Name: Voorbereiding van de Single-celsuspensies van Mouse Spleen met de gentleMACS Dissociator (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-12-11T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Leer hoe u efficiënt miltweefsel van muizen dissocieert met de gentleMACS Dissociator om levensvatbare enkelcel-suspensies te verkrijgen. Deze methode optimaliseert celvoorbereiding voor immunologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Inleiding tot Equipment <ol><li> Weefsel is zacht gedissocieerd, met behulp van violet C Buizen in levensvatbare eencellige suspensies. </li><li> De PBS / BSA EDTA buffer wordt gebruikt om de cellen te scheiden. De buffer is bereid door toevoeging van een onderdeel van BSA Stock oplossing voor de 20 delen van autoMACS spoeloplossing met EDTA. </li><li> De MACS Pre-Scheiding Filters worden gebruikt, zodat de gedissocieerde weefselmonsters zijn vrij van alle cel klonten, het bevorderen van een succesvolle MACS scheiding en daaropvolgende analyse. </li></ol> Dissociatie de milt-cellen <ol><li> Hele milt worden disscociated in single-cell suspensies van splenocyten het gebruik van de gentleMACS Dissociator. </li><li> Om te beginnen van de procedure, laad de C Tube met een volume van buffer op basis van de massa van de milt. Een gezonde milt van een jonge volwassen vrouw BALB / c muis weegt ongeveer 80 tot 120 mg. Elke 1 tot 2 milten van deze massa moet 3 ml buffer. Milt van oudere dieren of dieren met infecties zijn vaak groter en moeten worden afgewogen in buffer. De buffer volumes moeten dienovereenkomstig worden aangepast. Niet meer dan in totaal buffer volume van 10 ml. </li><li> Voeg de ontleed milt van de C Tube met 3 ml buffer. </li><li> Zorg ervoor dat de C-Tube kap strak is en bevestig de C Tube aan de dissociator met de dop naar beneden. </li><li> Het opstarten van de dissociator. Voor 1-2 milt, selecteert u het programma m_spleen_01. Het programma duurt 56 seconden in beslag. Als het aantal van de milt groter is, gebruik van het programma m_spleen_04, dit programma kan gebruikt worden voor maximaal 720 mg van de milt weefsel. </li><li> Na afronding van het programma de inheemse milt weefsel is gedissocieerd in een splenocyten schorsing. </li><li> Spin down van de hele cel suspensie bij 300xg bij kamertemperatuur gedurende ongeveer 30 sec. Dit zal ervoor zorgen dat de rotor en de stator zijn ontdaan van alle cellen die worden verzameld op de bodem van de C-Tube. </li><li> Verwijder het monster door het septum afgesloten opening in de C-Tube dop met behulp van een 1000 microliter pipetter. </li></ol> Filtratiestap <ol><li> Om te beginnen de filtratie stap, gelden de gedissocieerde weefsel om de Pre-filter Separation of een cel zeef met 30 micrometer poriegrootte. Het filter moet passen een 15 mL buis voor 1-2 milt of een 50 mL buis voor meer dan 2 milt. </li><li> Laat de celsuspensie passeren. Was daarna de filter door het toepassen van 5 ml van de buffer. </li><li> Nu, centrifuge de buis met de celsuspensie op 300xg, bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten aan alle splenocyten verzamelen in een milt celpellet. </li><li> Nu, dat we een pellet van gescheiden splenocyten hebben, moeten we het supernatans aspireren en resuspendeer de cel pellet in een geschikte hoeveelheid van de buffer. </li></ol> Milt dissociatie met behulp van de gentleMACS Dissociator levert een hoog percentage van levensvatbare splenocyten, die wordt aangetoond door middel van flowcytometrie met behulp van de MACSQuant Analyzer. Dode cellen worden gekleurd door propidiumjodide. In de verstrekte voorbeeld, de voorwaartse zijwaartse verstrooiing dot plot toont de voorbereide splenocyten.

Alle protocollen en data sheets zijn beschikbaar op<a href="http://www.miltenyibiotec.com"&gt; Http://www.miltenyibiotec.com.</a&gt;.

