Capillaire elektroforese (CE)

1. CE Instrumentatieopstelling

1. Schakel het CE-instrument en de computer in. Schakel met behulp van de computersoftware de lichtbron voor UV-analyse in om deze op te warmen. Sommige software heeft een indicator wanneer de lamp klaar is voor gebruik (de lamppictogram krijgt kleur).
2. Maak een methodebestand. Stel de belangrijke parameters in voor het uitvoeren van de CE. In deze analyse zijn de temperaturen van de cartridge en de monsteropslag 35 °C. De golflengte voor UV-detectie is 214 nm.
3. Schrijf een tijdprogramma. Het programma bestaat over het algemeen uit spoelstappen (om de capillair vóór analyse schoon te maken), injectiestappen en vervolgens een elektroforese-stap. Voor de spoelstap voert u 2 spoelingen uit gedurende 1 minuut met een druk van 20 psi. De eerste spoeling is met NaOH, wat helpt om ervoor te zorgen dat de silanolgroepen op de capillairwand worden gedeprotoneerd. De tweede spoeling is met bufferstof (hier 0,025 M boraatbuffer) om ervoor te zorgen dat de capillair wordt geëquilibreerd met buffer.
4. Voor de injectie wordt drukinjectie gebruikt bij 0,5 psi gedurende 5 s.
5. Voor de elektroforese-stap zijn de omstandigheden: scheidingsspanning: 20 kV, tijd: 5 min, normale polariteit. Geef voor elke stap ook aan welke fleskoker de inlaat is en welke fleskoker de uitlaat is. Sla het methodebestand op nadat alle parameters zijn ingevoerd.

2. Bereiding van de normen en soda-monsters

1. Maak 500-ppm-stockoplossingen van aspartaam, cafeïne en benzoëzuur in water. Maak er 50 ml van elk, met behulp van een volumetrische kolf.
2. Maak een standaardoplossing van 150 ppm aspartaam, 150 ppm cafeïne en 100 ppm benzoëzuur in een 10-ml volumetrische kolf.
3. Maak standaardoplossing van cafeïne van 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm en 200 ppm in een 10-ml volumetrische kolf.

3. Voer de monsters uit op de CE

1. Plaats de flesjes met standaardmonsters of soda-monsters in de monsterfleskoker. Zorg ervoor dat u opschrijft welk monster in welke sleuf zit. Twee sleuven hebben de boraat-runbuffer en de 0,1 M NaOH-spoelvloeistof.
2. Voer in het methodebestand in welke sleuf de eerste monstersfleuf zich bevindt.
3. Verzamel een enkele uitvoering en zorg ervoor dat u alle gegevensinformatie invoert die het programma vraagt.
4. Verzamel gegevens door de invoerfles te veranderen voor elk monster. Voer de combinatiestandaard, de 3 concentraties cafeïne en een Pepsi- en diet Pepsi-monster uit.
5. Plaats de doelgroep in het instrument en kies het juiste instrument.
6. Analyseer de gegevens op de computer. Bereken de piekgebieden en overlap standaarden en echte monsters om pieken te helpen identificeren. Maak een calibratiecurve voor de cafeïnegegevens.