering te waarborgen, werden alle dierverzorging, toediening van geneesmiddelen en gegevensverzameling uitgevoerd door onderzoekers die niet op de hoogte waren van de groepsindeling. De gecodeerde groepstoewijzingen werden pas onthuld na voltooiing van alle experimenten en statistische analyses. De blindering was van toepassing op: de technicus die de orale gavage uitvoerde; de patholoog die de histologie van het netvlies evalueerde; en de analist die de Western blot (WB) banden kwantificeerde.

Berekening van de steekproefomvang

De steekproefomvang werd bepaald op basis van een voorlopig experiment waarin de aantallen retinale ganglioncellen (RGC) werden geëvalueerd onder dezelfde experimentele omstandigheden. Uitgaande van een tweezijdige significantieniveau (α) van 0,05 en een statistische power (1-β) van 0,80, waren minimaal 5 muizen per groep nodig om een klinisch relevant verschil in RGC-aantallen tussen de model- en interventiegroepen te detecteren. Rekening houdend met een potentieel uitvalpercentage van ongeveer 20%, werd elke groep vastgesteld op 6 muizen.

Opzetten van diabetische dieren

De controlegroep kreeg een standaarddieet, terwijl de interventie- en modelgroepen gedurende vier weken een vet- en suikerrijk dieet (HFHSD) kregen. Na deze dieetperiode ondergingen de interventie- en modelgroepen een intraperitoneale injectie met een 1% streptozotocine (STZ)-oplossing in een dosering van 35 mg/kg17,18,19,20. Na zeventig twee uur na de injectie werden muizen met een nuchtere bloedglucosewaarde van meer dan 16,7 mmol/L beschouwd als een succesvol geïnduceerd DM-model en geselecteerd voor verdere experimenten. De DM-dieren bleven nog vier maanden een vet- en suikerrijk dieet volgen, terwijl de controlegroep hun standaarddieet behield.

Taxonomische validatie en kwaliteitsbeoordeling

De acht ingrediënten in QMG werden taxonomisch gevalideerd met behulp van de Modernized Plant Names Search (MPNS, http://mpns.kew.org/mpns-portal/). De kwaliteit van de rapportage over de samenstelling van de QMG werd geëvalueerd met de ConPhYMP-tool.

Toedieningsmethoden

In de interventiegroep kregen de dieren QMG oraal toegediend. QMG werd gekocht bij Zhejiang Sansheng Mandi Pharmaceutical Co., Ltd. (Chinese National Drug Approval No. Z20090036). De QMG-suspensie werd bereid door QMG gelijkmatig te mengen met gedestilleerd water. Muizen in de interventiegroep kregen de suspensie via orale gavage toegediend in een volume dat gelijk was aan dat van de model- en blanco-groepen. De dosering werd berekend op basis van de klinische enkelvoudige therapeutische dosis van 4,5 g per 60 kg volwassene (de standaard eenheidsdosis van de op de markt verkrijgbare formulering) met behulp van de normalisatiemethode voor het lichaamsoppervlak (BSA), zoals aanbevolen door de FDA en Reagan-Shaw21. De conversiefactor tussen volwassen mensen (Km = 37) en muizen (Km = 3) was 12,33, wat resulteerde in een muisendosis van 0,9 g/kg lichaamsgewicht. De modelgroep en de blancogroep kregen een gelijk volume fysiologisch zout via orale gavage. De toediening vond dagelijks plaats tussen 9:00 en 11:00 uur gedurende een aaneengesloten periode van 3 maanden.

Observatie en testindicatoren

Algemene monitoring van vitale functies

De algemene vitale functies en fysiologische indicatoren, waaronder lichaamsgewicht, bloedglucosewaarden, water- en voedselconsumptie, urineproductie, activiteitsniveaus en gedrag, lichaamstemperatuur, alsook de conditie van de vacht en huid, werden systematisch waargenomen en vastgelegd om therapeutische interventies uitgebreid te beoordelen en potentiële complicaties op te sporen.

