Onderzoeksartikel

Met hydroxyurea geladen nanostructurele lipide dragers voor verbeterde in vitro cytotoxiciteit en geneesmiddelentoediening

18 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/73012

⸱

22 september 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmaceutics, College of Pharmacy, Jazan University, 2School of Health Sciences, University of Petroleum and Energy Studies, 3Center for Global Health Research, Saveetha Medical College, and Hospitals, Saveetha Institute of Medical and Technical Sciences, Saveetha University

In dit artikel

Samenvatting

In deze studie werden nanostructurele lipide dragers (NLC's) geladen met hydroxyurea ontwikkeld, waarna hun eigenschappen en in vitro anticancer-activiteit werden geëvalueerd. NX-ST vertoonde een hoge inkapselingsefficiëntie, een gecontroleerde afgifte en een grotere cytotoxiciteit tegen MCF-7 cellen (IC₅₀ = 225 µg/mL) dan vrije hydroxyurea (IC₅₀ = 722,57 µg/mL).

Samenvatting

Hydroxyurea (HU) is een gevestigd antikankergeneesmiddel dat wordt gebruikt voor de behandeling van chronische myelogene leukemie, maar de therapeutische effectiviteit ervan wordt beperkt door snelle klaring, variabele biologische beschikbaarheid en dosisgerelateerde toxiciteit. Deze studie had tot doel de toediening van HU te verbeteren door hydroxyurea-geladen nanostructurele lipide dragers (NLC's) te ontwikkelen met behulp van verschillende combinaties van surfactanten. Drie formuleringen, waaronder NX-ST (Tween 80–SDS), NX-CT (Cremophor EL–Tween 80) en NX-CS (Cremophor EL–SDS), werden bereid en geëvalueerd op basis van partikelgrootte, polydispersiteitsindex (PDI), zetapotentiaal, inkapselingsefficiëntie (EE) en cytotoxische activiteit. De formuleringen vertoonden partikelgroottes op nanoschaal (67,377 tot 110 nm), een acceptabele PDI (<0,35), een hoog zetapotentiaal (-30,033 tot -46,433 mV) en een goede inkapselingsefficiëntie (78,189 tot 86,626%), wat wijst op stabiele formuleringen. Het afgifteprofiel vertoonde een ongeveer lineaire toename over de periode van 0,5–6 u, gevolgd door een plateau. Cytotoxiciteitsstudies lieten een verhoogde antikankeractiviteit zien in vergelijking met vrije HU (IC₅₀ = 722,57 µg/mL). De formulering NX-ST vertoonde de hoogste cytotoxiciteit (IC₅₀ = 225 ± 21,47 µg/mL), wat consistent is met een verbeterde geneesmiddeltoediening; de bijdrage van een verbeterde cellulaire opname wordt verondersteld en is in deze studie niet direct gemeten. De bestudeerde NLC-formuleringen, in het bijzonder NX-ST, verbeterden effectief de therapeutische prestaties van HU door de stabiliteit, toedieningsefficiëntie en antikankeractiviteit te optimaliseren.

Inleiding

Kanker blijft een van de belangrijkste doodsoorzaken wereldwijd, met bijna 20 miljoen nieuwe gevallen en 9,7 miljoen kankergerelateerde sterfgevallen in 2022. Tegen 2040 wordt verwacht dat deze aantallen aanzienlijk zullen stijgen, tot 29,9 miljoen nieuwe gevallen en 15,3 miljoen kankergerelateerde sterfgevallen per jaar1,2. De meeste huidige behandelingen met antikankermedicijnen maken gebruik van zeer toxische verbindingen, maar hun systemische toxiciteit beperkt de therapeutische concentraties die kankerkweefsel effectief kunnen bereiken3. Om deze uitdaging aan te pakken, onderzoeken wetenschappers nieuwe methoden voor medicijnafgifte om de tumortargeting te verbeteren en de therapeutische index van chemotherapie te verhogen.

Een cruciaal gebied binnen het oncologisch onderzoek is de ontwikkeling van geavanceerde systemen voor geneesmiddelentoediening om de therapeutische effectiviteit te verhogen en tegelijkertijd de bijwerkingen van antikankergeneesmiddelen te minimaliseren. Hydroxyurea (HU), een gevestigd chemotherapeuticum en antineoplastisch middel, is een hoeksteen in de behandeling van sikkelcelziekte, chronische myeloïde leukemie en bepaalde solide tumoren vanwege het vermogen om de productie van foetaal hemoglobine te verhogen en de DNA-synthese te remmen door ribonucleotide-reductase te targeten4,5. Ondanks de klinische effectiviteit wordt het therapeutische potentieel van HU belemmerd door uitdagingen zoals snelle klaring, variabele biobeschikbaarheid en een smalle therapeutische index, wat vaak leidt tot variabele farmacokinetiek en dosisafhankelijke toxiciteiten, waaronder myelosuppressie, gastro-intestinale stoornissen en potentiële secundaire maligniteiten6,7. Om deze beperkingen aan te pakken, zijn geavanceerde systemen voor geneesmiddelentoediening, waaronder nanogestructureerde lipide dragers (NLC's), naar voren gekomen als veelbelovende strategieën om de stabiliteit, oplosbaarheid en gecontroleerde afgifte van hydroxyurea te verbeteren, waardoor het veiligheids- en effectiviteitsprofiel wordt geoptimaliseerd8.

NLC's zijn een type lipide-gebaseerd nanodeeltje dat verschillende voordelen biedt ten opzichte van traditionele systemen voor geneesmiddelentoediening. Ze bestaan uit een vaste lipidematrix die gestabiliseerd wordt door surfactanten en kunnen zowel hydrofiele als lipofiele geneesmiddelen inkapselen. Deze unieke structuur maakt een verbeterde drug-loading capaciteit, gecontroleerde afgifte en verhoogde stabiliteit mogelijk9,10. De bereiding van NLC's omvat doorgaans technieken zoals homogenisatie onder hoge druk en ultrasonicatie, die de vorming van nanodeeltjes met een nauwe grootteverdeling en een hoge inkapselingsefficiëntie faciliteren11,12. De inkapseling van het geneesmiddel in NLC's verbetert niet alleen de oplosbaarheid en stabiliteit, maar vergemakkelijkt ook de gerichte afgifte aan kankercellen, waardoor off-target effecten worden geminimaliseerd. Recente studies hebben het potentieel van met geneesmiddelen beladen NLC's aangetoond om de therapeutische index en de sustained-release profielen van het geneesmiddel te verbeteren13,9. Dit mechanisme van gecontroleerde afgifte is cruciaal voor het handhaven van therapeutische geneesmiddelconcentraties over langere perioden, waardoor de toedieningsfrequentie wordt verlaagd en de therapietrouw van de patiënt verbetert14. Studies hebben aangetoond dat NLC's beladen met anticancer geneesmiddelen zoals gefitinib15, capecitabine16 en imatinib14 de werkzaamheid van het geneesmiddel aanzienlijk verhogen door de cellulaire opname en accumulatie in kankercellen te verbeteren. Zo hebben met gefitinib beladen NLC's een 4,5-voudige toename in cytotoxiciteit tegen kankercellen laten zien vergeleken met het vrije geneesmiddel, wat het potentieel van NLC's benadrukt om de therapeutische index van tyrosinekinaseremmers die worden gebruikt voor de behandeling van niet-kleincellige longkanker en colorectale kanker te verhogen. Op soortige wijze verbeteren met capecitabine beladen NLC's de stabiliteit van het geneesmiddel en de gecontroleerde afgifte, wat essentieel is voor het handhaven van therapeutische concentraties en het verminderen van systemische toxiciteit. Met imatinib beladen NLC's profiteren ook van een verbeterde gerichte afgifte, waardoor off-target effecten worden verminderd en de uitkomsten voor de patiënt bij de behandeling van chronische myeloïde leukemie verbeteren. Deze eigenschappen maken NLC's sterke kandidaten voor klinische studies en voor potentiële toepassingen in de gepersonaliseerde geneeskunde door behandelingen af te stemmen op individuele patiëntprofielen. De stabiliteitsevaluatie van met geneesmiddelen beladen NLC's is een ander belangrijk aspect dat hun klinische toepasbaarheid beïnvloedt. Stabiliteitsstudies houden vaak in dat de formuleringen worden blootgesteld aan verschillende omgevingscondities om hun fysieke integriteit in de loop van de tijd te beoordelen.

Versnelde stabiliteitstests hebben aangetoond dat deze NLC's hun structurele integriteit en druggehalte gedurende langere perioden behouden, wat hun potentieel voor langdurige bewaring en gebruik benadrukt4,17.

Ondanks deze voordelen beïnvloedt de selectie van het surfactant de fysisch-chemische eigenschappen en prestaties van nanostructureerde lipide dragers (NLC's) aanzienlijk. Lipide-surfactantsystemen spelen een belangrijke rol bij het verbeteren van de stabiliteit van nanodeeltjes, de inkapseling van geneesmiddelen en de biologische beschikbaarheid18,19,20. Er zijn echter beperkte studies gedaan naar hoe verschillende combinaties van surfactants de fysisch-chemische kenmerken en cytotoxische activiteit van hydroxyurea-geladen NLC's beïnvloeden. Daarom is dit onderzoek uitgevoerd om hydroxyurea-geladen NLC's (NANOXURIA) te ontwikkelen met behulp van verschillende surfactantsystemen en om systematisch te evalueren hoe deze variaties de fysisch-chemische stabiliteit, het bewaaringsgedrag en de antikankeractiviteit beïnvloeden. Door een duidelijk verband vast te stellen tussen het ontwerp van de formulering en de therapeutische prestaties, beoogt dit werk een effectief op nanodragers gebaseerd dispersiesysteem (colloïdale dispersie) te bieden om hydroxyurea-geladen NLC-formuleringen te karakteriseren en hun in vitro drug-release, cytotoxiteit en kortetermijn-bewaarstabiliteit te evalueren, waarbij fundamentele fysisch-chemische en in vitro prestatiegegevens worden gegenereerd om toekomstige HU-toediening te ondersteunen, zonder het geneesmiddelmolecuul zelf te wijzigen.

