Bron: Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Universiteit van Notre Dame, IN
Een fundamentele vereiste van biomedisch onderz…
Alle hier beschreven dierprocedures moeten worden uitgevoerd in overeenstemming met institutionele richtlijnen voor dierenetiek en goedgekeurd door IACUC. Alle procedures moeten voldoen aan de principes van de 3R's—Vervanging, Vermindering en Verfijning—en moeten worden uitgevoerd door getraind personeel.
1. Identificatie met oorpiercing
Oorpiercingcodes zijn ontwikkeld als een snelle en goedkope methode om individuele dieren te labelen. Er zijn drie stijlen van oorpiercing: de schaarpiercer, de duimpiercer en de hefboompiercer. De rechteroor van het dier wordt gebruikt voor enkele cijfers, het linkeroor voor tientallen en het midden van de oren voor honderdtallen.

Figuur 1. Oorpiercing bij muizen met schaarpiercer.
2. Identificatie met oorlabel
Aangepaste oorlabels kunnen worden besteld bij fabrikanten met alfabetische en/of numerieke codes, wat de differentiatie van muisstammen of onderzoekers mogelijk maakt. Oorlabels kunnen van metaal of plastic zijn. Sommige plastic labels hebben QR-codes die het gebruik van een compatibele scanner of lezer vereisen om toegang te krijgen tot de gecodeerde informatie. In tegenstelling tot visuele identificatiemethoden kunnen QR-codes niet worden geïnterpreteerd zonder externe apparaten zoals smartphones of speciale scanners. Deze afhankelijkheid van externe scanapparaten vormt een praktische beperking, aangezien de toegang tot geschikte apparatuur niet altijd onmiddellijk mogelijk is in alle faciliteitsinstellingen en de workflow-efficiëntie tijdens routineprocedures kan beïnvloeden.

Figuur 2. Een muis met een oorlabel dat correct op de pinna is geplaatst.
Accurate identificatie van laboratoriumdieren is essentieel om ervoor te zorgen dat het juiste dier wordt gebruikt voor experimentele procedures en betrouwbare gegevensverzameling.
Er bestaan verschillende invasieve en niet-invasieve methoden om laboratoriumdieren te identificeren; veelgebruikte invasieve methoden zijn oortekening en oorgatjes, die institutionele goedkeuring vereisen.
Niet-invasieve methoden worden echter geprefereerd wanneer dat mogelijk is, omdat ze het ongemak van dieren verminderen en het welzijn verbeteren.
Voordat u oorgatjes maakt, is het belangrijk om het coderingssysteem, de soorten gaten en hun voor- en nadelen te begrijpen.
Oorgatjes maken houdt in dat er gaatjes of inkepingen in de buitenkant van het oor (oorlel) worden gemaakt om dieren uniek te identificeren.
Veel faciliteiten gebruiken een door de instelling goedgekeurd oor-gatjes of oor-inkeping coderingssysteem. In veelgebruikte systemen vertegenwoordigen markeringen op het rechter oor eenheidswaarden, terwijl markeringen op het linker oor tientallen vertegenwoordigen en centrale gaten honderdtallen.
In deze systemen worden enkele gaten of inkepingen, dubbele inkepingen en combinaties van deze markeringen op aangewezen posities gebruikt om numerieke waarden toe te wijzen.
Als u bijvoorbeeld het dier als 39 wilt labelen, maakt u een gat in het rechter oor op de aangewezen plaats om het getal 30 aan te geven, en een dubbele inkeping in het linker oor op de aangewezen plaats om het getal 9 aan te geven.
Bij het toewijzen van codes is het belangrijk om het eenvoudigste patroon te gebruiken dat nodig is, waarbij het aantal en de grootte van gaten of inkepingen wordt geminimaliseerd om weefselschade te verminderen. Het is ten zeerste aanbevolen om het verwijderde weefsel te gebruiken voor genotypering.
Er zijn drie stijlen van commercieel verkrijgbare oor-gaten: de schaar-gat, de duimgat en de hefboomgat. Elk hiervan heeft zijn voor- en nadelen.
De duimgat vereist een knijpbeweging, maar is klein genoeg om in een Eppendorfbuisje te passen, zodat het oorweefsel gemakkelijker kan worden verzameld.
Ergonomisch gezien is de hefboomgat gemakkelijker te gebruiken dan de duimgat, vooral voor de dikkere oren van de oudere ratten.
De schaar-gat vereist geen knijpbeweging, waardoor vermoeide handen en blessures door het carpaletunnelsyndroom worden vermeden.
Hoewel oorgatjes maken een snelle en eenvoudige identificatiemethode is, heeft het beperkingen zoals een beperkt identificatiebereik en mogelijke welzijnszorgen, waardoor het minder geschikt is voor grootschalige of verfijning-gerichte studies.
Een andere beperking is dat naarmate dieren ouder worden, de huid van hun oren dikker wordt en het moeilijk is om een oorgat te maken zonder het dier aanzienlijk te verontrusten.
Daarom is het het beste om de oorgatjes te maken bij jonge ratten zodra ze zijn gespeend. Voor volwassen dieren die identificatie vereisen, moet het gebruik van inhalatie-anesthesie worden overwogen volgens institutioneel goedgekeurde richtlijnen.
Voordat u oorgatjes maakt, maakt u de ponsgereedschappen schoon met een desinfecterende oplossing, spoelt u ze af met alcohol, droogt u ze grondig en vermijdt u autoclavage.