Observatie van morfologische veranderingen in het netvlies door HE-kleuringsanalyse

Alle specimens werden na fixatie verwerkt via een automatische dehydrator met behulp van een serie ethanol- en xyleenoplossingen, gevolgd door inbedding in paraffine. Vervolgens werden paraffinecoupes van 4 µm gesneden en gekleurd met HE, om daarna te worden gemonteerd met neutrale gom. Retinale beelden werden gescand met een 3DHISTECH Pannoramic SCAN scanner. Beeldanalyse en datametingen werden uitgevoerd met Image-Pro Plus.

Detectie van serum IL-6, TNF-α en IL-1β via ELISA-analyse

Bloedmonsters werden verzameld via retro-orbitale enucleatie. Serum werd gescheiden door centrifugatie bij 1,000 × g gedurende 15 min bij 4 °C en bewaard bij -80 °C tot aan de analyse. Serumspiegels van IL‑1β, IL‑6 en TNF‑α werden gemeten volgens standaardprocedures, inclusief equilibratie van reagentia, toevoeging van monsters, incubatie, wassen, toevoeging van conjugaat en substraat, beëindiging van de reactie, meting van de optische dichtheid en berekening van de concentratie op basis van een standaardcurve. De optische dichtheid werd afgelezen bij 450 nm met een microplatelezer, en cytokineconcentraties werden berekend aan de hand van standaardcurves.

Detectie van de belangrijkste regulerende eiwitten in het netvlies en de colon via WB-analyse

Drie onafhankelijke biologische replica's werden uitgevoerd op een enkel membraan en sequentieel gesondeerd op doeleiwitten. Alle replica's waren afkomstig van een enkele cohort dieren die gelijktijdig waren geofferd. Wanneer het molecuulgewicht van een doeleiwit te dicht bij dat van GAPDH lag (<5 kDa verschil), werden deze op onafhankelijke membranen geanalyseerd om signaaloverlap te voorkomen. Elk membraan werd uitsluitend gesondeerd op óf het doeleiwit óf GAPDH om een nauwkeurige kwantificering te garanderen. De volgende primaire antilichamen werden gebruikt: GAPDH polyclonaal antilichaam (1:5000), CMKLR1 polyclonaal antilichaam (1:1000), Wnt5a polyclonaal antilichaam (1:1000), TP53 polyclonaal antilichaam (1:1000), AP-1 monoklonaal antilichaam (1:5000) en PPAR gamma (PPAR-γ) polyclonaal antilichaam (1:1000). Totale eiwitten werden verkregen door cellysis gevolgd door centrifugatie. Eiwitconcentraties werden bepaald met de BCA-assay. De geëxtraheerde eiwitten werden gescheiden via SDS-PAGE met een scheidingsgel van 12% en vervolgens overgebracht op membranen. De membranen werden geblokkeerd in TBST met 5% vetvrije melk en overnacht bij 4 °C geïncubeerd met de juiste primaire antilichamen. Na het wassen werden de membranen geïncubeerd met HRP-geconjugeerde anti-konijn of anti-muis secundaire antilichamen bij een verdunning van 1:10.000. Tot slot werden de eiwitbanden gevisualiseerd en geanalyseerd via chemiluminescentie-imaging. Tijdens de visualisatie en gegevensverwerking werden de blots horizontaal bijgesneden om irrelevante molecuulgewichtregio's te verwijderen, waarbij alle monsterbanen werden behouden zonder verwijdering van de gebieden tussen de banen. Er kan lichte vervorming van de randen optreden tijdens het bijsnijden om irrelevante gelregio's te verwijderen.