Om te voorkomen dat vervelende en vaak pijnlijke handleiding dissociaties, de gentleMACS Dissociator maakt het mogelijk om weefsel los te zeer efficiënt onder gecontroleerde en reproduceerbare omstandigheden. Het weefsel dissociatie procedure is zacht voor cellen en levert celsuspensies met een hoge levensvatbaarheid tarief. De gentleMACS Dissociator in combinatie met C Tubes is ontworpen voor de bereiding van single-cell schorsingen van verschillende weefsels. Het instrument is uitgerust met een aantal vooraf ingestelde programma&#39;s om muis-milt-, lever-, long-of zenuwweefsel distantiëren. Het bereik van de programma&#39;s en protocollen zal voortdurend worden uitgebreid met extra weefsels te nemen.

<table><tbody><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; Startset</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>C-buisjes</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>13 mL buisjes</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-596</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_751_13_mL_Tubes_for_LS_Columns.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>autoMACS&amp;#8482; spoelmiddel </td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACS&amp;#174; BSA-stamlopossing</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-376</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Pre-separatiefilters </td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACSQuant Analyzer</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-197</td><td></td></tr><tr><td>Propidiumjodide-oplossing</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-233</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

voorbereiding van de single-celsuspensies van mouse spleen met de gentlemacs dissociator

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

Single-cell suspensies zijn een voorwaarde voor experimenten in cel scheiding, cel-cel-analyse en cultuur. Om te voorkomen dat vervelende en vaak pijnlijke handleiding dissociaties de gentleMACS Dissociator maakt het mogelijk om weefsel los te zeer efficiënt onder gecontroleerde en reproduceerbare omstandigheden. De gentleMACS Dissociator optimaal kan dissociëren muis-milt, een combinatie van tijdbesparende en normalisatie met user-veiligheid. Deze video wordt beschreven hoe u de muis los te milten het gebruik van de gentleMACS Dissociator, een geautomatiseerde bench-top apparaat dat mechanisch kunnen verstoren weefsels met behulp van speciale buizen aan levensvatbare celsuspensies te produceren. Naar aanleiding van dissociatie, zijn milt gefilterd, gecentrifugeerd en geresuspendeerd voor verdere toepassingen.

Deze video beschrijft een eenvoudige, tijdsbesparende techniek voor automatische weefsel dissociatie met behulp van de gentleMACS Dissociator naar single-cell suspensies van de muis splenocyten voor te bereiden.

Voorbereiding van de Single-celsuspensies van Mouse Spleen met de gentleMACS Dissociator

Cel-suspensies van enkelvoudige cellen zijn een vereiste voor experimenten op het gebied van celseparatie, celanalyse en celkweek. Om tijdrovende en vaak pijnlijke handmatige...