Protocol

Deze studie omvatte geen menselijke deelnemers, weefsels van menselijke oorsprong of levende dieren. Alle biologische evaluaties werden in vitro uitgevoerd met gebruik van de commercieel verkrijgbare MCF-7 menselijke borstkankercellijn, verkregen van de American Type Culture Collection (ATCC). Bijgevolg was goedkeuring van een institutionele toetsingscommissie (IRB) of ethische commissie niet van toepassing op dit werk.

Materialen

Hydroxyurea (HU) (zuiverheid ≥99%), natriumdodecylsulfaat (SDS) (anionisch, zuiverheid 90%), Tween-80 (T80) (niet-ionisch, oliezuur ≥58%), Cremophor EL (niet-ionisch, afgeleid van castorolie, zuiverheid ≥98%), stearinezuur (zuiverheid 95–106%) en sesamolie werden gebruikt zoals ontvangen. Alle overige gebruikte chemicaliën en reagentia waren van analytische kwaliteit. Volledige leveranciers- en catalogusgegevens voor alle materialen en apparatuur zijn opgenomen in de Tabel met materialen.

Bereiding van hydroxyureum-geladen NLC's (NANOXURIA)

De bereiding van NANOXURIA omvat drie stappen, namelijk de bereiding van de lipidefase, de incorporatie van het geneesmiddel en de bereiding van de waterfase. De lipidefase werd verkregen als een smelt van een mengsel van stearinezuur (500 mg) en sesamolie (250 µl). De smelt werd verkregen in een bekerglas op een warmteplaat. De nauwkeurig afgewogen hoeveelheid HU (150 mg) werd gemengd met de lipidefase. De waterfase werd bereid door surfactantia (Tabel 1) op te lossen in water (Millipore) (25 mL). De surfactantoplossing werd verhit tot dezelfde temperatuur als de lipidefase (70°C) om voortijdige stolling te voorkomen. De warme waterfase werd geleidelijk toegevoegd aan de gesmolten lipidefase onder hoge snelheid roeren met een homogenisator. Het mengsel werd 20 min lang op hoge snelheid (6.000 rpm) gehomogeniseerd om een stabiele warme emulsie te creëren. De warme emulsie werd onder continu roeren afgekoeld tot kamertemperatuur. Tijdens het afkoelen stolt de lipidefase, waardoor de NLC's worden gevormd. De bereide HU-beladen NLC's werden bewaard voor verdere karakterisering en toepassing.

Karakterisering en evaluatie

Deeltjesgrootte, zetapotentieel (ZP) en polydispersiteitsindex (PDI)

De analyse van de partikelgrootte en de polydispersiteitsindex (PDI) van NANOXURIA werden bepaald met een Zetasizer Nano ZS90. Dit apparaat werkt op basis van het principe van dynamische lichtverstrooiing (DLS), waarbij de Brownse beweging van partikels in een suspensie wordt gemeten en via de Stokes-Einstein-vergelijking wordt gecorreleerd aan hun hydrodynamische diameter. Naast de grootte en PDI werd de oppervlaktelading van NANOXURIA beoordeeld door het zettapotentiaal (ZP) te meten met hetzelfde instrument. Het zettapotentiaal werd bepaald middels elektroforetische lichtverstrooiing (ELS), waarbij de snelheid van partikels in een aangelegd elektrisch veld wordt geanalyseerd om hun oppervlaktelading te berekenen. Deze parameter is essentieel voor het evalueren van de colloïdale stabiliteit van NANOXURIA. De metingen werden uitgevoerd in een gecontroleerde omgeving, waarbij de verdunde monsters in cuvetten werden geplaatst om compatibiliteit met de optische en elektrische vereisten van het instrument te waarborgen. Om de robuustheid en reproduceerbaarheid van de resultaten te vergroten, werden alle metingen in triplo uitgevoerd.

Morfologie

De morfologie van NANOXURIA werd bestudeerd met een elektronenmicroscoop die zowel in transmissie- als scanmodus werkte. Transmissie-elektronenmicroscopie (TEM) werd gebruikt om de interne structuur en de vorm van de deeltjes waar te nemen, terwijl veldemissie-scanning-elektronenmicroscopie (FE-SEM) werd ingezet om de oppervlaktemorfologie en de deeltjesverdeling te onderzoeken. De monsters werden op passende wijze geprepareerd en geanalyseerd bij geschikte versnellingsspanningen om beelden met een hoge resolutie te verkrijgen. Voor de monsterpreparatie werden NANOXURIA-dispersies verdund met gezuiverd water; voor TEM werd een druppel van de verdunde dispersie op een met koolstof gecoat koperrooster geplaatst, werd het teveel weggedept en werd de film aan de lucht gedroogd bij kamertemperatuur vóór beeldvorming onder hoog vacuüm bij een versnellingsspanning van 60-80 kV. Voor FE-SEM werd een druppel van de verdunde dispersie op een aluminium stub gemonteerd, aan de lucht gedroogd en sputter-gecoat met een dunne geleidende laag voorafgaand aan de beeldvorming bij (1–3 kV). Representatieve micrografieën werden vastgelegd bij verschillende vergrotingen.

Analyse van de inkapselingsrendement voor NANOXURIA-formuleringen

De inkapselingsefficiëntie (EE) van NANOXURIA werd bepaald met de ultrafiltratie-centrifugatietechniek met een Amicon Ultra-2 mL centrifugaalfilter (3 kDa MWCO). Deze methode scheidde niet-ingekapselde HU (ongeveer 6 mg in 1 mL NANOXURIA) van de ingekapselde fractie door te centrifugeren bij 4,000 x g gedurende 20 min bij 25 °C, om een effectieve isolatie te waarborgen. Het filtraat, dat vrije HU bevat, werd verdund met gezuiverd water en geanalyseerd met een UV-Vis-spectrofotometer bij 213 nm om de niet-ingekapselde drug te kwantificeren, met een kalibratiecurve gebaseerd op de wet van Beer-Lambert. De % EE werd als volgt berekend;

figure-protocol-1

In vitro release-studie

Het in vitro afgifteprofiel van HU uit NANOXURIA werd geëvalueerd met de dialysezak-diffusietechniek, een veelgebruikte methode voor het beoordelen van gecontroleerde geneesmiddelafgifte. Dialysezakken (12–14 kDa MWCO) werden 12 u vooraf geweekt in gedestilleerd water om een juiste hydratatie en het verwijderen van conserveermiddelen te waarborgen. Eén uiteinde van de dialysezak werd stevig afgesloten en 2 mL van de NANOXURIA-formulering, gelijk aan 12 mg HU, werd zorgvuldig in de zak gebracht. Het andere uiteinde werd vervolgens strak dichtgeknoopt om lekkage te voorkomen. De dialysezak werd ondergedompeld in een bekerglas met water (50 mL) als afgifte medium. De opstelling werd gehouden op 37 ± 0.5 °C om de lichaamstemperatuur te simuleren en werd met 50 rpm geroerd met een magnetische roerder om een uniforme menging te garanderen en grenslaageffecten te minimaliseren. Op vooraf bepaalde tijdsintervallen (0,5, 1, 2, 4, 6, 12 en 24 u) werden aliquoten van 2 mL uit het afgifte medium onttrokken en onmiddellijk vervangen door een gelijk volume vers, vooraf verwarmd water om sink-condities te handhaven. De verzamelde monsters werden gefilterd door een spuitfilter van 0,45 µm om eventuele particulate materie te verwijderen, zodat de helderheid voor analyse werd gewaarborgd. Het membraanfilter houdt particulaten tegen terwijl opgelost HU kan passeren. Omdat HU vrij wateroplosbaar is, bleef het vrije geneesmiddel in het filtraat, waardoor werd gewaarborgd dat het vastgehouden materiaal bestond uit particulaten en niet uit het vrije geneesmiddel. De gefilterde monsters werden vervolgens geanalyseerd op HU-gehalte met een UV-Vis-spectrofotometer bij een golflengte van 213 nm, wat overeenkomt met de maximale absorptie (λmax) van HU. Er werd een kalibratiecurve opgesteld om de HU-concentraties nauwkeurig te kwantificeren.

Celkweek

De studie werd uitgevoerd met de metastatische menselijke borstkankercellijn MCF-7, verkregen van de American Type Culture Collection (ATCC). De cellen werden onderhouden in RPMI 1640-medium aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS) om de celgroei en levensvatbaarheid te ondersteunen, en 1% penicilline-streptomycine-oplossing om microbiële contaminatie tijdens de kweek te voorkomen. De cellen werden vervolgens geïncubeerd onder standaard fysiologische omstandigheden bij 37 °C in een bevochtigde CO₂-incubator, waarbij het kweekmedium op pH 7.4 werd gehouden. Deze omstandigheden werden gekozen om een optimale celgroei, proliferatie en experimentele betrouwbaarheid te garanderen gedurende de cytotoxiciteitsstudies.

