Omzetting van vetzuurmethylesters door zeepoplossing voor U^k'₃₇ Paleothermometrie

1. Installatie en voorbereiding van materialen

1. Verkrijg een totaal lipide-extract (TLE) met behulp van een oplosmiddelextractiemethode (Sonicatie, Soxhlet of Accelerated Solvent Extraction (ASE)).
2. Bereid een oplossing van 2 N KOH in 5% H₂O in methanol voor.
   1. KOH en methanol kunnen worden gekocht bij chemische leveranciers. Deze chemicaliën moeten puur en vrij van koolwaterstoffen zijn.
      1. De molaire massa van KOH is ~56 amu waardoor 1 mol OH^- wordt gevormd voor elke mol KOH. Dus om een 2 N concentratie te bereiken, lost u 112 g KOH op in 0,95 L zuiver water en 0,05 L methanol.
      2. Let op dat het oplossen van KOH in water exotherm is en een grote hoeveelheid warmte produceert. Voeg de KOH-pellets langzaam toe aan het water om een gewelddadige reactie te voorkomen.
   2. Los 112 g KOH-pellets op in 0,95 L zuiver water op een automatische roerplaat.
   3. Voeg 0,05 L methanol toe zodra alle KOH is opgelost om de oplossing van de organische biomarkers in de waterige oplossing te bevorderen.
3. Bereid een oplossing van 6 N zoutzuur (HCl) in H₂O voor.
   1. HCl kan worden gekocht bij chemische leveranciers. Deze chemische stof moet puur en vrij van koolwaterstoffen zijn.
   2. HCl komt meestal geconcentreerd voor als 13 N. Dus een 1:1 mengsel van HCl en zuiver water produceert een 6,5 N mengsel van HCl, wat dicht genoeg is bij 6 N voor de doeleinden van dit experiment.
      1. Zorg ervoor dat u de HCl toevoegt aan het water en niet andersom, omdat het toevoegen van water aan geconcentreerd HCl exotherm is en warmte genereert. Dit kan ervoor zorgen dat HCl spat.
   3. Pour voorzichtig en langzaam 100 mL HCl in een beker met 100 mL zuiver water, terwijl u het mengsel tussen toevoegingen van HCl ronddraait.
4. Bereid een oplossing van 5% NaCl (tafelzout) in H₂O voor.
   1. NaCl kan worden gekocht bij chemische leveranciers. Deze chemische stof moet puur en vrij van koolwaterstoffen zijn.
   2. Bereken en weeg de massa van het zout dat nodig is om ongeveer 1 L van een 5% oplossing (w/w) te maken. 1 L water weegt ongeveer 1 kg of 1.000 g. Dus 50 g NaCl opgelost in 950 mL geeft een 5% oplossing (50 g + 950 g = 1.000 g; 50 g / 1.000 g = 0,05 of 5%).
   3. Voeg voorzichtig 50 g NaCl toe aan zuiver water op een automatische roerplaat en wacht tot het is opgelost.
5. Verkrijg de volgende materialen: 2 schone en gecombusteerde (550 ˚C gedurende 6 u) 40 mL borosilicaat glazen flesjes met PTFE-afgesloten dop; een verwarmende oven of verwarmingsblokken; gecombusteerde (550 ˚C gedurende 6 u) borosilicaat glazen pipetten en bulben; pH-tape (zure reeks); Hexaan (Hexaan kan worden gekocht bij chemische leveranciers. Deze chemische stof moet Optima Grade of gelijkwaardig zijn).

2. Methoden

1. Begin met het gedrooide TLE (bevattend esters) in een van de 40 mL borosilicaat glazen flesjes.
2. Voeg ongeveer 10 mL van de 2 N KOH toe aan de TLE en sluit af.
3. Verwarm in de oven of op een verwarmingsblok tot 60 ˚C gedurende 2,5 u om de esterbinding te splitsen (Figuur 3).
4. Verwijder het monster van de warmte en laat het afkoelen tot kamertemperatuur.
5. Voeg ongeveer 10 mL van de 5% NaCl-oplossing toe aan de TLE (Figuur 3). Dit helpt om te voorkomen dat het interface tussen de waterige en organische fase (die later wordt toegevoegd) gaat schuimen. Sluit af en schud kort.
6. Voeg druppelsgewijs 6 N HCl toe aan de gezouten TLE tot een pH van 2 is bereikt om de O^-  te protoneren en het eindproduct te vormen, een stabiele carbonzuur (Figuur 3; gebruik pH-papier om te testen). Als de TLE gekleurd was, kan er een kleurverschuiving optreden bij een pH van 2.
7. Voeg ongeveer 20 mL hexaan toe aan de aangezuurde oplossing, die nu estervrij is. Sluit af en schud krachtig gedurende 5 s om organische verbindingen uit het water te extraheren.
8. Laat het rusten tot de waterige en organische fasen volledig gescheiden zijn. Zouten, ionen, water en ongereageerde HCl blijven in de waterige fase. Organische verbindingen bevinden zich nu in het hexaan.
9. Verwijder ongeveer 75% van het supernatant hexaan met een pipet en breng het over in het andere 40 mL borosilicaat glazen flesje.
10. Herhaal 2.7 - 2.9 twee keer, telkens ongeveer 10 mL hexaan toevoegend.
11. Gooi de overgebleven waterige mengsel in een goed afvalcontainer.
12. Label de fles met hexaan en estervrije organische stoffen "TLE - gesaponificeerd."