Ethische verklaring: De studie werd uitgevoerd in overeenstemming met de institutionele richtlijnen en de ethische principes van de Verklaring van Helsinki. Ethische goedkeuring is verkregen van de Ethische Commissie van Bisha University (UBCOM-RELOC), met goedkeuringsnummer H-06-BH-087/(0802.23). Deelname was vrijwillig en van alle deelnemers is voorafgaand aan de inschrijving schriftelijke geïnformeerde toestemming verkregen. De materialen, apparatuur en analytische procedures die in de studie zijn gebruikt, zijn samengevat in de Tabel met materialen.
Onderzoeksopzet en setting
Er werd een retrospectieve cross-sectionele studie uitgevoerd in het Maternity and Children’s Hospital in Bisha, Saudi-Arabië, tussen december 2022 en mei 2023 om de ijzerstatus te beoordelen en factoren te onderzoeken die geassocieerd zijn met ijzertekort bij zwangere vrouwen in de noordelijke regio Asir.
Studiepopulatie en bemonsteringsmethodologie
In totaal werden 200 deelnemers ingeschreven, waaronder 135 zwangere vrouwen die routinematige prenatale zorgbezoeken aflegden en 65 op leeftijd gematchte niet-zwangere vrouwen die als controlegroep dienden. Deelnemers werden via gemaksteekproef uit poliklinieken geworven gedurende de studieperiode. In aanmerking komende vrouwen die tijdens de spreekuren arriveerden, werden opeenvolgend benaderd, en de werving liep door tot de beoogde steekproefomvang was bereikt. Om potentiële selectiebias binnen dit kader te verminderen, werden de controles op leeftijd gematcht met behulp van eenvoudige random sampling uit de in aanmerking komende niet-zwangere polikliniekbezoekers.
Zwangere vrouwen kwamen in aanmerking voor deelname als zij 18 jaar of ouder waren en een zwangerschap hadden met een gestationele leeftijd tussen 12 en 36 weken. Geschikte deelnemers werden geïncludeerd ongeacht hun ijzerstatus en vervolgens geclassificeerd als zwangere vrouwen met IDA of zonder IDA op basis van laboratoriumbevindingen. Volgens de WHO-criteria werd anemie tijdens de zwangerschap gedefinieerd als hemoglobinecarbonconcentraties (Hb) < 11,0 g/dL tijdens het eerste en derde trimester en < 10,5 g/dL tijdens het tweede trimester. IDA werd gediagnosticeerd bij vrouwen die voldeden aan de zwangerschapsspecifieke Hb-drempelwaarde en bewijs hadden van ijzertekort, waaronder serumferritine < 15 ng/mL, serumijzer < 10 µmol/L en een totale ijzerbindende capaciteit (TIBC) ≥ 68 µmol/L17,18. Zwangere vrouwen die niet aan deze diagnostische criteria voldeden, werden geclassificeerd als de groep zwangere vrouwen zonder IDA. Niet-zwangere vrouwen in de reproductieve leeftijd zonder huidige zwangerschap en zonder bekende hematologische aandoeningen dienden als controlegroep. Exclusiecriteria voor beide groepen omvatteden een gedocumenteerde voorgeschiedenis van chronische of systemische aandoeningen geassocieerd met een veranderde ijzermetabolisme of inflammatoire status, zoals chronische nierziekte, auto-immuunziekten, maligniteiten, inflammatoire darmziekten, chronische leverziekte of erfelijke ijzeraandoeningen (bijv. hemochromatose). Vrouwen met acute infecties op het moment van afname, personen die in de voorafgaande drie maanden intraveneuze ijzertherapie of bloedtransfusies hadden ontvangen, en personen die langdurige immunosuppressieve therapie ondergingen, werden ebenfalls uitgesloten. De body mass index (BMI) en etniciteit werden genoteerd voor alle deelnemers; deze variabelen werden echter niet gebruikt als exclusiecriteria, maar werden beschouwd als potentiële covariabelen in de analyse.
Bepaling van de steekproefomvang
De steekproefomvang is berekend met behulp van epidemiologische software voor steekproefberekeningen19, op basis van een verwachte prevalentie van IDA onder zwangere vrouwen in Saoedi-Arabië van 40%6, met een betrouwbaarheidsinterval van 95% en een foutmarge van 5%. De minimale vereiste steekproefomvang werd geschat op 182 deelnemers; daarom zijn in totaal 200 deelnemers geworven om de statistische precisie te verhogen.
Gegevensverzameling
Vragenlijst
Gegevens werden verzameld met behulp van een gestructureerde en gevalideerde vragenlijst. De vragenlijst werd ontwikkeld na een uitgebreide literatuurstudie en is geëvalueerd door een panel van vakexperts, waaronder gynaecologen, voedingsdeskundigen en epidemiologen, om de inhoudsvaliditeit te waarborgen. Er werd een pilotstudie uitgevoerd met 20 deelnemers, die niet waren opgenomen in de definitieve analyse, om de duidelijkheid, betrouwbaarheid en haalbaarheid te beoordelen. De interne consistentie van de vragenlijst was acceptabel, met een Cronbach's alpha van 0,81.