Detectie van darmmicrobiota door middel van 16S rDNA-sequencinganalyse

Verse fecesmonsters werden van elke muis verzameld voorafgaand aan de terminale procedures. Muizen werden individueel gedurende 10–15 min in steriele kooien geplaatst om spontane defecatie mogelijk te maken. Fecespellets werden onmiddellijk met steriele pincetten verzameld, overgebracht naar steriele 1,5 mL buisjes, snel bevroren in vloeibare stikstof en bewaard bij -80 °C tot de DNA-extractie. Alle procedures werden onder steriele omstandigheden uitgevoerd om kruiscontaminatie te minimaliseren. Het interval tussen defecatie en invriezen werd beperkt tot 10 min om de microbiële integriteit te waarborgen. De fecale genomische DNA (gDNA)-monsters werden gezuiverd met de Fecal gDNA extraction kit, gevolgd door amplificatie van het volledige 16S rDNA-gen via de polymerasekettingreactie (PCR) met de universele primers 8F (5’-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3’) en 1492R (5’-CGGTTACCTTGTTACGACTT-3’). De PCR-producten werden vervolgens geanalyseerd via agarosegelelektroforese, gezuiverd en gekwantificeerd voor verdere toepassingen. High-throughput sequencing werd uitgevoerd op de Nanopore GridION sequencer. Het proces van data-analyse omvatte basecalling, kwaliteitscontrole van de data, soortannotatie, constructie van fylogenetische bomen, community-analyse, Alpha- en Beta-diversiteitsanalyse, analyse van differentieel abundante soorten  en voorspelling van de communityfunctie. Tijdens de analyse werden diverse tools en databases gebruikt, zoals NanoFilt, Usearch, de programmeertaal R, Python en de SILVA-database.

Correlatieanalyse van de darm-retina-as met systemische inflammatie en microbiota van de darmen op meerdere niveaus

Om de potentiële associaties tussen de darmmicrobiota op verschillende niveaus en serum-inflammatoire cytokinen en belangrijke regulatoire eiwitten te onderzoeken, is een correlatieanalyse uitgevoerd met behulp van het Luoning Bio-Cloud platform. In eerste instantie werden de abundantiegegevens van soorten op het niveau van koninkrijk, stam, klasse, orde, familie, genus en soort geëxtraheerd uit de sequeneringsresultaten. Fysisch-chemische factoren, waaronder serum-inflammatoire cytokinen en eiwitexpressieniveaus, werden samengesteld in een bestand met omgevingsfactoren. Om de betrouwbaarheid en visualisatie van de correlaties te waarborgen, werden de gegevens genormaliseerd om de schaalverschillen tussen microbiële abundantie en klinische meeteenheden te elimineren. De correlatiecoëfficiënten (R-waarden) en de bijbehorende significantieniveaus (P-waarden) werden berekend. De resultaten werden gevisualiseerd met een correlatie-heatmap, waarbij kleurgradiënten de sterkte en richting van de correlatie aangeven (rood staat voor een positieve correlatie, blauw voor een negatieve correlatie) en sterretjes (**) de statistische significantie aangeven (P < 0,01).

Statistische methoden

Alle statistische analyses en visualisaties zijn uitgevoerd met GraphPad Prism. De t-test om gemiddelden te vergelijken werd toegepast op gegevens die voldeden aan een normale verdeling. In gevallen waarin de gegevens afweken van normaliteit, werd de Kruskal-Wallis-test gebruikt. Voor de relaties tussen variabelen werd de correlatie van Spearman of Pearson berekend. Alle statistische tests zijn tweezijdig uitgevoerd, waarbij de statistische significantie is vastgesteld op 0,05.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

General situation of experimental animals

Blood glucose levels were significantly elevated in the model group (27.21 ± 6.03 mmol/L) compared with the blank group (P < 0.001), indicating the successful induction of the DM model. During the study period, the experimental animals showed stable body weight, continuous water and food intake, normal urine output, body temperature, healthy fur and skin condition, and normal behavior during the experiment.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Diabetische retinopathie (DR) is een complexe neurovasculaire complicatie die wordt aangestuurd door chronische hyperglykemie, ontsteking en metabole ontregeling22. De American Academy of Ophthalmology categoriseert DR in non-proliferatieve DR en proliferatieve DR, gekenmerkt door het ontstaan van neovascularisatie23. Gezien de beperkingen van huidige therapeutische strategieën is het verkennen van nieuwe mechanismen een veelbelovende richting gebleken voor de aanpak van DR...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren dat zij geen bekende concurrerende financiële belangen of persoonlijke relaties hebben die een invloed zouden kunnen hebben gehad op het in dit artikel beschreven werk.