Celviabiliteitsassay (MTT)

De MTT-assay werd uitgevoerd om het vermogen van verschillende NANOXURIA-formuleringen om celdood te induceren te beoordelen16,21. Kort samengevat werden MCF-7-cellen uitgezaaid in 96-wells platen met een dichtheid van 1 x 104 cellen/mL en 24 u geïncubeerd in een CO₂-incubator om een goede celhechting en groei mogelijk te maken. Onbehandelde cellen dienden als negatieve controle, terwijl wells die alleen kweekmedium bevatten als blanco controles werden gebruikt. Na incubatie werd het kweekmedium vervangen door vers medium met verschillende concentraties van de testformuleringen, tot maximaal 200 µg/mL. De behandelde platen werden verder 72 u geïncubeerd onder standaard kweekcondities. Na de behandeling werd 20 µL MTT-reagens (5 mg/mL) aan elke well toegevoegd en nogmaals 4 u geïncubeerd om de vorming van intracellulaire formazankristallen in metabolisch actieve cellen mogelijk te maken. Vervolgens werd 100 µL dimethylsulfoxide (DMSO) toegevoegd om de kristallen op te lossen, wat resulteerde in een violette oplossing. De absorptie werd gemeten bij 570 nm met een microplate reader (SpectroStar Nano). De celviabiliteit (%) werd berekend ten opzichte van de onbehandelde controlegroep met behulp van de verkregen absorptiewaarden.

figure-protocol-2

Stabiliteitsstudie

De stabiliteit van NANOXURIA werd systematisch beoordeeld over een periode van 3 maanden onder gecontroleerde bewaarcondities om de geschiktheid voor langdurig gebruik te evalueren. Elke NANOXURIA-formulering werd verdeeld in luchtdichte, amberkleurige glazen containers om blootstelling aan licht en vocht te minimaliseren. De containers werden bewaard bij een constante kamertemperatuur van 25 ± 2 °C en een gekoelde temperatuur van 4 ± 2 °C. Monsters werden periodiek geëvalueerd op vooraf vastgestelde intervallen (1, 2 en 3 maanden) op fysieke en fysisch-chemische stabiliteit. Een nulmeting werd onmiddellijk na bereiding en vóór bewaring uitgevoerd en werd aangemerkt als 0 maanden (initieel). De fysieke beoordelingen bestonden uit visuele inspectie op veranderingen in het uiterlijk, waaronder tekenen van agglomeratie, sedimentatie, fasescheiding, kleurverandering (bijv. van gebroken wit naar geel), veranderingen in consistentie (bijv. viscositeit of textuur) en geur (bijv. ranzigheid door lipide-oxidatie). Voor de fysisch-chemische stabiliteit werden belangrijke karakteriseringsparameters gemeten, waaronder de deeltjesgrootte, de polydispersiteitsindex (PDI) en het zetapotentiaal (ZP).

Statistische analyse

In deze studie worden alle experimentele resultaten uitgedrukt als gemiddelde waarden ± standaarddeviatie (SD) (n = 3) om de centrale tendens en variabiliteit van de gegevens weer te geven. Statistische analyses werden uitgevoerd om de formulering te evalueren met behulp van een gepaarde t-test en om verschillen tussen formuleringen te vergelijken met behulp van een eenwegvariantieanalyse (ANOVA), gevolgd door de multiple-comparison test van Tukey. Een p-waarde < 0,05 werd beschouwd als statistisch significant. Statistische analyses werden uitgevoerd met GraphPad Prism versie 10.

Resultaten

Fysisch-chemische eigenschappen

De fysisch-chemische eigenschappen van de NANOXURIA-formuleringen, waaronder de deeltjesgrootte, de polydispersiteitsindex (PDI), het zetapotentiaal (ZP), de morfologie en de inkapselingsefficiëntie (EE), worden weergegeven in Tabel 2. De morfologische beoordeling via TEM en SEM, aangevuld met grafieken van de deeltjesgrootte- en zetapotentiaalverdeling, wordt gepresenteerd in Figuur 1, 2 en 3. Een vergelijking van de PDI voor verschillende surfactantcombinaties wordt weergegeven in Figuur 4.

Vrijgavestudie

De in vitro release-studie van NANOXURIA-formuleringen werd uitgevoerd om te bepalen hoe verschillen in formulering het drug-release-profiel over 24 h beïnvloeden (Figuur 5). NX-CS vertoonde de snelste release, beginnend bij 55,90% na 0,5 h en oplopend tot 104,05% na 24 h (waarden >100% kunnen wijzen op experimentele variabiliteit of volledige release met een lichte overschatting). Het release-profiel vertoonde een nagenoeg lineaire toename van 0,5 tot 6 h, gevolgd door een plateau. NX-CT vertoonde de traagste, meest gecontroleerde release, beginnend bij 46,18% na 0,5 h en oplopend tot 82,99% na 24 h, met een plateau tussen 2–12 h (54,51% tot 59,38%) gevolgd door een latere toename. NX-ST vertoonde een intermediair release-profiel, beginnend bij 54,05% na 0,5 h, piekend op 90,63% na 12 h, en licht dalend naar 86,23% na 24 h. In het algemeen volgde de cumulatieve release de volgorde: NX-CS > NX-ST > NX-CT. NX-CS en NX-ST vertoonden een sterkere initiële burst release, terwijl NX-CT een vertraagde release vertoonde. De release-kinetiek wees op een snelle release voor NX-CS, een sustained release voor NX-CT en een bifasische release voor NX-ST.

Cytotoxiciteitsassay

De in vitro cytotoxiciteit van NANOXURIA formuleringen werd geëvalueerd tegen MCF-7 borstkankercellen met behulp van de MTT-assay, waarbij  Tabel 3 de IC₅₀-waarden specificeert. NX-ST vertoonde de hoogste cytotoxiciteit, met een geschatte IC₅₀ van 225 ± 21,47 µg/mL (geëxtrapoleerd), wat wijst op een superieure anticancerale activiteit. In contrast vertoonden NX-CS en NX-CT een lagere cytotoxiciteit, met IC₅₀-waarden die 300 µg/mL overschreden. Vrije hydroxyurea (HU) vertoonde de minste cytotoxiciteit, met een IC₅₀ van 722,57 µg/mL. Omdat de IC₅₀-waarden voor NX-CS en NX-CT slechts werden gerapporteerd als zijnde hoger dan 300 µg/mL, kan hun cytotoxiciteit ten opzichte van elkaar en ten opzichte van vrije HU (722,57 µg/mL) niet worden vastgesteld op basis van de huidige gegevens; alleen NX-ST kon stellig worden gerangschikt als meer cytotoxisch dan vrije HU. Deze resultaten geven aan dat NLC-formuleringen de anticancerale activiteit van HU aanzienlijk verbeteren in vergelijking met het vrije geneesmiddel.

Statistische correlatie tussen fysisch-chemische parameters en cytotoxiciteit

Alle bestudeerde parameters zijn gecorreleerd en worden weergegeven in Figuur 6. Statistische analyses onthulden significante verschillen tussen de HU-geladen NLC's (NX-ST, NX-CT, NX-CS) in zetapotentieel, inkapselingsefficiëntie (EE) en cytotoxiciteit (IC₅₀) [F(2,12) = 6,45, p = 0,014], maar niet in partikelgrootte of PDI [F(2,12) = 1,27, p = 0,31]. NX-ST vertoonde een optimale cytotoxiciteit met een matige EE, terwijl NX-CS en NX-CT een hogere EE maar een zwakkere cytotoxiciteit vertoonden. IC50-waarden die de bovengrens van het geteste concentratiebereik overschreden (>300 µg/mL) kregen een waarde van 300 µg/mL toegewezen voor de explorerende correlatieanalyse. Explorerende Spearman-correlatieanalyse toonde een positieve associatie aan tussen zetapotentieel en IC₅₀ (ρ = 0,866, p = 0,333). Hieruit volgt dat formuleringen met een minder negatief zetapotentieel de neiging hadden om hogere IC₅₀-waarden te vertonen, terwijl de sterker negatief geladen NX-ST-formulering een grotere cytotoxische activiteit vertoonde.

Stabiliteitsstudie

Stabiliteit van de deeltjesgrootte

Bij 25 °C nam de deeltjesgrootte van alle NANOXURIA-formuleringen toe gedurende de drie maanden durende bewaarperiode, waarbij duidelijke trends zichtbaar waren (Figuur 7). NX-ST, 110 nm (1 maand), bleef relatief stabiel tijdens de eerste twee maanden (106,4 nm), maar nam toe tot 150,6 nm in de derde maand. NX-CT, beginnend bij 91,9 nm, vertoonde een geleidelijke toename tot 102,2 nm in twee maanden, gevolgd door een sterke stijging naar 168,3 nm na drie maanden. NX-CS vertoonde de grootste verandering, met een toename van aanvankelijk 67,3 nm naar 171,06 nm in de derde maand. Over het algemeen vertoonden alle formuleringen een groei van de deeltjesgrootte bij 25 °C, waarbij de mate van toename volgde op de volgorde: NX-CS > NX-CT > NX-ST.

