Ga naar <a href="http://www.springerprotocols.com/Abstract/doi/10.1007/978-1-59745-457-5_18">Springer Protocols</a> voor meer informatie over de engineering baculovirus als een insecidical agent en de microapplicator technieken die in deze test.

De auteurs hebben niets te onthullen.

protocollen voor microapplicator-geassisteerde infectie van lepidoptera larven met baculovirus

Baculovirussen worden op grote schaal gebruikt als eiwit-expressievectoren en als insecten ongediertebestrijding agenten. . Deze video laat zien hoe lepidoptera larven kunnen besmet zijn met microapplicator technieken in de darm met baculovirus veelvlakken en in de hemolymfe met geoculeerd virus. Dit begeleidende Springer Protocols gedeelte geeft een overzicht van de baculovirus levenscyclus en het gebruik van baculovirussen als insecticide agenten. Formulering en toepassing van baculovirussen voor plaagbestrijding die doeleinden zijn elders beschreven.

In deze video, tonen we twee microapplicator technieken die worden gebruikt om infecteren van lepidoptera larven met baculovirus om insecten efficiency te bepalen.

Protocollen voor microapplicator-geassisteerde Infectie van lepidoptera Larven met Baculovirus

Baculoviruses are widely used both as protein expression vectors and as insect pest control agents. . This video shows how lepidopteran larvae can be ...