In dit videoprotocol ziet u hoe u miltspleens van muizen kunt dissociëren met behulp van Gentle Max, een geautomatiseerd benchtop-apparaat dat weefsels mechanisch kan disrupten met speciale buizen om levensvatbare cel-suspensies te produceren. Na de dissociatie worden de milten gefilterd met Max Pres scheidingsfilters, gecentrifugeerd en gesuspendeerd voor verdere toepassingen. Hallo, mijn naam is Melanie mlu.Ik ben een wetenschapper bij Milton Biotech hier in BE Lab Park, Duitsland. Vandaag laat ik u de bereiding van een enkelcel-suspensie uit een milt van een muis zien met behulp van deze GenX-dissociatie. De GenX-dissociatie maakt een zeer eenvoudige en snelle bereiding van een enkelcel-suspensie mogelijk.Laten we beginnen. Om tijdrovende en vaak pijnlijke handmatige dissociaties te vermijden, maakt de gentle max di associator het mogelijk om weefsel zeer efficiënt te dissociëren onder gecontroleerde en reproduceerbare omstandigheden. Weefsel wordt voorzichtig gedissocieerd met behulp van violet C-buizen tot levensvatbare suspensies van enkelvoudige cellen.De C-buis is voorzien van een met een septum afgesloten opening in het midden van de dop, waardoor men met een pipet uit de buis kan werken terwijl de steriliteit constant gewaarborgd blijft. Om de gedissocieerde cellen te suspenderen, dient u de juiste PBS-BSA-EDTA-buffer te gebruiken. De buffer wordt bereid door één deel BSA-stoomoplossing toe te voegen aan 20 delen AutoMax fencing-oplossing die EDTA bevat.Met behulp van de Max Pres scheidingsfilters worden gedissocieerde weefselmonsters bevrijd van alle celklonters, wat een succesvolle maximale scheiding en daaropvolgende analyse bevordert. Om de procedure te starten, vullen we de C-buis met een volume buffer. Afhankelijk van de massa van de milten weegt een gezonde milt van een zes tot zeven weken oude vrouwelijke biopsiemuis ongeveer 80 tot 120 milligram.Voor elke één tot twee milten van deze massa zijn drie milliliter buffer nodig. Overschrijd een totaal volume van 10 milliliter niet. We kunnen nu de gedissecteerde milt toevoegen aan de C-buis die drie milliliter buffer bevat. Milten van oudere dieren of dieren met infecties zijn vaak groter en moeten in buffer worden gewogen.De buffervolumes moeten vervolgens dienovereenkomstig worden geschaald, maar mogen opnieuw een totaalvolume van 10 milliliters niet overschrijden. Zorg er nu voor dat de dop van buis C goed vastzit en bevestig buis C aan de dissociatie-eenheid. Met de dop naar beneden, zet de dissociatie-eenheid aan voor één tot twee milten en selecteer Program M spleen oh one. Het programma zal 56 seconden duren om te voltooien; als het aantal milten groter is, gebruik dan program M spleen oh four.Dit programma kan worden gebruikt voor maximaal 720 milligram miltweefsel. Na voltooiing van het programma is het oorspronkelijke miltweefsel gedissocieerd tot een PLE-celсусpensie, die er als volgt uitziet; centrifugeer dit kort om het monster op de bodem van de buis te verzamelen. Dit zorgt ervoor dat de rotor en stator vrij zijn van alle cellen, die op de bodem van de C-buis worden verzameld.We verwijderen het monster via de met een septum afgedichte opening in de dop van de C-buis met een pipet van 1000 µL. Om met de filtratiestap te beginnen, brengen we het gedissocieerde weefsel aan op een pres-separatiefilter of een zeef met een poriegrootte van 30 micron. De zeef moet passen op een buis van 15 mL voor één tot twee milten of op een buis van 50 mL voor meer dan twee milten.Laat de celsuspensie passeren en was vervolgens het filter door vijf milliliters buffer toe te voegen. Centrifugeer de buis met de celsuspensie nu bij 300 Gs op kamertemperatuur gedurende 10 minuten om alle cellen te verzamelen in een miltcelpellet. Nu we een pellet van gedissocieerde cellen hebben, moeten we het supernatant aspireren en de celpellet resuspenderen in een passende hoeveelheid buffersuspensie voor miltdissociatie.Het gebruik van de gentle max resulteert in een hoog percentage levensvatbare PLE-cyten, wat wordt aangetoond via flowcytometrie met de max quant. Dode cellen worden gekleurd met propidiumjodide, zoals in het gegeven voorbeeld. De forward side scatter dot plot toont de geprepareerde SP-cyten.Ik heb u laten zien hoe u miltweefsel kunt dissociëren met behulp van deze milde X-dissociatie. Wanneer u deze procedure uitvoert, is het belangrijk om de hoeveelheid buffer aan te passen aan de monstergrootte en het juiste Gentle X-programma te kiezen. Dat is alles.Veel succes met uw experiment.

preparation-single-cell-suspensions-from-mouse-spleen-with-gentlemacs

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

We beschrijven de voorbereiding van de T-cel groeifactor gebruikt voor de in vitro expansie van antigeen-specifieke T-lymfocyt rat lijnen.

Voorbereiden van T-cel groeifactor van Rat Splenocyten

Dissociëren cellen van specifiek weefsel soorten vereist specifieke parameters voor weefsel opwinding tot het verkrijgen van een hoog volume van levensvatbare, kweekbare cellen. De Miltenyi gentleMACS dissociator optimaliseert deze taak met een eenvoudige, praktische protocol. In deze publicatie het gebruik van dit apparaat op longweefsel wordt uitgelegd.