Bij 4 °C vertoonden de NANOXURIA-formuleringen een verbeterde stabiliteit in vergelijking met 25 °C, met kleinere toenames in de deeltjesgrootte over de opslagperiode van drie maanden (Figuur 7). NX-ST behield een relatieve stabiliteit, met deeltjesgrootten van 110 nm na één maand, 102 nm na twee maanden en 120,96 nm na drie maanden. NX-CT vertoonde een geleidelijke toename in deeltjesgrootte van 91,9 nm na één maand naar 116,7 nm na twee maanden en 128,5 nm na drie maanden. NX-CS vertoonde de minste variatie, waarbij de grootte toenam van aanvankelijk 67,3 nm naar 74,75 nm na twee maanden en 89,3 nm na drie maanden. Over het algemeen volgde de groei van de deeltjesgrootte bij 4 °C de trend: NX-CT > NX-ST > NX-CS, wat wijst op een verbeterde stabiliteit onder gekoelde omstandigheden.

PDI-stabiliteit

Bij 25 °C vertoonde de PDI van de NANOXURIA-formuleringen verschillende trends over de opslagperiode van drie maanden (Figuur 8). NX-ST behield relatief stabiele PDI-waarden gedurende de studie, wat duidt op een consistente deeltjesgrootteverdeling. NX-CT vertoonde een toename van de PDI in de tweede maand (0,342), gevolgd door een afname naar 0,248 in de derde maand. NX-CS vertoonde een progressieve toename van de PDI in de loop van de tijd, wat wijst op een geleidelijk verlies van de uniformiteit van de deeltjesgrootte. Over het algemeen demonstreerde NX-ST de meest stabiele verdeling, vertoonde NX-CT een tijdelijke variabiliteit en vertoonde NX-CS een toenemende heterogeniteit.

Bij 4 °C vertoonden de PDI-waarden van de NANOXURIA-formuleringen verschillende trends gedurende de opslagperiode van drie maanden (Figuur 8). NX-ST vertoonde relatief stabiele PDI-waarden, die afnamen van 0,347 na één maand naar 0,269 na twee maanden, gevolgd door een lichte stijging naar 0,349 na drie maanden. NX-CT vertoonde een progressieve toename van de PDI van 0,221 na één maand naar 0,331 na drie maanden, wat wijst op een geleidelijk verlies van partikeluniformiteit. NX-CS vertoonde eveneens een stijgende trend in PDI over de tijd, wat duidt op een verminderde homogeniteit. Over het geheel genomen behield NX-ST de meest stabiele distributie, terwijl NX-CT en NX-CS een toenemende heterogeniteit vertoonden.

Zetapotentiaalstabiliteit

Bij 25 °C vertoonde het zetapotentieel (ZP) van de NANOXURIA-formuleringen duidelijke trends over de opslagperiode van drie maanden (Figuur 9). NX-ST vertoonde een initiële ZP van −46,43 mV na één maand, die afnam tot −39,37 mV na twee maanden en toen toenam tot −52,33 mV in de derde maand. NX-CT vertoonde een geleidelijke toename van de negativiteit, waarbij de waarde veranderde van −30,76 mV na één maand naar −35,66 mV na twee maanden en −37,13 mV na drie maanden. NX-CS vertoonde een toename van de ZP-negativiteit van aanvankelijk −30,03 mV naar −39,6 mV na twee maanden en −52,47 mV na drie maanden. Over het algemeen vertoonden alle formuleringen afnemende ZP-waarden na verloop van tijd, waarbij NX-ST en NX-CS grotere magnitudes vertoonden dan NX-CT.

Bij 4 °C vertoonden de zeta-potentialen (ZP) van de NANOXURIA-formuleringen duidelijke trends over de opslagperiode van drie maanden (Figuur 9). NX-ST behield gedurende de gehele studie consistent hoge negatieve ZP-waarden. NX-CT vertoonde een geleidelijke toename van de ZP-negativiteit, beginnend bij −30,76 mV en iets negatiever wordend tegen de derde maand. NX-CS vertoonde een lichte afname van de ZP-negativiteit, van aanvankelijk −30,03 mV naar −28,8 mV in drie maanden.

Beschikbaarheid van gegevens:

De gegevens die de bevindingen van deze studie ondersteunen, zijn beschikbaar in het artikel. De ruwe datasets die tijdens de huidige studie zijn gegenereerd en geanalyseerd, zijn beschikbaar in het aanvullende bestand

figure-results-1
Figuur 1: Morfologische en fysisch-chemische karakterisering van NX-ST. (A) Scanningelektronenmicroscopie (SEM) beeld. (B) Transmissie-elektronenmicroscopie (TEM) beeld. (C) Deeltjesgrootteverdeling (108.3 nm; PDI = 0.336) (n = 1). (D) Zeta-potentiaalverdeling (−48.8 mV) (n = 1). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-2
Figuur 2: Morfologische en fysisch-chemische karakterisering van NX-CT. (A) SEM-afbeelding. (B) TEM-afbeelding. (C) Deeltjesgrootteverdeling (91.87 nm; PDI = 0.235) (n = 1). (D) Zetapotentiaalverdeling (−31.3 mV) (n = 1). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-3
Figuur 3: Morfologische en fysisch-chemische karakterisering van NX-CS. (A) SEM-afbeelding. (B) TEM-afbeelding. (C) Deeltjesgrootteverdeling (74.72 nm; PDI = 0.244) (n = 1). (D) Zetapotentiaalverdeling (−36.8 mV) (n = 1). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-4
Figuur 4: Vergelijking van de PDI tussen NANOXURIA-formuleringen met verschillende surfactantcombinaties. De PDI-waarden worden weergegeven voor de formuleringen NX-ST, NX-CT en NX-CS. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-5
Figuur 5: In vitro hydroxyureavrijgave uit NANOXURIA-formuleringen. De cumulatieve hydroxyureavrijgave uit NX-CS, NX-CT en NX-ST wordt weergegeven over 24 h. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-6
Figuur 6: Vergelijking van fysisch-chemische parameters en cytotoxiciteit tussen NANOXURIA-formuleringen. Radarchart waarin de deeltjesgrootte, PDI, zetapotentieel (ZP), inkapselingsefficiëntie (EE) en IC₅₀ voor NX-ST, NX-CS en NX-CT worden vergeleken. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-7
Figuur 7: Effect van bewaartemperatuur en -duur op de deeltjesgrootte van NANOXURIA. (A) Deeltjesgrootte tijdens bewaring bij 25 °C. (B) Deeltjesgrootte tijdens bewaring bij 4 °C. (C) Vergelijking van de deeltjesgrootte tussen 4 °C en 25 °C na 2 en 3 maanden. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-8
Figuur 8: Effect van bewaartemperatuur en bewaringstermijn op de PDI van NANOXURIA. (A) PDI tijdens bewaring bij 25 °C. (B) PDI tijdens bewaring bij 4 °C. (C) Vergelijking van de PDI tussen 4 °C en 25 °C na 2 en 3 maanden. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-9
Figuur 9: Effect van bewaartemperatuur en bewaarduur op het zeta-potentieel van NANOXURIA. (A) Zeta-potentieel tijdens bewaring bij 25 °C. (B) Zeta-potentieel tijdens bewaring bij 4 °C. (C) Vergelijking van het zeta-potentieel tussen 4 °C en 25 °C na 2 en 3 maanden. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

FormuleringenTween-80 (µL)*Natriumdodecylsulfaat (SDS) (mg)Cremophor EL (µL)#
NX-ST50100-
NX-CT50-100
NX-CS-50100
Dichtheid (g/ml) = (1,07*, 1,05#)

Tabel 1: Surfactant-samenstelling van NANOXURIA-formuleringen. Hoeveelheden Tween-80, natriumdodecylsulfaat (SDS) en Cremophor EL werden gebruikt voor de bereiding van NX-ST-, NX-CT- en NX-CS-formuleringen.

FormuleringenDeeltjesgrootte (d.nm) (n = 3) (± SD)PDI (n = 3) (± SD)ZP (mV) (n = 3) (± SD) EE (%) (n = 3) (± SD)
NX-ST110 ± 1.9970.347 ± 0.011-46.433 ± 8.40478.189 ± 3.49
NX-CT91.947 ± 0.2150.221 ± 0.015-30.767 ± 0.47384.638 ± 5.0
NX-CS67.377 ± 7.1580.302 ± 0.091-30.033 ± 5.86286.626 ± 4.676

Tabel 2: Physicochemische karakterisering van NANOXURIA-formuleringen. Deeltjesgrootte, polydispersiteitsindex (PDI), zetapotentieel (ZP) en inkapselingsefficiëntie (EE) van NX-ST, NX-CT en NX-CS bij 25 °C. Gegevens worden weergegeven als gemiddelde ± SD (n = 3).

FormuleringenIC50 (µg/mL)IC50 (µM)
NX-ST225 ± 21.472960
NX-CS>300-
NX-CT>300-
HU722.579500

Tabel 3: In vitro cytotoxiciteit van NANOXURIA-formuleringen en vrije hydroxyureum. IC₅₀-waarden van NX-ST, NX-CS, NX-CT en vrij hydroxyureum (HU) tegen MCF-7-cellen, uitgedrukt in µg/mL en µM.

Aanvullend bestand 1: Ruwe gegevens en berekeningen voor de karakterisering van nanostructurele lipide dragers geladen met hydroxyurea. Het bestand bevat de onderliggende experimentele gegevens en berekeningen voor de NX-ST, NX-CT en NX-CS formuleringen, inclusief partikelgrootte, polydispersiteitsindex, zetapotentiaal, inkapselingsefficiëntie, metingen van de geneesmiddelvrijgave en analyses voor de vergelijking van formuleringen.Klik hier om dit bestand te downloaden.

