Het maken van Patch-pipetten en Sharp elektroden met een programmeerbare Puller

Summary

Deze video laat zien hoe u een programmeerbare trekker te gebruiken om patch pipetten en scherpe elektroden te maken voor elektrofysiologie. Dezelfde procedure kan gebruikt worden om een ​​verscheidenheid van glazen instrumenten, waaronder injectienaalden te maken.

Abstract

Glazen micro-elektroden (ook wel pipetten) zijn een werkpaard van elektrofysiologie voor decennia. Vandaag de dag worden dergelijke pipetten gemaakt van glas haarvaten met behulp van een programmeerbare trekker. Dergelijke instrumenten warmte van de capillaire met behulp van een metalen filament of een laser en trekken uit het glas met behulp van de zwaartekracht, een motor of beide. Pipetten voor patch-clamp opnamen worden gevormd met alleen warmte en zwaartekracht, terwijl de scherpe elektroden voor intracellulaire opname gebruik maken van een combinatie van warmte, de zwaartekracht, en een motor. De procedure gebruikt om de intracellulaire opname pipetten te maken is vergelijkbaar met die gebruikt voor de injectie naalden voor een verscheidenheid aan toepassingen, waaronder cRNA injectie in Xenopus oöcyten te maken. In het algemeen, capillaire glas <1,2 mm in diameter wordt gebruikt om de pipetten voor patch clamp opname te maken, terwijl de smallere glas wordt gebruikt voor intracellulaire opname (buitendiameter = 1,0 mm). Voor elk gereedschap, is de trekker net iets anders geprogrammeerd. Deze video laat zien hoe je beide soorten van opname pipetten met behulp van vooraf vastgestelde puller programma's.

Protocol

Pulling pipetten

Met behulp van een micro-elektrode trekker, zoals de Sutter P-97 Flaming / Brown, trek een set van ongeveer 10-20 pipetten.

1. Selecteer uw capillaire glas. We maken gebruik van borosilicaat capillairen (Sutter BF150-110-10, 1,5 mm buitendiameter, binnendiameter 1.1mm, 10cm lang). Zorgvuldig op te slaan, zodat het glas blijft schoon en stofvrij.
2. Ontwerp een programma te trekken. We maken gebruik van een 5 stappen programma, met dalende hitte en snelheid bij elke stap, en een kleine trek aan de laatste stap. Sutter's pipet kookboek is een uitstekende referentie voor het ontwikkelen van geschikte progra....

Discussion

Het protocol geïllustreerde is hier in het dagelijks gebruik in de elektrofysiologie laboratoria en wordt ook gebruikt om injectienaalden te maken voor cellen en dieren. Met een programmeerbare trekker, is het gemakkelijk om pipetten te maken voor een scala van toepassingen. Met aandacht en zorg, zal de gloeidraad op uw trekker voor een jaar of meer. Veel succes met je experimenten.

....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Micropipette Puller	Instrument	Sutter Instrument Co.	P-97	Or similar instrument (e.g. Sutter P-87 or P-2000)
Glass Capillaries	Reagent	Sutter Instrument Co.	BF150-86-10	Or, similar capillary glass. To make filling the pipette easier, use a capillary with a glass filament.