Dankbetuigingen

De auteur wil graag alle teamleden erkennen die veel steun en hulp hebben geboden om dit onderzoek te voltooien.

Dit onderzoek werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (Grant Number:82474580) en het Hospital Foundation Free Exploration Project in het Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine (No. 23ZYTS1601).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
AP-1 monoklonaal antilichaamProteintech66313-1-IG1:5000
CMKLR1 polyklonaal antilichaamAffinityAF52911:1000
GAPDH polyklonaal antilichaamAffinityAF70211:5000
Geit Anti-Muis IgG(H+L) HRPMULTI SCIENCESGAM00721:10000
Geit Anti-Konijn IgG(H+L) HRPMULTI SCIENCESGAR00721:10000
GraphPad Prism/versie 9.5
Image-Pro PlusMedia Cybernetics, Inc., Rockville, MD, USAversie 6.0
Luoning Bio-Cloud platform http://www.biomediv.cn/login.html
Muis IL-1β(Interleukine 1 Beta) ELISA KitElabscienceE-EL-M0037Detectie van serumcytokinen
Muis IL-6(Interleukine-6) ELISA KitElabscienceE-EL-M0044Detectie van serumcytokinen
Muis TNF-α(Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA KitElabscienceE-EL-M3063Detectie van serumcytokinen
NanoFilt/versie 2.7.1
Nanopore GridION sequencerOxford Nanopore Technologieshttps://store.nanoporetech.com/gridion.html
Pannoramic SCAN II3DHISTECH Pannoramic SCAN scanner https://www.3dhistech.com/scanners/pannoramic-scan-ii-digital-scanner/
PPAR gamma (PPAR-γ) polyklonaal antilichaam ImmunoWaybs-0530R1:1000
Python/versie 3.7.4
Qiming GranuleZhejiang Sansheng Mandi Pharmaceutical Co., Ltd.Chinese National Drug Approval No. Z200900360,9 g/kg, orale gavage
R programmeertaal/versie 4.0.3
SILVA database/versie 138
Streptozotocine (STZ)Sigma-AldrichS013035 mg/kg, i.p.
TP53 polyklonaal antilichaamAbcamab1314421:1000
Usearch/versie 10.0.240
Wnt5a polyklonaal antilichaamProteintech55184-1-AP1:1000
Zymo Research BIOMICS DNA Microprep KitZymo ResearchD4301Extractie van fecaal gDNA