Discussie

Voorgestelde aanpak en belangrijkste bevindingen

In de huidige studie is NANOXURIA ontwikkeld met behulp van een methode voor hete homogenisatie. Stearinezuur werd gebruikt als vast lipide, en de bereidingstemperatuur werd gehandhaafd op ongeveer 70 °C, wat nauw aansluit bij het smeltpunt van stearinezuur (~69.3 °C), om volledige smelting van de lipiden en een efficiënte homogenisatie te waarborgen, terwijl onnodige thermische blootstelling van HU en de surfactanten werd geminimaliseerd22. De surfactantsystemen werden selected op basis van hun hydrofiel-lipofiele balanswaarde (HLB), biocompatibiliteit en geschiktheid voor de bereiding van NLC. Voorlopige formulatieproeven werden gebruikt om surfactanteconcentraties te identificeren die stabiele nanodispersies produceren met een kleine deeltjesgrootte en een lage PDI, waarbij overmatige concentraties die de stabiliteit of cytocompatibiliteit nadelig zouden kunnen beïnvloeden, werden vermeden. De formulaties werden vóór de deeltjesgrootteanalyse adequaat verdund met water van hoge zuiverheid om meervoudige verstrooiingseffecten te minimaliseren, die een nauwkeurige bepaling van de deeltjesgrootte en de grootteverdeling kunnen beïnvloeden23.

De drie formuleringen, NX-ST, NX-CT en NX-CS, verschilden hoofdzakelijk in hun surfactantsamenstelling. NX-ST bevatte T80 en SDS, NX-CT bevatte Cremophor EL en T80, en NX-CS bevatte Cremophor EL en SDS. Deze formuleringsstrategie maakte het mogelijk om de effecten van non-ionische en ionische surfactants, alsook hun concentraties, op de fysisch-chemische kenmerken van HU-geladen NLC's te evalueren. De resultaten toonden duidelijke verschillen aan in partikelgrootte, PDI, ZP, EE, drug-releasegedrag en cytotoxiciteit tussen de formuleringen, wat aangeeft dat de keuze van de surfactant een belangrijke bepalende factor is voor de prestaties van NLC's.

De partikelgrootte verschilde significant tussen de formuleringen (p < 0,05), volgens de volgorde NX-CS < NX-CT < NX-ST. Partikelgrootte is een belangrijke determinant voor de prestaties van nanodragers, omdat kleinere partikels een groter oppervlak kunnen bieden en de dispersiestabiliteit, cellulaire interacties, biodistributie en het drug-release-gedrag beïnvloeden24,25. NX-CS produceerde de kleinste partikels, wat geassocieerd kan worden met de hoge emulgeerefficiëntie van Cremophor EL in combinatie met de gematigde concentratie SDS. Cremophor EL kan de vorming van kleinere druppels faciliteren door de grensvlakspanning te verlagen, terwijl SDS bijdraagt aan elektrostatische stabilisatie. De lagere SDS-concentratie die in NX-CS werd gebruikt in vergelijking met NX-ST kan voldoende grensvlakstabilisatie hebben geboden zonder de overmatige grensvlakeffecten te veroorzaken die gepaard gaan met de hogere SDS-concentratie26,27,28.

NX-CT produceerde een gemiddelde partikelgrootte. De combinatie van Cremophor EL en T80 levert twee niet-ionische surfactanten met complementaire interfaciale en sterische stabilisatie-eigenschappen. Cremophor EL draagt bij aan een sterke emulsificatie, terwijl T80 een sterische barrière rond de partikels kan vormen en coalescentie kan verminderen29,30,31. De afwezigheid van een ionische surfactant voorkomt bovendien sterke lading-gemedieerde interacties tijdens de partikelvorming. In tegenstelling hiertoe vertoonde NX-ST de grootste partikelgrootte. Hoewel SDS een sterke emulgerende surfactant is, kan de relatief hoge concentratie in NX-ST de interfaciale omgeving en het groeigedrag van de partikels hebben beïnvloed. T80 zorgt voor sterische stabilisatie, maar het gecombineerde effect van T80 en de hogere SDS-concentratie kan hebben geleid tot een minder gunstige balans tussen emulsificatie en stabilisatie dan die bereikt in NX-CS.

De morfologische studies ondersteunden verder de vorming van nanoschaal lipide dragers. SEM en TEM toonden hoofdzakelijk sferische tot bijna-sferische deeltjes, waarbij de waargenomen morfologie grotendeels consistent was met de door DLS bepaalde deeltjesgrootten. Verschillen tussen microscopische en DLS-metingen zijn te verwachten, omdat SEM gedroogde deeltjes onderzoekt, terwijl DLS de hydrodynamische diameter van deeltjes meet samen met hun bijbehorende hydratatie- en surfactantlagen. De gecombineerde microscopische en DLS-bevindingen ondersteunen dus de succesvolle vorming van nanoschaal NLC-systemen.

De PDI leverde aanvullende informatie over de uniformiteit van de partikelpopulaties. NX-CT vertoonde de smalste partikelgrootteverdeling, terwijl NX-ST de hoogste gemiddelde PDI vertoonde. NX-CS had een tussenliggende gemiddelde PDI, maar een grotere variabiliteit tussen herhaalde metingen. In het bijzonder geven de replikaatwaarden voor NX-CS aan dat deze formulering een grotere variabiliteit vertoonde dan die voor NX-ST en NX-CT. De algemene PDI-trend was NX-CT < NX-CS < NX-ST, hoewel het gerapporteerde verschil niet statistisch significant was (p > 0.05). De relatief lage PDI van NX-CT kan gerelateerd zijn aan de gecombineerde sterische stabilisatie geboden door Cremophor EL en T80. Beide surfactanten zijn niet-ionisch en kunnen de partikelinterface stabiliseren zonder sterke elektrostatische interacties te introduceren. Cremophor EL vergemakkelijkt de emulsificatie, terwijl T80 sterische bescherming biedt, wat potentieel een homogenere partikelpopulatie bevordert32,33. De hogere PDI van NX-ST kan de invloed van de hogere SDS-concentratie weerspiegelen. SDS zorgt voor elektrostatische afstoting, maar veranderingen in de surfactantconcentratie kunnen ook de micellisatie en interfaciale organisatie beïnvloeden, wat mogelijk bijdraagt aan heterogeniteit in de partikelgrootte34,35,36. NX-CS vertoonde een tussenliggende PDI-waarde, wat consistent is met de gecombineerde effecten van Cremophor EL en een lagere SDS-concentratie37.

De formuleringen verschilden ook in oppervlaktelading. NX-ST vertoonde de hoogste negatieve ZP, wat consistent is met de aanwezigheid van de hogere SDS-concentratie, gevolgd door NX-CT en NX-CS. De hogere negatieve oppervlaktelading van systemen die SDS bevatten is te verwachten, aangezien SDS een anionische surfactant is. De ZP-waarden geven daarom aan dat SDS wezenlijk bijdroeg aan de oppervlaktelading van de NLC's, terwijl de niet-ionische surfactants voornamelijk bijdroegen aan sterische stabilisatie. De ZP-trend was NX-ST > NX-CT > NX-CS (p < 0,05). Deze verschillen mogen echter niet uitsluitend worden toegeschreven aan de surfactantsamenstelling, aangezien residuele vrije surfactant, ionsterkte en veranderingen in de lipide-surfactantorganisatie de gemeten ZP ook kunnen beïnvloeden38,39,40.

De inkapselingsefficiëntie demonstreerde verder de invloed van de samenstelling op de retentie van HU. Alle formuleringen vertoonden een relatief hoge EE (>75%), wat wijst op een succesvolle incorporatie van HU in de NLC-systemen. NX-CS vertoonde de hoogste EE, gevolgd door NX-CT en NX-ST, met een significant verschil tussen de formuleringen (p < 0,05). Cremophor EL kan hebben bijgedragen aan een efficiënte grensvlakstabilisatie en geneesmiddelretentie, terwijl de matige SDS-concentratie in NX-CS mogelijk voor aanvullende stabilisatie heeft gezorgd zonder de potentieel verstorende effecten die geassocieerd worden met de hogere SDS-concentratie in NX-ST41,42,43. Aangezien HU echter hydrofiel is, is het onwaarschijnlijk dat het volledig is opgelost binnen de lipidematrix. HU kan in plaats daarvan aanwezig zijn als een fijn gedispergeerd geneesmiddel, geassocieerd met het lipide-watergrensvlak, of ondergebracht in de imperfecte lipidematrix en de surfactantrijke grensvlakregio.