Gestandaardiseerde Voorbereiding van de Single-celsuspensies van Mouse longweefsel met behulp van de gentleMACS Dissociator

Dissociëren cellen van specifiek weefsel soorten vereist specifieke parameters voor weefsel aggitation het verkrijgen van een hoog volume van levensvatbare, kweekbare cellen. De Miltenyi gentleMACS Dissociator optimaliseert deze taak met een eenvoudige, praktische protocol. In deze publicatie het gebruik van dit apparaat op nerual weefsel wordt uitgelegd.

Generatie van de Single-celsuspensies van Mouse Neural Tissue

This video demonstrates a procedure for the adoptive transfer of high salt-treated antigen-presenting dendritic cells (DCs) into mice. Murine CD11c+ dendritic cells (DCs) are exposed to a medium containing high amounts of sodium, forming isolevuglandin (IsoLG)-protein adducts in the cells. These adducts serve as neoantigens and are presented on the surface of DCs. The high salt-treated cells are injected into mice through adoptive cell transfer.

A Method for the High Salt Treatment of Dendritic Cells and their Adoptive Transfer into Mice

The video demonstrates the preparation of a single-cell suspension of immune cells from a murine brain tissue. It involves enzymatic digestion to release cells from the brain tissue, followed by density gradient centrifugation to isolate the immune cells based on their densities to obtain the single-cell suspension.

Preparing a Single-Cell Suspension of Immune Cells from Murine Brain Tissue

Flowcytometrie kan worden gebruikt om de toestand van chromatine in T-cellen te beoordelen. Dit protocol maakt wetenschappers bewijs van chromatine decondensatie tijdens T-celactivering aangetoond door een verhoging van de gemiddelde fluorescentie-intensiteit (MFI) van fluorescente histon H3 antilichamen interpreteren...

Het gebruik van flowcytometrie om de staat van chromatine in T-cellen Assess

Hier presenteren we een protocol om te isoleren van dendritische cellen uit lymfkliertest milt door magnetische cel Sorteren en latere adoptief overdracht naïef muizen. Het model van hoge-zout geactiveerde dendritische cellen werd gekozen om de stapsgewijze procedures voor de overdracht van de geadopteerde en stroom cytometry uitleggen.

Isolatie en adoptief overdracht van hoge zout behandeld antigeen-presenteren dendritische cellen

We beschrijven hierin een eenvoudige analyse van de heterogeniteit van het muriene immuun B-celcompartiment in het peritoneum, milt en beenmergweefsel door middel van flowcytometrie. Het protocol kan worden aangepast en uitgebreid naar andere muizenweefsels.

Flowcytometrische karakterisering van de ontwikkeling van murine B-cellen

Hier presenteren we een eenvoudige en efficiënte methode om levende meiotische en post-meiotische kiemcellen te isoleren van volwassen muispesten. Met behulp van een lage cytotoxiciteit, violet-opgewonden DNA bindende kleurstof en fluorescentie-geactiveerde celsorde, kan men zeer verrijkte spermatogene celpopulaties isoleren voor vele downstream toepassingen.

Isolatie van Murine Spermatogenic Cellen met behulp van een Violet-Excited Cell-Permeable DNA Binding Dye

Dit artikel beschrijft een protocol voor het samenvoegen en inkapselen van miltcellen in een halfvaste basaalmembraanmatrix. Basale membraanmatrixconstructies kunnen worden gebruikt in driedimensionale kweek voor het bestuderen van de ontwikkeling van organoïden, of voor in vivo transplantatie- en weefselregeneratiestudies.

Basement Membrane Matrix Ingekapselde Celaggregatie voor het onderzoeken van de vorming van miltweefsel bij muizen

Hier presenteren we een protocol om van milt afgeleide exosomen van muizen te isoleren met behulp van een combinatie van vertering met collagenase type I en ultracentrifugatie.

Isolatie en karakterisering van exosomen afgeleid van miltweefsels van muizen

Leer hoe u efficiënt miltweefsel van muizen dissocieert met de gentleMACS Dissociator om levensvatbare enkelcel-suspensies te verkrijgen. Deze methode optimaliseert celvoorbereiding voor immunologisch onderzoek.

Voorbereiding van de Single-celsuspensies van Mouse Spleen met de gentleMACS Dissociator

Meer video's verkennen