Referenties

  1. Lei C, et al. Homocysteine and diabetic retinopathy. Exp Eye Res. 2026;262:110729.
  2. Owens DR, et al. IDF diabetes Atlas: A worldwide review of studies utilizing retinal photography to screen for diabetic retinopathy from 2017 to 2024 inclusive. Diabetes Res Clin Pract. 2025;226:112346.
  3. Zhu J, Huang J, Sun Y, Xu W, Qian H. Emerging role of extracellular vesicles in diabetic retinopathy. Theranostics. 2024;14(4):1631–1646.
  4. Xie L, Lin W. The role of gut microbiota dysbiosis in the inflammatory pathogenesis of diabetic retinopathy. Front Immunol. 2025;16:1604315.
  5. Niu J, Liu Y, Peng H, Chen J, Chen L. Early-stage diabetic retinopathy: gut-metabolic triggers, immune-neurodegeneration, and interventions. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 2025;263(10):2723–2736.
  6. Rowan S, et al. Involvement of a gut-retina axis in protection against dietary glycemia-induced age-related macular degeneration. Proc Natl Acad Sci U S A. 2017;114(22):E4472–E4481.
  7. Rzeczycki P, Pęciak O, Plust M, Droździk M. Gut Microbiota in the Regulation of Intestinal Drug Transporters: Molecular Mechanisms and Pharmacokinetic Implications. Int J Mol Sci. 2025;26(24):11897.
  8. Yang H, et al. Mediating role of aging and obesity in the relationship between dietary index for gut microbiota and metabolic syndrome and its potential regulatory mechanisms. Eur J Med Res. 2025;31(1):137.
  9. Zahavi EE, et al. Repeat-element RNAs integrate a neuronal growth circuit. Cell. 2025;188(16):4350–4365.e22.
  10. Dander E, et al. The chemerin/CMKLR1 axis regulates intestinal graft-versus-host disease. JCI Insight. 2023;8(5):e154440.
  11. Zhang J, et al. Therapeutic targets in the Wnt signaling pathway: Treating cancer with specificity. Biochem Pharmacol. 2025;236:116848.
  12. Liu M, Lim ST, Song W, Coffman TM, Wang X. Beyond lipids: fenofibrate in diabetic retinopathy and nephropathy. Trends Pharmacol Sci. 2026;47(3):325–341.
  13. Wu Y, et al. The active ingredient β-sitosterol in the anti-inflammatory agents alleviates perianal inflammation in rats by inhibiting the expression of Srebf2, activating the PPAR signaling pathway, and altering the composition of gut microbiota. Int Immunopharmacol. 2025;152:114470.
  14. Lin T, Chen C, Zhao LC, Zhu HY, Li W. The beneficial effects of Traditional Chinese Medicine on diabetic retinopathy: mechanisms, therapeutics, and prospects. Acupunct Herb Med 2026;6(2):188–204.
  15. Huo J, et al. Evaluation of individualized treatment of nonproliferative diabetic retinopathy: a multicenter, randomized, parallel-controlled study. J Tradit Chin Med. 2022;42(1):90–95.
  16. Huang Y, et al. Pharmacological mechanism and clinical study of Qiming granules in treating diabetic retinopathy based on network pharmacology and literature review. J Ethnopharmacol. 2023;302(Pt A):115861.
  17. Salma B, et al. Ameliorative Efficacy of the Cassia auriculata Root Against High-Fat-Diet + STZ-Induced Type-2 Diabetes in C57BL/6 Mice. ACS Omega. 2020;6(1):492–504.
  18. Srinivasan K, Viswanad B, Asrat L, Kaul CL, Ramarao P. Combination of high-fat diet-fed and low-dose streptozotocin-treated rat: a model for type 2 diabetes and pharmacological screening. Pharmacol Res. 2005;52(4):313–320.
  19. Liu Y, Deng J, Fan D. Ginsenoside Rk3 ameliorates high-fat-diet/streptozocin-induced type 2 diabetes mellitus in mice via the AMPK/Akt signaling pathway. Food Funct. 2019;10(5):2538–2551.
  20. Hu RY, et al. AFG Ameliorates Diabetic Retinopathy through AMPK-Dependent Autolysosomal Pathway: From Network Pharmacology to In Vivo and In Vitro Validation. J Agric Food Chem. 2026;74(2):2124–2139.
