Verrijkingskweek: Het kweken van aërobe en anaërobe microben op selectieve en differentiële media

1. Voorbereiding

1. Voor het begin, handen grondig wassen en geschikte handschoenen aantrekken.
2. Werkoppervlak steriliseren met 5% natriumhypochloriet (bleach) en grondig drogen.
3. Een inoculatiesluik in een lege 120 mL Erlenmeyer kolf plaatsen zodat deze niet op het werkblad aanraakt tijdens het werken.

2. Groeimedia en Cultuurs

1. Verzamel vier platen Mannitol Zout Agar (MSA), Eosine Methyleenblauw agar (EMB), en acht tryptische soja agar (TSA) uit de koelkast (deze kunnen commercieel worden gekocht).
2. Plaats platen op het schoongemaakte werkgebied.
3. Verzamel de volgende broedcultuurs: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, en Proteus vulgaris. Wees voorzichtig: omdat dit aërobe organismen zijn, moeten de doppen van de buisjes lichtjes loszitten.
4. Plaats alle cultuurs in een buisjesrek op het schoongemaakte werkoppervlak.

3. Overbrengen van Cultuurs en Incubatie

1. Sta of zit aan het werkblad met al het materiaal binnen handbereik.
2. Gebruik aseptische techniek om de bacteriën over te brengen naar de plaat, verwarm eerst de sluik totdat deze oranje gloeit - en laat deze vervolgens in de lucht afkoelen.
3. Terwijl de sluik afkoelt, neem de broedcultuur van E. coli, en open vervolgens de dop met behulp van je pink.
4. Verwarm snel de opening van de buis. Dit voorkomt verontreiniging.
5. Dompel de sluik in de buis en streek de organisme op het eerste kwadrant van een EMB plaat.
6. Nadat de eerste streek is uitgevoerd, verwarm de sluik en voer vervolgens een tweede streek uit die de eerste streek slechts één of twee keer kruist. Dit zal het isoleren van enkele kolonies mogelijk maken en bepalen of er enige verontreiniging is.
7. Herhaal dit totdat alle vier de kwadranten van de plaat zijn gestreken.
8. Breng nu elk van de resterende vier organismen over op dezelfde streekplateerwijze zodat het eindproduct één MSA plaat, één EMB plaat en twee afzonderlijke TSA platen per organisme is.
9. Zodra alle organismen zijn overgebracht, verwarm de sluik nog een laatste keer en leg deze weg.
10. Plaats 1 TSA plaat met elk organisme in het gaspakket, en schud vervolgens een gaszakje voordat je het in de kamer naast de platen plaatst. Dicht goed af.
11. Incubeer alle platen bij 37°C een nacht.
12. Sterisliseer het werkoppervlak nog een laatste keer met 5% bleekwater.

4. Resultaten lezen en noteren

1. Verwijder de platen uit de incubator en plaats ze op een schone laboratoriumbank
2. Noteer de groei van de organismen op elke plaat in je laboratoriumnotitieboek. Neem met name gedetailleerde aantekeningen over:
   1. Aantallen en grootte van kolonies (indien aanwezig) op elke plaat, voor elke geplateerde stam
   2. Uiterlijk van het agar rondom eventuele kolonies die op de MSA platen groeien
   3. Uiterlijk van eventuele kolonies die op de EMB platen groeien
   4. Verschillen in groei tussen de TSA platen die buiten versus binnen het gaspakket zijn gekweekt