De afgifteprofielen vertoonden formulatieafhankelijk gedrag, waarbij de cumulatieve HU-afgifte na 24 h de volgorde volgde NX-CS > NX-ST > NX-CT . NX-CS vertoonde een relatief snelle afgifte met een initiële burst gevolgd door een plateau, wat consistent is met kinetiek die lijkt op eerste-orde, terwijl NX-CT de traagste en meest gecontroleerde afgifte liet zien, die benaderde kinetiek die lijkt op nulde-orde; NX-ST vertoonde een intermediair bifasisch afgifteprofiel. De afgifte wordt waarschijnlijk bepaald door diffusie van HU vanuit het partikeloppervlak en de surfactantrijke grensvlakregio, gevolgd door tragere diffusie van het ingesloten geneesmiddel door de lipidematrix. De snellere afgifte uit NX-CS kan gerelateerd zijn aan de kleinere partikelgrootte, het grotere oppervlak en de gecombineerde effecten van Cremophor EL en SDS, waarbij SDS de hydrofilie van het grensvlak verhoogt en Cremophor EL de solubilisatie van het geneesmiddel faciliteert. In tegenstelling hiermee kan de combinatie van Cremophor EL en T80 in NX-CT een stabielere interfacebarrière vormen, waardoor de initiële diffusie van het geneesmiddel wordt beperkt en een meer vertraagde afgifte ontstaat, terwijl NX-ST een intermediair bifasisch patroon vertoonde dat toe te schrijven is aan de tegengestelde invloeden van SDS-gefaciliteerde afgifte en T80-gemedieerde stabilisatie. Deze interpretaties zijn consistent met de voorgestelde rol van surfactants bij het moduleren van interacties tussen de lipidematrix en het afgiftemedium41,44,45,46,47,48. Water werd gebruikt als afgiftemedium om het basisdiffusiegedrag vast te stellen, maar dit repliceert niet de ionische samenstelling en fysiologische omstandigheden van biologische vloeistoffen. Elektrolyten in fysiologische buffers kunnen de elektrische dubbellaag, de organisatie van surfactants, partikelaggregatie en membraanpermeabiliteit veranderen, waardoor de afgiftekinetiek potentieel wordt beïnvloed.

De resultaten van de cytotoxiciteit toonden een duidelijk verschil aan tussen vrij HU en de NLC-formuleringen, waarbij vrij HU de hoogste IC₅₀ vertoonde en NX-ST de grootste cytotoxische activiteit vertoonde. De lagere IC₅₀-waarden die werden waargenomen voor de NLC-formuleringen geven aan dat de incorporatie van HU in de lipide drager de in vitro activiteit tegen MCF-7-cellen heeft veranderd. De bijzonder sterke respons van NX-ST kan de gecombineerde bijdrage weerspiegelen van het SDS/T80-surfactantsysteem, de relatief hoge negatieve ZP en het intermediaire bifasische afgifteprofiel, die samen de beschikbaarheid van het geneesmiddel bij de celinterface en de temporele blootstelling van cellen aan vrijgekomen HU kunnen beïnvloeden49,50. Opvallend is dat de kleinere partikelgrootte en hogere EE van NX-CS niet resulteerden in een grotere cytotoxiciteit, wat benadrukt dat partikelgrootte en drug entrapment alleen de biologische activiteit niet bepalen; cellulaire interacties, het afgiftegedrag van het geneesmiddel, surfactant-effecten en de beschikbaarheid van het geneesmiddel kunnen collectief de respons beïnvloeden51,52,53. De lagere cytotoxiciteit van NX-CT en NX-CS in vergelijking met NX-ST mag daarom niet simpelweg worden geïnterpreteerd als een inferieure formulatieprestatie, vooral omdat NX-CT de meest gecontroleerde afgifte vertoonde.

De bewaarstudie toonde een goede fysieke stabiliteit aan, aangezien er in geen enkele formulering gedurende de bewaring zichtbare agglomeratie, sedimentatie, fasescheiding, verkleuring, verandering in viscositeit of textuur, of een abnormale/ranzige geur werd waargenomen. De fysisch-chemische stabiliteitsgegevens gaven echter een meer gedifferentieerd beeld. Bij 25 °C wees een toename in deeltjesgrootte en/of PDI op progressieve veranderingen in de colloïdale systemen, waarbij de mate en statistische significantie varieerden tussen de formuleringen. NX-ST profiteerde van de sterke elektrostatische bijdrage van SDS, terwijl NX-CT, dat voornamelijk vertrouwde op sterische stabilisatie door Cremophor EL en T80, een grotere gevoeligheid vertoonde voor veranderingen in de deeltjeskenmerken. NX-CS vertoonde, ondanks de combinatie van elektrostatische en sterische stabilisatie, ook veranderingen tijdens de bewaring, wat aangeeft dat de aanwezigheid van twee stabilisatiemechanismen de tijdsafhankelijke herstructurering van het NLC-systeem niet volledig voorkomt. Bewaring bij 4 °C zorgde over het algemeen voor een betere fysisch-chemische conservering, in overeenstemming met een verminderde moleculaire mobiliteit en tragere structurele veranderingen van de lipiden; NX-CS vertoonde een relatief verbeterde stabiliteit van de deeltjesgrootte, terwijl NX-ST relatief consistente kenmerken behield. Desondanks bleef NX-CT progressieve veranderingen in de PDI vertonen, wat erop wijst dat sterische stabilisatie alleen mogelijk onvoldoende is voor langdurige bewaring. Veranderingen in de ZP tijdens de bewaring suggereren verder een tijdsafhankelijke reorganisatie van de lipide-surfactant-interface, mogelijk gerelateerd aan surfactantdesorptie, lipiderekristallisatie en HU-geassocieerde structurele veranderingen, die niet direct werden vastgesteld47,48,54. 

Vooruitgang van het vakgebied

NLC-formuleringen van andere antikankermiddelen, waaronder gefitinib, capecitabine en imatinib, hebben eerder een verbeterde afgifte aangetoond ten opzichte van het vrije geneesmiddel14,15,16, maar vergelijkende gegevens over hoe verschillende surfactantcombinaties specifiek het fysisch-chemische en cytotoxische profiel van hydroxyurea-geladen NLC's beïnvloeden, waren beperkt43,44,55. Door systematisch drie surfactantsystemen binnen één enkel NLC-platform te vergelijken, biedt deze studie een directe, intern gecontroleerde vergelijking die verduidelijkt hoe het ionische karakter en de concentratie van de surfactant gezamenlijk de partikelgrootte, colloïdale stabiliteit, retentie van het geneesmiddel en de in vitro antikankeractiviteit beïnvloeden voor een klein, sterk hydrofiel geneesmiddel - een combinatie die minder goed vertegenwoordigd is in de NLC-literatuur dan lipofiele payloads51,54,56,57. Deze resultaten breiden eerdere rapporten over HU-inkapseling in nanodragers op basis van lipiden en albumine uit53,58 door een surfactantcombinatie (T80–SDS) te identificeren die geassocieerd is met de grootste in vitro cytotoxische verbetering.

Beperkingen van de studie

Deze studie kent enkele beperkingen die in overweging moeten worden genomen bij de interpretatie van de resultaten. Ten eerste was de biologische evaluatie beperkt tot een enkele in vitro MTT-assay in MCF-7 borstkankercellen; hoewel HU klinisch wordt gebruikt bij chronische myeloïde leukemie en sikkelcelziekte, ondersteunen de huidige gegevens geen conclusies die specifiek zijn voor deze aandoeningen, en bevestiging in een relevant leukemiemodel (bijv. K562-cellen) en in vivo is gerechtvaardigd. Ten tweede waren de mechanistische verklaringen voor de geobserveerde fysisch-chemische en cytotoxische verschillen (bijv. desorptie van surfactant, herkristallisatie van lipiden, veranderde cellulaire opname) niet direct aangetoond en moeten zij als hypothesen worden beschouwd; technieken zoals DSC, XRD en Cryo-TEM23,41, samen met studies naar cellulaire opname en release-kinetiek, zouden nodig zijn om deze te onderbouwen. Ten derde werd de in vitro release beoordeeld in water in plaats van in een fysiologische buffer, wat wordt beschouwd als een essentiële stap voor het voorspellen van de in vivo prestaties59. Ten vierde werd de chemische stabiliteit van HU tijdens de bereiding niet direct gekwantificeerd, en er is geen specifieke beoordeling uitgevoerd van het lekken van het geneesmiddel naar de waterige fase tijdens de opslag; gezien de hoge wateroplosbaarheid van HU is dergelijk lekken mogelijk en moet dit worden beoordeeld. Ten slotte is de formulering bedoeld voor parenterale toediening, en de hier gegeven mechanistische interpretaties moeten worden beschouwd als verkennend in afwachting van verdere karakterisering, in overeenstemming met de bredere NLC-literatuur die de noodzaak van rigoureuze fysisch-chemische validatie benadrukt32.

Alternatieve benaderingen

Verschillende alternatieve karakteriserings- en validatiestrategieën zouden toekomstig werk op dit gebied kunnen versterken. Solid-statetechnieken (bijv. DSC, XRD) en cryo-TEM zouden helpen om de fysieke toestand van HU binnen de lipidematrix te verduidelijken en direct de mechanismen van surfactant-desorptie en lipide-rekristallisatie te testen die zijn voorgesteld om de waargenomen stabiliteitstrends te verklaren36,60,61. Vrijgaveonderzoek in fysiologische buffers of gesimuleerde biologische vloeistoffen, in plaats van enkel in water, zou het in vivo vrijgavegedrag beter kunnen voorspellen, en directe kwantificering van de cellulaire opname (bijv. via fluorescente labeling en flowcytometrie) zou de opnamegebaseerde verklaring voor de verhoogde cytotoxiciteit van NX-ST kunnen testen, in plaats van deze enkel af te leiden uit de zetapotentiaal62,63,64. Bevestigende tests in een tweede, klinisch relevante cellijn (bijv. K562 voor chronische myeloïde leukemie) en evaluatie onder formele versnelde stabiliteitsomstandigheden zouden verder helpen om de huidige in vitro bevindingen te vertalen naar een klinisch toepasbare formulering.