De uiteindelijke vragenlijst bestond uit drie secties met in totaal 35 items (Aanvullend bestand 1):
Sectie 1 (Sociodemografische gegevens, 10 items): leeftijd, opleidingsniveau, beroep, woonplaats, nationaliteit en familiegeschiedenis van anemie.
Sectie 2 (Dieetgewoonten, 12 items): frequentie van consumptie van ijzerrijke voedingsmiddelen (rood vlees, wit vlees, vis, groenten en verrijkte granen), inname van thee en koffie, en het dieetregime. Dieetvariabelen werden a priori geselecteerd op basis van hun vastgestelde relevantie voor de ijzerinname, de biobeschikbaarheid van ijzer en dieetfactoren die de ijzerabsorptie kunnen beïnvloeden. De vragenlijst omvatte belangrijke dieetbronnen van ijzer, waaronder rood vlees, gevogelte, vis, groene bladgroenten en verrijkte granen. Voedingsmiddelen rijk aan vitamine C, in het bijzonder citrusvruchten, werden beoordeeld omdat vitamine C de absorptie van non-heemijzer kan bevorderen. Daarentegen werd de consumptie van thee en koffie beoordeeld omdat dieetpolyfenolen de absorptie van non-heemijzer kunnen remmen wanneer ze tijdens of vlak voor of na maaltijden worden geconsumeerd. Het dieetregime en de consumptie van fastfood werden eveneens beoordeeld om een indicatie te geven van algemene dieetpatronen en nutritionele adequaatheid. De geselecteerde dieetitems waren gebaseerd op literatuuronderzoek tijdens de ontwikkeling van de vragenlijst en werden vervolgens door experts op het gebied van verloskunde, voeding en epidemiologie geëvalueerd op inhoudsvaliditeit.
Sectie 3 (Klinische geschiedenis en symptomen, 13 items): zwangerschapsduur, pariteit, geschiedenis van bloedtransfusies, vermoeidheid, duizeligheid, koorts en andere symptomen die gewoonlijk geassocieerd worden met anemie.
Biochemische beoordeling
Voor elke deelnemer werd een veneuze bloedafname van 5 mL uitgevoerd na een nacht vasten. De monsters werden gecentrifugeerd bij 2000 × g gedurende 15 min om het serum te scheiden, dat vervolgens onmiddellijk werd geanalyseerd. De hemoglobinconcentratie werd gemeten met een geautomatiseerde hematologie-analyzer en gerapporteerd in gram per deciliter (g/dL). Serumferritinespiegels werden bepaald met een electrochemiluminescentie-immunoassay (ECLIA) op een geautomatiseerde immunoassay-analyzer en uitgedrukt in nanogram per milliliter (ng/mL). Serumijzer, de totale ijzerbindende capaciteit (TIBC) en de onverzadigde ijzerbindende capaciteit (UIBC) werden bepaald met een colorimetrische methode op een geautomatiseerde biochemische analyzer, waarbij de resultaten werden gerapporteerd in micromol per liter (µmol/L). De transferrinesaturatie (TR-SAT) werd berekend als de ratio van serumijzer tot TIBC vermenigvuldigd met 100 en uitgedrukt als percentage.
Statistiek en data-analyses
Gegevens werden gecodeerd en geanalyseerd met behulp van gestandaardiseerde statistische analysesoftware. Beschrijvende statistieken, waaronder gemiddelden, standaarddeviaties en percentages, werden gebruikt om sociodemografische, dieet-, klinische en biochemische variabelen samen te vatten. Groepsvergelijkingen werden uitgevoerd met behulp van een ongepaarde Student's t-test of een eenweg-variantieanalyse (ANOVA), afhankelijk van de situatie. Statistische significantie werd gedefinieerd als p < 0,05. Grafische weergaven werden gegenereerd met behulp van grafiek- en statistische software.
Om factoren te onderzoeken die onafhankelijk geassocieerd zijn met IDA, werd een multivariaat logistisch regressiemodel toegepast. De IDA-status werd vastgelegd als de binaire afhankelijke variabele (IDA = 1, non-IDA/controle = 0). Onafhankelijke variabelen werden a priori geselecteerd op basis van biologische plausibiliteit en bewijs uit eerdere studies en omvatten sociodemografische kenmerken (woonplaats, familiegeschiedenis van anemie), fysiologische status (zwangerschap) en dieetvariabelen (inname van rood vlees, gevogelte en citrusvruchten).
Categorische variabelen werden gecodeerd met behulp van dummyvariabelen, en variabelen voor voedingsinname werden geclassificeerd als laag of adequaat op basis van de gerapporteerde consumptiefrequentie (≤2 keer per week vs. >2 keer per week). Alle geselecteerde variabelen werden gelijktijdig in het regressiemodel ingevoerd om hun onafhankelijke associaties te schatten, terwijl er werd gecorrigeerd voor potentiële verstorende factoren. Er werden gecorrigeerde odds ratio's (OR's) met 95% betrouwbaarheidsintervallen (BI's) gerapporteerd, waarbij OR's groter dan 1 duidden op een hogere kans op IDA. Een visuele samenvatting van de OR's en de bijbehorende 95% BI's werd gepresenteerd middels een forest plot, gegenereerd in spreadsheetsoftware.