Methodenartikel

Het verzamelen en meten van nociceptieve en inflammatoire mediatoren in chirurgische wonden

8.4K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/962

⸱

29 oktober 2008

 ,  ,  , 
1Department of Anesthesiology, Stanford University School of Medicine

In dit artikel

Retraction Notice

This article has been retracted at the request of the authors due to duplication of text in J Pain (Carvalho B, Clark DJ, Angst MS (2008) Local and Systemic Release of Cytokines, Nerve Growth Factor, Prostaglandin E2, and Substance P in Incisional Wounds and Serum Following Cesarean Delivery. J Pain 9: 650-657.) due to an honest mistake of the authors. View Retraction Notice

Samenvatting

Een techniek voor het verzamelen en chirurgische wond biochemische mediatoren te meten op specifieke tijdstippen.

Samenvatting

De doelstellingen van deze studie zijn om de haalbaarheid van het verzamelen en het meten van inflammatoire en nociceptieve biochemische bemiddelaars van de operatiewond site te testen, om de relatie tussen de wond en serum niveaus te evalueren, en om eventuele associaties tussen mediator release, pijn en pijnstillende consumptie na keizersnede te bepalen levering. Twintig gezonde vrouwen die een electieve keizersnede met een spinale anesthesie werden ingeschreven. Wondvocht en serum mediatoren, pijnscores en analgetica verbruik werden gemeten op 1, 6, 24, en 48 uur na de keizersnede. In wondvocht, werden 19 van de 20 mediatoren betrouwbaar gedetecteerd waaronder IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL -17, TNFa, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 en MIP-1β, zenuw groeifactor (NGF), prostaglandine E2 (PG-E2) en substantie P. Wound PG-E2 en diverse cytokines piekte begin van de , terwijl NGF toonde een meer vertraagde afgifte. Er waren geen correlaties tussen de concentratie versus tijd profiel van de wond en serum cytokines. Deze studie toont de haalbaarheid van het verzamelen en meten van nociceptieve en inflammatoire mediatoren in chirurgische wonden op specifieke tijdstippen. Het gebrek aan significante correlaties tussen de wond en de serumspiegels benadrukt het belang van het bepalen van site-specifieke versie indien gelokaliseerd pathologieën moeten worden bestudeerd.

Protocol

Nociceptieve en inflammatoire biochemische mediator collectie

  1. De On-Q ® PainBuster ® Pain Relief systeem is ingevoegd in de onderhuidse laag door het chirurgisch team vlak voor sluiting wond. Het systeem levert continu normale fysiologische zoutoplossing (of lokale verdoving) subcutaan in de wond met een snelheid van 2 ml / h.
  2. Een drie-weg kraan is opgenomen in dit systeem om aspiratie van wondexsudaat toelaten op bepaalde tijdstippen.
  3. Gemeten op de tijdstippen die door het protocol (bijvoorbeeld, 1, 6, 24 en 48 uur na keizersnede), is 1 ml van wondexsudaat teruggetrokken in een polyethyleen cup met 30 ul van proteïnase inhibitor.
  4. Op dezelfde tijdsintervallen 10 ml bloed wordt verzameld in een groene bovenkant bloedafname buis met lithium heparine. 300 ul van proteïnase-inhibitor wordt vervolgens toegevoegd aan de bloedmonsters.
  5. Binnen 1 uur na afname, worden monsters op ijs en gecentrifugeerd bij 3000 rpm gedurende 10 minuten.
  6. Het serum en de wond supranate wordt verwijderd en plaats in een standaard microcentrifugebuis en opgeslagen bij -20 ° C.

Assay analyse

  1. Als alle monsters worden verzameld, worden ze ontdooid en geanalyseerd op hetzelfde moment.
  2. Cytokines worden vervolgens gemeten met behulp van a17-multiplex bead array-immunoassay plaat. Multiplex immuno-assay technologie maakt het mogelijk het testen van maximaal 100 analyten in het lichaam-vloeistof monsters zo klein in volume als 50 ul en resultaten opleveren die vergelijkbaar zijn met die verkregen met ELISA. Deze plaat is geschikt voor het meten interleukine 1ß (IL-1ß), interleukine 2 (IL-2), interleukine-4 (IL-4), interleukine-5 (IL-5), interleukine-6 ​​(IL-6), interleukine-7 (IL -7), interleukine 8 (IL-8), interleukine (IL-10), interleukine-12 (IL-12), interleukine-13 (IL-13), interleukine-17 (IL-17), tumor necrosis factor α (TNF) , interferon α (INFα), granulocyt kolonie-stimulerende factor (G-CSF), granulocyt-macrofaag kolonie stimulerende factor (GM-CSF), monocyten chemoattractant eiwit 1 (MCP-1) en macrofaag inflammatoire eiwit 1 (MIP-1β).
  3. Zenuwgroeifactor wordt gemeten met de NGF antilichaam DY256 door toe te voegen aan de 17-plex plaat met behulp van de Bio-Plex amine koppeling kit.
  4. Elke meting wordt uitgevoerd in duplo en volgens specificaties van de fabrikant. Standaard curves voor elke analyt worden gegenereerd met behulp van de referentie-analyten geleverd door de fabrikanten bij concentraties van 0,20, 0,78, 3,13, 12.5, 50, 200, 800, 3200 pg / ml plus een nul-norm (fysiologische zoutoplossing alleen). Standaard curves zijn opgenomen in elke run en de gemeten concentraties werden berekend met Bio-Plex Manager-software.
  5. Prostaglandine E2 en substantie P zijn gemeten met behulp van een zeer gevoelige ELISA-kits Elke test wordt in tweevoud uitgevoerd volgens de specificaties van de fabrikant.