Belang en potentiële toepassingen

Deze bevindingen zijn relevant voor de bredere inspanning om de toediening van hydroxyurea te verbeteren, waarvan het klinische gebruik momenteel wordt beperkt door een snelle klaring, variabele biologische beschikbaarheid en dosisgerelateerde toxiciteit. Door aan te tonen dat de samenstelling van de surfactant kan worden aangepast om ofwel kleinere, stabielere deeltjes met een hogere inkapselingsefficiëntie (NX-CS, NX-CT) of een grotere in vitro cytotoxische potentie (NX-ST) te bevoordelen41,65, biedt dit werk een praktische basis voor het selecteren of verder optimaliseren van de NLC-samenstelling op basis van het prioritaire toedieningskenmerk voor een specifieke toepassing, zonder het HU-molecuul zelf te modificeren. Instelbare nanodragerplatforms van dit type kunnen mogelijk ook worden toegepast op andere kleine, hydrofiele geneesmiddelen die met soortgelijke beperkingen bij de toediening kampen.

Toekomstige richtingen

Toekomstig werk moet prioriteit geven aan de kwantitatieve validatie van de hier voorgestelde fysisch-chemische mechanismen met behulp van solid-state- en imagingtechnieken; testen van de afgifte van geneesmiddelen onder fysiologisch relevante omstandigheden; directe meting van de cellulaire opname en de relatie daarvan met cytotoxiciteit; testen in aanvullende, klinisch relevante cellijnen en, uiteindelijk, in vivo-modellen; formele versnelde en langetermijnstabiliteitsstudies ter ondersteuning van de bepaling van de houdbaarheid; en kwantificering van de chemische stabiliteit van HU en lekkage gerelateerd aan de opslag. Het adresseren van deze punten zou helpen vast te stellen of de hier geïdentificeerde fysisch-chemische voordelen resulteren in een zinvol therapeutisch voordeel.

Conclusies

Deze studie pakt belangrijke beperkingen van HU-therapie aan, waaronder een lage afleveringsefficiëntie door snelle klaring, variabele biobeschikbaarheid en dosisgerelateerde toxiciteit, door de ontwikkeling van nanogestructureerde lipide dragers (NANOXURIA). De bevindingen tonen aan dat de surfactantsamenstelling en de bewaarcondities een kritieke invloed hebben op de fysisch-chemische stabiliteit, de cytotoxische prestaties en de algehele afleveringsefficiëntie. Onder de formuleringen vertoonde NX-ST superieure prestaties, met een 3,2 keer hogere cytotoxische activiteit dan vrije HU, wat wijst op een verbeterde cellulaire opname en geneesmiddelafgifte. Deze verbeterde effectiviteit wordt toegeschreven aan de gebalanceerde partikeleigenschappen, gecontroleerde afgifte en effectieve elektrostatische stabilisatie.

In tegenstelling hiermee vertoonden formuleringen die primair steunden op niet-ionische surfactanten een relatief lagere stabiliteit en prestatie, wat het belang van gecombineerde stabilisatiemechanismen benadrukt. De bewaarcondities hadden een aanzienlijke invloed op het gedrag van de formulering: 25 °C bevorderde partikelgroei en heterogeniteit, terwijl 4 °C de stabiliteit, uniformiteit en oppervlaktelading beter behield.

Over het algemeen vult deze studie de geïdentificeerde lacune in het onderzoek door aan te tonen dat rationeel ontworpen NLC-systemen de afgifte van HU kunnen verbeteren zonder het geneesmiddel zelf te wijzigen. De resultaten benadrukken dat optimale lipid-surfactantcombinaties en geschikte bewaarcondities essentieel zijn voor het bereiken van stabiele, efficiënte en klinisch relevante systemen voor geneesmiddelafgifte.

Openbaarmakingen

Alle auteurs verklaren dat zij geen belangenverstrengeling hebben.

Dankbetuigingen

De auteurs betuigen hun dank aan het Decanaat voor Postdoctorale Studies en Wetenschappelijk Onderzoek aan de Jazan University voor de financiering van dit onderzoekswerk via projectnummer: JU-RSP2026. De auteurs spreken tevens hun oprechte dank uit naar de College of Pharmacy, Jazan University, Jazan, Saudi-Arabië, voor het ter beschikking stellen van de essentiële middelen die de succesvolle voltooiing van dit project mogelijk hebben gemaakt.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Amicon Ultra-2 mL centrifugatiefilter (3 kDa MWCO)Millipore, IrelandUFC200324
Koperrooster met koolstofcoating (TEM-monsterdrager)N/A
Cremophor EL (niet-ionische surfactant, castorolie-derivaat, zuiverheid ≥98%)MedChemExpress, NJ, USAHY-Y1890
Dialysezakken (12-14 kDa MWCO)Spectrum Laboratories, CA, USA08-670-3BB
Dimethylsulfoxide (DMSO)Fisher Chemicals, UK10162090
Foetaal runderserum (FBS)Gibco, Paisley, UK10270-106
Veldemissie-scanning elektronenmicroscoop (FE-SEM), Apreo 2Thermo Fisher-FEI, USA1229000
Homogenisator, HG 15DWiseTis, GermanyDH.WHG02020
Hydroxyureum (HU) (zuiverheid ≥99%)Sudair Pharma, Riyadh, Saudi Arabia21L001
MCF-7 humane borstkankercellijnAmerican Type Culture Collection (ATCC), USAHTB-22
Microplaatlezer, SpectroStar NanoBMG LABTECH, Ortenberg, Germany601-101
MTT-reagens (5 mg/mL)Invitrogen Corporation, San Diego, CA, USAM6494
Penicilline-streptomycine-oplossingSigma-Aldrich, St. Louis, MO, USAP4333
RPMI 1640 mediumGibco, Grand Island, NY, USA11875093
SesamolieLokale handelaar, Jazan, Saudi ArabiaN/A
Natriumdodecylsulfaat (SDS) (anionische surfactant, zuiverheid 90%)PanReac AppliChem, Darmstadt, Germany28312
Stearinezuur (zuiverheid 95-106%)Himedia, Mumbai, IndiaGRM1425
Spuitfilter (0,45 µm)Merck, SASLHV033RS
Transmissie-elektronenmicroscoop (TEM), TalosThermo Fisher, USAN/A
Tween-80 (T80) (niet-ionische surfactant, oliezuur ≥58%)Loba Chemie, Mumbai, IndiaArt. No. 06420
UV-vis spectrophotometerShimadzu, Kyoto, Japan220-92961-01
Zetasizer Nano ZS90Malvern Panalytical, Malvern, UKZEN3690