Houd eerst het dier vast door het bij de nek te grijpen, zodat de oren gemakkelijk toegankelijk zijn.
Plaats het rechter oor in de pons en zorg ervoor dat het gat op een afstand van de oorrand is gepositioneerd.
Leg vervolgens snel en stevig druk uit om de schaar te sluiten en door de huid te snijden. Laat dan de druk los en verwijder het van het oor.
Trek of draai niet aan de pons om scheuren te voorkomen. Voor een inkeping plaatst u de pons op de rand van de oorlel en oefent u snelle, stevige druk uit, opent u vervolgens de schaar om het te verwijderen.
Bevestig dat de juiste code is geponst voordat u het dier terug in de kooi plaatst.
Reinig vervolgens de pons met desinfecterende oplossing, spoel af met alcohol en droog grondig om roest te voorkomen.
Oortekening is een andere methode voor de identificatie van muizen en ratten.
Er zijn verschillende commercieel verkrijgbare oorteken. Deze omvatten: metalen oormerken met een reeks getallen en/of letters erop geëtst, en plastic oormerken met karakters of barcodes.
Een nadeel van metalen oormerken is dat het vaak nodig is om het dier op te pakken om de code te lezen. In tegenstelling daarmee zijn plastic oormerken gemakkelijk te lezen zonder de dieren te hanteren.
Een ander voordeel van plastic oormerken of niet-metalen oormerken is hun compatibiliteit met MRI-beeldvorming. Hoewel de oormerken een individuele identificatie voor een muis of rat bieden, zijn ze niet onfeilbaar. Oormerken kunnen verloren gaan door overmatig verzorgen, infectie, vechten en agressief fokgedrag.
Als meerdere dieren in dezelfde kooi worden gehuisvest, kan het verlies van een oorteken problematisch zijn. Oorselectie en identificatiecodes moeten volgens institutioneel goedgekeurde protocollen worden gevolgd, en alle informatie moet duidelijk worden opgenomen op het kooilabel.
Laten we nu leren hoe we een oorteken kunnen aanbrengen, aangezien onjuiste positionering verschillende ongelukkige gevolgen kan hebben.
De eerste stap is om een geschikt label te selecteren voor de dieren die geïdentificeerd moeten worden. Hier zullen we een metalen label gebruiken om de procedure op muizen te demonstreren. Zorg ervoor dat u de applicator bestelt die geschikt is voor de specifieke grootte en stijl van de oorteken die worden gebruikt.
Verwijder voorzichtig het label en richt het in de applicator zodat het uiteinde met het gat boven het gekartelde gebied van de applicator is gepositioneerd. Het puntige uiteinde van het label moet tegenover de inkeping zijn.
Houd het dier vast zodat
View the full transcript and gain access to JoVE Science Education videos
Q1: How does the ear punch code system work for identifying rodents?
The ear punch code uses standardized notch positions on both ears to create unique animal identifiers. Right ear notches represent single digits (1, 3, 5 for units; double notch for 2), while left ear notches represent tens (10-90). Center holes represent 100 (right ear) and 200 (left ear), with both holes indicating 300. This system allows labeling animals from 1 through 399 by combining notch values.
Q2: What are the main differences between scissor, thumb, and lever ear punches?
Scissor punches avoid pinching motions, reducing carpal tunnel fatigue and injury. Thumb punches are small enough to fit in an Eppendorf tube for easier tissue collection but require a pinching motion. Lever punches are ergonomically superior for thicker ears of older rats. Each design offers distinct advantages depending on your specific research needs and animal age.
Q3: Why is ear punching best performed on young rats rather than adults?
As rats age, their ear skin thickens, making ear punching difficult and causing significant distress without anesthesia. Young rats, ideally when weaned, have thinner, more pliable ears that tolerate the procedure better. For adult rats requiring identification, inhalant anesthesia induction and maintenance laboratory animals should be considered to minimize animal discomfort during ear punching.
Q4: What are the advantages and disadvantages of metal versus plastic ear tags?
Metal tags require picking up the animal to read the code, while plastic tags are easily readable without handling. Plastic tags are compatible with MRI imaging and reduce animal stress from repeated handling. However, both tag types can be lost due to over-grooming, infection, fighting, or self-trauma. Using a secondary identification method like punch codes on the opposite ear prevents identification loss.
Q5: What positioning errors should be avoided when applying ear tags to rodents?
Tags placed too close to the ear edge risk tearing; tags positioned too close to the head can catch neck skin, causing irritation and restricted movement. Tags must not bend the ear, interfere with mobility, or catch on caging. Incorrect positioning leads to self-trauma, infection, and swelling, potentially requiring tag removal and veterinary treatment.
Q6: How should ear punch tissue samples be prepared for PCR genotyping?
Before collecting punch tissue for PCR samples, soak the apparatus in a surface decontaminant solution for at least 3 minutes to remove residual DNA or RNA, then rinse with alcohol. This preparation prevents contamination and ensures accurate genotyping results. Using punches for tissue collection reduces animal stress by eliminating repeat handling for separate sampling procedures.
Q7: What is the proper procedure for removing an infected ear tag from a rodent?
First, moisten a cotton-tipped applicator with antiseptic solution and remove debris around the tag. For severe infections, anesthetize the animal. Using wire cutters, cut across the tag loop edge-to-edge, never the flat surface. Gently guide the tag out with hemostats, avoiding the crimped end to prevent hole enlargement. Wipe the ear with antiseptic and monitor for purulent discharge requiring veterinary follow-up.