  21. Reagan-Shaw S, Nihal M, Ahmad N. Dose translation from animal to human studies revisited. FASEB J. 2008;22(3):659–661.
  22. Zou Q, et al. Oxidative stress in diabetic retinopathy. Clin Chim Acta. 2026;584:120871.
  23. Clements JN, Mesawich J, Twisdale C. Current and Emerging Pharmacologic Therapies for Diabetic Retinopathy. Pharmacotherapy. 2026;46(3):e70119.
  24. Rezvani Z, Khani F, Afarid M, Asadian F, Takhshid MA. Clinical values of systemic inflammatory indices in diabetic retinopathy. Clin Exp Optom. 2026;109(3):371–385.
  25. Zhu Z, et al. Targeting the CMKLR1-Mediated Signaling Rebalances Immunometabolism State in Middle-Age Testicular Macrophages. Adv Sci (Weinh). 2026;13(14):e15166.
  26. Lin Y, et al. Epithelial chemerin-CMKLR1 signaling restricts microbiota-driven colonic neutrophilia and tumorigenesis by up-regulating lactoperoxidase. Proc Natl Acad Sci U S A. 2022;119(29):e2205574119.
  27. Puthanmadhom Narayanan S, et al. Epigenetic Alterations Are Associated With Gastric Emptying Disturbances in Diabetes Mellitus. Clin Transl Gastroenterol. 2020;11(3):e00136.
  28. Wang L, et al. Chemerin/CMKLR1 Axis Promotes the Progression of Proliferative Diabetic Retinopathy. Int J Endocrinol. 2021;2021:4468625.
  29. Zheng C, et al. α-NETA down-regulates CMKLR1 mRNA expression in ileum and prevents body weight gains collaborating with ERK inhibitor PD98059 in turn to alleviate hepatic steatosis in HFD-induced obese mice but no impact on ileal mucosal integrity and steatohepatitis progression. BMC Endocr Disord. 2023;23(1):9.
  30. Dranse HJ, et al. The impact of chemerin or chemokine-like receptor 1 loss on the mouse gut microbiome. PeerJ. 2018;6:e5494.
  31. Flores-Hernández E, et al. Canonical and non-canonical Wnt signaling are simultaneously activated by Wnts in colon cancer cells. Cell Signal. 2020;72:109636.
  32. Qi Y, et al. Heat-inactivated Bifidobacterium adolescentis ameliorates colon senescence through Paneth-like-cell-mediated stem cell activation. Nat Commun. 2023;14(1):6121.
  33. Ou W, et al. Cooperation of Wnt/β-catenin and Dll1-mediated Notch pathway in Lgr5-positive intestinal stem cells regulates the mucosal injury and repair in DSS-induced colitis mice model. Gastroenterol Rep (Oxf). 2024;12:goae090.
  34. Dong Y, et al. Berberine ameliorates DSS-induced intestinal mucosal barrier dysfunction through microbiota-dependence and Wnt/β-catenin pathway. Int J Biol Sci. 2022;18(4):1381–1397.
  35. Escandon P, et al. The role of peroxisome proliferator-activated receptors in healthy and diseased eyes. Exp Eye Res. 2021;208:108617.
  36. Blot G, et al. Perilipin 2-positive mononuclear phagocytes accumulate in the diabetic retina and promote PPARγ-dependent vasodegeneration. J Clin Invest. 2023;133(19):e161348.
  37. Zhou W, et al. TREM2-dependent activation of microglial cell protects photoreceptor cell during retinal degeneration via PPARγ and CD36. Cell Death Dis. 2024;15(8):623.
  38. Bala Kumar S, et al. Gut microbial metabolites targeting JUN in renal cell carcinoma via IL-17 signaling pathway: network pharmacology approach. Mol Divers. 2026;30(1):613–632.
  39. Wang L, et al. Gut microbial bile acid metabolite skews macrophage polarization and contributes to high-fat diet-induced colonic inflammation. Gut Microbes. 2020;12(1):1–20.
  40. Hagan T, et al. Antibiotics-Driven Gut Microbiome Perturbation Alters Immunity to Vaccines in Humans. Cell. 2019;178(6):1313–1328.e13.
  41. Meng Y, et al. Jinlida ameliorates diabetic kidney disease via gut microbiota-dependent production of pyridoxamine targeting renal AGEs/RAGE and TGF-β pathways. Phytomedicine. 2026;150:157744.