    Figuur 1
    Figuur 1

    Figuur 1: exsudaat en serum niveaus van verschillende pro-en anti-inflammatoire cytokines (interleukine 1ß (IL-1ß), interleukine 2 (IL-2), interleukine-4 (IL-4), interleukine-5 (IL-5), interleukine 6 (IL-6), interleukine-7 (IL-7), interleukine 8 (IL-8), interleukine (IL-10), interleukine-12 (IL-12), interleukine-13 (IL-13), interleukine-17 (IL -17), tumor necrosis factor α (TNF-α), interferon-γ (INFγ), granulocyt kolonie-stimulerende factor (G-CSF), granulocyt-macrofaag kolonie stimulerende factor (GM-CSF), monocyten chemoattractant eiwit 1 (MCP-1 ) en macrofaag inflammatoire eiwit 1 (MIP-1ß), zenuw groeifactor (NGF), prostaglandine E2 (PG-E2) en substantie P (SP) niveaus (pg / ml) gemeten op baseline, 6 en 24 uur na de keizersnede .

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

De On-Q ® PainBuster ® Hulp van de Pijn-systeem moet worden ingevoegd over de hele incisie in subcutane laag vlak voor sluiting wond. Dit vergemakkelijkt aspiratie via de drieweg-kraan op de aangegeven tijd intervallen. De On-Q ® systeem levert continu fysiologische zoutoplossing subcutaan in de wond met een snelheid van 2 ml / h. Dit voorkomt dat de katheter stolling en verbetert de betrouwbaarheid van het systeem om exsudaat monsters te produceren. Als aspiratie van exsudaat is moeilijk (ongeveer 5% van de gevallen), overweeg dan het vera...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te melden.

Dankbetuigingen

Dr Carvalho Het werk wordt ondersteund door een gebouw Interdisciplinair vacatures in de gezondheid van vrouwen onderzoek subsidie ​​van het Office of Research op de gezondheid van vrouwen en de National Institute of Child Health and Human Development van de National Institutes of Health (5K12 HD043452). Dr Angst levert (de On-Q ® PainBuster ® Post-Op Hulp van de Pijn System) en de financiering ontvangen voor de uitvoering van de biochemische testen van I-Flow (Lake Forest, CA).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
On-Q® PainBuster® Post-Op Pain Relief System I-Flow, Lake Forest, CA
Complete proteinaseremmer Roche Group
17-multiplex bead immunoassay Bio-PlexTM plateBio-Rad
Bio-Plex amine koppelingenkitBio-Rad
De NGF-antilichaam DY256R&D Systems
Prostaglandine E2 en substantie P ELISA-kits Assay Designs

Referenties

  1. Elshal, M. F., McCoy, J. P. Multiplex bead array assays: performance evaluation and comparison of sensitivity to ELISA. Methods. 38, 317-323 (2006).
  2. Heijmans-Antonissen, C., Wesseldijk, F., Munnikes, R. J., Huygen, F. J., van der Meijden, P., Hop, W. C., Hooijkaas, H., Zijlstra, F. J. Multiplex bead array assay for detection of 25 soluble cytokines in blister fluid of patients with complex regional pain syndrome type 1. Mediators Inflamm.. 28398, 1-8 (2006).
  3. Buvanendran, A., Kroin, J. S., Berger, R. A., Hallab, N. J., Saha, C., Negrescu, C., Moric, M., Caicedo, M. S., Tuman, K. J. Upregulation of prostaglandin E2 and interleukins in the central nervous system and peripheral tissue during and after surgery in humans. Anesthesiology. 104, 403-410 (2000).
  4. Holzheimer, R. G., Steinmetz, W. Local and systemic concentrations of pro- and anti-inflammatory cytokines in human wounds. Eur J Med Res. 5, 347-355 (2000).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Nociceptieve mediatorencollectie van chirurgische wondvloeistofanalyse van wondexudaatcytokine metingprostaglandine E2substance Pnerve growth factorbeoordeling van pijnscoreanalgesicagebruik