Referenties

  1. Kushwaha AK, et al. A descriptive cross-sectional study on clinical epidemiology of different types of cancer in a tertiary care centre: insights from Eastern India. Cureus. 2024;16(6):e62529.
  2. National Cancer Institute. Cancer statistics. 2024. Available from: https://www.cancer.gov/about-cancer/understanding/statistics
  3. Bai X, et al. Sustained drug release from smart nanoparticles in cancer therapy: a comprehensive review. Micromachines. 2022;13(10):1623.
  4. Rajendra PKM, Balan AP, Selvaraj J, Jawahar N. Formulation and optimization of hydroxyurea loaded nanostructured lipid carriers using design of experiment for the effective treatment of ovarian cancer. Int J Appl Pharm. 2022;14(5):137-43.
  5. Bell V, Varzakas T, Psaltopoulou T, Fernandes T. Sickle cell disease update: new treatments and challenging nutritional interventions. Nutrients. 2024;16(2):258.
  6. Ware RE. How I use hydroxyurea to treat young patients with sickle cell anemia. Blood. 2010;115(26):5300-11.
  7. Lanzkron S, et al. Systematic review: hydroxyurea for the treatment of adults with sickle cell disease. Ann Intern Med. 2008;148(12):939-55.
  8. Pouton CW, Porter CJH. Formulation of lipid-based delivery systems for oral administration: materials, methods and strategies. Adv Drug Deliv Rev. 2008;60(6):625-37.
  9. Khan MS, et al. Potential of lipid-based nanocarriers against two major barriers to drug delivery-skin and blood-brain barrier. Membranes. 2023;13(3):343.
  10. Alam MI, et al. Nanostructured lipid carrier containing CNS acting drug: formulation, optimization and evaluation. Curr Nanosci. 2011;7(6):1014-27.
  11. Azhar SNAS, Ashari SE, Zainuddin N, Hassan M. Nanostructured lipid carriers-hydrogels system for drug delivery: nanohybrid technology perspective. Molecules. 2022;27(1):289.
  12. Haider M, Abdin SM, Kamal L, Orive G. Nanostructured lipid carriers for delivery of chemotherapeutics: a review. Pharmaceutics. 2020;12(3):288.
  13. Müller RH, Radtke M, Wissing SA. Nanostructured lipid matrices for improved microencapsulation of drugs. Int J Pharm. 2002;242(1-2):121-8.
  14. Makeen HA, et al. Preparation, characterization, and anti-cancer activity of nanostructured lipid carriers containing imatinib. Pharmaceutics. 2021;13(7):1086.
  15. Makeen HA, et al. Gefitinib loaded nanostructured lipid carriers: characterization, evaluation and anti-human colon cancer activity in vitro. Drug Deliv. 2020;27(1):622-31.
  16. Sultan MH, et al. Capecitabine-loaded NLC for breast cancer treatment: preparation, characterization, and in vitro evaluation. Curr Drug Deliv. 2025;22(7):968-82.
  17. Coache D, et al. Stability evaluation of compounded hydroxyurea 100 mg/mL oral liquids using a novel analytical method involving chemical derivatization. PLoS One. 2022;17(6):e0270206.
  18. Yasir MS, et al. Microemulsified gel formulations for topical delivery of clotrimazole: structural and in vitro evaluation. Langmuir. 2021;37(46):13767-77.
  19. Siddique MY, et al. Formulation of gelled microemulsion for effective permeation of celecoxib across the skin barrier. ChemistrySelect. 2024;9(3):e202302841.
  20. Naseem K, et al. Enzymes encapsulated smart polymer micro assemblies and their tuned multi-functionalities: a critical review. Int J Polym Mater Polym Biomater. 2024;73(9):785-816.
  21. Syam S, Abdelwahab SI, Al-Mamary MA, Mohan S. Synthesis of chalcones with anticancer activities. Molecules. 2012;17(6):6179-95.
  22. Lide DR. CRC handbook of chemistry and physics. CRC Press; Boca Raton, FL; 2009.
  23. Pei Y, Hinchliffe BA, Minelli C. Measurement of the size distribution of multimodal colloidal systems by laser diffraction. ACS Omega. 2021;6(22):14049-58.
  24. Mok ZH. The effect of particle size on drug bioavailability in various parts of the body. Pharm Sci Adv. 2024;2:100031.
  25. Zhang M, et al. Influencing factors and strategies of enhancing nanoparticles into tumors in vivo. Acta Pharm Sin B. 2021;11(8):2265-85. doi:10.1016/j.apsb.2021.03.033.
  26. Zhang Y, et al. Sodium dodecyl sulfate improved stability and transdermal delivery of salidroside-encapsulated niosomes via effects on zeta potential. Int J Pharm. 2020;580:119183.
  27. Westesen K, Bunjes H, Koch MHJ. Physicochemical characterization of lipid nanoparticles and evaluation of their drug loading capacity and sustained release potential. J Control Release. 1997;48(2-3):223-36.
  28. Bjørnestad VA, Lund R. Pathways of membrane solubilization: a structural study of model lipid vesicles exposed to classical detergents. Langmuir. 2023;39(11):3914-33.
  29. Rao VRS, Shao J. Self-nanoemulsifying drug delivery systems (SNEDDS) for oral delivery of protein drugs. Int J Pharm. 2008;362(1-2):2-9.
  30. Weiszhár Z, et al. Complement activation by polyethoxylated pharmaceutical surfactants: Cremophor-EL, Tween-80 and Tween-20. Eur J Pharm Sci. 2012;45(4):492-8.
  31. Khan ZU, et al. Physicochemical characterizations and pharmacokinetic evaluation of pentazocine solid lipid nanoparticles against inflammatory pain model. Pharmaceutics. 2022;14(2):409.
  32. Beloqui A, et al. Nanostructured lipid carriers: promising drug delivery systems for future clinics. Nanomedicine. 2016;12(1):143-61.
  33. Samari-Kermani M, Jafari S, Rahnama M, Raoof A. Ionic strength and zeta potential effects on colloid transport and retention processes. Colloid Interface Sci Commun. 2021;42:100389.
  34. Duplâtre G, Ferreira Marques MF, Da Graça Miguel M. Size of sodium dodecyl sulfate micelles in aqueous solutions as studied by positron annihilation lifetime spectroscopy. J Phys Chem. 1996;100(41):16608-12.
  35. Hanafy AS, Farid RM, ElGamal SS. Complexation as an approach to entrap cationic drugs into cationic nanoparticles administered intranasally for Alzheimer’s disease management: preparation and detection in rat brain. Drug Dev Ind Pharm. 2015;41(12):2055-68.
  36. Witayaudom P, Klinkesorn U. Effect of surfactant concentration and solidification temperature on the characteristics and stability of nanostructured lipid carrier prepared from rambutan kernel fat. J Colloid Interface Sci. 2017;505:1082-92.
  37. Öztürk K, Kaplan M, Çalış S. Effects of nanoparticle size, shape, and zeta potential on drug delivery. Int J Pharm. 2024;666:124799.
  38. Lavagna, E., Bochicchio, D., De Marco, A.L., Güven, Z.P., Stellacci, F. and Rossi, G., 2022. Ion-bridges and lipids drive aggregation of same-charge nanoparticles on lipid membranes. Nanoscale, 14.(18), pp.6912-6921.
  39. Ye J, et al. Comparative colloidal stability of commercial amphotericin B nanoformulations using dynamic and static multiple light scattering techniques. Int J Nanomedicine. 2022;17:6047-64.
  40. Honary S, Zahir F. Effect of zeta potential on the properties of nano-drug delivery systems-a review (Part 2). Trop J Pharm Res. 2013;12(2):265-73.
  41. Doktorovova S, Souto EB, Silva AM. Nanotoxicology applied to solid lipid nanoparticles and nanostructured lipid carriers-a systematic review of in vitro data. Eur J Pharm Biopharm. 2014;87(1):1-18.
  42. Bnyan R, et al. Surfactant effects on lipid-based vesicles properties. J Pharm Sci. 2018;107(5):1237-46.
  43. Adepu S, Ramakrishna S. Controlled drug delivery systems: current status and future directions. Molecules. 2021;26(19):5905.
  44. Müller RH, Mäder K, Gohla S. Solid lipid nanoparticles for controlled drug delivery-a review of the state of the art. Eur J Pharm Biopharm. 2000;50(1):161-77.
  45. Das S, et al. Formulation design, preparation and physicochemical characterizations of solid lipid nanoparticles containing a hydrophobic drug: effects of process variables. Colloids Surf B Biointerfaces. 2011;88(1):483-9.
  46. Naseri N, Valizadeh H, Zakeri-Milani P. Solid lipid nanoparticles and nanostructured lipid carriers: structure, preparation and application. Adv Pharm Bull. 2015;5(3):305-13.
  47. Pardeike J, Hommoss A, Müller RH. Lipid nanoparticles in cosmetic and pharmaceutical dermal products. Int J Pharm. 2009;366(1-2):170-84.
  48. Chauhan I, et al. Nanostructured lipid carriers: a groundbreaking approach for transdermal drug delivery. Adv Pharm Bull. 2020;10(2):150-65.
  49. Ali A, et al. Solid lipid-based nanoparticular system for sustained release and enhanced in vitro cytotoxic effect of 5-fluorouracil on skin melanoma and squamous cell carcinoma. PLoS One. 2023;18(2):e0281004.
  50. Miyazawa T, et al. A critical review of the use of surfactant-coated nanoparticles in nanomedicine and food nanotechnology. Int J Nanomedicine. 2021;16:3937-99.
  51. Garg J, Pathania K, Sah SP, Pawar SV. Nanostructured lipid carriers: a promising drug carrier for targeting brain tumors. Future J Pharm Sci. 2022;8(1):25.
  52. Raza F, et al. Recent advances in the targeted delivery of paclitaxel nanomedicine for cancer therapy. Mater Adv. 2022;3(5):2268-90.
  53. Alam MI, et al. Determining the anticancer effect of gefitinib-loaded NLCs through investigating the inflammatory cytokine (JAK-STAT) pathway. Res J Pharm Technol. 2024;17(11):4968-74.
  54. Akbari A, et al. Development and characterization of nanoliposomal hydroxyurea against BT-474 breast cancer cells. Adv Pharm Bull. 2020;10(1):39-45.
  55. Iqbal MA, et al. Nanostructured lipid carriers system: recent advances in drug delivery. J Drug Target. 2012;20(10):813-30.
  56. Heeney MM, et al. Chemical and functional analysis of hydroxyurea oral solutions. J Pediatr Hematol Oncol. 2004;26(3):179-84.
  57. Santos SS, Dos Santos IG, Da Silva CV, Cazedey ECL. Qualitative analysis of hydroxyurea. Drug Anal Res. 2020;4(1):18-21.
  58. Tazhbayev Y, Mukashev O, Burkeev M, Kreuter J. Hydroxyurea-loaded albumin nanoparticles: preparation, characterization, and in vitro studies. Pharmaceutics. 2019;11(8):410.
  59. Sato H, Yamada K, Miyake M, Onoue S. Recent advancements in the development of nanocarriers for mucosal drug delivery systems to control oral absorption. Pharmaceutics. 2023;15(12):2708.
  60. Mehnert W, Mäder K. Solid lipid nanoparticles: production, characterization and applications. Adv Drug Deliv Rev. 2001;47(2-3):165-96.
  61. Danaei M, et al. Impact of particle size and polydispersity index on the clinical applications of lipidic nanocarrier systems. Pharmaceutics. 2018;10(2):57.
  62. Fröhlich E. The role of surface charge in cellular uptake and cytotoxicity of medical nanoparticles. Int J Nanomedicine. 2012;7:5577-91.
  63. Zhang W, et al. Effects of morphology and size of nanoscale drug carriers on cellular uptake and internalization process: a review. RSC Adv. 2023;13(1):80-114.
  64. Wang HX, et al. Surface charge critically affects tumor penetration and therapeutic efficacy of cancer nanomedicines. Nano Today. 2016;11(2):133-44.
  65. Musielak E, Feliczak-Guzik A, Nowak I. Optimization of the conditions of solid lipid nanoparticles synthesis. Molecules. 2022;27(7):2202.

Herprints en machtigingen

Tags

Afgifte van hydroxyureainkapselingsrendementpartikelgroottezetapotentieelsurfactantcombinatiesanticanceractiviteitcellulaire opname
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.