  42. Zhou H, Zhang L, Ding C, Zhou Y, Li Y. Upregulation of HMOX1 associated with M2 macrophage infiltration and ferroptosis in proliferative diabetic retinopathy. Int Immunopharmacol. 2024;134:112231.
  43. Mohammad HMF, et al. Neuroprotective effect of levetiracetam in mouse diabetic retinopathy: Effect on glucose transporter-1 and GAP43 expression. Life Sci. 2019;232:116588.
  44. Peng H, et al. Autophagy and senescence of rat retinal precursor cells under high glucose. Front Endocrinol (Lausanne). 2023;13:1047642.
  45. Ding Y, Chen L, Xu J, Feng Y, Liu Q. APAF1 Silencing Ameliorates Diabetic Retinopathy by Suppressing Inflammation, Oxidative Stress, and Caspase-3/GSDME-Dependent Pyroptosis. Diabetes Metab Syndr Obes. 2024;17:1635–1649.
  46. Yang T, et al. Clinical study on the modulating effects of Jiaotaiwan on the modulating effects of microbiota–SCFAs–neurotransmitter/immune axis in patients with depression. Acupunct Herb Med 2025;5(4):456–468.
  47. Luo XX, et al. Effect of qiming granule on retinal blood circulation of diabetic retinopathy: a multicenter clinical trial. Chin J Integr Med. 2009;15(5):384–388.
  48. Hu Z, et al. Add-on effect of Qiming granule, a Chinese patent medicine, in treating diabetic macular edema: A systematic review and meta-analysis. Phytother Res. 2021;35(2):587–602.
  49. Yang M, et al. The Efficacy and Safety of Qiming Granule for Dry Eye Disease: A Systematic Review and Meta-Analysis. Front Pharmacol. 2020;11:580.
  50. Ma XF, et al. Efficacy and Safety of Qiming Granule for Nerve Injury Associated with Non-proliferative Diabetic Retinopathy: A Multicenter, Randomized, Non-inferiority, Active-Controlled Clinical Trial. Chin J Integr Med. 2026;32(3):195–203.
  51. Zhou Q, et al. Qiming granules regulate Müller cell pyroptosis and the P2X7R/NLRP3 immune inflammatory pathway in diabetic retinopathy. Chin Med. 2026;21(1):89.
  52. Zhou L, Qin T, Lv Y, Wu Z. Qiming Granules Ameliorate Diabetic Retinopathy by Regulating the PI3K/Akt Signaling Pathway. J Ocul Pharmacol Ther. 2026;42(3):202–212.
  53. Li HD, Li MX, Zhang WH, Zhang SW, Gong YB. Effectiveness and safety of traditional Chinese medicine for diabetic retinopathy: A systematic review and network meta-analysis of randomized clinical trials. World J Diabetes. 2023;14(9):1422–1449.
  54. Chen F, et al. Isorhamnetin promotes functional recovery in rats with spinal cord injury by abating oxidative stress and modulating M2 macrophages/microglia polarization. Eur J Pharmacol. 2021;895:173878.
  55. Naudhani M, Thakur K, Ni ZJ, Zhang JG, Wei ZJ. Formononetin reshapes the gut microbiota, prevents progression of obesity and improves host metabolism. Food Funct. 2021;12(24):12303–12324.
  56. Qu Y, et al. Kaempferol Alleviates Murine Experimental Colitis by Restoring Gut Microbiota and Inhibiting the LPS-TLR4-NF-κB Axis. Front Immunol. 2021;12:679897.
  57. Saikia L, et al. Therapeutic Potential of Quercetin in Diabetic Neuropathy and Retinopathy: Exploring Molecular Mechanisms. Curr Top Med Chem. 2024;24(27):2351–2361.
  58. Yao H, et al. Kaempferol Protects Blood Vessels From Damage Induced by Oxidative Stress and Inflammation in Association With the Nrf2/HO-1 Signaling Pathway. Front Pharmacol. 2020;11:1118.
  59. Zhang HX, Li YY, Liu ZJ, Wang JF. Quercetin effectively improves LPS-induced intestinal inflammation, pyroptosis, and disruption of the barrier function through the TLR4/NF-κB/NLRP3 signaling pathway in vivo and in vitro. Food Nutr Res. 2022;66:10.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

CMKLR1-netwerkdarmmicrobiotaretinahistopathologieinflammatoire cytokinenWestern blot16S rDNA-sequencing
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.