Terwijl het arthropode specifieke baccala-virus wordt gebruikt als standaard onderzoeksinstrument voor eukaryote eiwitexpressiesystemen, wordt het ook ontwikkeld als een milieuvriendelijk insectendodend middel, dat herbivore insecten zoals lepidoptera in de natuur kan doden. Lepidoptera-larven worden geïnfecteerd door baccala-virussen bij het eten van geïnfecteerde bladeren. De larven of rupsen nemen het baccala-virus op in een vorm die bekend staat als een polyhedron, wat een complex van virusdeeltjes is verpakt in een grote kristallijne eiwitstructuur die het virus beschermt tegen uitdroging.Zodra de larve is geïnfecteerd, verspreidt het geblokte virus de infectie binnenin het insect. Het virus kapt de nucleïnezuur- en eiwitsynthesemachinerie van de gastheer om meer virus en polyhedra te maken. Uiteindelijk wordt de larve zo grondig geïnfecteerd met virus dat ze oplost in een rommelige vloeibare massa van polyhedra die op plantoppervlakken druppelt die door het insect zijn gegeten, en dan begint de cyclus opnieuw om de insectendodende werkzaamheid van een bepaalde Baca te bepalen.Avir-stam micro applicatortechnieken en bioassays kunnen worden gecombineerd. Leid dorin-larven kunnen worden geïnfecteerd door het geblokte virus direct in de HemosIL of lichaamsholte te injecteren en de mortaliteitspercentages kunnen worden beoordeeld. Bovendien kunnen larven worden geïnfecteerd met polyhedra met behulp van orale micro applicator-ondersteunde injectie en kan de timing van infectie van de darm en andere weefsels worden beoordeeld.Hallo, ik ben Wendy Sparks in het laboratorium van Brian e boning in het Department of Entomology aan de Iowa State University. Ik kom ook van boning snap. Vandaag laten we je twee procedures zien om lab duct DI te infecteren met het backlog-virus. Beide methoden gebruiken micro applicator.Ten eerste zal ik je laten zien hoe je een micro applicator gebruikt om lichaamsvirus in de he in de heni te leveren door prole. Dan laat ik je zien hoe je de micro applicator gebruikt om poly header in de mid guard te leveren door muis. Dus laten we beginnen.Wanneer ontwikkeld voor insectendodende doeleinden, bevatten balo-virussen meestal het polyhedron-gen om orale infectie van plaaginsectenlarven te vergemakkelijken. Er zijn echter soms redenen om een polyhedron-negatief baccala-virus te testen op potentiële insectendodende effecten of om het darmkanaal van een insect te omzeilen. In dit geval kan injectie van geblokt virus met behulp van een micro applicator worden uitgevoerd om larven te infecteren voordat de test wordt gestart.Het titer van de werkende voorraad van geblokt virus moet worden bepaald met behulp van plaque-assay of endpoint-verdunningsassays. Voor fysiologische experimenten zijn injecties van vijf keer 10 tot de vierde PFU per vijfde stadium H VNS typisch. Om deze bioassay te starten, laadt u elke verdunning van het geblokte virus in een plastic een cc to hercule spuit met een scherpe naaldtip van 28,5 of 32 gauge.Meestal kan een tot drie microliters geblokte virusoplossing. Met een titer van 10 tot de zevende, min 10 tot de achtste per milliliter worden gebruikt voor elke larve, zodat het laden van 300 tot 500 microliters in de spuit voldoende is voor de meeste doeleinden. Verwijder vervolgens luchtbellen uit de spuit door de spuit rechtop te houden om lucht naar de naaldtip te brengen en af te geven.Bevestig vervolgens de spuit op de spuitondersteuningsbuis. Stel nu het volume in op 1,0 microliter. Voor elke druppel op de microprocessorbesturingseenheid van de micro applicator, kalibreer eerst de besturingseenheid om ervoor te zorgen dat het juiste volume wordt afgegeven, de snelheid waarmee de druppel wordt afgegeven kan worden ingesteld op een schaal van nul tot negen.Een bereik van nul tot één wordt meestal gebruikt. Druk op de voetschakelaar om ervoor te zorgen dat de oplossing correct wordt afgegeven. Onthoud dat als er te veel oplossing wordt afgegeven of als de toepassing te langzaam is, de volume- en snelheidsinstellingen kunnen worden aangepast totdat het juiste volume oplossing met de juiste snelheid wordt aangebracht.Ik ben nu klaar om te beginnen met de injectie voor H VNS-infectie. Vroeg vijfde stadium larven worden meestal geïnjecteerd, de grotere grootte van de latere stadia vergemakkelijkt het injectieproces. Steek de naaldtip door de plana van een van de pro legs en in de lichaamsholte.Let op, wanneer de naaldtip in de prole wordt gestoken, verander de lichaamspositie van de larve. Om schade aan de darm en lichaamswand te voorkomen, druk nu vier keer op de voetschakelaar om vier microliters van de virusoplossing in de hemo-seal te brengen. Nadat de injecties zijn voltooid, brengt u alle larven terug naar de 28 graden Celsius incubator. Controleer regelmatig op dode larven en om ervoor te zorgen dat er voldoende dieet beschikbaar is voor overlevende larven.Hoewel late stadia niet sterven door verwonding aan de cuticula als gevolg van injectie, moeten de larven nog 24 uur na injectie worden gecontroleerd op schade aan de darm, die kan resulteren uit bacteriële infectie. Deze vroege mortaliteit moet worden uitgesloten van gegevensanalyse. Als u de micro applicator-ondersteunde bioassay met geblokt virus gebruikt voor dodelijke concentratie bioassays, moet de bioassay drie of vier keer op aparte tijdstippen worden gerepliceerd.Gebruik 30 individuen per dosis voor elke virus- of controlebehandeling. Gebruik een geschikt probate-analyseprogramma zoals polo of SAS om lc 50-waarden, 95% betrouwbaarheidsintervallen en de juiste statistieken te berekenen. Deze bioassay kan ook worden gebruikt om ST 50-overlevingstijden te bepalen na inoculatie van een vaste dosis virus.In dit geval wordt de sterfte van larven elke vier tot acht uur geregistreerd met frequentere waarnemingen. Als de sterfteratio hoog is, worden de mediane overlevingstijden in de 95% betrouwbaarheidslimieten berekend met behulp van de Kaplan Meyer-schatting met behulp van een s plus of SAS-programma. Nu Harran je de micro applicator-ondersteunde bioassay met geblokt virus heeft laten zien.Ik laat je de assay zien. Het gebruik van polyhedra Orale inoculatie van polyhedra direct in het insectendarmkanaal wordt

protocols-for-microapplicator-assisted-infection-lepidopteran-larvae

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Protocols for Microapplicator-assisted Infection of Lepidopteran Larvae with Baculovirus

Iowa State University.  In this video, we demonstrate two microapplicator techniques used to infect of lepidopteran larvae with baculovirus in order to determine insecticidal efficiency.

Protocollen voor microapplicator-geassisteerde Infectie van lepidoptera Larven met Baculovirus

In dit artikel

Samenvatting

Samenvatting

Protocol

Openbaarmakingen

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Gerelateerde artikelen